益生菌干预对卵清蛋白过敏幼鼠模型的免疫调节作用

目的 研究益生菌干预对卵清蛋白(OVA)诱导幼鼠食物过敏发生的影响,以及对模型动物免疫功能的调节作用.方法 3周龄断乳雌性Brown-Norway幼鼠随机分为空白对照组、食物过敏组和益生菌干预组,每组10只.采用ELISA法检测各组血清OVA-IgE和小肠内容物slgA水平.体外分离培养脾淋巴细胞,采用流式细胞术对脾调节性T淋巴细胞亚群分类计数,采用ELISA法检测细胞上清液中IFN-γ、IL-4和IL-10的水平.结果 食物过敏组血清OVA-IgE质量浓度显著高于空白对照组(P<0.05),益生菌干预组OVA-IgE质量浓度显著低于食物过敏组(P<0.05).益生菌干预组小肠内容物中slgA水平显著高于食物过敏组和空白对照组(P<0.05).食物过敏组脾CD4~+CD25~+T淋巴细胞的百分比显著低于空白对照组(P<0.05);益生菌干预组与食物过敏组相比有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05).食物过敏组脾IL-4和IL-10的质量浓度显著高于空白对照组(P<0.05);益生菌干预组IFN-γ、IL-4和IL-10的水平均显著低于食物过敏组(P<0.05);食物过敏组IFN-γ/IL-4的比值显著低于空白对照组(P<0.05),而益生菌干预组显著高于食物过敏组(P<0.05).结论 益生菌干预能够通过调节模型动物Th1/Th2细胞因子的平衡起到防治食物过敏的作用.     

益生菌干预对卵清蛋白过敏幼鼠模型的免疫调节作用

目的研究益生菌干预对卵清蛋白（OVA）诱导幼鼠食物过敏发生的影响,以及对模型动物免疫功能的调节作用。方法3周龄断乳雌性Brown—Norway幼鼠随机分为空白对照组、食物过敏组和益生菌干预组,每组10只。采用ELISA法检测各组血清OVA—IgE和小肠内容物sIgA水平。体外分离培养脾淋巴细胞,采用流式细胞术对脾调节性T淋巴细胞亚群分类计数,采用ELISA法检测细胞上清液中IFN-γ、IL-4和IL-10的水平。结果食物过敏组血清OVA—IgE质量浓度显著高于空白对照组（P〈0．05）,益生菌干预组OVA—IgE质量浓度显著低于食物过敏组（P〈0．05）。益生菌干预组小肠内容物中sIgA水平显著高于食物过敏组和空白对照组（P〈0．05）。食物过敏组脾CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞的百分比显著低于空白对照组（P〈0．05）;益生菌干预组与食物过敏组相比有升高趋势,但差异无统计学意义（P〉0,05）。食物过敏组脾IL-4和IL-10的质量浓度显著高于空白对照组（P〈0．05）;益生菌干预组IFN-γ、IL-4和IL-10的水平均显著低于食物过敏组（P〈0．05）;食物过敏组IFN-γ／IL-4的比值显著低于空白对照组（P〈0．05）,而益生菌干预组显著高于食物过敏组（P〈0．05）。结论益生菌干预能够通过调节模型动物Th1／Th2细胞因子的平衡起到防治食物过敏的作用。     

