2型糖尿病肾病患者尿VEGF、TGF-β1、Co-Ⅳ的变化及意义

目的探讨2型糖尿病肾病患者不同时期尿血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅳ型胶原(Co-Ⅳ)的变化规律及其临床意义.方法将符合1999年WHO诊断标准的108例(男55例,女53例)2型糖尿病患者,根据24h尿白蛋白排泄量分为3组,即正常白蛋白尿组(DM1组,37例)、微量白蛋白尿组(DM2组,34例)和临床白蛋白尿组(DM3组,37例),另设正常对照组(NC组,36例),采用酶联免疫法(ELISA),分别测定四组研究对象尿VEGF、TGF-β1、Co-Ⅳ水平.结果与NC组(2.96±0.98)μg/l相比,DM1组尿VEGF(5.48±1.48)μg/l升高(P＜0.05),而尿TGF-β1(46.57±13.15)μg/l和Co-Ⅳ(10.10±3.81)μg/l无明显变化(P＞0.05).尿VEGF在DM2组(11.17±3.53)μg/l和DM3组(12.07±5.10)μg/l进一步升高,与DM1组比较差异显著(均P＜0.05);而尿TGF-β1和Co-Ⅳ结果仍相似,即在DM2组无明显变化,DM3组[分别为(161.68±59.54)μg/l、(24.15±5.23)μg/l]较DM1组[分别为(46.57±13.15)μg/l、(10.10±3.81)μg/l]与DM2组[分别为(76.51±22.01)μg/l、(15.5±3.44)μg/l]明显升高(均P＜0.05).结论VEGF、TGF-β1和Co-Ⅳ与糖尿病肾病的发生发展有关;并且,尿VEGF可能为早期糖尿病肾病的预示指标,而尿TGF-β、Co-Ⅳ可能为判断糖尿病肾病严重程度的指标.     

白介素-6和转化生长因子-β1在膝骨关节炎发病中的作用

目的探讨白介素(IL)-6和转化生长因子(TGF)-αβ1在膝骨关节炎(OA)发病中的作用及其关系,并寻求可以反映OA严重程度的指标.方法OA组患者40例,其中轻度14例,中度16例,重度10例;对照组5例.关节液中IL-6与TGF-β1浓度测定采用酶联免疫吸附试验法(ELISA).统计采用K-W非参数检验及相关分析.结果对照组IL-6和TGF-β1浓度分别为(23.00±9.41)pg/ml和(152.00±103.77)pg/ml,OA组分别为(228.33±373.06)pg/ml和(708.50±476.97)pg/ml,两组差异有显著性(P＜0.05).滑液中IL-6浓度与OA严重程度呈负相关(r=-0.497,P＜0.01),而TGF-β1与OA严重程度不相关,但滑液中TGF-β1与IL-6浓度呈正相关(r=0.377,P=0.017).结论IL-6和TGF-β1在膝骨关节炎的发病中有重要的病理作用;滑液中IL-6的浓度与OA严重程度呈负相关,其可能是一种对软骨具有保护性的细胞因子.OA关节滑液中IL-6和TGF-β1浓度呈正相关,IL-6可能部分参与TGF-β对软骨的双重作用.     

TGF-β1在骨性关节炎中的表达及与关节软骨和滑膜细胞凋亡的关系

目的研究TGF-β1在骨性关节炎（OA）患者软骨和滑膜中的表达及与关节软骨和滑膜细胞凋亡的关系。方法对30例患者（OA组）及10例正常膝关节组织（对照组）,用免疫组化、原位末端标记技术（TUNEL）等方法检测TGF-β1在膝关节软骨和滑膜中的表达及软骨和滑膜细胞凋亡情况。结果TGF-β1蛋白在OA组阳性表达的积分光密度（IOD）值显著高于正常对照组（P〈0.01）,OA组凋亡指数（AI）与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）,OA组软骨和滑膜细胞凋亡程度与TGF-β1的表达均呈负性相关（r=-0.457,P〈0.05）。结论OA中TGF-β1的高表达有可能负性调节软骨和滑膜区域细胞凋亡的发生,延缓骨性关节炎的发生发展。     

Smad signal transduction pathway involved in supression of VEGF on TGF-β1 induced EMT of HK-2 cells

