温下方抑制肺癌A549细胞增殖及对PCNA Rb CyclinD1表达的影响

目的:研究温下方对肺癌A549细胞增殖的抑制作用及对PCNA、Rb、CyclinD1表达的影响。方法:正常血清及不同浓度的温下方含药血清作用于A549细胞,MTT法检测含药血清对A549细胞的抑制作用,激光共聚焦显微镜观察PCNA、Rb、CyclinD1的表达。结果:温下方大、小剂量含药血清组作用24h抑制率为29.85%、25.90%,作用36h抑制率为42.02%、35.10%;PCNA表达降低至3.08±0.97、3.15±0.88,CyclinD1表达降低至2.65±0.83、2.70±0.79。结论:温下方可明显抑制肺腺癌细胞的增殖,明显降低PCNA、CyclinD1表达。     

温下方含药血清诱导A549/DDP细胞凋亡及对Bcl-2,Bax,p53蛋白表达的影响

目的:研究温下方含药血清诱导人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP凋亡及对Bcl-2,Bax,p53蛋白表达的影响。方法:制备温下方含药血清,高效液相色谱法(HPLC)定性检测含药血清中人参皂苷Rb1、大黄素和乌头碱。A549/DDP细胞分为DDP干预组,含药血清+DDP干预组,正常血清+DDP干预组。孵育24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜检测Bcl-2,Bax及p53蛋白表达。结果:HPLC结果显示含药血清中含有人参皂苷Rb1、大黄素及乌头碱。含药血清作用后,与DDP干预组比较,含药血清+DDP干预组细胞凋亡率增高至(21.82±3.27)%(P<0.05);细胞内Bcl-2蛋白表达降低至2.81±0.02(P<0.05);Bax蛋白表达增高至2.90±0.08(P<0.05);p53蛋白表达增高至3.58±0.09(P<0.05)。结论:温下方含药血清明显诱导A549/DDP细胞凋亡,显著降低Bcl-2蛋白表达,提高Bax,p53蛋白表达,可能从诱导耐药细胞凋亡角度逆转耐药。     

尖叶假龙胆醇提物含药血清对A549细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:探讨尖叶假龙胆醇提物(EEGA,ethanol extract from Gentianella acuta)含药血清对人肺癌A549细胞株诱导凋亡和影响细胞周期的作用。方法:采用四甲基偶氮盐(MTT)比色法检测EEGA含药血清对A549细胞作用24 h、48 h、72 h的增殖抑制率,使用流式细胞仪观察EEGA含药血清处理A549细胞48 h后,细胞凋亡率和细胞周期阻滞率变化的检测。结果:MTT显示EEGA低、中、高剂量含药血清都能抑制A549细胞增殖(P0.05),其抑制率与作用时间相关。低、中、高剂量含药血清处理A549细胞48 h后凋亡率显著高于空白组(P0.05),同时低、中、高剂量含药血清处理A549细胞48 h后,G0/G1期细胞明显较空白组增加(P0.01),提示EEGA含药血清可促进细胞凋亡,并且将细胞生长周期阻滞于G0/G1期。结论:尖叶假龙胆对人肺癌A549细胞有抑制作用,机制可能与抑制细胞生长、阻滞细胞生长周期及诱导细胞凋亡有关。     

补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP耐顺铂作用及对Survivin表达的影响

目的研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP耐顺铂作用及对Survivin表达的影响。方法采用随机对照法将24只SD大鼠分为高、中、低剂量组和空白对照组,制备补中益气汤高剂量（补中益气汤1.134 g/mL,2 mL）、中剂量（补中益气汤0.576 g/mL,2 mL）、低剂量（补中益气汤0.284 g/mL,2 mL）含药血清,采用MTT法检测不同剂量和浓度的补中益气汤含药血清对A549及A549/DDP细胞的增殖抑制效应,计算耐药逆转倍数;采用免疫细胞化学法、Western blot技术、免疫荧光三种方法检测Survivin在两细胞株中的表达。结果补中益气汤含药血清对A549和A549/DDP细胞有明显抑制作用,10%各剂量组抑制率均高于5%相应剂量组,且随着剂量浓度的升高,抑制率也逐渐升高;与10%空白组比较,10%中、低剂量组抑制率升高（P〈0.05）;10%中剂量含药血清作用后,A549和A549/DDP IC50均降低（P〈0.05）,逆转倍数均升高,对A549/DDP细胞的逆转倍数达到2.46,使A549/DDP对顺铂的耐药性下降;与本组A549比较,免疫细胞化学法、Western blot法、免疫荧光法均检测到A549/DDP细胞中Survivin的表达量均降低（P〈0.05）,与10%空白组比较,10%中剂量组A549/DDP均降低（P〈0.05）。结论 10%中剂量补中益气汤含药血清对A549及A549/DDP细胞都有抑制作用,并可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,其逆转机制可能与减少细胞内Survivin的表达,增强A549/DDP对化疗药物的敏感性有关。     

