基质金属蛋白酶、血管内皮细胞生长因子与角膜新生血管形成的相关性

目的 研究大鼠角膜新生血管形成中,基质金属蛋白酶(MMP2)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达与炎性反应的相关性。方法 利用硝酸银烧灼角膜表面,建立鼠角膜新生血管模型,每日裂隙灯下观察角膜新生血管的发展,并于1、4、7、10、21d处死大鼠,摘取眼球作角膜病理切片,多形核白细胞(PMN)计数作统计分析;免疫组化方法分析MMP2、VEGF的表达。结果 光镜下显示正常组PMN计数为0.500±0.629,处理后第1d角膜缘(PMN)细胞开始增多,炎症后引起角膜新生血管(CNV)1d、4d、7d.10d、21d,PMN计数(每高倍视野均数)分别为14.200±1.723、19.200±2.401、28.700±1.632、15.100±2.097、0.700±0.816,以CNV7d组PMN增加最明显,此后减少;免疫组化显示:MMP2在CNV中阳性表达逐渐增加,于10d表达最明显,此后随炎性细胞的减少而减少,21d后几乎无表达;VEGF与MMP2的表达分布相似,但密度较弱。结论 炎症相关性角膜新生血管形成中,MMP2、VEGF的表达增加,并与角膜的炎性反应平行。     

VEGF、MVD与角膜新生血管形成关系的实验研究

目的 探讨血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor , VEGF )在大鼠角膜碱烧伤后新生血管形成中的作用.方法 利用氢氧化钠烧灼大鼠角膜表面,建立大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization, CNV)模型,每日裂隙灯下观察角膜新生血管的发展,并分别于烧伤后1、4、7、14、21d处死大鼠,摘除角膜做病理切片,行微血管密度(Microvessel density,MVD)测定;免疫组化法检测VEGF的表达;图像分析系统测定该因子的蛋白表达.结果 免疫组化显示:VEGF在CNV中的阳性表达逐渐增加,于7 d表达最明显, 21 d后几乎无表达;MVD测定结果以CNV 7～14 d组血管密度最高;图像分析系统结果与免疫组化染色结果一致.结论 碱烧伤后CNV形成中,VEGF的表达增加,CNV中MVD与VEGF的表达呈正相关.     

强力霉素对碱烧伤后角膜新生血管生长的影响

目的 探讨强力霉素对碱烧伤后角膜新生血管(CNV)形成及角膜血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法 将35只健康SD大鼠随机选取5只,为A组(正常组).余30只大鼠行右眼角膜碱烧伤,建立角膜新生血管动物模型,将其随机平分为B组(实验对照组)和C组(实验干预组).分别于3d,7d,14d裂隙灯下观察各组CNV的生长情况,计算新生血管面积,并采用免疫组化法检测大鼠角膜组织中VEGF的表达情况.结果 A组没有CNV生成,C组和B组相比CNV的生长明显受到了抑制;免疫组织化学染色结果示:A组VEGF微弱表达,B组和C组的表达明显高于A组,C组VEGF的表达低于B组,且差异具有统计学意义(P<0.05).结论 强力霉素可有效抑制角膜碱烧伤后CNV的生成及角膜组织中VEGF的表达.     