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导HK-2细胞发生肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)的过程中对Smad 2/3,Smad 7信号途径以及SnoN表达的影响.方法 体外培养的HK-2细胞分为:①正常对照组;②TGF-β1(5μgL)阳性对照组;③VEGF165(100μg/L)作用组;④TGF-β1(5 μg/L)+ VEGF165(100 μg/L)共同作用组.采用Western Blot法和RT-PCR分别检测各组细胞p-Smad 2/3和Smad 2/3(共同作用30和60 min),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad 7 、SnoN的表达水平(共同作用48 h).结果 TGF-β1组α-SMA蛋白和mRNA表达与正常对照组比较明显增强,TGF-β1与VEGF165共同作用组α-SMA蛋白和mRNA表达与TGF -β1单独作用组比较明显减弱(P＜0.05).体外HK-2细胞,TGF-β1组刺激30、60 min,与正常对照组比较,(p-Smad 2/3)/(Smad 2/3)比值明显升高,TGF-β1 +VEGF165组与TGF-β1单独作用组相比明显下降,且以30 min时下降明显.TGF-β1组作用48h与正常对照组比较,Smad7蛋白和mRNA表达明显下降,VEGF165+TGF-β1组较TGF-β1单独作用组Smad 7表达明显升高(P＜0.05).VEGF165组与正常对照组相比,α-SMA、(p-Smad 2/3 )/(Smad 2/3)、Smad 7蛋白和mRNA表达的差异无统计学意义(P＞0.05).TGF-β1组SnoN蛋白表达与正常对照组比较明显增强(P＜0.05),TGF-β1与VEGF165共同作用组SnoN蛋白表达与TGF-β1单独作用组相比差异无统计学意义(P＞0.05),各组SnoN mRNA表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 VEGF165抑制TGF-β1诱导HK-2细胞EMT的机制可能与直接抑制Smad 2/3磷酸化、上调Smad 7信号表达有关,而与调节SnoN表达无关.     

骨形成蛋白7能减轻TGF-β1诱导的人足细胞损伤

目的：观察骨形成蛋白（bone morphogenie protein 7,BMP-7）抑制转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）诱导的人足细胞转分化作用及其机制研究。方法：构建及鉴定pcDNA 3.1rh BMP-7质粒,体外培养人足细胞,先后予10、20、50、100、200 μg/mL重组的BMP-7诱导足细胞,分别在培养24、48、72 h收集细胞,流式细胞试验检测细胞凋亡率,以此选择重组BMP-7最适的刺激浓度和最适的作用时间点。实验分为正常对照组、TGF-β诱导组（TGF-β）及质粒转染组（PEGF-BMP-7）,质粒转染组加入重组BMP-7 100 μg/mL预处理48 h后,而TGF-β诱导组和PEGF-BMP-7组分别予5 ng/mL TGF-β1处理足细胞后,通过免疫荧光观察足细胞Podocin、α-SMA、VIM的表达变化;收集细胞抽取总RNA和总蛋白,应用RT-PCR和Western blot观察重组BMP-7对人足细胞Podocin、α-SMA、VIM的mRNA和蛋白表达的影响。结果：①本实验成功构建pcDNA 3.1rh BMP-7质粒,转染的人足细胞能稳定表达BMP-7,质粒转染组BMP-7蛋白表达水平（0.487±0.012）较正常对照组（0.251±0.012）和TGF-β诱导组（0.151±0.015）明显增高（P＜0.001）;②Real-time PCR检测结果显示TGF-β诱导组足细胞Podocin的mRNA表达水平（0.285±0.013）较正常对照组（1.057±0.090）明显降低（P＜0.001）,而质粒转染组足细胞Podocin的mRNA表达水平（0.693±0.077）较TGF-β诱导组有升高趋势（P=0.003）;TGF-β诱导组和质粒转染组足细胞的α-SMA（1.257±0.039和1.028±0.093）、VIM（1.114±0.097和0.821±0.059）的mRNA表达较正常对照组（0.357±0.089和0.403±0.020）明显升高（P＜0.001）,质粒转染组足细胞α-SMA和VIM的mRNA较TGF-β诱导组有下降趋势（P=0.011,P=0.002）。Western blot检测结果显示TGF-β诱导组足细胞Podocin的蛋白表达水平（32.923±5.301）较正常对照组（101.807±9.208）明显降低（P＜0.001）,而质粒转染组足细胞Podocin的蛋白表达水平（90.507±7.810）较TGF-β诱导组有升高趋势（P＜0.001）;TGF-β诱导组和质粒转染组足细胞的α-SMA（116.120±8.300和93.832±10.602）、VIM（124.016±9.702和100.801±6.801）的蛋白表达较正常对照组（35.730±4.892和43.801±2.600）明显升高（P＜0.001）,质粒转染组足细胞α-SMA和VIM的蛋白较TGF-β诱导组有下降趋势（P=0.017,P=0.007）。结论：TGF-β1可诱导人足细胞发生转分化,导致其α-SMA、VIM表达增高,Podocin表达减少,BMP-7能显著抑制此现象,提示BMP-7可逆转足细胞EMT,对足细胞损伤具有保护作用。     