毛蕊异黄酮对肺腺癌细胞增殖和迁移功能的影响

目的:检测毛蕊异黄酮对肺腺癌细胞生长转移的影响。方法:将不同浓度的毛蕊异黄酮分别作用于人肺癌细胞系A549细胞,通过MTT实验检测细胞增殖情况,通过transwell实验检测细胞转移情况。利用western blot及RT-PCR的方法检测毛蕊异黄酮对A549细胞相关蛋白的作用。结果:毛蕊异黄酮可以抑制A549细胞增殖与转移功能。(25、 50、100μg/mL)毛蕊异黄酮处理A549细胞24 h后,对其增殖的抑制率分别为(39.51±0.75)%,(48.91±3.64)%和(56.49±1.54)%。25μg/mL与50μg/mL毛蕊异黄酮作用A549细胞48 h后对其转移的抑制率分别为(17.76±3.82)%和(38.71±8.23)%。毛蕊异黄酮以剂量依赖的方式抑制A549细胞中CyclinD1与MMP2蛋白的表达。结论:毛蕊异黄酮可以通过抑制CyclinD1与MMP2蛋白的表达来抑制肺癌细胞A549细胞的增殖与转移。     

温下方含药血清对A549/DDP细胞内erbB-2、Topo-Ⅱ表达及铂含量的影响

目的:观察温下方不同剂量含药血清对A549/DDP细胞内表皮生长因子受体(erbB-2),DNA拓扑异构酶-Ⅱ(Topo-Ⅱ)表达及铂含量的影响.方法:将对照血清及不同剂量温下方含药血清作用于A549/DDP细胞,用免疫荧光技术、激光共聚焦显微镜检测erbB-2、Topo-Ⅱ表达,用激光流式细胞仪技术检测细胞内顺铂浓度.结果:温下方舍药血清能明显降低erbB-2表达(P＜0.05),明显提高Topo-Ⅱ表达及细胞内铂含量(P＜0.05).结论:温下方可能通过降低耐药细胞损伤后自我修复能力而逆转其耐药.     

二母颗粒含药血清对肺腺癌A549及肝癌SMMC-7721细胞株凋亡的影响

目的:观察二母颗粒含药血清对肺腺癌A549及肝癌SMMC-7721细胞株增殖和凋亡的影响。方法:采用形态学及MTT法观察二母颗粒组(10g/kg)5%、10%、20%含药血清对A549及SMMC-7721细胞株增殖的抑制作用;通过流式细胞法观察药物对细胞凋亡的影响。结果:形态学观察表明二母颗粒含药血清使A549及SMMC-7721细胞株发生形态改变;MTT结果显示二母颗粒含药血清对A549及SMMC-7721细胞株增殖有抑制作用,且随含药血清浓度的增高以及作用时间的延长,抑制作用亦有所加强。其中20%含药血清作用于A549及SMMC-7721细胞株48h,10%含药血清作用于A549 48h,其OD值与对照组比较均有统计学差异;流式细胞技术检测结果表明20%含药血清作用于A549细胞株24h及48h,10%含药血清作用于A549 48h,与同时间段阴性对照组比较凋亡率明显升高;20%、10%含药血清作用于SMMC-7721细胞株24h及48h,对肿瘤细胞的凋亡率也有明显升高的作用。结论:二母颗粒含药血清对A549及SMMC-7721细胞株的增殖有抑制作用,其作用机制与其诱导细胞凋亡有密切的关系。     