过敏性腹泻小鼠大肠黏膜中T细胞亚群的表达与Th1/Th2型细胞因子的关系

目的 检测小鼠过敏性腹泻模型大肠黏膜中T细胞亚群的表达和血清中Th1型细胞因子(IFN-γ)、Th2型细胞因子(IL-4)和OVA-IgE水平,探讨腹泻小鼠大肠黏膜中T细胞亚群的表达特点与Th1/Th2型细胞因子的关系.方法 雌性BALB/c小鼠20只随机分成两组,即对照组和实验组.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IFN-γ,IL-4及OVA-IgE的水平,取大肠组织HE染色观察大肠组织病理改变,免疫组织化学染色观察T细胞亚群的表达情况.结果 与对照组相比,实验组小鼠非特异性炎症反应明显,上皮不规则排列,腺区存在大量白细胞(WBC)浸润,固有层可见大量嗜酸性粒细胞(EOS)浸润.CD3,CD4,CD8免疫组织化学染色显示,与对照组相比,肠黏膜固有层可见大量CD3+,CD4+,CD8+细胞.实验组IL-4,OVA-IgE分泌水平明显升高,IFN-γ分泌水平和IFN-γ/IL-4比值显著降低(P<0.01).嗜酸粒细胞百分比与CD4+/CD8+比值呈显著正相关(P<0.05).结论 过敏性腹泻小鼠大肠黏膜局部CD4+T细胞亚群明显增加,CD4/CD8细胞比例失衡,并与Th1/Th2型细胞因子向Th2型漂移及EOS浸润程度相关.     

哮喘小鼠Th1/Th2细胞偏移及卡介苗干预的影响

目的研究哮喘小鼠Th1/Th2细胞偏移情况,同时观察卡介苗（BCG）对Th1/Th2偏移的影响。方法将雄性昆明小鼠随机分成哮喘组、BCG干预组和对照组。用卵清蛋白（OVA）致敏、激发建立哮喘模型。ELISA法测定肺泡灌洗液、脾细胞培养上清液中IFN-γ、IL-4的水平。结果肺泡灌洗液、脾细胞培养上清液中IFN-γ/IL-4比值在OVA致敏后均明显降低,初次激发后进一步降低,多次激发后继续降低,与对照组相比,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。BCG干预后IFN-γ/IL-4比值较哮喘组增高,但仍低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论致敏状态下Th1/Th2比例发生偏移,随着抗原激发,Th1/Th2偏移愈加明显,在哮喘气道炎症中,以Th2亢进为主,而代表全身性炎症的脾脏中,则以Th1分泌减少为主。BCG干预后可以部分纠正Th1/Th2偏移,但BCG作用有时限性。     

BCG-CpG-DNA对哮喘小鼠Th1/Th2平衡调节影响的实验研究

目的:研究BCG - CpG - DNA干预对哮喘小鼠Th1/Th2平衡的影响.方法:将昆明小鼠45只随机分为正常对照组、哮喘组、治疗组3组,每组小鼠都为15只.正常对照组以生理盐水致敏激发,以卵清白蛋白(OVA)致敏激发建立小鼠哮喘模型为模型组,治疗组于致敏后分别以BCGBCG-CpG-DNA注射干预,观察肺泡灌洗液(BALF)白胞总数、外周血嗜酸粒细胞(EOS)计数.采用用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血中干扰素(IFN -γ)、白细胞介素-4(IL -4)水平表达.并采用三色流式细胞法测定外周血Th1/Th2细胞之比.结果:与正常对照组比较,哮喘组、治疗组小鼠肺泡灌洗液中的白细胞总数、EOS计数、血中IL -4水平明显增加.差异显著有统计学意义(P＜0.05);而与哮喘组比较,治疗组肺泡灌洗液中的白细胞总数、EOS计数、血中IL -4水平降低差异显著有统计学意义(P＜0.05).与正常对照组比较,哮喘组血中的IFN -γ水平显著降低,而治疗组血中的IFN -γ水平增加互相比较差异显著有统计学意义(P＜0.05).与正常对照组外周血Th1/Th2( 1.49±0.32)比较,哮喘组外周血Th1/Th2比值(0.62±0.21)出现明显降低差异显著有统计学意义(P＜0.05);与哮喘组Th1/Th2 (0.62±0.21)比较,治疗组Th1/Th2(1.12±0.21)明显升高,差异显著有统计学意义(P＜0.05).结论:BCG-CpG-DNA能哮喘小鼠气道炎症起到抑制作用、提高Th1,细胞因子IFN -γ的生成减少哮喘小鼠Th2型细胞因子IL -4的水平提高外周血Th1/Th2的比例.     