新生儿呼吸窘迫综合征患儿血清转化生长因子-β1、骨形态发生蛋白-7、维生素A水平及其与病情程度的关系

目的 探讨血清中转化生长因子-β1(TGF-β1)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)、维生素A在新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)患儿中的表达情况及其与病情程度的关系.方法 选取64例NRDS患儿及60例无NRDS的早产儿分别作为NRDS组、对照组,检测两组TGF-β1、BMP-7和维生素A水平.结果 NRDS组血清TGF-β1和BMP-7水平高于对照组(P<0.05),两组血清维生素A水平差异无统计学意义(P>0.05);病情Ⅲ~Ⅳ级NRDS患儿血清TGF-β1和BMP-7水平高于Ⅰ~Ⅱ级患儿(P<0.05);NRDS患儿血清TGF-β1和BMP-7水平与病情程度呈正相关(P<0.05),但维生素A与病情程度无相关性(P>0.05).结论 NRDS患儿血清TGF-β1和BMP-7水平明显升高,且两者水平越高患儿病情程度越重.     

骨形态形成蛋白-7对体外培养肾小管上皮细胞TGF-β1诱导转分化的作用

目的观察骨形态形成蛋白-7(BMP-7)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人类肾小管上皮细胞(HKC)转分化的作用,并探讨其作用机制.方法将体外培养的HKC分为5组:(1)无血清培养基阴性对照组;(2)TGF-β1阳性对照组;(3)BMP-7单独作用组;(4)BMP-7与TGF-β1共同作用组;(5)BMP-7预处理后加入TGF-β1组.间接免疫荧光法测定HKC角蛋白(keratin)的表达;免疫组织化学方法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及E-钙粘素(E-cadherin)表达;流式细胞技术测定α-SMA阳性HKC的百分数;半定量反转录PCR(RT-PCR)方法测定HKC细胞α-SMA、TGF-β1及其Ⅱ型受体mRNA的表达.结果TGF-β1与BMP-7共同作用HKC细胞48 h,α-SMA表达较阳性对照组减弱,而E-钙粘素及角蛋白表达较阳性对照组增强,与阴性对照组相比差异无显著性;BMP-7预处理后再加入TGF-β1作用HKC细胞48 h,α-SMA表达较阳性对照组减弱,而E-钙粘素及角蛋白表达较阳性对照组增强,与阴性对照组相比差异无显著性;流式细胞技术测定α-SMA阳性HKC的百分数,在BMP-7与TGF-β1共同作用组明显低于阳性对照组(9.7% vs 19.8%,5.8% vs 19.8%,P＜0.05).BMP-7组预处理组亦明显低于阳性对照组(8.7% vs 19.8%,P＜0.05).RT-PCR显示BMP-7与TGF-β1共同或者预处理HKC细胞,α-SMA mRNA表达分别为阳性对照组的15%和12%,而TGF-β1及其Ⅱ型受体mRNA表达水平分别为阳性对照的28%和19%及47%和36%.结论一定浓度的BMP-7与TGF-β1同时培养或预处理,都能抑制TGF-β1诱导的HKC细胞转分化;BMP-7可以预防和抑制HKC细胞TGF-β1及其Ⅱ型受体mRNA表达,这很可能是BMP-7抑制HKC细胞转分化的重要机制之一.     