芪杉胶囊对肺癌A549细胞PI3KAKt信号通路影响的研究

目的:观察芪杉胶囊对肺癌A549细胞PI3KAKt信号通路的影响。方法:分别运用MTT法检测含药血清对A549细胞增殖的影响;Annexin V-PE/7-AAD双染法检测含药血清对A549细胞凋亡的影响;Western-blot法检测含药血清对A549细胞凋亡相关蛋白表达的影响;RT-PCR法检测含药血清对A549细胞凋亡相关基因表达的影响。结果:芪杉胶囊含药血清高、中、低剂量组分别作用于A549细胞时,均表现为抑制细胞增殖作用,其抑制率分别为24.26%,16.44%和10.89%,含药血清浓度越大,对细胞的抑制作用越显著。与空白组相比,芪杉胶囊含药血清高、中、低剂量组及顺铂组细胞凋亡率显著升高,且含药血清浓度越大,对细胞凋亡的作用越显著。芪杉胶囊含药血清高、中、低剂量组及顺铂组Caspase-3、Caspase-9、Cytochrome c、AKT、m TOR及PI3K蛋白和基因相对表达量与空白组相比,表达量降低,且含药血清浓度越大,对A549细胞凋亡相关蛋白和基因表达的影响越显著。结论:芪杉胶囊通过影响A549细胞凋亡相关Caspase-3、Caspase-9、Cytochrome c、AKT、m TOR及PI3K蛋白和基因表达,从而抑制细胞增值、促进细胞凋亡。     

贞芪酪蛋白肽复合物血清对人肺腺癌A549细胞分化抑制作用及相关机制研究

目的 :探索贞芪酪蛋白肽(ligustri-astragali casein co-peptid, LACP)复合物对人肺腺癌A549细胞分化的诱导作用及作用机制。 方法 :MTT法检测贞芪酪蛋白肽含药血清5%,10%,15%,20%浓度对人肺腺癌A549细胞增殖的影响;通过贞芪酪蛋白肽药物血清对A549细胞核质比和端粒酶活性的影响观察其诱导分化作用;免疫细胞化学方法观察贞芪酪蛋白肽药物血清对A549细胞Bax/bcl-2基因表达的影响。 结果 :4种不同浓度的贞芪酪蛋白肽含药血清均对A549细胞增殖有抑制作用,其中以浓度为20%的贞芪酪蛋白肽血清的抑制率最高;能降低细胞的核质比,并抑制人肺癌细胞端粒酶活性的作用;贞芪酪蛋白肽血清能促进A549细胞凋亡基因bax/bcl-2的表达,与无药血清对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。 结论 :贞芪酪蛋白肽含药血清对人肺腺癌细胞A549有一定抑制作用;有诱导人肺癌细胞A549分化的作用,其主要机理可能是抑制了A549细胞端粒酶活性;贞芪酪蛋白肽诱导A549细胞凋亡的作用机制之一可能是促进促凋亡基因bax/bcl-2的表达。     

回药臭壳虫含药血清对人肺腺癌A549细胞生长增殖的影响

目的:探讨回药臭壳虫(CKC)含药血清对人肺鳞癌A549细胞生长的抑制作用及对细胞形态的影响。方法:将40只雄性SD大鼠按体重随机分为生理盐水对照组(NS)、回药臭壳虫低剂量组(CKCL)、回药臭壳虫中剂量组(CKCM)、回药臭壳虫高剂量组(CKCH)各10只,分别给予相应的CKCL、CKCM、CLCH浓缩水煎剂灌胃,NS组给予等量生理盐水灌胃,连续5天。采用血清药理学方法,制备含药血清;体外培养人肺腺癌A549细胞,将细胞分为实验组与对照组,实验组分别给予10%、20%浓度的相应组大鼠含药血清,对照组给予相同浓度对照组大鼠血清,培养24h、48h、72h后观察细胞形态变化,采用MTT法检测不同浓度含药血清对A549细胞的生长抑制率。结果:光镜下观察发现,各浓度臭壳虫含药血清组细胞形态不规则,胞膜出现不同程度的回缩,胞核固缩,细胞间距增大,其中以20%浓度臭壳虫含药血清高剂量组作用72h最为明显。MTT法检测细胞生长抑制率发现,各实验组不同浓度抑制率均高于对照组(P0.05);回药臭壳虫高剂量组72h抑制率高于低剂量组(P0.05);回药臭壳虫各剂量组72h抑制率高于24h抑制率(P0.05)。结论:回药臭壳虫含药血清可抑制A549细胞的生长增殖。     

纳米雄黄对肺癌A549细胞的凋亡诱导作用

目的:研究纳米雄黄对肺癌A549细胞的凋亡诱导作用。方法:采用机械研磨法制备纳米雄黄。以肺癌A549细胞株为靶细胞,采用MTT法检测细胞的增殖活性,AnnexinV/PI双染色法检测A549细胞的凋亡,流式细胞术检测BAX蛋白和Bcl-2蛋白表达、Caspase-3活性、P53蛋白的表达。结果:纳米雄黄可显著抑制A549细胞的增殖,50μg/mL和100μg/mL的纳米雄黄处理48h后,A549细胞凋亡率显著增高为12.53%和69.19%;20μg/mL和50μg/mL的纳米雄黄作用24h,A549细胞中活性caspase-3由对照的(2.25±0.17)%增高到(3.84±0.63)%和(7.35±0.33)%;P53蛋白表达总体增高但加药48h高剂量组也有所降低;Bax蛋白表达由对照的(79.50±0.50)%增高到(92.45±0.35)%和(96.9±0.00)%;Bcl-2蛋白表达由对照的(77.85±2.15)%增高到(87.10±10.5)%和(83.1±4.6)%。结论:纳米雄黄可有效诱导肺癌A549细胞发生凋亡。     