哮喘小鼠调节性T细胞与Th1/Th2因子失衡关系的实验研究

目的 研究哮喘小鼠外周血CD4+CD25+Treg细胞数量改变与血清Th1/Th2相关细胞因子IFN-γ和IL-4水平的关系,探讨其在支气管哮喘发病中的作用.方法 健康雌性BALB/c小鼠20只,随机分为2组(每组10只):①模型组于第0、7、14天予OVA/Al(OH)3腹腔注射,第21～26天每天以OVA雾化吸入激发.②对照组则以生理盐水(NS)在致敏阶段替代OVA 腹腔注射、激发阶段替代OVA雾化.第27天处死动物.观察小鼠肺组织病理改变,流式细胞仪检测CD4+CD25+Treg细胞的变化,ELISA方法检测血清中IL-4、IFN-γ的含量变化.结果 模型组外周血CD4+CD25+Treg细胞的数值、占CD4+T细胞比例和血清IFN-γ水平较对照组降低(P<0.01);血清IL-4水平较对照组明显升高(P<0.01).结论 哮喘小鼠表现明显的Th1/Th2平衡失调、Th2细胞功能亢进,其机制与CD4+CD25+Treg细胞的抑制作用降低有关.     

CTLA-4抗体诱导原因不明复发性流产患者Th1/Th2转换的体外研究

目的:观察CTLA-4抗体在诱导原因不明复发性流产患者Th1/Th2转换中的作用.方法:用人绒毛膜癌细胞株JEG-3制备的滋养细胞抗原刺激30例复发性流产患者外周血单核细胞,实验组加CTLA-4抗体(10μg/ml组和1μg/ml组),对照组加IgG(10μg/ml组和1μg/ml组)培养,分别取24h、72h上清液,ELISIA法测其IL-2、IFN-γ和IL-4的水平.结果:①与同浓度对照组相比,实验组产生的IL-4均显著降低(P＜0.01),而产生的IFN-γ、IL-2均明显升高(P＜0.05).②与CTLA-4抗体1μg/ml组相比,CTLA-4抗体10μg/ml组产生的IL-4稍低,而IFN-γ和IL-2稍高,但无统计学差异(P＞0.05).结论:CTLA-4抗体可以上调Th1型细胞因子,下调Th2型细胞因子,提示CTLA-4抗体体外阻断CTLA-4可诱导原因不明复发性流产的Th1/Th2失衡更向Th1极化,不利于妊娠.     

肺炎链球菌3型多糖对支气管哮喘小鼠气道炎症及Treg/Th17细胞的影响

目的观察肺炎链球菌3型多糖(T3P)对支气管哮喘小鼠气道炎症以及Treg/Th17细胞的影响,探讨T3P对哮喘小鼠的免疫调节作用。方法 BALB/c小鼠随机分成对照组、哮喘组和T3P组,每组8只。哮喘组以卵清蛋白(OVA)致敏、气道激发建立哮喘模型,对照组以PBS代替,T3P组在OVA致敏前皮下注射T3P进行干预。观察小鼠肺组织病理改变,对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数及分类,ELISA法检测血清OVA特异性IgE(OVA-IgE)以及BALF中白介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)、IL-10、IL-17浓度,实时荧光定量PCR法检测肺组织中转录因子Foxp3和RORγt mRNA表达水平,流式细胞术检测Treg和Th17细胞占CD4~+细胞百分比。结果 T3P组小鼠肺组织炎症反应程度弱于哮喘组,血清OVA-IgE,BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞比例以及IL-4、IL-17浓度均低于哮喘组(P<0.05),IFN-γ、IL-10浓度高于哮喘组(P<0.05),小鼠肺组织Foxp3 mRNA表达水平及Treg占CD4~+细胞百分比均高于哮喘组(P<0.05),RORγt mRNA表达水平和Th17细胞占CD4~+细胞百分比均低于哮喘组(P<0.05)。哮喘组和T3P组小鼠肺组织Foxp3-mRNA/RORγt-mRNA比值及Treg/Th17细胞比例与BALF中嗜酸粒细胞数量呈负相关。结论 T3P可以通过抑制过敏原特异性IgE表达调节Th1/Th2、Treg/Th17细胞平衡,抑制气道炎症。     