大鼠股骨骨折合并脑外伤时骨愈合过程中TGF-1β的作用

目的:研究大鼠股骨骨折合并脑外伤时骨痂组织中TGF-β1的表达及血清TGF-β1水平,探讨TGF-β1与骨折合并脑外伤时愈合加快的关系.方法:将64只大鼠随机分为4组∶正常对照组、脑外伤组、骨折组和骨折合并脑外伤组各16只.建立大鼠脑外伤和骨折模型,分别于2 wk和3 wk取血清,酶联免疫吸附法测血清中TGF-β1水平,骨折标本拍计算机X线摄像片,骨痂组织作HE染色和SP法免疫组化.结果:2 wk时大鼠血清TGF-β1水平在骨折合并脑外伤组(4.68±0.61)μg/L,脑外伤组(5.92±0.84)μg/L,骨折组(6.23±0.78)μg/L,与正常对照组(8.37±0.65)μg/L相比均有显著性降低(P<0.05);骨折合并脑外伤组与脑外伤组、骨折组比较有显著性降低(P<0.05);3 wk时各实验组大鼠血清TGF-β1水平有所恢复,骨折合并脑外伤组与正常对照组相比未见有统计学差异.骨痂组织TGF-β1免疫组化染色平均阳性细胞百分数骨折合并脑外伤组(85.2±9.2)%比骨折组(77.0±6.7)%有显著性增加(P<0.05).结论:伴有脑外伤的骨折愈合加快,TGF-β1可能是脑外伤后骨折愈合加速的因素之一.     

骨形成蛋白-7基因转染对人肾小管上皮细胞外基质分泌的影响

目的构建骨形成蛋白-7(BMP-7)全长基因表达质粒,观察BMP-7过表达对转化生长因子(TGF)-β诱导的人肾小管上皮细胞细胞外基质分泌(ECM)的作用。方法将BMP-7全长cDNA连接进入真核细胞表达质粒pcDNA3·1中,以脂质体Superfect介导的方法将重组表达质粒pcDNA3·1-BMP-7转染入人肾小管上皮细胞,挑选阳性克隆,以获得稳定转染的人肾小管上皮细胞株。采用Western印迹方法检测BMP-7在肾小管上皮细胞培养上清液中的表达。给予TGF-β(5ng/ml)进行处理,应用RT-PCR和ELISA的方法,观察BMP-7过表达对纤维粘连蛋白(FN)、胶原Ⅰ、Ⅲ(ColⅠ、Ⅲ)等细胞外基质mRNA和蛋白质表达的作用。结果EcoR I限制性酶切鉴定以及DNA双向测序结果均说明所构建的重组质粒为BMP-7全长基因表达质粒。Western印迹方法检测稳定转染人肾小管上皮细胞蛋白表达量明显高于空载体转染组(P<0·05)。TGF-β处理24、48、72h后,5ng/ml TGF-β处理组、空白质粒转染(pcDNA3·1)+5ng/ml TGF-β组ColⅠ、Ⅲ、FN mRNA的表达量明显高于正常对照组,空白质粒转染组(pcDNA3·1)[ColⅠ(A值):0·897±0·100、1·054±0·090vs0·286±0·010、0·319±0·080;ColⅢ(A值):1·114±0·040、0·961±0·090vs0·354±0·020、0·403±0·040;FN(A值):1·257±0·090、1·188±0·060vs0·413±0·020、0·454±0·060,均P<0·05];Col I、FN mRNA表达量pcDNA3·1-BMP-7转染组+5ng/ml TGF-β组明显低于TGF-β处理组(0·591±0·007、0·687±0·020,P<0·05),ColⅢmRNA表达有降低趋势(0·809±0·090),但差异无统计学意义。细胞培养上清液FN含量5ng/ml TGF-β处理组、空白质粒转染(pcDNA3·1)+5ng/mlTGF-β组明显高于正常对照组(P<0·05),而pcDNA3·1-BMP-7转染组+5ng/ml TGF-β组表达明显低于TGF-β处理组(P<0·05)。结论BMP-7过表达可以显著减少TGF-β所致的人肾小管上皮细胞FN、ColⅠ、ⅢmRNA和细胞培养上清液中的FN的表达。表明BMP-7减少小管间质炎症反应和纤维化的发生,改善肾功能的作用,部分是通过抑制肾小管上皮细胞分泌细胞外基质实现的。     

