大鼠胎脑神经细胞与几丁质多孔体、胶原蛋白海绵及明胶海绵生物相容性的实验研究

目的 评价大鼠胎脑神经细胞与几丁质多孔体、胶原蛋白海绵及明胶海绵的细胞相容性，为中枢神经组织工程材料的选择提供实验依据。方法 将大鼠胎脑神经细胞分别与几丁质多孔体、胶原蛋白海绵及明胶海绵联合体外培养，进行光、电镜观察，并测定3种材料与细胞的吸附率。结果 神经细胞均能在3种材料上贴附并生长，细胞吸附率分别为31．54％、30．58％和15．54％，并且几丁质有促进细胞生长的作用。结论 几丁质、胶原蛋白及明胶3种材料，尤其是几丁质，具有良好的神经细胞相容性，有可能作为神经系统组织工程的载体应用于临床。     

大鼠脂肪干细胞与不同去细胞神经支架的体外相容性比较

目的:观察大鼠脂肪干细胞与2种不同去细胞神经支架的体外相容性,为周围神经组织工程寻求合适的种子细胞载体.方法:将大鼠脂肪干细胞与传统去细胞神经支架和改良法去细胞神经支架体外复合培养,采用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞在2种支架上的生长、黏附情况,测定细胞活性及细胞吸附率,并与空白对照组比较.结果:脂肪干细胞可在2种去细胞神经支架上生长、黏附,在改良法去细胞神经支架上的细胞吸附率优于传统去细胞神经支架.结论:脂肪干细胞与2种去细胞神经支架均有较好的体外组织相容性,改良法去细胞神经支架可作为更有效的周围神经组织工程细胞载体.     

组织工程皮肤用真皮支架细胞相容性的比较研究

目的研究几种真皮支架的细胞相容性，为构建组织工程皮肤提供资料。方法取胶原海绵、明胶海绵、PEGA和PHBV共4种真皮支架，与小鼠成纤维细胞和ES源表皮样干细胞体外培养，观察前者对后者粘附率的影响，及对成纤维细胞增殖的影响，评价真皮支架的细胞相容性。结果成纤维细胞和ES源表皮样干细胞在4种支架材料上均能粘附存活，成纤维细胞能增殖，但在胶原海绵、PHBV和PLGA支架上的增殖率明显高于明胶海绵。结论几种真皮支架的细胞相容性较好，可用于新型组织工程皮肤的构建。     

大鼠脂肪干细胞与去细胞神经支架相容性研究

目的观察大鼠脂肪干细胞与去细胞神经支架体外相容性,为周围神经组织工程寻求合适的种子细胞载体。方法将大鼠脂肪干细胞与去细胞神经支架体外体外复合培养,采用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞在支架上的生长、黏附情况,MTT法测定细胞活性并与空白对照组比较。结果脂肪干细胞在去细胞神经支架上生长、黏附情况良好。结论两者具有很好的体外组织相容性,去细胞的神经支架可以作为有效的周围神经组织工程的细胞载体。     

兔髁突细胞与可吸收明胶海绵复合培养的研究

目的: 研究明胶海绵作为颞下颌关节组织工程支架材料应用的可行性.方法: 采用胶原酶阶段消化法获取兔髁突软骨中的纤维软骨细胞,取经碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)扩增的第3代细胞与已用多聚赖氨酸修饰的明胶海绵复合培养,进行噻唑蓝(MTT)比色及光镜、扫描电镜观察.结果: 纤维软骨细胞于明胶海绵孔壁内牢固粘附,5 d开始增殖,4 W时有大量细胞生长于明胶海绵上.结论: 明胶海绵表现出良好的亲水性、细胞吸附性和体外生物相容性,可作为组织工程细胞培养支架材料用.     

壳聚糖-类人胶原蛋白对兔肝创面的止血效果及组织相容性观察

目的:观察壳聚糖-类人胶原蛋白对兔肝脏创面的局部止血效果及组织相容性.方法:在兔肝脏表面制作面积为1 cm×1 cm的创面,应用壳聚糖-类人胶原蛋白、类人胶原蛋白及明胶海绵进行止血,通过测定出血时间找出止血效果最佳的材料.同时通过光镜及电镜观察比较其与肝脏组织的相容性.结果:壳聚糖-类人胶原蛋白,类人胶原蛋白和明胶海绵止血时间依次为(78±11)s,(81±10)s和(115±13)s,壳聚糖-类人胶原蛋白和类人胶原蛋白止血时间均比明胶海绵缩短(P＜0.05).光镜及电镜观察发现,与明胶海绵相比,壳聚糖·类人胶原蛋白海绵的组织相容性更佳.结论:类人胶原蛋白中加入壳聚糖后不影响其局部的止血效果和组织相容性,但可增强材料的力学强度和延展性.     