MMP-2和TIMP-2在激光诱导形觉剥夺的高度近视豚鼠脉络膜新生血管中的表达变化

 目的  构建高度近视豚鼠脉络膜血管新生(choroidal neovascularization,CNV)模型,探讨基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitor-2 of metalloproteinase,TIMP-2)在高度近视CNV形成中的作用。方法  72只2周龄三色豚鼠随机分为实验组(n=36)和对照组(n=36),实验组右眼行6周形觉剥夺诱导高度近视。两组各选取30只豚鼠右眼行532 nm激光光凝视网膜诱导CNV。于激光前和光凝后7、14、21、28、35天进行免疫组化观察光凝区域MMP-2和TIMP-2的表达,real-time PCR检测视网膜色素上皮层(retinal pigment epithelium,RPE) 脉络膜/巩膜复合物中的MMP-2和TIMP-2 mRNA表达对MMP-2和TIMP-2免疫组化阳性表达的积分光密度值(integral optical desnsity,IDO)及mRNA相对表达水平进行统计学分析。结果  激光光凝后实验组和对照组MMP-2和TIMP-2表达均明显上调,MMP 2于光凝后21天、TIMP-2于光凝后28天时表达高峰。激光前及光凝后各观察时间点,实验组MMP-2阳性表达和mRNA相对表达量均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而激光前实验组TIMP-2表达较对照组明显减少(P<0.05),光凝后各时间点两组TIMP-2表达差异无统计学意义。结论  MMP-2和TIMP-2与高度近视CNV形成密切相关,MMP-2与TIMP-2表达平衡紊乱可能参与高度近视CNV的发生发展。     

碱烧伤后小鼠角膜新生血管表达vasohibin mRNA其蛋白

目的:探讨碱烧伤后的小鼠角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)是否表达vasohibin mRNA及其蛋白.方法:15只小鼠采用碱烧伤的方法制备角膜新生血管模型.6只小鼠为正常对照组.分别于烧伤后1、3、6、9d裂隙灯显微镜观察CNV情况并拍照,以NIH ImagJ 图像软件分析角膜照片,计算新生血管的面积比(新生血管占全角膜的比值).分别在这四个不同时间点提取烧伤组各3个角膜的总mRNA,另取3个正常对照组角膜作为对照,用半定量逆转录酶链式反应(RT-PCR)检测 vasohibin mRNA在CNV中的表达水平.在烧伤后9d采用免疫荧光染色法检测vasohibin蛋白在烧伤和正常角膜组织中的表达异同.结果:vasohibin蛋白在烧伤组角膜中的新生血管内皮呈强荧光信号,而在正常角膜组织中没有荧光信号;碱烧伤后1、3、6和9d,新生血管面积比分别为0%、(12.72±1.95)%、(30.45±5.40)%、(53.09±9.14)%,vasohibin mRNA相对GAPDH mRNA的表达量为2.11±0.32、2.39±0.76、3.72±0.54 and 8.94±1.21.在观察期内,新生血管面积比值和vasohibin mRNA的表达水平逐渐升高,二者呈现明显的相关性(r=0.930,P<0.05).结论:碱烧伤后小鼠角膜新生血管表达vasohibin mRNA及其蛋白,但正常角膜组织中不表达.Vasohibin蛋白表达与角膜新生血管的形成关系密切.     

兔眼碱烧伤后VEGF的表达与角膜新生血管的关系探讨

目的:研究兔眼碱烧伤后角膜血管内皮生长因子(VEGF)的表达与角膜新生血管(CNV)的关系。方法:56只兔随机分成实验组A、实验组B、实验组C及对照组。实验组用N aOH碱烧伤法诱导CNV模型,按碱烧伤后24h、3d、1周、2周、3周、4周,2月、6月处死兔取出角膜,进行CNV的形态学检查及免疫组化法评价VEGF的表达。结果:实验组兔碱烧伤后1d开始出现CNV,2周达高峰;碱烧伤后1d出现VEGF表达,持续升高至碱烧伤后1周,随后表达水平开始下降。对照组中未出现CNV及VEGF不表达。结论:碱烧伤后兔眼VEGF的表达与CNV的形成有密切相关性,并发挥了作用。     

MMP-9及TIMP-3在小鼠脉络膜新生血管形成中的作用

目的：研究基质金属蛋白酶-9(MMP-9)，基质金属蛋白酶组织抑制剂-3(TIMP-3)mRNA在实验性小鼠脉络膜新生血管(CNV)形成过程中的表达，探讨二者在CNV发生机制中的作用。方法：使用半导体二极管激光器(810nm)对C57BL／6J小鼠视网膜进行照射(120mW，75μm，0．1s)以诱导CNV形成，分别于激光后1、3d，1、2、4周取出眼球，采用原位杂交技术及图像分析对MMP-9、TIMP-3 mRNA的表达情况进行检测。结果:MMP-9、TIMP-3 mRNA表达在CNV形成过程中均有一动态过程，即激光后早期均明显增加，后期则保持在较稳定水平，前者增长趋势于激光后1周停止，而后者于激光后3d即已稳定。结论：MMP-9与TIMP-3 mRNA表达变化的失衡促使基质降解作用的发挥，在CNV的形成中可能发挥了一定作用。     