血管内皮生长因子对肾小管上皮-间充质细胞转化的作用及其与骨形成蛋白-7、分化抑制因子表达的关系

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)对肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)的作用及其与骨形成蛋白-7(BMP-7)、分化抑制因子(Id)2、Id3表达的关系。方法体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)经转化生长因子-β1(TGF-β1,5ng/ml)与不同浓度VEGF165(0.1、1、10、100ng/ml)共同作用,或TGF-β1(5ng/ml)与血管内皮生长因子受体-1(VEGFR1)抗体(10μg/ml)共同作用48h后,免疫组织化学双染方法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素表达,实时荧光定量PCR法、Westernblot法检测细胞α-SMA、BMP-7、Id2和Id3的表达。TGF-β1(5ng/ml)、VEGF165(100ng/ml)与激活素受体样激酶-6/Fc嵌合体(Alk6/FcChimera)(2μg/ml,中和内源性BMP-7)共同作用48h后,Westernblot法检测细胞α-SMA、Id2的表达情况。结果TGF-β1作用后,α-SMA表达比正常对照显著增强(P<0.05),E-钙黏素、BMP-7、Id2及Id3的mRNA及蛋白质表达均显著减弱(P<0.05)。VEGF165以浓度依赖方式增强BMP-7及Id2蛋白表达,而显著降低TGF-β1上调α-SMA表达的作用(P<0.05)。加入VEGFR1抗体(10μg/ml)后,TGF-β1上调α-SMA表达的作用显著增强(P<0.05),而E-钙黏素、BMP-7、Id2表达显著减弱(P<0.05)。TGF-β1 VEGF165 Alk6/FcChimera共同作用后α-SMA蛋白表达比TGF-β1 VEGF165共同作用后显著增强(P<0.05),而Id2表达差异无显著性。结论VEGF165可抑制TGF-β1诱导HK-2细胞发生EMT;其机制可能与BMP-7和Id2表达上调有关,而与Id3表达变化无关。Id2表达增强可能与VEGF165的直接作用有关,而与BMP-7无关。     

儿童先天性巨输尿管组织中HIF-1α、VEGF和TGF-β1蛋白的表达

目的:检测儿童先天性巨输尿管组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白的表达.方法:取25例先天性巨输尿管末端组织,按年龄分为<1岁组(10例),1-3岁组(8例)和>3岁组(7例);取28例肾母细胞瘤输尿管下端无肿瘤细胞浸润的组织作为对照,按年龄分为<1岁组(8例),1-3岁组(10例)和>3岁组(10例).采用免疫组化SP法检测两种组织中HIF-1α、VEGF和TGF-β1蛋白的表达.结果:>3岁组对照组织和先天性巨输尿管末端组织中HIF-1α、VEGF和TGF-β1的表达极少或呈阴性.<1岁组和1-3岁组先天性巨输尿管末端组织中3指标均高于对照组织(HIF-1α:Z=3.593和3.721;VEGF:Z=3.554和3.465;TGF-β1:Z=3.554和3.552,P均<0.001).结论:HIF-1α、VEGF和TGF-β1的异常表达可能参与了儿童先天性巨输尿管症的发病过程.     

三期辨证治疗对骨折患者血清bFGF、TGF-β、VEGF、BMP-2表达的影响

目的:三期辨证治疗对骨折患者血清bFGF、TGF-β、VEGF、BMP-2表达的影响。方法:选取2015年10月至2018年3月我院收治120例桡骨骨折患者随机分为治疗组和对照组60例。对照组固定后第1天口服麝香接骨胶囊,并同时结合功能锻炼。连服用56d。治疗组固定后第1天口服桃仁消肿胶囊。连服用14d(1-2周);于第15-28d(3-4周)改口服红花续断胶囊吗,于第29-56d(5-8周)改口服鹿角壮骨胶囊,连服用28d。并同时结合功能锻炼。分别于服药前、服药后14、28、56d检测两组患者血清bFGF、TGF-β、VEGF、BMP-2基因表达情况。结果:两组服药后14、28、56d血清bFGF、TGF-β、VEGF、BMP-2表达水平与同组服药前比较,差异有显著性(P0.05);观察组服药后28、56血清bFGF、TGF-β、VEGF、BMP-2表达水平水平与对照组同期比较,差异有显著性(P0.05)。结论:采取三期辨证治疗骨折能促进患者血清bFGF、TGF-β、VEGF、BMP-2表达,加快骨折愈合。     

膜型基质金属蛋白酶-1在骨性关节炎患者滑膜中的表达及意义

目的:探讨膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP/MMP-14)在骨性关节炎(OA)患者膝关节滑膜中的表达和意义?方法:应用免疫组化和Western blot方法检测MT1-MMP蛋白在40例OA与40例非OA患者滑膜中的表达情况?结果:免疫组化结果表明MT1-MMP蛋白在OA与非OA患者滑膜中的表达有显著性差异(χ2 = 29.46,P < 0.01),且阳性表达多定位于滑膜细胞的胞质;Western blot分析结果显示MT1-MMP蛋白在OA患者滑膜(1.042 ± 0.219)中表达显著高于非OA患者滑膜组织(0.256 ± 0.050,F = 12.838,P = 0.001)?结论:MT1-MMP蛋白与骨性关节炎发生发展相关,可能作为诊断及判断骨性关节炎的一项重要指标?     

