不同补肾方剂对老年前期小鼠不同脏器细胞核体外RNA转录？…

目的：探讨补肾阴方左归饮和补肾阳方益肾宝对老年前期小鼠抗衰老的机制。方法：用１４月龄雄性小白鼠为肾虚模型，观察左归饮及益肾宝对其肝、脑、肾、睾丸的细胞核体外ＲＮＡ转录活性及无细胞提取液蛋白质合成活性的影响。结果：老年前期对照组小鼠４种脏器的细胞核体外ＲＮＡ转录活性及无细胞提取液蛋白质合成活性明显低于青年组（３月龄）小鼠。经灌服左归饮和益肾宝２个月后，两给药组小鼠４种脏器的细胞核体外ＲＮＡ转录活性及     

右归饮对老年肾虚证小鼠影响的蛋白质组学研究

目的:从蛋白质表达水平观察中药方剂右归饮对老年小鼠生理性肾虚证动物模型的影响。方法:将昆明系雄性小鼠随机分为老年肾虚证模型组、右归饮(5.6 g.kg-1,1次/d连续ig 2个月)组与青年正常对照组3组,对其肝、肾、睾丸组织蛋白质提取液及血清分别进行蛋白质双向电泳并对电泳图谱进行分析,找出右归饮调节纠正的蛋白质,进行质谱分析鉴定和Western-blot验证。结果:找到右归饮调节纠正的蛋白质点22个,质谱鉴定出17种蛋白质。结论:找到并鉴定了右归饮对老年小鼠生理性肾虚证动物模型调节纠正的17种蛋白质。     

鹿茸提取物促进老年小鼠核酸和蛋白质合成作用及机制的研究

给雄性老年小鼠(24月龄)连续灌服15天鹿茸水提取物(1.0g/kg/d),对肝和睾丸的重量、肝脑组织RNA和蛋白质含量、血清中蛋白质含量,肝细胞核RNA含量均有明显增加的作用,并明显增强肝细胞核RNA聚合酶的活性。体外实验证明,鹿茸水提取物在较低浓度(10～100μg/ml)时,对RNA聚合酶的活性呈明显的增强作用。以上结果提示,鹿茸水提取物促进老年小鼠核酸和蛋白质合成效应是由于其能明显增强RNA聚合酶的活性。     

补肾益精方药对老年大鼠不同组织DNA TOPOⅡ活性的影响

目的:研究补肾益精方药对老龄大鼠肝、肾、睾丸、脾DNA TOPOⅡ活性的影响,初步探讨补肾益精方药抗衰老的机理.方法:用雄性老年大鼠为肾虚模型,观察左归饮、益肾宝对TOPOⅡ活性的影响.结果:老年大鼠TOPOⅡ的活性明显低于青年大鼠,经灌喂左归饮、益肾宝后,老年大鼠TOPOⅡ的活性显著提高.结论:补肾益精方药能提高老年大鼠TOPOⅡ的活性,起到延缓衰老的作用.     

补肾益精方药对老年大鼠染色体端粒DNA重复序列长度的影响

目的:观察补肾益精方药对老年大鼠细胞染色体端粒DNA重复序列长度的影响,探讨其延缓衰老的机理.方法:以经方左归饮及自拟方益肾宝为补肾益精方药给予老年大鼠.以本实验室建立的PCR法测定老年大鼠肝、肾、睾丸及白细胞染色体端粒DNA重复序列的相对长度.用紫外分光光度计测端粒DNA扩增产物,以光密度值表示端粒DNA重复序列相对长度.结果:左归饮和益肾宝两组大鼠除睾丸组织外,肝、肾和白细胞端粒DNA扩增产物光密度值均大于老年对照组,统计学处理具有显著性差异.结论:左归饮和益肾宝补肾益精方药可使体细胞染色体端粒DNA重复序列减缓缩短,这可能就是补肾益精方药延缓机体衰老的作用机制之一.     