大肠黏膜腺管开口中PCNA mRNA和survivin mRNA表达及与增殖、凋亡相互关系的研究

目的探讨增殖细胞核抗原（PCNA）mRNA和survivin mRNA在大肠黏膜各型腺管开口中的表达，以及增殖、凋亡在大肠黏膜腺管开口变化过程中动态变化关系及意义。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法提取70例不同腺管开口类型组织PCNA mRNA和survivin mRNA，并通过流式细胞学检测其增殖及凋亡指数。结果PCNAmRNA和survivinmRNA分别在Ⅰ、Ⅱ、ⅢL、Ⅳ、Ⅴ型中阳性表达率分别为0％、12．5％、38．9％、66．7％、92．3％。0％、12．5％、22．2％、44．4％、69．2％，增殖指数与凋亡指数在Ⅰ、Ⅱ、ⅢL、Ⅳ、Ⅴ型中分别为0．27±0．038、0．39±0．054、0．44±0．044、0．62±0．059、0．63±0．168，7．53±2．24、9．11±3．33、11．66±0．72、14．11±1．15、10．26±2．15。结论PCNAmRNA和survivinmRNA阳性表达在腺管开口变化过程中均逐渐增高，在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。Ⅳ阶段中增殖、凋亡指数同时上升，而在Ⅴ型开口中，增殖指数继续上升。而凋亡指数下降。增殖、凋亡动态平衡紊乱导致腺管开口的变化，在大肠癌发生、发展中起重要作用。     

不同体质血清对A549肺癌细胞周期蛋白表达的影响

目的:探讨不同体质血清对A549肺癌细胞生长的影响及可能的机制。方法:A549肺癌细胞经平和、阴虚、阳虚体质血清培养72h,用MTT、流式细胞、蛋白印迹法(Western blots)的方法分别测定平和、阴虚、阳虚体质血清对A549肺癌细胞增殖、细胞周期和周期蛋白D1、E(CyclinD1,CyclinE)及细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4(CDK4)的影响。结果:MTT的结果显示阴虚、阳虚体质血清中的A549肺癌细胞吸光度值(A)明显明显高于平和质;流式细胞的结果表明阴虚、阳虚体质血清培养的A549肺癌细胞的S期细胞明显高于平和质(P0.05),而细胞周期G0/G1期的细胞低于平和质,其中阴虚体质血清与平和质比较有统计学意义(P0.05);Western blots的结果表明阴虚、阳虚体质CyclinD1和CDK4基因表达的产物均高于平和质,CyclinE基因表达产物均低于平和质(P0.05,P0.01)。结论:阴虚、阳虚体质血清均可促进A549肺癌细胞增殖,可能的机制是促进细胞周期从G0/G1期向S期推进,提高CyclinD1、CDK4的表达。     

制白附子70%乙醇提取物的完全急性毒性研究

目的：评价制白附子70%乙醇提取物的急性毒性作用。方法：灌胃给予大鼠25.0g/kg、50.0g/kg、100.0g/kg制白附子70%乙醇提取物1次,测定d1（给药当天）、d2、d3、d7、d14大鼠体重及给药前、给药后4h～28h、28～52h的饲料消耗量,计算摄食量,并于d3和d14各处死50%动物进行尸体解剖、血液生化学检查和血液细胞学检查。结果：给药第3d,低剂量组大鼠脾脏、胸腺系数增大（1.25±0.40,0.27±0.06）,高、低剂量组血清CREA含量下降（45.4±6.12μmol/L,41.7±21.4μmol/L）,高剂量组血清CK含量上升（2068.3±877.8IU/L）,以上数据与对照组比较均有统计学差异。给药14d,低、中剂量组血清CREA含量升高（70.6±15.6μmol/L,67.8±8.10μmol/L）。未观察到对大鼠体重、摄食量及血液细胞学指标有所影响。结论：制白附子70%乙醇提取物的三个受试剂量对大鼠急性毒性作用不明显。     