TGFβ1和BMP2在人膝骨关节炎滑膜组织中的表达研究

目的探讨转化生长因子(TGF-β1)和骨形成蛋白(BMP2)在人膝骨关节炎滑膜组织中的作用。方法采用免疫组织化学及原位杂交方法在光镜下观察TGFβ1和BMP2在人膝骨关节炎滑膜组织中的表达,以类风湿关节炎及健康意外截肢患者分别作为疾病对照组及正常对照组。结果早期骨关节炎(OA)患者滑膜组织各层TGFβ1蛋白表达与类风湿关节炎(RA)组及正常对照组差异有统计学意义(P<0.05);TGFβ1mRNA在血管周围及滑膜衬里层与RA组差异有统计学意义(P<0.05)。早期OA滑膜组织各层BMP2蛋白及BMP2mRNA表达与正常对照组差异有统计学意义(P<0.05);与RA组差异无统计学意义。早期OA各层TGFβ1、BMP2蛋白的表达与各炎症指标无相关性;早期RA滑膜衬里层TGFβ1蛋白表达与外周血小板计数呈正相关性,早期RA血管周围TGFβ1蛋白表达与炎症指标CRP呈正相关性。结论TGFβ1mRNA以及蛋白在OA的高表达可能成为OA后期骨化过度、骨性强直的原因之一;BMP2在OA滑膜组织各层的高表达推测有可能为OA软骨骨化强直病理变化中重要的“启动子”。     

增殖性糖尿病视网膜病变玻璃体中转化生长因子β2的定量 …

目的:通过对增殖性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)患者玻璃体中转化生长因子β2(TGF-β2)含量的研究,探讨TGF-β2在PDR病理过程中的作用.方法:应用酶联免疫吸附测定法对10例(10只眼)正常人及24例(24只眼)PDR患者玻璃体中TGF-β2的含量进行检测和分析.结果:10例正常人玻璃体中,TGF-β2的含量为(1.27±0.69)ng/ml;24例PDR患者玻璃体中,TGF-β2的含量为(4.89±3.51) ng/ml.两组比较,PDR组的玻璃体中TGF-β2的含量明显升高,差异非常显著(P<0.01).将糖尿病视网膜病Ⅳ期及Ⅴ期14例(14只眼)患者列为一组,10例(10 只眼)Ⅵ期患者另列一组,玻璃体中TGF-β2的含量分别为(6.07±4.05)及(2.84±1.72) ng/ml,两组间比较有显著差异(P<0.05).它们分别与正常对照组比较也有非常显著差异(P<0.01)和显著差异(P<0.05).结论:PDR患者玻璃体中TGF-β2的含量升高,提示TGF-β2在PDR的病理发展过程中可能起重要作用.     

TGF-β1、PDGF、CTGF在尘肺病患者血清中的表达水平变化及意义

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板源性生长因子(PDGF)、结缔组织生长因子(CTGF)在尘肺病发生、发展中表达水平的变化及其意义。方法采用双抗体夹心法,测定70例尘肺病患者(其中包括29例矽肺病患者和41例煤工尘肺病患者)和77例健康对照者血清TGF-β1、PDGF、CTGF的表达水平。结果尘肺病患者血清TGF-β1、PDGF、CTGF含量分别为(44.95±23.72)ng/mL、(56.95±55.68)ng/mL、(346.70±259.49)pg/mL,对照组则分别为(6.81±4.99)ng/mL、(30.96±21.63)ng/mL、(307.49±235.40)pg/mL,病例组与对照组血清TGF-β1、PDGF含量差异均有统计学意义(P<0.05),血清CTGF含量在两组间差异无统计学意义(P>0.05);矽肺病患者血清TGF-β1、PDGF含量均高于煤工尘肺病患者,差异有统计学意义(P<0.05);尘肺病患者血清TGF-β1、PDGF含量随着期别的增加而降低,差异有统计学意义(P<0.05);两变量相关分析显示TGF-β1与PDGF、CTGF与PDGF呈正相关关系(P<0.05)。结论血清TGF-β1、PDGF表达水平与尘肺病的发生发展、病理类型及严重程度密切相关。     

