金欣口服液含药血清抗呼吸道合胞病毒作用研究

目的：观察金欣口服液对呼吸道合胞病毒（RSV）感染的人喉癌上皮细胞（Hep-2）细胞的抑制作用。方法：通过体外抗病毒实验采用MTT法检测病变抑制率及以上清滴度观察金欣口服液含药血清对RSV的抑制作用。结果：MTT法测定病毒抑制率均高于75％,含药血清组上清滴度与空白血清组和病毒对照组比较有显著差异,滴度低于后两组。结论：金欣口服液对呼吸道合胞病毒引起的细胞病变有明显抑制作用。     

清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒抑制作用的实验研究

目的研究清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染细胞的抑制作用。方法用不同剂量的清肺口服液制成含药血清处理呼吸道合胞病毒感染后的Hep-2细胞,用组织细胞培养法,采用细胞病变(CPE)观察和四氮唑盐还原法(MTT法)检测清肺口服液含药血清对RSV感染细胞的增殖抑制作用。结果在Hep-2细胞上,清肺口服液的最大无毒浓度为1∶9。100TCID50RSV攻击后Hep-2细胞的OD值明显降低,加入中高剂量含药血清后OD值升高。结论清肺口服液含药血清对RSV有抑制作用。      

金欣口服液含药血清及其有效单体白藜芦醇对RSV的RNA聚合酶转录活性的影响

目的?研究金欣口服液含药血清及其有效单体白藜芦醇对呼吸道合胞病毒（RSV）RNA聚合酶转录活性的作用。方法?通过体外分离病毒核糖核蛋白复合体（RNP）进行体外转录,并在转录过程中应用放射性核苷酸标记,同位素检测RSV的mRNA全长转录本,从而观察金欣口服液含药血清及其有效单体白藜芦醇对RSV 的RNA依赖的RNA聚合酶活性的影响。结果?正常细胞组与病毒感染细胞模型组放射性核苷酸辐射强度有显著差异（P<0.01）,而白藜芦醇组转录掺入的放射性核苷酸明显低于病毒对照组（P<0.01）,而各含药血清组差异不显著。结论?金欣口服液有效单体白藜芦醇对RSV的RNA依赖的RNA聚合酶有较好的抑制作用,其可能是金欣口服液抗RSV的作用机制之一。      

金欣口服液对RSV感染细胞TLR4及TNF-α表达的影响

目的 研究开肺化痰清热止咳中药金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的Hep-2细胞TLR4及该通路下游细胞因子TNF-α表达的影响.方法 制备血行药物成分溶液,作用于RSV感染的Hep-2细胞,通过RT-qPCR、免疫荧光标记结合激光共聚焦技术及ELISA法,分别观察分析细胞TLR4 mRNA、蛋白和相关细胞因子的表达水平,分析药物作用机制.结果 与病毒对照组比较,金欣口服液作用于RSV感染的Hep-2细胞后,TLR4 mRNA及蛋白表达显著降低,TNF-α表达显著降低,细胞病变程度减轻.结论 金欣口服液含药血清可以通过下调TLR4和TNF-α表达水平减轻感染RSV后Hep-2细胞的病变程度.     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒增殖影响的研究

目的:观察清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus RSV)A、B亚型增殖的影响.方法:采用组织培养病毒滴度测定方法观察呼吸道合胞病毒A、B亚型滴度的变化.结果:清肺口服液含药血清不能影响呼吸道合胞病毒A、B亚型滴度.结论:清肺口服液含药血清不能直接影响呼吸道合胞病毒增殖.     

金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞胞内钙离子的影响

目的:探讨金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染细胞内的钙离子影响.方法:体外建立RsV A型LONG株攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞模型,设正常细胞组、病毒组、空白血清组、利巴韦林组和金欣口服液组.采用激光共聚焦技术检测其对感染细胞不同时间点的胞内钙离子的变化.结果:RsV感染24 h细胞内钙离子与正常细胞组相比无显著性差别(P>0.05).空白血清、利巴韦林、金欣口服液组和病毒组相比无显著性差异(P>O.05).RSV感染48、72 h均高于细胞组(P0.05).72 h低于病毒组(P<0.05);利巴韦林组和金欣口服液组48、72 h均低于病毒组,且有显著性差异(P<0.05).金欣口服液组和利巴韦林组相比.48 h有显著性差异(P<0.05),但72 h无显著性差异(P>0.05).结论:金欣口服液可能抑制成纤维细胞的钙离子内流,这也许是金欣口服液抑制RSV感染细胞凋亡的一个因素.金欣口服液可作为早期抗RSV感染治疗药物.     