MMP-9及TIMP-3在小鼠脉络膜新生血管形成中的作用

目的研究基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-3(TIMP-3)mRNA在实验性小鼠脉络膜新生血管(CNV)形成过程中的表达,探讨二者在CNV发生机制中的作用.方法使用半导体二极管激光器(810nm)对C57BL/6J小鼠视网膜进行照射(120mW,75μm,0.1s)以诱导CNV形成,分别于激光后1、3d,1、2、4周取出眼球,采用原位杂交技术及图像分析对MMP-9、TIMP-3mRNA的表达情况进行检测.结果MMP-9、TIMP-3 mRNA表达在CNV形成过程中均有一动态过程,即激光后早期均明显增加,后期则保持在较稳定水平,前者增长趋势于激光后1周停止,而后者于激光后3d即已稳定.结论MMP-9与TIMP-3 mRNA表达变化的失衡促使基质降解作用的发挥,在CNV的形成中可能发挥了一定作用.     

角膜缝线与碱烧伤诱导兔角膜新生血管的实验观察

目的利用角膜缝线、碱烧伤两种常用方法来诱导兔角膜新生血管（CNV）产生。观察CNV产生早期的过程中,其生长情况及血管内皮生长因子（VEGF）在兔角膜中的表达情况。方法将新西兰白兔75只随机分为3组,A组-正常对照组5只;B组-角膜缝线组35只;C组-碱烧伤组35只。每日裂隙灯显微镜观察角膜炎性反应情况与混浊程度,检测第3天、7天、14天角膜新生血管长度和数量并摄影记录;B、C两组分别于实验后第1、2、3、5、7、10、14天观察、取材。免疫组织化学（IHC）检测VEGF在兔角膜中的表达情况。结果伤后3 d,新生血管开始侵入角膜;7 d,新生血管生长活跃;10 d,新生血管达到生长高峰;14 d后B组与C组新生血管均出现回退迹象。角膜缝线组CNV面积明显小于碱烧伤组（P〈0.01）,10 d后VEGF在碱烧伤组的表达明显高于缝线组（P〈0.01）。结论碱烧伤组相对于缝线组可以诱导产生更多的新生血管（CNV面积）,且CNV退化的时间晚,这些可能与VEGF的表达有关;但角膜缝线更容易控制CNV产生的范围。     

2型糖尿病大鼠心脏MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的变化与糖尿病心肌病变关系

目的探讨2型糖尿病(T2DM)大鼠心脏基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制物2(TIMP-2)的变化及其在糖尿病心肌病变(Diabetic Cardiomyopathy,DC)发病中的意义。方法高脂食物喂养、小剂量链脲菌素诱导2型糖尿病大鼠模型。正糖高胰岛素嵌铗技术(EICT)检测两组大鼠胰岛素抵抗情况,葡萄糖输注速率(GIR)表示胰岛素抵抗;测定大鼠体重(BW)、心脏重量(HW)和计算HW/BW;RT-PCR测定两组大鼠MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的mRNA水平,免疫组化法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2和Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白水平。结果糖尿病大鼠GIR明显低于正常对照组(P0.01)。糖尿病大鼠心脏:HW和HW/BW明显高于正常对照组(P0.05),Ⅰ、Ⅲ型胶原明显增多(P0.01),MMP-2、TIMP-1、TIMP-2的mRNA表达增加(P0.01),MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的蛋白含量增加(MMP-2、TIMP-1:P0.05;TIMP-2:P0.01);MMP-2、MMP-9与TIMP-1蛋白水平比值及MMP-2与TIMP-2蛋白水平比值均显著降低。结论 T2DM大鼠心脏MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2增加,MMPs/TIMPs比值降低,心脏Ⅰ、Ⅲ型胶原明显增多;心脏MMPs/TIMPs表达改变与心脏间质纤维化有关。     