明胶海绵与人胚半月板细胞构建复合物的研究

目的：研究明胶海绵作为半月板组织工程支架材料应用的的可行性。方法：采用胶原酶阶段消化法获取人胚半月板纤维软骨细胞，取经胰岛素样生长因子I(IGF—Ⅰ)扩增的第3代细胞与已用多聚赖氨酸修饰的明胶海绵复合培养，进行MTT、光镜、扫描电镜观察。结果：纤维软骨细胞于明胶海绵上牢固粘附，4d开始增殖，3周时已有大量细胞生长于明胶海绵上。结论：明胶海绵表现出良好的亲水性、细胞吸附性和体外生物相容性，适于作为组织工程细胞培养支架材料用。     

豚鼠神经干细胞修复兔面神经缺损观察

目的:观察豚鼠海马神经干细胞(NSCs)修复兔面神经缺损的效果,探讨其作为组织工程的种子细胞修复周围神经缺损的可行性.方法:健康日系大耳白兔20只,随机分为2组,每组10只,均建立一侧面神经颊支缺损10 mm模型,用内置胶原蛋白海绵的硅胶管桥接面神经缺损,治疗组在上述神经导管内植入新生豚鼠海马NSCs,对照组注人生理盐水.NSCs移植前48 h用5'-溴尿嘧啶(BrdU)标记.术后12周,进行大体观察、神经电生理检查、BrdU和S100免疫组织化学染色和组织学观察.结果:①治疗组神经肌肉动作电位的潜伏期明显短于对照组(P＜0.01),而波幅明显高于对照组(P＜0.01).②治疗组有大量BrdU阳性细胞,且部分阳性细胞同时呈现S100双标阳性.对照组未见BrdU阳性细胞.③治疗组再生有髓神经纤维数量、直径和髓鞘厚度与对照组相比明显增加(P＜0.01).结论:NSCs能明显提高面神经损伤后修复效果,可作为种子细胞应用于外周神经组织工程.     

自体骨髓基质细胞立体培养修复关节软骨缺损的实验研究

目的:探讨细胞载体Ⅰ型胶原海绵与骨髓基质细胞的组织相容性及利用自体骨髓基质细胞立体培养构建的组织工程软骨修复关节软骨的效果.方法:在24只4～6月龄新西兰大白兔股骨粗隆、胫骨下端进行骨穿,获取骨髓基质细胞进行体外培养、扩增,三代后获取足够细胞数量,制成108/ml细胞悬液,植入细胞载体Ⅰ型胶原海绵立体培养,2周后移植到直径 3.5 mm 的软骨缺损面上,于1、2、3个月处死动物检查.结果:骨髓基质细胞与细胞载体Ⅰ型胶原海绵有良好的组织相溶性,形成自体组织工程软骨能完成关节软骨缺损修复.第1个月修复组织具备纤维软骨特征,第2个月具备透明软骨特征,第3个月修复组织具备透明软骨的生物学特性.结论:细胞载体Ⅰ型胶原海绵与骨髓基质细胞体外培养形成的组织工程软骨,能完成关节软骨的修复,修复组织为透明软骨.     

人脐带问充质干细胞在胶原支架材料体外复合培养的生物学特性研究

目的：观察体外人脐带间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）黏附胶原蛋白支架条件下的干细胞免疫表型及成骨特性的变化,为复合载体移植提供实验依据。方法：将人脐带间充质干细胞静态接种于胶原蛋白支架上,经体外培养两周后,检测细胞在胶原蛋白材料中的干细胞CD44、CD105、HLA-DR、Ⅰ型胶原表达,观察细胞特性变化。结果：细胞在支架上有较好的粘附,CD 44、CD105、Ⅰ型胶原表达阳性,HLA-DR表达阴性。结论：混合培养中人脐带MSCs不仅与胶原蛋白有较好的组织相容性,且细胞在支架上培养仍保持了其干细胞的特点,Ⅰ型胶原表达阳性,提示具有潜在的成骨能力,为人脐带间充质干细胞组织工程体外预制提供实验基础。 更多还原     

