miR-214通过靶向MCL-1抑制骨髓瘤细胞的迁移侵袭

目的:明确miR-214与MCL-1之间的靶向调控关系及其对骨髓瘤细胞侵袭迁移能力的影响。方法:qRT-PCR和Western blot检测miR-214和MCL-1在骨髓瘤细胞中的表达情况并做相关性分析；Transwell小室法检测上调miR-214或沉默MCL-1对骨髓瘤细胞株H929和U266迁移侵袭能力的影响；荧光素酶报告基因实验验证miR-214与MCL-1的靶向关系；Western blot检测上调或下调miR-214对MCL-1表达的影响。结果:miR-214在骨髓瘤细胞中表达下调，MCL-1则显上调，二者呈负相关；上调miR-214或敲低MCL-1可显著抑制骨髓瘤细胞H929和U266的侵袭迁移能力；荧光素酶报告基因实验证实MCL-1是miR-214的靶基因，Westerm blot结果发现miR-214负调控MCL-1表达；MCL-1的额外补充可逆转miR-214对骨髓瘤细胞H929和U266迁移侵袭能力的抑制作用。结论:miR-214通过负调控MCL-1表达抑制骨髓瘤细胞的迁移侵袭。     

微小RNA-24对骨肉瘤细胞U2OS体外增殖与迁移能力的影响及作用机制

目的 探讨微小RNA-24(miR-24)对人骨肉瘤细胞株U2OS体外增殖与迁移能力的影响及其可能的机制.方法 通过转染miR-24模拟物(miR-24 mimic)建立miR-24过表达的U2OS细胞株,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、细胞活力检测方法(CCK-8法)和Transwell检测对照组、阴性对照组和miR-24过表达组3组细胞增殖及迁移能力的变化;Western blotting检测细胞的上皮间质转化(EMT)进程及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的活性.结果 对照组、阴性对照组和miR-24过表达组miR-24的表达水平分别为1.00±0.00、1.03±0.08和2.46±0.29,3组间差异有统计学意义(F=11.026,P=0.012),转染了miR-24 mimic后,人骨肉瘤细胞株U2OS中的miR-24表达水平与对照组相比显著升高(t=4.604,P=0.009).与对照组相比,人骨肉瘤细胞株U2OS过表达miR-24 24 h[(3.56±0.27)%∶(8.63±0.79)%]、48 h[(20.16±1.09)%∶(54.77±5.42)%)]和72 h[(45.47±3.16)%∶(95.52±8.56)%]后细胞增长率均明显降低,差异均有统计学意义(t=3.896,P=0.016;t=4.813,P=0.008;t=7.173,P=0.002).过表达miR-24 24 h后,对照组、阴性对照组和miR-24过表达组细胞相对迁移率分别为(100.00±0.00)%、(99.26±5.85)%和(31.37±2.09)%,3组间差异有统计学意义(F=12.175,P=0.009);与对照组相比,过表达miR-24后细胞迁移率明显降低(t=3.843, P=0.014).同时过表达miR-24上调细胞中上皮细胞标志物上皮细胞钙黏蛋白(E-cadhe-rin,t=3.852,P=0.018)和β-连环素蛋白(β-catenin)的表达(t=3.512,P=0.024),而下调间质细胞标志物神经钙黏蛋白(N-cadherin,t=3.832,P=0.018)和波形蛋白(vimentin)的表达(t=4.058,P=0.012),抑制U2OS的EMT进程.此外,过表达miR-24可下调NF-κB(p65)(t=4.813,P=0.008)、磷酸化核因子IκB激酶抑制剂α(p-IKK-α)(t=3.764,P=0.013)和磷酸化激活IκB激酶复合物α(p-IκB-α)的表达(t=4.064,P=0.012),抑制NF-κB信号通路的激活.结论 miR-24可抑制人骨肉瘤细胞株U2OS体外增殖与迁移,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的激活,进而抑制细胞的EMT进程相关.提示miR-24可作为治疗骨肉瘤迁移的一个潜在作用位点.     