补肾、活血类复方对老年大鼠T细胞凋亡相关基因表达调控模式的比较研究

目的：探讨两个补肾复方（右归饮和补肾益寿胶囊）及活血复方下调老年大鼠T细胞凋亡的基因调控模式。方法：用TUNEL标记的流式细胞检测和荧光实时定量RT－PCR技术，研究老年大鼠和年轻大鼠T淋巴细胞抗凋亡和促凋亡基因（Fas、FasL、Bcl-2、Bax、TNFR1、TNFR2)的表达以及凋亡级联反应中半胱氨酸蛋白酶（如Caspase8和Caspase3)活性的差异，及比较两个补肾方和活血复方对老年大鼠T细胞抗凋亡和促凋亡基因表达的调控以及对Caspase活性的影响。结果：两个补肾复方均能够有效地降低老年大鼠T细胞的过度凋亡，下调FasL及TNFR1基因的转录和Caspase8及Caspase3的活性。而活血复方对于T细胞的过度凋亡无显著作用。结论：激活诱导的T细胞过量凋亡与肾虚密切相关，两个补肾复方均可下调促凋亡基因FasL和TNFR1的转录，从而抑制老年大鼠过度的T细胞凋亡，是补肾法所特有的对老年T细胞凋亡相关基因的调控模式。     

左归饮对老年小鼠脾细胞体外增殖和血清白细胞介素-2的影响

目的:探讨左归饮对老年小鼠免疫功能的影响.方法:通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定脾淋巴细胞增殖反应、酶联免疫(ELISA)法测定血清中白细胞介素-2(IL-2)水平.结果:老年小鼠脾细胞对刀豆蛋白A(ConA)应答增殖能力和血清中IL-2水平明显低于青年小鼠(P＜0.01和P＜0.05),左归饮可显著提高老年小鼠IL-2的含量,同时促进体外脾细胞增殖(P＜0.05和P＜0.01).结论:左归饮明显增强老年小鼠的免疫功能,使其恢复或接近青年小鼠状态,具有延缓衰老的作用.     

补肾活血法对再障小鼠骨髓基质黏附分子的影响

目的:观察补肾活血法对再障小鼠骨髓基质黏附能力及黏附分子CD106/CD49d的影响。方法:用免疫介导法复制小鼠再障模型,并给予补肾活血方药(参芪益肾饮),体外培养再障小鼠骨髓基质细胞,碘化丙啶染色检测其细胞周期,用流式细胞仪测定骨髓基质黏附分子表达水平。结果:再障小鼠骨髓基质细胞绝大部分处于G0/G1期,处于S期及G2+M期的细胞比例明显降低,中药组小鼠骨髓基质细胞处于S期及G2+M期的比例较模型组小鼠明显增加;模型组骨髓基质细胞黏附能力下降,中药组基质细胞黏附能力回升,与正常组无区别;模型组骨髓基质细胞CD106、CD49d表达均降低,中药组CD106、CD49d水平有所升高。结论:补肾活血法提高再障小鼠骨髓基质黏附分子表达水平,可能是其治疗再障的机制之一。     

西藏红景天提取物抗衰老作用的实验研究

本文对西藏红景天提取物抗衰老作用进行了研究.结果表明:西藏红景天提取物可明显抑制老年小鼠脑MA0-B活性,并增加脑单胺类递质含量(5-HT、DA),明显增加肝RNA和蛋白质含量,促进RNA和蛋白质的合成,增强老年小鼠脑、肝和肾SOD活性,降低MDA含量,作用强于青年小鼠.本研究为西藏红景天的开发利用提供了实验依据.     

基于方证相应学说探寻肾阴虚证的标志蛋白质

目的:基于方证相应学说,运用蛋白质组学技术探寻肾阴虚证的标志蛋白,以期在蛋白质表达水平找到肾阴虚证的物质基础,进而阐述肾阴虚证的发生机理。方法:将昆明系雄性小鼠随机分为老年肾虚证模型组、左归饮组与青年正常对照组3组,对其肝、肾、睾丸组织蛋白质提取液及血清分别进行蛋白质双向电泳并对电泳图谱进行分析,找出左归饮调节纠正的蛋白质进行质谱分析鉴定和Wstern-blot验证。结果:找出左归饮调节纠正的蛋白质点24个,质谱鉴定出20个蛋白质。结论:找到并鉴定了一组肾阴虚证标志蛋白质,根据蛋白质的功能在蛋白质表达水平初步探讨了肾阴虚证的发生机理。     