骨髓间充质干细胞诱导分化的成骨细胞转染增强型绿色荧光蛋白基因后复合生物衍生骨的研究

目的:探讨绿色荧光蛋白(GFP)基因转染本身是否可以改变细胞复合材料的生物学特性,从而影响材料生物相容性的正确评价?方法:将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因技术成功标记人源骨髓间充质干细胞(MSCs)诱导分化的成骨样细胞,再与人源生物衍生骨复合培养;同时设立未转染EGFP基因的骨髓MSCs诱导分化的成骨样细胞直接与人源生物衍生骨复合培养作为对照,通过倒置显微镜?荧光显微镜?扫描电镜对比观察?结果:发现转染EGFP基因的MSCs诱导分化的成骨样细胞能够成功地复合于人源生物衍生骨上,且生长状态较好?与未转染组细胞复合材料的情况相比,转染组与其没有明显差异?结论:EGFP基因转染技术没有对MSCs诱导分化的成骨样细胞复合衍生骨的能力以及增殖生长活性造成明显损害,从而不会影响对于材料生物相容性的正确评价?     

纳米结构组织工程支架材料

组织工程支架材料表面的微观和亚微观结构对细胞的粘附与生长有很重要的影响,表层具有纳米结构的支架材料可以改善细胞对材料的粘附性和生物相容性。本文主要介绍了纳米生物材料对组织工程发展的影响及纳米生物材料的一些制备方法,如自组装技术和模板技术。     

Biocompatibility Studies on Fibrin Glue Cultured with Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Vitro

By culturing bone marrow mesenchymal stem cells of rabbits with fibrin glue in vitro,the biocompatibility of fibrin glue was investigated to study whether this material can be used as scaffolds in bone tissue engineering. After 2-months old New Zealand rabbits had been anesthetized, about 4--6 ml of bone marrow were aspirated from rabbit femoral trochanter. The monocytes suspension was aspirated after bone marrow was centrifuged with lymphocyte separating medium and cultured primarily. Then the cells were divided into two groups: one was cultured with complete medium and the other with induced medium. The cells of the two groups were collected and inoculated to the culture plate containing fibrin glue. In the control group, cells were inoculated without fibrin glue. The implanted cells and materials were observed at different stages under a phase-contrast microscope and scanning electron microscope. MTT and alkaline phosphatase (ALP) were measured. Bone marrow mesenchymal stem cells grew on the surface of fibrin glue and adhered to it gradually. Cells light absorption value (A value) and the ALP content showed no significant difference. Fibrin glue had no inhibitory effect on cell morphology, growth, proliferation and differentiation. It has good biocompatibility and can be used as scaffold materials for bone marrow mesenchvmal stem cells in bone tissue engineering.     

BG/PHBV复合多孔支架材料与成骨细胞体外复合培养

目的用生物活性玻璃BG/聚羟基烷酸酯PHBV复合多孔支架材料与骨髓基质细胞来源的成骨细胞体外复合培养了解其生物相容性,为骨组织工程支架材料选择提供依据。方法:将体外培养的兔骨髓基质细胞诱导分化的成骨细胞,与BG/PHBV复合多孔支架材料体外复合培养,对复合体进行形态学、扫描电镜、细胞增长能力的测定,评价细胞与材料的相容性。结果:骨髓基质细胞有较强的向成骨细胞分化和繁殖能力成骨细胞与BG/PHBV复合多孔支架材料体外复合培养8d,分布于支架材料的成骨细胞迅速分化增殖,分泌细胞外基质并形成钙结节。结论:骨髓基质细胞是骨组织种子细胞的良好来源BG/PHBV复合多孔支架材料与成骨细胞具有良好的生物相容性,是构建组织工程骨的一种理想支架材料。     

Decellularized aorta of fetal pigs as a potential scaffold for small diameter tissue engineered vascular graft