多发性骨髓瘤患者原代细胞与U266细胞株zeste基因增强子同源物2表达升高的初步研究

 目的　探讨多发性骨髓瘤（MM）U266细胞株和MM患者的骨髓单个核细胞（BMMNC）中DNA甲基化相关蛋白zeste基因增强子同源物2（EZH2）的表达,分析DNA甲基化与MM的关系。方法　选取MM U266细胞株及10例MM患者BMMNC（MM-BMMNC）,同时选取10名健康人骨髓提取的单个核细胞（N-BMMNC）。用Western blot法测定细胞EZH2的含量,以目的蛋白EZH2与内参照β-actin 表达量的比值作为EZH2蛋白相对表达水平。结果　与10例N-BMMNC（0.2277±0.1306）比较,EZH2在U266细胞（0.9730±0.1029）和10例MM-BMMNC（0.9220±0.1301）中表达明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论　EZH2在MM U266细胞株及MM-BMMNC中含量明显增多,EZH2与MM的发生和发展机制可能有密切联系。     

MiR-21下调SPRY2表达对多发性骨髓瘤细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制研究

目的:探讨miR-21下调SPRY2基因表达在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)发生发展以及转移过程中的作用。方法:构建miR-21表达载体LV-anti-miR-21及脂质体转染法筛选稳定沉默SPRY2的MM细胞系。应用实时定量PCR和Western blot检测miR-21表达和SPRY2蛋白表达水平。四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测细胞增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果:实时定量PCR及Western blot检测结果表明:转染U266细胞后,U266/LV-anti-miR-21慢病毒MOI 20组和MOI 40组miR-21表达量较U266/un组差异明显下降(P<0.05);转染miR-21 mimics组的U266细胞SPRY2的蛋白表达量较无转染组(untreated)和阴性对照组(siRNA)明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与无转染组、阴性对照组相比:MTT法显示转染组48、72、96h细胞的生长速度明显减慢,增殖率明显下降(P<0.01);流式细胞术表明miR-21 mimics转染U266细胞48、72h后,细胞凋亡率分别为U266组[(24.7±1.97)%、(38.6±1.56)%]、siRNA组[(27.3±1.72)%、(37.3±1.59)%]和U266/miR-21组[(12.7±1.27)%、(22.1±1.63)%],与两对照组比较,U266/miR-21组细胞凋亡率明显降低,G0/G1期细胞明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验显示转染组24、48h细胞迁移的能力明显减弱(P<0.05);Transwell实验证实转染组48、72h细胞穿过聚磷酸酯膜的U266细胞数明显减少,细胞穿膜能力明显降低(P<0.05)。结论:MiR-21下调SPRY2基因表达能够在体外条件下促进MM细胞的增殖和侵袭作用,揭示其在MM的发生、发展及转移过程中的作用及可能的机制,为确立新分子靶向治疗提供可靠的研究依据。     

miR-15a在多发性骨髓瘤患者外泌体中的表达及外泌体对肿瘤生长的影响

摘 要：［目的］ 探讨miR-15a在多发性骨髓瘤（MM）患者外泌体中的表达及外泌体对肿瘤发生发展的意义。［方法］ 选择在我院治疗的MM患者71例及健康志愿者20例，分析miR-15a在血浆外泌体中的表达水平；并以人源MM细胞株MM.1R细胞为实验模型，采用增殖实验观察外泌体对肿瘤细胞增殖的影响，采用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡，采用Western blot检测凋亡通路相关蛋白的表达。［结果］与健康志愿者相比，MM患者的血浆miR-15a水平显著降低(4.45±0.20 vs 12.86±0.63，P<0.001)，且与患者临床分期有关（P=0.023）。当使用MM患者来源的外泌体处理MM.1R细胞后，实验组细胞增殖率较对照组提高，在12h、24h、48h时分别提高了14.1%、34.0%、52.7%(P<0.01)；而健康志愿者来源的外泌体则使细胞增殖率降低，在12h、24h、48h时分别降低了12.4%、20.8%、27.5% (P<0.01)。流式细胞术结果显示，MM患者来源外泌体抑制了肿瘤细胞凋亡，24h凋亡率减少了3.3% (P=0.005)；而健康志愿者来源外泌体促进了肿瘤细胞凋亡，24h凋亡率增加了7.8% (P<0.001)。Western blot检测发现MM组的Bcl-2表达增加，Bax和caspase-3表达下降，与健康志愿者来源的外泌体作用相反。［结论］促凋亡因子miR-15a在MM患者外泌体中的表达水平低于健康人群，且MM患者来源的外泌体具有促进肿瘤发展的作用。     