补肾中药对拟痴呆小鼠胆碱能M－受体功能及胆碱酯酶活性的影响

选用氯化铝溶液制备拟痴呆小鼠动物模型，研究补肾中药对拟痴呆小鼠大脑皮层组织（Ｃｅｒ）中胆碱能Ｍ－受体结合容量（Ｒｔ）和胆碱酯酶（ＡｃｈＥ）活性的影响。结果表明，拟痴呆小鼠Ｃｅｒ中ＡｃｈＥ活性比正常青年小鼠明显提高（Ｐ＜０．０１），而Ｍ－受体Ｒｔ值显著降低（Ｐ＜０．００１）。补肾中药可明显降低拟痴呆小鼠Ｃｅｒ中ＡｃｈＥ，活性（Ｐ＜０．０５～０．０１），增加Ｍ－受体Ｒｔ值（Ｐ＜０．００１）。提示补肾中药能通过降低拟痴呆小鼠Ｃｅｒ中ＡｃｈＥ活性，增加Ｍ－受体Ｒｔ值，明显提高记忆能力。补肾中药有防治脑功能减退和防治早老性痴呆的作用。     

补肾泻肝方对再生障碍性贫血造血与免疫失调治疗的实验研究

目的:证实补肾泻肝方对再生障碍性贫血造血与免疫失调的治疗作用。方法:利用免疫介导再生障碍性贫血动物模型,观察补肾泻肝方对再生障碍性贫血造血与免疫失调的治疗作用。结果:用药组抑制细胞活性,CD_3~ 细胞和 CD_8~ 细胞较对照组明显减低(P<0.05):用药组小鼠骨髓有核细胞数、Hb、WBC BPC 在第12天均高于对照组(P<0.05);病理组织学显示用药组至第12天骨髓见散在增生灶,第60天基本恢复正常。结论:提示补肾泻肝方具有明确的解除 CD_8~ 细胞对造血的抑制,同时促进造血干细胞生长的作用。     

补肾法延缓免疫衰老的临床与实验研究

目的：观察补肾法延缓免疫衰老的临床疗效及相应的实验研究。方法：老年人22对（44名），采用随机分组，双盲给药（补方即补肾益寿胶囊和安慰剂）；实验研究则比较两个补肾方（右归饮和补肾益寿胶囊）和活血方（桃红四物汤）对老年大鼠T细胞凋亡及Fas、FasL基因表达的调控作用。结果：临床结果显示补肾组T细胞凋亡率比安慰剂组明显降低（P＜0．01），FasL基因表达亦明显降低（P＜0．05）。动物实验显示两个补肾方组老年大鼠T细胞凋亡均明显降低（P＜0．05），FasL基因表达亦明显降低（P＜0．01），而活血方组均无变化。结论：补肾法对老年人与老年大鼠T细胞FasL基因的转录具有负调控作用。这是补肾法下调老年人与老年大鼠T细胞过度凋亡的分子机理之一。     

补肾方剂对小鼠胎盘单胺氧化酶活性的影响

目的观察补肾方剂对胎儿宫内发育迟缓（IUGR）模型孕鼠胎盘单胺氧化酶（MAO）活性的影响,探讨其作用机理。方法孕鼠随机分为正常组、模型组、左归丸组、右归丸组、五子衍宗丸组、四君子汤组、四物汤组、八珍汤组、正常＋左归丸组,40%乙醇致胎儿IUGR模型,模型组和正常组予生理盐水灌胃,各治疗组分别在造模同时予相应方药水煎液灌胃,11 d后检测各组孕鼠胎盘组织MAO活性。结果 40%乙醇致IUGR的母体胎盘组织MAO活性明显降低（P〈0.01）,补肾阴方左归丸、平补肾方五子衍宗丸及气血双补方八珍汤对IUGR模型孕鼠胎盘组织MAO活性降低有明显回升作用（P〈0.05或P〈0.01）;补气方四君子汤、补血方四物汤、补肾阳方右归丸对IUGR模型孕鼠胎盘组织MAO活性降低无作用。结论平补肾方、补肾阴方和气血双补方可通过对抗酒精抑制的MAO活性,起到保护胎儿、保证胚胎正常发育的作用。     