磁珠-流式细胞术检测肺结核患者Th1/Th2细胞因子

目的 建立磁珠-流式细胞术检测肺结核病患者血浆中的Th1/Th2细胞因子,为结核病患者免疫监测提供一种快速和客观的方法.方法 按Th1/Th2细胞因子磁珠分析试剂盒说明书进行,Th1/Th2细胞因子标准品倍比稀释,50μL等体积混合的Th1/Th2细胞因子捕获磁珠加入检测管,依次加入50μL PE标记的检测试剂,50μL标准品或50μL待检样品震荡混匀,室温避光3 h,加1 mL洗液,200 g离心5 min,加300μL洗液悬浮磁珠,上流式细胞仪前各样品振荡3～5 s.采集流式图谱并用BD CBA software(version 4.0;BDBiosciences)软件分析,并换算成细胞因子浓度.结果 涂阳肺结核患者和涂阴肺结核患者血浆中IFN-γ显著升高,而IL-5显著降低;涂阳肺结核患者循环IL-10显著升高,涂阴肺结核患者循环IL-10含量绝对值升高,但差异无显著性.结论 与常规ELISA法相比,磁珠-流式细胞术检测细胞因子需更少的时间和样品.     

黄褐毛忍冬总皂苷对卵清蛋白致敏小鼠的抗过敏作用

目的:观察黄褐毛忍冬总皂苷(Ful)对卵清蛋白(OVA)致敏小鼠的抗过敏作用,为临床用于治疗食物过敏提供药理学依据.方法:建立BALB/c小鼠食物过敏模型,设过敏反应组(Se),Ful高(H)、中(M)、低(L)浓度组及生理盐水对照组(NS).ELISA测定血清中OVA特异性IgE水平、小肠黏液中总IgA及OVA特异性IgA水平;甲苯胺蓝染色观察空肠及肠系膜肥大细胞,HE染色观察空肠形态;足垫肿胀实验检测迟发型超敏反应.结果:OVA隔日激发3～4次后,Se,L,M组均有3/4以上小鼠出现急性腹泻.高浓度Ful可抑制过敏小鼠腹泻发生,减轻肥大细胞聚集和脱颗粒,降低OVA特异性IgE水平,缓解OVA介导的足垫肿胀反应,减轻小肠绒毛炎症.结论:高浓度Ful可同时缓解食物过敏小鼠IgE介导的及细胞介导的超敏反应.     

慢性乙型肝炎Th1/Th2失衡分析

目的:探讨慢性乙型肝炎发病过程中Th1/Th2细胞平衡失调的原因. 方法:用CD3和CD28 mAb, LPS分别体外刺激慢性HBV感染者和健康对照者的PBMC,ELISA法检测培养上清液中IL-10, IL-12及IFN-γ的水平. 结果:用mAb诱导刺激PBMC后,慢性HBV感染组IFN-γ和IL-10水平与健康对照组无差异;LPS诱导刺激后,慢性HBV感染组IL-12水平显著低于健康对照组(34±8 vs 77±9, P<0.05),且HBV阳性者IL-10分泌水平显著高于阴性者(975±101 vs 895±97, P<0.05). 结论:慢性HBV感染时Th1/Th2失衡并非T细胞本身缺陷所致,APC功能缺陷可能为Th1/Th2失衡的原因. APC功能缺陷可能与HBV侵犯APC有关.     