TGF-β1、VEGF和MMP-2蛋白在口腔鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的:研究口腔鳞状细胞癌组织中TGF-β1、VEGF和MMP-2的表达及其临床意义。方法:用链霉素亲生物素-过氧化酶免疫组织化学(SP)法检测40例口腔鳞状细胞癌组织中TGF-β1、VEGF和MMP-2的表达,分析TGF-β1、VEGF和MMP-2的表达与临床病理参数的关系以及TGF-β1的表达与VEGF和MMP-2表达的相关性。结果:TGF-β1表达阳性率为55%(22/40),VEGF表达阳性率为60%(24/40),MMP-2表达阳性率为65%(26/40)。TGF-β1、VEGF和MMP-9的表达与口腔鳞状细胞癌患者的年龄、性别及组织分化程度无明显关系(P>0.05),与临床分期和淋巴结转移有关。Ⅲ期与Ⅰ、Ⅱ期比较,原发灶中TGF-β1、VEGF和MMP-2表达率有升高趋势(P<0.05)。有淋巴结转移者与无淋巴结转移者比较,原发灶中TGF-β1、VEGF和MMP-2表达率有升高趋势(P<0.05)。TGF-β1的表达与VEGF和MMP-2的表达呈明显的正相关性。结论:TGF-β1、VEGF和MMP-2的表达与口腔鳞状细胞癌的浸润和转移有关。     

TGF-β1通过Jagged1/Notch激活小鼠肝星状细胞

目的：研究转化生长因子-β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）激活小鼠肝星状细胞（mouse hepatic stellate cells,mHSC）的具体机制。方法：实验选用mHSC-T25细胞株为实验对象,随机分为激活组（mHSC-T25+10 ng/mL TGF-β1）、抑制组（mHSC-T25+1 μmol/L TGF-β-R1抑制剂）和对照组（mHSC-T25）。qRT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、TGF-β1、转化生长因子β受体1（transforming growth factorβreceptor1,TGF-β-R1）、Jagged1、血管内皮生长因子（vas－cular endothelial growth factor,VEGF）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）等的mRNA表达;细胞免疫荧光法检测α-SMA、Jagged1等蛋白的表达;Western blot检测TGF-β1、α-SMA、TGF-β-R1、Jagged1、Smad2/3、p-Smad2/3等蛋白的表达。结果：①TGF-β1刺激组中α-SMA、TGF-β1、TGF-β-R1、Jagged1、VEGF、HGF等mRNA表达量均较对照组明显增加而抑制组均明显下降。α-SMA：激活组（315.1±6.2）%,抑制组（34.3±4.5）% （F=3291.956,P=0.000）;TGF-β1：激活组（524.8±14.3）%,抑制组 （29.0±10.7）%（F=469.534,P=0.000）;TGF-β-R1：激活组（235.5±15.2）%,抑制组（17.0±2.8）%（F=392.239,P=0.000）;Jagged1：激活组（548.7±16.6）%,抑制组（17.4±4.7）%（F=364.166,P=0.000）;VEGF：激活组（331.9±19.8）%,抑制组（19.5±3.7）%（F=278.407,P=0.000）;HGF：激活组（376.00±6.51）%,抑制组（16.2±2.7）%（F=640.340,P=0.000）。②激活组高表达α-SMA、Jagged1等蛋白,而对照组、抑制组表达明显较少。α-SMA：激活组0.880±0.016,对照组0.481±0.007,抑制组0.207±0.014 （F=2098.556,P=0.000）;Jagged1：激活组0.796±0.015,对照组0.474±0.021,抑制组0.167±0.005（F=1242.556,P=0.000）。③TGF-β1激活组中TGF-β1、α-SMA、TGF-β-R1、Jagged1、Smad2/3、p-Smad2/3的蛋白表达量均较对照组明显上调而抑制组均明显下调。TGF-β1：激活组1.180±0.138,对照组0.654±0.061,抑制组0.359±0.012（F=67.706,P=0.000）;α-SMA：激活组1.076±0.063,对照组0.689±0.022,抑制组0.374±0.011（F=239.186,P=0.000）;TGF-β-R1：激活组1.192±0.142,对照组0.710±0.380,抑制组0.378±0.069 （F=57.235,P=0.000）;Jagged1：激活组1.582±0.247,对照组0.817±0.116,抑制组0.364±0.059（F=43.649,P=0.000）;Smad2/3：激活组2.057±0.114,对照组1.203±0.105,抑制组0.664±0.063（F=158.856,P=0.000）;p-Smad2/3：激活组2.088±0.120,对照组1.168±0.107,抑制组0.573±0.120 （F=136.369,P=0.000）。上述实验结果提示,激活组、抑制组与对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：TGF-β1通过Jagged1/Notch激活小鼠肝星状细胞并调控其相关生物学活性。     