蛴螬提取物诱导人肺癌A549细胞凋亡的机制研究

目的:观察蛴螬提取物对人肺癌A549细胞增殖的影响及其机制。方法:采用MTT法检测蛴螬提取物对人肺癌A549细胞的生长抑制率;用HE染色方法观测凋亡细胞的形态学变化;运用免疫组织化学SP法检测用药前后细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的表达改变。结果:用蛴螬提取物处理的人肺癌A549细胞生长抑制率明显高于对照组;施药早期细胞出现凋亡形态学变化;A549细胞经蛴螬提取物处理后CyclinD1表达均下降。结论:蛴螬提取物在体外对人肺癌A549细胞株有显著的增殖抑制作用,其机制与下调CyclinD1的表达有关。     

大黄及其有效成分对人肺腺癌A549细胞的影响

目的：观察大黄及其有效成分大黄素对人肺腺癌A549细胞的影响,为临床抗肿瘤提供实验证据。方法：采用实时细胞分析系统和改良MTT方法,观察单味中药大黄（0.05μg/L、0.5μg/L、5μg/L）及其有效成分大黄素（16 nmol/L、80 nmol/L、400 nmol/L、2μmol/L、10μmol/L）对A549细胞的作用,同时观察FRAP/mTOR抑制剂、PI3K抑制剂、MAPKK抑制剂和Caspase-3抑制剂对上述作用的影响。结果：大黄及其有效成分大黄素能显著抑制A549细胞增殖,并呈剂量依赖性,动态IC50研究发现大黄素在55 h时IC 50值最低,反应此时刻抑制A549细胞效应最大,其中Caspase-3抑制剂可以明显阻断大黄素对A549细胞的抑制作用。结论：大黄及其有效成分大黄素能有效抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,呈剂量依赖性,证实大黄素是通过激活Caspase-3来抑制肺腺癌细胞的增殖。     

蜂毒素靶向PTEN/PI3K/Akt信号通路调控非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡

目的蜂毒素能否调控非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡,及其可能的作用机制。方法体外培养非小细胞肺癌细胞A549,在其中加入不同浓度蜂毒素进行干预(0、1、2、4 mg/L),MTT检测细胞增殖抑制率,Annexin V FITC/PI联合流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot 检测细胞内PTEN、p-PI3K和p-Akt蛋白表达,RT-PCR检测细胞内p53和CyclinD1基因表达。结果蜂毒素能有效抑制A549细胞的增殖,促进细胞的凋亡,上调细胞PTEN的蛋白表达量,下调p-PI3K和p-Akt蛋白表达量,各浓度间差异具有统计学意义(P<0.05);蜂毒素能诱导p53 mRNA、抑制CyclinD1 mRNA的表达,各浓度间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论蜂毒素能通过调控PTEN/PI3K/Akt信号通路抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡。     

抗纤软肝颗粒对肝星状细胞细胞外信号调节激酶1mRNA、蛋白表达的影响

目的:探讨抗纤软肝颗粒对肝星状细胞细胞外信号调节激酶1(ERK1)mRNA、蛋白表达的影响。方法:运用细胞培养技术,以hsc-t6细胞系为研究对象,分为(1)空白包被+10%生理盐水组、(2)纤维连接蛋白(FN)+10%生理盐水组、(3)FN+5%抗纤软肝颗粒含药血清(kxr)组、(4)FN+10%kxr组、(5)FN+20%kxr组。按以上分组进行药物干预,干预后继续培养48h。应用免疫细胞组织化学方法检测ERK1蛋白的表达,采用RT-PCR法测定ERK1mRNA的表达。结果:与FN组相比,kxr组肝星状细胞的ERK1mRNA、蛋白表达均显著下调,分别减少了54.36%(35.98%)、66.08%(49.59%)、72.82%(59.15%),均有显著性差异。结论:kxr能够在转录及翻译水平抑制ERK1mRNA、蛋白的表达,从而阻抑了整合素激活的MAPK途径的信号转导。     

芪玉三龙汤药物血清对肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的观察芪玉三龙汤药物血清对人肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。方法制备芪玉三龙汤药物血清,体外培养A549细胞。将A549细胞分为正常血清组、5%药物血清组、10%药物血清组和20%药物血清组。CCK-8法和集落形成实验检测A549细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、cleaved Caspase-3、Bcl-2表达。结果与正常血清组比较,不同浓度芪玉三龙汤药物血清组A549细胞活力明显降低(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.001),10%药物血清组和20%药物血清组A549细胞Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.001)。结论芪玉三龙汤可能通过上调A549细胞Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,进而诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。