遗传因素对脐血Th1/Th2平衡的影响

目的:探讨遗传影响因素(父母有无过敏性疾病(Allergic diseases,AD)史)对新生儿脐血单个核细胞Thl/Th2平衡的影响.方法:取正常足月新生儿脐血为研究对象,其中20例父母有过敏性疾病史(AD组)和20例无过敏性疾病史(对照组).收集脐血浆并分离单个核细胞(CBMC),体外经植物血凝素(PHA)刺激,MTT比色法检测细胞增殖活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养48h后细胞培养上清液中IL-2、IL-4、IFN-r、GM-CSF的水平.结果:数据显示:AD组与对照组相比:(1)脐血血浆中IL-2、IL-4、GM-CSF有显著性差异(P<0.05),IFN-r无显著性差异;(2)PHA干预培养48h后细胞培养上清夜中IL-2、IL-4、IFN-r,GM-CSF均有显著性差异(P相似文献   

流式细胞术检测人和小鼠Th细胞亚群

目的建立人和小鼠Th1和Th2细胞的检测方法,探讨两者在流式细胞仪检测方面的不同.方法采用PMA和离子霉素共同刺激外周血单个核细胞,观察在不同时间和不同剂量的PMA刺激下外周血T淋巴细胞CD3、CD4、CD8表达的变化;采用多色荧光共同标记分析技术检测外周血单个核细胞IL-4和IFN-γ的表达.结果在PMA和离子霉素共同刺激后4 h,人外周血T淋巴细胞表面CD4表达迅速下降,而小鼠T淋巴细胞表面CD4表达仅轻度下降;采用多色分析技术可以有效的检测Th1细胞和Th2细胞;采用CD3、CD8设门分析可以有效的区分人Th细胞;采用CD4设门可以有效区分小鼠Th细胞.结论人Th细胞检测宜采用4色染色分析技术,小鼠Th细胞检测采用3色染色技术即可.     

T-bet对Th1/Th2分化调节作用与恶性肿瘤的关系

T-bet是T-box基因家族的新型转录因子,选择性地表达于Th1细胞,能诱导干扰素γ的产生,在Th1细胞的分化中起决定性的作用。在生理条件下,机体Th1和Th2细胞的免疫功能处于动态平衡态,这种平衡的偏离,对肿瘤发生、发展有重要的影响。现已发现,肿瘤宿主体内Th1/Th2向Th2漂移,Th2优势状态与肿瘤的免疫逃逸密切相关。研究表明,将T-bet基因导入肿瘤细胞,可将Th2细胞逆转为Th1细胞,这将对肿瘤的免疫治疗具有重要的意义。     

溃疡性结肠炎患者Th17和Th1／Th2细胞亚群的研究

目的检测溃疡性结肠炎（Ulcerativecolitis,UC）患者外周血中辅助性T细胞亚群（Th1、Th2和Th17）数量和比例的变化,探讨其在UC发病机制中的作用。方法选择40例UC患者,分离外周血单核细胞（PBMc）,采用流式细胞术（FCM）检测Th1、Th2、Th17细胞的数量及Th1／Th2比值,用ELISA测定培养上清中IFN-γIL-4、IL-17水平,与同期选择的健康对照组比较并与患儿的病情进行相关性分析。结果UC患者PBMC中IFN-γ＋Th1细胞的数量、IL--γ7＋Th17细胞的数量均高于健康对照组[（27．0±2．9）％,（23．2±1．7）％,P〈O．05;（26．61±2．6）,（11．4±1．2）,P〈0．011;Th1／Th2比值高于健康对照组[（12．8±1．6）,（8．60±1．9）,P〈0．01],Th17细胞的数量与疾病程度呈正相关（P〈0．05,r=0．42）。结论IL-17＋Th17细胞与Th1／Th2比值变化可能参与UC患者的免疫学发病机制。     