羊膜移植对急性碱烧伤角膜中MMP-9及TIMP-1表达的影响

目的 :探讨羊膜移植对角膜碱烧伤后基质金属蛋白酶 (MMP 9)及其抑制剂 (TIMP 1)在小鼠角膜中的表达影响及意义。方法 :将 4 0只昆明小鼠随机分为实验组和对照组 ,采用 1mol·L-1氢氧化钠溶液烧伤小鼠角膜 ,建立炎症性角膜碱烧伤动物模型 ;对实验组小鼠右眼角膜行羊膜移植术 ;对照组不行羊膜移植。然后在羊膜移植术后第 2 ,7,14 ,2 1d处死动物。用免疫组织化学染色方法和计算机图像分析系统检测小鼠角膜烧伤后基质金属蛋白酶在角膜中的分布及其平均光度值。结果 :在对照组 ,角膜中MMP 9在第 2d出现表达 ,第 7d达高峰 ,以后逐渐降低。TIMP 1开始表达不明显 ,第 7d出现表达 ,14d达高峰 ,以后逐渐降低。羊膜移植组各时间点MMP 9表达低于对照组 ,而TIMP 1表达高于对照组。结论 :羊膜移植术可通过调节基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达平衡 ,从而抑制和延迟碱烧伤后角膜融解的发生和发展。     

小鼠单疱病毒角膜炎行羊膜移植MMPs及TIMPs表达的变化

目的:探讨羊膜移植对BalB/c小鼠感染单纯疱疹病毒-1(HSV-1)后基质金属蛋白酶-2,-8,-9及组织金属蛋白酶抑制剂TIMP-1,TIMP-2表达变化及其在单疱病毒角膜炎(HSK)病程中所起的作用。方法:将40只小鼠随机分为实验组和对照组,将5μl(105PFU)HSV-1感染小鼠单侧右眼角膜,建立单疱病毒角膜炎的动物模型。对实验组小鼠右眼角膜行羊膜移植术。分别在HSV-1感染后的第2,7,14 d处死小鼠,用免疫组化方法对小鼠感染HSV-1后MMP-2、MMP-9、MMP-8、TIMP-1、TIMP-2的表达变化进行研究,探讨它们在单疱病毒性角膜炎发展过程中所起的作用。结果:在对照组,角膜中MMP-2、MMP-8、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2在第2天出现表达且表达主要位于浅表基质层及上皮下的炎性细胞中。感染后第14天可见坏死性角膜炎及角膜溃疡形成,同时角膜基质和浸润的炎性细胞中尤其溃疡处,可见MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2表达显著增加。溃疡区域有大量MMP-8阳性染色的中性粒细胞。实验组各时间点MMP-2,-9,-8活性均低于对照组,TIMPS表达高于对照组。结论:行羊膜移植可抑制角膜细胞和浸润的炎性细胞分泌产生MMPs,促进TIMPS表达,可能对上皮性角膜炎与溃疡形成过程起重要的抑制作用。     

羊膜移植对碱烧伤小鼠角膜基质金属蛋白酶表达的影响及其意义

目的　探讨羊膜移植对急性碱烧伤小鼠角膜基质金属蛋白酶 (MMP 2 ,MMP 9)的表达影响及其意义。方法　将 40只昆明小鼠随机分为实验组和对照组 ,采用 1mol·L- 1 氢氧化钠溶液烧伤小鼠角膜 ,建立炎症性角膜碱烧伤动物模型 ;对实验组小鼠右眼角膜行羊膜移植术 ,对照组不行羊膜移植。然后在羊膜移植术后 2、7、14、2 1d处死动物 ,用免疫组织化学染色方法和计算机图像分析系统检测小鼠角膜烧伤后基质金属蛋白酶在角膜中的分布及其平均吸光度值。结果　在对照组 ,角膜中MMP 2、MMP 9在第 2天出现表达 ,第 7天达高峰 ,以后逐渐降低。实验组各时间点MMP 2及MMP 9表达均低于对照组。结论　羊膜移植术可抑制角膜细胞及浸润的炎症细胞产生基质金属蛋白酶 ,从而抑制和延迟碱烧伤后角膜溶解的发生和发展。     