MiR-29a下调共刺激分子B7-H3的表达及其对脑胶质瘤细胞侵袭的影响

目的： 探讨miR-29a调控共刺激分子B7-H3在脑胶质瘤中的表达及其对脑胶质瘤细胞侵袭能力的影响。 方法： 通过Real-time PCR检测miR-29a和B7-H3在正常脑组织、脑胶质瘤组织及人胶质瘤细胞株U87中的表达,并利用脂质体将miR-29a的模拟物（mimics）和抑制剂（inhibitors）转入U87细胞,流式术验证miR-29a对B7-H3表达的调节效果;采用CCK-8和Transwell实验观察miR-29a对U87细胞的增殖和侵袭能力的影响,并通过流式术分析miR-29a干预前后U87细胞上与细胞侵袭相关的化学趋化因子的表达变化,以miRtarbase等软件预测miR-29a与 CXCR4 的结合能力。 结果： 胶质瘤组织及细胞株中miR-29a低表达而 B7-H3 mRNA高表达,且均与瘤组织病理分级相关。转染miR-29a mimics可以有效下调U87细胞中 B7-H3 mRNA的表达。转染miR-29a mimics可以显著抑制U87细胞的侵袭能力（P<0.05）,但对细胞增殖并无显著影响。miR-29a过表达可同时下调U87细胞中CXCR4的表达,但软件分析 CXCR4 基因上并不存在miR-29a的结合位点。 结论： miR-29a可有效下调B7-H3分子的表达,进而抑制脑胶质瘤细胞的侵袭能力,其作用机制可能与CXCR4途径相关。     

神经节苷脂GM3对多发性骨髓瘤细胞株U266细胞增殖及细胞周期的影响

目的 观察神经节苷脂GM3对多发性骨髓瘤细胞株U266细胞增殖和细胞周期的影响.方法 各试验组分别加入20、40、80、160μmol/L GM3,同时设置不加GM3的空白对照组.培养U266细胞48 h后采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖;碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测细胞周期.结果 GM3可以抑制U266细胞增殖,并且随着GM3浓度增加抑制作用增强;不同浓度GM3组(20、40、80、160μmol/L)中U266细胞增殖抑制率依次为(13±4)%、(26±4)%、(47±6)%、(55±10)%,各浓度组与对照组比较差异有统计学意义(F=93.063,P<0.05).GM3处理48 h后,U266细胞中S期细胞比例增高,由(22.6±3.7)%上升到(71.5±3.8)%(P<0.01);G2/M期细胞比例降低,由(42.6±2.5)%降为(0.8±0.6)%(P<0.05);而G0/G1期细胞比例无明显变化(P>0.05).结论 GM3可以阻滞多发性骨髓瘤U266细胞于S期,抑制其增殖.     

miR-181a对人食管癌TE11细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:通过构建miR-181a的真核表达载体,研究其对人食管癌TE11细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:以95C细胞基因组DNA为模板,扩增得到miR-181a前体序列,插入表达载体pcDNA3.1(+)克隆获得pcDNA3.1(+)-miR-181a。将真核表达载体pcDNA3.1(+)-miR-181a转染到TE11细胞中,并采用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogentic quantitative-PCR,RFQ-PCR)对其表达情况进行验证。分别采用MTT法、细胞划痕法和Boyden小室法检测转染重组质粒pcDNA3.1(+)-miR-181a对TE11细胞增殖能力、迁移能力和侵袭能力的影响。结果:成功构建了插入miR-181a基因片段的真核表达载体pcDNA3.1(+)-miR-181a;RFQ-PCR检测结果表明,转染pcDNA3.1(+)-miR-181a的TE11细胞能够过表达成熟的miR-181a(P<0.05)。过表达miR-181a的TE11细胞增殖能力、迁移能力和细胞侵袭能力均明显增强。结论:miR-181a在TE11细胞中过表达能够增加细胞的增殖、迁移和侵袭能力,为进一步深入研究miR-181a在肿瘤中的作用机制提供了实验依据。     

LINC01006靶向miR-331-3p调控多发性骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和转移的机制研究