原发性肝癌患者手术前后Th1类细胞因子的水平变化

目的探讨原发性肝癌患者Th1/Th2免疫反应状态。方法用ELISA和RT-PCR方法检测24例原发性肝癌患者、24例健康人群外周血中Th1/Th2相关细胞因子浓度及mRNA表达。结果原发性肝癌患者外周血Th1相关细胞因子IL-2、IFN-γ的浓度与mRNA表达均明显低于健康人群（P〈0.05）,而Th2相关细胞因子IL-4、IL-10的浓度与mRNA表达均明显高于健康人群（P〈0.05）。结论原发性肝癌患者Th1/Th2细胞亚群存在着Th1向Th2的漂移,并可通过这一机制逃避机体免疫监视。     

小儿哮喘急性发作期诱导痰Th1/Th2细胞因子的研究

目的探讨儿童哮喘发作期诱导痰Th细胞亚群的变化。方法用双抗体夹心ELISA法对72例哮喘患儿和30例正常儿童分别测定IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-10、IgE以及嗜酸细胞计数。结果①Th1类细胞因子（IFN-γ、IL-12）在变态反应哮喘患儿组与正常对照组无显著性差异；②哮喘组Th2类细胞因子（IL-4、IL-10）高于正常组，有显著性变化；③EOS％和IgE哮喘组高于正常组。结论儿童哮喘发作期存在免疫功能紊乱，表现为Th2亚群免疫应答优势。     

卡介苗多糖核酸对变应性鼻炎病人Th1/Th2失衡状态的调节

目的观察卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)治疗变应性鼻炎的机制及其疗效.方法将60例变应性鼻炎病人随机分为BCG-PSN治疗组和息斯敏对照组,治疗前后分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定患者外周血单个核细胞(PBMCs)培养上清液中的白细胞介素-4(IL-4),白细胞介素-5(IL-5),干扰素γ(IFN-γ),粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF).同时于治疗后1周、治疗后2个月进行疗效评定.结果病人组PBMCs上清液中IL-4、IL-5、GM-CSF含量显著增高,而IFN-γ含量显著减少.BCG-PSN治疗后病人组上清液IL-4、IL-5、GM-CSF水平明显降低,而IFN-γ含量显著升高,差异有显著性(P<0.01).息斯敏对照组治疗前后,上述指标变化差异无显著性.治疗2个月后疗效评定,BCG-PSN治疗组显效率为66.7%,优于息斯敏对照组(40%) (P<0.05).结论 BCG-PSN能纠正变应性鼻炎病人体内Th1和Th2细胞因子的失平衡状态,为治疗变应性鼻炎提供了理论依据,临床疗效也表明BCG-PSN治疗变应性鼻炎疗效可靠.     

自身免疫性溶血性贫血患者外周血Th1/Th2、Th3/Tr1细胞的检测及意义

目的探讨自身免疫性溶血性贫血(AIHA)患者外周血Th1/Th2、Th3/Tr1细胞状态,分析它们在AIHA发病机制中的作用。方法收集AIHA患者及健康者外周抗凝静脉血,分离纯化淋巴细胞。运用FITC-CD3单抗,Cy5-CD4单抗,PE-CRTH2单抗,以CD3/CD4设门作三色流式细胞术检测Th1/Th2细胞,ELISA法检测血清中Th3细胞相关的细胞因子TGF-β1的含量和Tr1细胞的相关因子IL-10的含量。结果与正常对照相比,AIHA患者外周血CD3+CD4+CRTH2-T细胞(Th1)百分率、CD3+CD4+CRTH2+T细胞(Th2)百分率均下降(P<0.05),而CD4+CRTH2-T/CD4+CRTH2+T比例(Th1/Th2)均明显升高(P<0.01),Th3/Tr1细胞分泌的相关细胞因子TGF-β1和IL-10的含量均降低(P<0.05)。结论AIHA患者外周血存在细胞免疫功能失调,T细胞亚群极化状态发生改变,呈Th1型细胞优势,Th3/Tr1细胞因子含量下降,可能与AIHA的免疫学发病机制有关。