补肾中药对老年大鼠脑和脾脏中乙酰胆碱酯酶、胆碱乙酰化转移酶活性及胆碱能M-受体功能的影响

目的:通过测定脑和脾脏中乙酰胆碱酯酶(AchE)、胆碱乙酰化转移酶(ChAT)活性和 M-受体结合容量(Rt)等指标,探讨补肾中药延缓脑功能衰老的机理。方法:用微量酶底物比色法测定 AchE 活性,放射酶分析法测定 ChAT 活性以及用放射性标记配基受体结合方法测定 M 受体结合容量。结果:老年大鼠脑和脾脏中 AchE 活性比青年对照组显著升高,ChAT 活性明显降低,M-受体 Rt值也显著降低。SRBC 免疫后,脑和脾脏中 AchE 活性较未免疫的老年大鼠更高,ChAT 活性降低,表明外来抗原产生的免疫应答可通过增加 AchE 活性及降低 ChAT 活性而降低 Ach 含量。补肾中药可抑制未免疫和 SRBC 免疫后老年大鼠脑和脾脏中 AchE 活性,增加 ChAT 活性,增加 M-受体 Rt 值,改善脑的记忆功能。结论:补肾中药可以通过调节 Ach 的合成和分解酶活性以增加脑和脾脏组织中 Ach 含量,提高 M 受体 Rt 值,从而提高老年大鼠脑记忆功能。     

左归饮对老年小鼠抗氧化作用及胸腺脾脏指数的影响

目的:从抗氧化作用及免疫器官指数角度探讨左归饮延缓衰老的作用机理。方法:以5.5 g/(kg.d)浓缩左归饮煎液自由饮75 d,并以老年小鼠作对照,观察左归饮对老年小鼠血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)及胸腺指数、脾指数的影响。结果:老年小鼠与青年小鼠比较MDA含量明显升高,SOD活性、T-AOC、胸腺指数和脾指数显著降低。应用左归饮则使老年小鼠上述指标明显恢复,且差异显著。结论:左归饮能增强老年小鼠的抗氧化能力,减少自由基对细胞膜的损伤,抑制免疫器官的退化和萎缩,起到延缓衰老的作用。     

补肾方剂对胎鼠肝组织己糖激酶、谷氨酸脱氢酶活性的影响

目的:通过胚胎期给药,探讨补肾方对胎儿宫内发育迟缓(IUGR)模型胎鼠己糖激酶(HK)、谷氨酸脱氢酶(GDH)活性的影响。方法:模型组用酒精给孕鼠灌胃导致IUGR模型,各补肾组分别在造模同时予补肾方灌胃,其他组予补气方、补血方、气血双补方灌胃,检测各组胎鼠肝组织HK、GDH活性。结果:IUGR胎鼠HK、GDH活性明显降低(P0.05);补肾阴方、补血方对IUGR胎鼠HK活性降低均有明显恢复作用(P0.05);补肾方、补血方、气血双补方均能不同程度恢复IUGR胎鼠GDH活性(P0.01,P0.01,P0.05,P0.05)。结论:改善IUGR胎鼠肝组织HK、GDH活性可能是补肾方治疗IUGR机理之一,可作为中医"肾主生殖发育、肾为先天之本"和"补母益子"论的依据。     

健脾补肾方含药血清对体外培养小鼠脾细胞周期影响

[目的]观察健脾补肾方含药血清对体外培养小鼠脾细胞周期影响。[方法]用血清药理学方法,流式细胞仪技术检测健脾补肾方含药血清对体外培养48h后小鼠脾细胞DNA周期影响。[结果]健脾补肾方含药血清高浓度组DNA合成前期细胞百分比显著低于对照组,差异具有显著性(P<0.01),并且含药血清各浓度组DNA合成期(S期)细胞均高于对照组(P<0.01),而DNA合成后期及有丝分裂期(G2/M期)细胞只有高浓度组显著高于对照组(P<0.01)。[结论]健脾补肾方含药血清可以促进小鼠脾细胞的增值。