目的:探讨LINC01006靶向miR-331-3p在多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)进展中的功能。方法:RT-qPCR检测39例MM患者和22例正常对照者骨髓标本来源的浆细胞中LINC01006和miR-331-3p的表达。分别转染si-LINC01006、si-NC、miR-331-3p mimics、miR-NC、si-LINC01006+anti-miR-NC、si-LINC01006+anti-miR-331-3p至MM细胞U266,通过CCK-8、流式细胞术和Transwell法评估U266细胞抑制率、凋亡率和转移数。DIANA Tools网站预测LINC01006与miR-331-3p的相互作用，并通过双荧光素酶报告基因法进一步验证。结果:MM患者骨髓标本来源的浆细胞中LINC01006表达升高，miR-331-3p表达降低。转染si-LINC01006可增加细胞抑制率和凋亡率(P<0.05),减少细胞转移数(P<0.05),并上调miR-331-3p表达(P<0.05)。转染miR-331-3p mimics可增加细胞抑制率和凋...     

微小RNA-206通过干扰CDK4和GAK的表达对前列腺癌细胞生长的影响

目的 探讨微小RNA-206(miR-206)对前列腺癌细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和细胞周期素G相关蛋白激酶(GAK)表达的干扰作用及对前列腺癌细胞生长的影响.方法前列腺癌细胞株DU-145和PC-3为转染对象,转染miR-NC为对照组,转染miR-206为实验组.荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测CDK4和GAK mRNA的表达水平.Western blotting检测CDK4和GAK蛋白的表达水平.流式细胞术检测细胞周期分布.EdU增殖实验和集落形成实验检测细胞增殖能力.结果在DU-145和PC-3细胞株中,miR-NC组CDK4 mRNA表达量分别为1.00±0.09、1.00±0.10,GAK mRNA表达量为1.00±0.05、1.00±0.06;与之相比,两细胞株miR-206组中CDK4 mRNA表达明显下降,分别为0.36±0.18(t=6.572,P=0.001)、0.43±0.17(t=5.794,P=0.001),GAK mRNA表达量亦明显下降,分别为0.23±0.04(t=22.420,P<0.001)、0.32±0.08(t=14.500,P<0.001).Western blotting实验结果与qRT-PCR结果一致.流式细胞术检测结果显示,分别与两细胞株miR-NC组比较,转染miR-206后前列腺癌细胞在S期(23.60%±5.68%∶32.53%±4.52%,t=2.462,P=0.049;22.09%±4.35%∶30.96%±4.86%,t=2.720,P=0.035)和G2-M期(16.28%±7.12%∶26.63%±4.33%,t=2.484,P=0.048;14.60%±1.62%∶24.68%±7.13%,t=2.758,P=0.033)的细胞比例下降,在G0-G1期(60.13%±5.82%∶40.84%±5.37%,t=4.872,P=0.003;63.31%±3.27%∶44.36%±3.82%,t=7.533,P<0.001)的细胞比例升高.EdU增殖实验结果显示,转染miR-206的细胞增殖能力明显减弱(22.56±3.81∶38.90±8.51,t=3.503,P=0.013;25.12±6.42∶48.45±8.92,t=4.244,P=0.005).集落形成实验结果显示,两细胞株miR-NC组形成的集落数分别为218.66±44.59、177.35±24.49,miR-206组形成的集落数分别为125.38±32.80(t=3.370,P=0.015)、82.65±14.05(t=6.708,P=0.001),提示miR-206组细胞增殖能力降低.结论 miR-206可通过干扰CDK4和GAK的表达显著抑制前列腺癌细胞的生长,提示miR-206可能成为前列腺癌的分子靶向治疗工具.     

miR-200 b介导血肿瘤屏障通透性增加的机制

目的：研究微小RNA（ microRNA,miRNA）miR-200b是否介导血肿瘤屏障（ blood-tumor barrier, BTB）通透性增加。方法：测量跨内皮阻抗值（ TEER）、辣根过氧化物酶（ HRP）渗漏量,分析血脑屏障（ blood-brain barrier,BBB）和BTB通透性的改变,应用Real-time PCR检测血脑屏障BBB和BTB大鼠脑微血管内皮细胞（ rat cerebral microvascular endothelial cell RCMEC,ECs）miR-200b的表达,应用miR-200b agomir和miR-200b antagomir分别转染GECs（ECs和U87脑胶质瘤细胞共培养的细胞）后分析血肿瘤屏障的通透性改变;应用Western blot检测紧密连接相关蛋白ZO-1（ zonula occludens-1）的表达;应用免疫荧光方法观察GECs紧密连接相关蛋白ZO-1和丝状肌动蛋白（ filamentous actin,F-actin）结构和分布的改变。结果：与BBB 相比,BTB的TEER值显著降低,HRP显著升高;与BBB 的ECs 相比,GECs内源性miR-200b表达显著降低;miR-200b agomir和miR-200b antagomir成功转染到GECs 中;miR-200b agomir 组TEER值显著升高,HRP流量显著降低,以及ZO-1表达显著升高,抑制ZO-1由内皮细胞的边缘向细胞质转移,抑制丝状肌动蛋白由细胞膜边缘向细胞中央区分布,F-actin分布于细胞边缘明显增加,应力纤维形成明显减少;miR-200b an-tagomir结果与miR-200b agomir实验结果相反。结论：MiR-200b介导BTB通透性增加。     