基于缝合法的小鼠角膜炎症模型的构建及其意义

目的: 探讨缝合法构建小鼠角膜炎症模型的有效性及其意义。方法：采用11-0尼龙线于BALB/c小鼠角膜进行“8”字缝合，构建小鼠角膜炎症模型，分别于术后3、7、12 d裂隙灯下和术后5、7、14 d采用免疫荧光法观察淋巴管及血管生长情况，术后3、7、14 d采用HE染色观察角膜炎症变化，术后1、3、7、11、14 d采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测TNF-α mRNA在炎性角膜中的表达。结果：裂隙灯观察及免疫荧光结果显示，在术后3 d角膜可见明显的淋巴管、血管新生，术后7 d 生长达到高峰；HE染色显示术后3 d角膜水肿、炎性细胞浸润明显，于7 d开始消退；qRT-PCR结果显示角膜术后表达TNF α mRNA，术后7 d到达高峰后开始下降，并维持在较低水平(P<0.05)。结论：缝合法小鼠角膜模型是一种典型的炎症模型，符合炎性反应的一般规律，是研究炎性淋巴管生长调控机制的理想工具。     

COX-2在角膜新生血管中的表达及血管形成抑制实验研究

目的:检测COX-2、VEGF在角膜新生血管形成中的表达及探讨COX-2选择性抑制剂对新生血管的抑制作用.方法:建立碱烧伤致大鼠角膜新生血管模型,通过裂隙灯和病理学观察,免疫组化方法检测COX-2和VEGF的表达.结果:阳性组见大量炎性细胞浸润,角膜新生血管丰富,用药组的上述改变明显减轻,且术后各时间点COX-2和VEGF表达均较阳性组明显减弱,有显著性差异(P<0.01).二者表达变化与病理组织学表现相平行.且COX-2与VEGF呈显著正相关(P<0.05).结论:COX-2和VEGF参与了角膜新生血管的形成过程,COX-2选择性抑制剂可抑制和延缓新生血管的发生、发展.     

转染CTGF基因对乳腺癌细胞MMP－2及TIMP－2表达的影响

目的: 通过研究结缔组织生长因子（CTGF）基因对人乳腺癌MCF-7细胞株基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-2（TIMP-2）表达的影响,深入探讨CTGF在乳腺癌侵袭和转移中的作用机制。方法: 采用脂质体介导法,将CTGF基因瞬时转染体外培养的人MCF-7细胞,并用免疫荧光、RT-PCR和蛋白质印迹法检测其转染成功与否;再采用蛋白质印迹法检测转基因MCF-7 MMP-2及TIMP-2表达改变。结果: 与对照组相比,转染CTGF基因的MCF-7,其CTGF mRNA和蛋白表达均显著增高,MMP-2蛋白表达水平显著增高,而TIMP-2蛋白表达水平显著降低。 结论: CTGF可能通过增加乳腺癌细胞MMP-2表达及抑制TIMP-2的生成而起到促进乳腺癌侵袭和转移的作用。     

卵巢浆液性囊腺癌中MMP-7和TIMP-3蛋白表达的实验研究

目的:探讨卵巢浆液性囊腺癌中MMP-7和TIMP-3蛋白表达与其发生、发展的可能关系。方法:应用免疫组化(S-P)方法检测45例卵巢浆液性囊腺癌和39例卵巢浆液性囊腺瘤的MMP-7和TIMP-3蛋白情况。结果:45例卵巢浆液性囊腺癌和39例卵巢浆液性囊腺瘤组织中MMP-7蛋白表达阳性百分比为68.89%和30.77%,TIMP-3蛋白为40.00%和64.10%。MMP-7蛋白在卵巢浆液性囊腺癌中表达增高(P<0.01),TIMP-3蛋白在卵巢浆液性囊腺癌中表达减低(P<0.05)。结论:MMP-7和TIMP-3蛋白表达改变可能与卵巢浆液性囊腺癌的发生机制有关。