Background For cardiovascular tissue engineering, acellularized biomaterials from pig have been widely investigated. Our purpose was to study mechanical properties and biocompatibility of decellularized aorta of fetal pigs （DAFP） to determine its potential as scaffold for small diameter tissue engineered vascular graft. Methods Descending aorta of fetal pigs was removed cells using trypsin, ribonuclease and desoxyribonuclease. Mechanical properties of DAFP were evaluated by tensile stress-strain and burst pressure analysis. Assessment of cell adhesion and compatibility was conducted by seeding porcine aortic endothelial cells. To evaluate biocompatibility in vivo DAFP was implanted subcutaneously into adult male Sprague Dawley rats for 2, 4 and 8 weeks. Results Histochemistry and scanning electron microscopy examination of DAFP revealed well-preserved extracellular matrix proteins and porous three-dimensional structures. Compared with fresh aorta, DAFP had similar ultimate tensile strength, axial compliance and burst pressure. Cell culture studies in vitro showed that porcine aortic endothelial cells adhered and proliferated on the surfaces of DAFP with excellent cell viability. Subdermal implantation demonstrated that the DAFP did not show almost any immunological reaction and exhibited minimal calcification during the whole follow-up period. Conclusion The DAFP has the potential to serve as scaffolds for small diameter tissue engineered vascular graft.     

基于聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二醇水凝胶的兔骨髓基质干细胞三维培养

目的研究新型可注射温度敏感型聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二醇水凝胶[poly（ethylene glycol）-poly（epsilon-caprolactone）-poly（ethylene glycol）,（PEG-PCL-PEG,PECE）]的生物相容性,探讨其做为细胞三维培养材料和组织工程支架的可行性。方法将兔骨髓基质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）接种于水凝胶,体外共同培养后进行形态结构观察,用MTT法检测BMSCs增殖活性,DAPI和EI试剂盒观察细胞存活和凋亡情况。结果 BMSCs在PECE水凝胶中生长及功能均比较理想。DAPI/EI染色见少量红色荧光,显示仅有少量细胞凋亡。结论可注射温度敏感性PEG-PCL-PEG水凝胶生物相容性好,是一种良好的三维培养材料,可作为种子细胞的载体应用于组织工程中。     

A surface-modified biodegradable urethral scaffold seeded with urethral epithelial cells

Background  Efficient cell adhesion and proliferation is a central issue in cell-based tissue engineering, which offers great promise for repair of urethral defects or strictures. This study evaluated the adhesion and growth of rabbit uroepithelium on a surface-modified three-dimensional poly-L-lactic acid (PLLA) scaffold.

Methods  Urethral mucosa were harvested from male New Zealand rabbits and the urothelium were dissociated and then cultured. Immunocytochemistry on cultured uroepithelium for pancytokeratin and uroplakin II and TE-7 confirmed pure populations. After in vitro proliferation, cells were seeded onto a surface-modified urethral scaffold with non-knitted filaments. The morphology and viability of the cells were examined by immunohistochemical and fluorescence staining. Inverted and scanning microscopes were used to document cell growth and adhesion.

Results  Three to five days after primary culture, the uroepithelial cells gradually became confluent, assuming a cobblestone pattern. The filaments of the urethral scaffold had excellent biocompatibility and allowed growth of the uroepithelium, without affecting viability. The uroepithelial cells adhered to and grew well on the scaffold. After 3–7 days, the cells grew vigorously and meshes of the scaffold were full of uroepitheliums.

Conclusions  The surface-modified urethral scaffold with non-knitted filaments allows the growth of uroepithelium and can serve as a carrier for the tissue engineering of urethra.

     

两种自制支架材料对体外培养关节软骨细胞生长与代谢的影响

目的 评定两种自制支架材料DL－聚乳酸支架，聚磷酸钙纤维对体外培养关节软骨细胞生长与代谢的影响。方法 采用材料样品与体外单层培养关节软骨细胞直接接触法，并对其进行倒置显微镜观察，培养细胞计数与DAN含量及其细胞外基质^35S掺入量和羟脯氨酸含量测定。结果 两种支架材料可与培养关节软骨细胞完全相容，无关节软骨细胞毒性；对培养关节软骨细胞的DNA，蛋白多糖及胶原合成无异常影响。结论 两种支架材料具有良好的关节软骨细胞相容性，对其功能物质的合成无异常影响，经其结构与性能优化，即可满足关节软骨组织工程制备的各项要求。