miR-30a-5p通过靶向下调ATF1提高非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性北大核心

目的:探索miR-30a-5p对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞的放射增敏效应及其相关机制,为提高NSCLC放射敏感性提供理论依据。方法:采用qRT-PCR检测人正常肺上皮细胞株BEAS-2B、人肺癌细胞株A549、H460中miR-30a-5p表达情况;应用miR-30a-5p agomir、antagomir及对照转染A549细胞株,联合放射,检测miR-30a-5p对A549细胞株的放射增敏效应;通过生物信息学预测并筛选miR-30a-5p的靶基因,采用双荧光素酶报告基因检测进行验证;siATF1、miR-30a-5p agomir及siATF1+miR-30a-5p agomir转染A549细胞,通过qRT-PCR、Western Blotting检测靶基因表达与miR-30a-5p的关系,并通过平板克隆形成实验检测其对A549细胞株的放射增敏效应。结果:miR-30a-5p在A549和H460细胞株中表达均低于BEAS-2B细胞株(P<0.001);miR-30a-5p agomir转染联合放射,A549细胞放射生物学参数D_(0)、D_(q)、N较agomir NC组降低(均为P<0.05)。靶基因预测及验证结果显示,miR-30a-5p可以与ATF1的3'UTR特异性结合,ATF1是miR-30a-5p的一个靶基因,过表达miR-30a-5p可下调ATF1表达。siATF1、miR-30a-5p agomir及siATF1+miR-30a-5p agomir转染A549细胞联合照射,A549细胞克隆形成率及放射生物学参数D_(0)、D_(q)、N均低于对照组(均为P<0.05)。结论:miR-30a-5p通过靶向下调ATF1表达,在A549细胞中发挥放射增敏效应。     

miR-181d对骨巨细胞瘤生物学行为的影响

目的:观察miR-181d在骨巨细胞瘤中的表达及其对骨巨细胞瘤生物学行为的影响。方法:收集20例骨巨细胞瘤病理标本及瘤旁组织,利用RT-PCR和荧光原位杂交技术检测肿瘤组织及瘤旁组织中miR-181d的表达。以原代培养的骨巨细胞瘤基质细胞（giant cell tumor stromal cell,GCTSC）转染miR-181d的仿生剂和抑制剂,通过CCK8实验检测miR-181d对GCTSC增殖活性的影响;通过萤光素酶活性实验及western blot检测miR-181d对细胞周期分裂蛋白37（CDC37）调控作用。结果:RT-PCR检测骨巨细胞瘤中miR-181d的表达量显著低于瘤旁组织［（1.09±0.12） vs （3.07±0.43）,P<0.05］;荧光原位杂交显示肿瘤组织内荧光值明显低于瘤旁组织。GCTSC转染miR-181d agomir后,细胞增殖活性显著低于对照组［（0.51±0.11） vs （0.95±0.12）,P<0.05］;而转染miR-181d antagomir后,细胞增殖活性显著高于对照组［（1.63±0.15） vs （0.89±0.09）,P<0.05］;萤光素酶活性实验及western blot显示miR-181d可以抑制CDC37表达。结论:miR-181d可通过调控CDC37抑制骨巨细胞瘤细胞增殖。     