骨形成蛋白-7对肾小管上皮细胞转分化及结缔组织生长因子表达的影响

目的 观察骨形成蛋白-7(BMP-7)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人近端肾小管上皮细胞(HK-2)向间充质细胞转分化(EMT)及表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响,探讨其抑制、逆转肾间质纤维化的可能机制.方法 将体外培养的HK-2细胞分为对照组,3 ng/ml TGF-β1组,TGF-β1同时加不同浓度BMP-7(100～400 ng/ml)组.相差显微镜观察细胞形态改变;间接免疫荧光测定E-cadherin的表达;RT-PCR和Western印迹分别检测α-SMA、E-cadherin、CTGF mRNA和蛋白的表达.结果 3 ng/ml TGF-β1刺激48 h后,HK-2细胞由立方形铺路石样转变为梭形长条样;去除TGF-β1,再加入200 ng/ml BMP-7干预48 h,可见到大部分细胞逆转回原来的形态.免疫荧光显示,E-cadherin蛋白在正常HK-2细胞质膜高表达;3 ng/ml TGF-β1刺激后,E-cadherin表达明显减弱;去除TGF-β1,再加入200 ng/ml BMP-7干预后,E-cadherin表达重新恢复.RT-PCR及Western印迹显示,3 ng/mlTGF-β1刺激48 h后,α-SMA mRNA及蛋白表达明显上调、E-cadherin mRNA及蛋白表达明显减少,同时CTGF mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.01);BMP-7与TGF-β1共同刺激48 h后,BMP-7呈剂量依赖性抑制TGF-β1诱导下α-SMA mRNA及蛋白的表达,并逐渐恢复E-cadherin mRNA及蛋白的表达,同时下调CTGF mRNA及蛋白的表达,400 ng/ml BMP-7组与TGF-β1组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论 BMP-7能阻断并逆转TGF-β1诱导的EMT,下调CTGF的表达,这可能是其逆转肾间质纤维化的重要作用机制.     

大鼠跟腱损伤修复局部生长因子内源性表达变化的研究

目的测定损伤肌腱修复术后康复过程中手术局部分泌型生长因子表达的变化情况。方法 21只大鼠切断单侧跟腱后立即以丝线修复,术后第1、3、5、7、14、21和28天分别处死3只实验大鼠。收集损伤局部及健侧跟腱标本,以实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定转化生长因子β1(TGF-β1)、TGF-β2、TGF-β3,骨形态形成蛋白(BMP)-12、BMP-13、BMP-14,血管内皮生长因子(VEGF),肝细胞生长因子(HGF),组织连接生长因子(CTGF),胰岛素样生长因子1(IGF-1)、IGF-2,成纤维细胞生长因子(FGF-1)、FGF-2,血小板源性生长因子a(PDGFa)、PDGFb和表皮生长因子(EGF)等分泌型生长因子的表达水平并进行对比分析。结果术后第1、3、5、7、14、21和28天损伤修复测标本,TGF-β2表达水平最高,其中术后第1、3、5天表达最明显。BMP-13、BMP-14,VEGF和IGF表达水平基本相当,但较TGF-β2表达水平少。术后第7天,上述因子表达水平显著减少。而TGF-β1在术后第21天达到最大表达。对照组标本未测出相关生长因子RNA表达。结论 TGF-β2、BMP-13、BMP-14、IGF-1和VEGF在术后第1天即开始高表达,术后第7天显著降低。TGF-β1在术后第21天表达水平达最大值。在肌腱损伤后局部综合应用上述生长因子可有效加快其愈合进程,增加肌腱修复后的强度,促进肌腱早期修复。