lncRNA LUADT1靶向miR-138-5p调控胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨肺腺癌相关转录本1（LUADT1）对胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法:将si-NC、si-LUADT1、miR-NC、miR-138-5p、pcDNA、pcDNA-LUADT1分别转染至U251细胞中,记为si-NC组、si-LUADT1组、miR-NC组、miR-138-5p组、pcDNA组、pcDNA-LUADT1组;将si-LUADT1分别与anti-miR-NC、anti-miR-138-5p共转染至U251细胞中,记为si-LUADT1+anti-miR-NC组、si-LUADT1+anti-miR-138-5p组。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测LUADT1和miR-138-5p表达水平;细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测细胞增殖活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹（Western blot）法检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（p21）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达;双荧光素酶报告实验检测lncRNA LUADT1和miR-138-5p的靶向关系。结果:胶质瘤组织中lncRNA LUADT1高表达,miR-138-5p低表达。抑制lncRNA LUADT1表达或过表达miR-138-5p,细胞活性降低,细胞迁移、侵袭数降低,CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低,p21蛋白表达水平升高。lncRNA LUADT1靶向调控miR-138-5p,干扰miR-138-5p表达逆转了抑制lncRNA LUADT1表达对胶质瘤U251细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:抑制lncRNA LUADT1表达通过靶向miR-138-5p抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-138-5p靶向调控RAB22A表达抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-138-5p对胶质瘤细胞增殖、迁移与侵袭的影响以及其作用机制。方法:U251细胞分为miR-NC组(对照组)、miR-mimics组、miR-inhibitor组以及miR-mimics+RAB22A-pcDNA3.1组。qRT-PCR检测miR-138-5p在胶质瘤细胞中的表达量;CCK8实验检测U251细胞的增殖能力;Transwell实验检测U251细胞的迁移和侵袭能力;Targetscan数据库预测miR-138-5p的下游靶基因;运用双荧光素酶报告基因实验验证细胞周期蛋白RAB22A是miR-138-5p的靶基因;RNA结合蛋白免疫沉淀实验进一步验证miR-138-5p与RAB22A之间的相互作用;运用蛋白免疫印迹实验检测组织和细胞中RAB22A的蛋白表达水平。结果:与正常人星形胶质细胞相比较,miR-138-5p 在胶质瘤细胞中表达量降低(P<0.05);CCK8和Transwell实验结果表明,在U251细胞中,过表达miR-138-5p能显著抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P＜0.05);运用Targetscan数据库预测miR-138-5p下游靶基因为RAB22A,miR-138-5p作用于RAB22A的3' UTR区域,双荧光素酶报告基因实验与蛋白免疫沉淀实验结果证实miR-138-5p与RAB22A之间的相互作用;RAB22A在胶质瘤细胞中明显高表达(P＜0.05),在U251细胞中过表达miR-138-5p明显抑制RAB22A的表达(P＜0.05)。结论:miR-138-5p在胶质瘤细胞中表达降低,miR-138-5p通过下调RAB22A表达而抑制细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-203抑制食管鳞癌细胞迁移、侵袭及其分子机制探讨

目的:探究miR-203对食管鳞癌细胞(TR146、EC109)迁移、侵袭能力的影响及其分子机制。方法:检测miR-203在食管鳞癌细胞系中的表达水平,并通过转染miR-203激动剂agomir使TR146、EC109细胞稳定高表达miR-203,miR-203 agomir阴性对照组(NC)和无处理组(Blank)作为对照。通过划痕实验、Transwell实验检测miR-203对TR146、EC109细胞迁移、侵袭能力的影响。利用生物信息学分析miR-203潜在的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验、实时定量PCR（qPCR）实验、Western blot实验验证miR-203靶基因。通过拯救实验探究miR-203是否通过抑制靶基因发挥作用。结果:与正常食管上皮细胞相比,miR-203在食管鳞癌细胞系中表达下调。在TR146、EC109细胞内将miR-203表达水平上调数倍,划痕实验证实miR-203能够抑制TR146、EC109细胞迁移能力,Transwell实验证实miR-203能够抑制TR146、EC109细胞侵袭能力。生物信息学、qPCR实验和Western blot实验表明LASP1(LIM and SH3 domain protein 1)是miR-203潜在的靶基因。拯救实验表明miR-203通过靶向抑制LASP1发挥抑制食管鳞癌细胞迁移、侵袭的作用。结论:miR-203能够抑制食管鳞癌细胞迁移、侵袭,并且该抑制作用可能通过miR-203靶向抑制LASP1介导,为食管鳞癌临床诊断和靶向治疗提供了理论依据。