银黄清肺胶囊含药血清体外抗呼吸道合胞病毒实验研究

目的 研究银黄清肺胶囊含药血清体外抑制呼吸道合胞病毒(RSV)的作用.方法 采用观察CPE及MTT法,观察在银黄清肺胶囊含药血清干预下,感染RSV Hep-2细胞的CPE及光密度值,从而比较不同给药方式(预防给药、治疗给药、直接杀灭)及不同药物剂量下银黄清肺胶囊对RSV的抑制作用. 结果 在三种给药方式中,与相应浓度空白血清比较,各浓度银黄清肺胶囊与利巴韦林片含药血清OD值均明显增高(P<0.05);其中稀释度为3.13%的利巴韦林片含药血清和稀释度为6.25%的银黄清肺胶囊含药血清相比本组其他浓度含药血清OD值均明显增高(P<0.05).结论 银黄清肺胶囊含药血清对RSV有直接灭活作用,对RSV侵入Hep-2细胞有阻断作用,对RSV在Hep-2细胞内增殖有抑制作用. 其中稀释度为3.13%的利巴韦林含药血清和稀释度为6.25%的银黄清肺胶囊含药血清相比本组其他浓度含药血清体外抗RSV活性强.     

金欣口服液调控心磷脂代谢抗呼吸道合胞病毒感染的机制研究

目的 研究金欣口服液及其主要成分黄芩苷对呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus, RSV)诱导心磷脂代谢异常的影响及可能的作用机制。方法 将BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组和金欣口服液给药组。前3 d以RSV混悬液滴鼻建立RSV感染模型,从第3天下午开始,金欣口服液组予金欣口服液(27.6 g·kg^-1·d^-1)连续灌胃给药3 d。体外实验采用RSV感染Raw264.7细胞的方式建立病毒感染模型,黄芩苷组给予黄芩苷(100 mg·kg^-1·d^-1)干预。采用色谱质谱联用的方式分别检测小鼠肺组织及Raw264.7细胞心磷脂代谢谱的变化。qPCR法检测RSV表面蛋白RSV-F、RSV-G,炎症因子IL-6、IL-1β、Tnf-α,心磷脂代谢酶Tafazzin(TAZ)、心磷脂合成酶1(Crls1)、心磷脂转运酶(PLSCR3)以及自噬受体蛋白SQSTM1/P62(p62)的转录水平。Western blot法检测p62蛋白表达水平,分子对接检测p62与CL14∶0-...     

免疫磁珠纯化人呼吸道合胞病毒F蛋白方法的建立

目的 利用免疫磁珠分离技术(IMS)建立快速纯化人呼吸道合胞病毒(RSV)融合蛋白(F)的方法.方法 表达RSV F的重组腺病毒FGAd/F感染293细胞,收获细胞裂解液,利用兔抗人RSV多抗包被表面活化的免疫磁珠富集和纯化F蛋白,同时建立夹心ELISA,检测纯化的F蛋白浓度以及 F蛋白的回收率.结果 采用IMS成功纯...     

金欣口服液不同化学部位对呼吸道合胞病毒感染的影响

目的 观察金欣口服液不同化学部位在体内的抗呼吸道合胞病毒（RSV）作用。方法 小鼠经滴鼻感染RSV建立肺炎模型,随机分为正常对照组、模型对照组、利巴韦林组、金欣口服液组、金欣口服液石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取液组及母液组,光镜下观察肺组织的炎症病变情况,计算小鼠肺指数和肺指数抑制率、脾指数、胸腺指数、死亡保护率。结果 金欣口服液石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取液对RSV感染后小鼠的肺指数增高均有显著的降低作用(P<0.01),减轻感染小鼠肺组织炎症病变,同时能增加脾指数和胸腺指数(P<0.01)。金欣口服液正丁醇提取液能降低RSV感染小鼠的死亡率。结论 金欣口服液石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取液对RSV具有一定的抑制作用,并且能提高RSV感染小鼠的免疫功能。正丁醇提取液对RSV感染小鼠具有一定的死亡保护作用。     

翻白草油对RSV感染宿主HeLa细胞Caspase-3蛋白的影响

目的：检测翻白草油对呼吸道合胞病毒（RSV）感染宿主HeLa细胞Caspase-3蛋白的影响,探讨翻白草油抗RSV的作用。方法：RSV感染宿主HeLa细胞后,选取翻白草油进行抗RSV病毒作用研究,采用Westernblot检测宿主HeLa细胞Caspase-3蛋白的表达。结果：翻白草油组与RSV病毒组比较,宿主HeLa细胞Caspase-3蛋白的表达明显降低（P〈o．05）。结论：翻白草油在直接灭活阶段和病毒生物合成阶段,抗RSV作用可能与降低Caspase-3蛋白的表达有关。     

金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染的肺巨噬细胞及BALB/c小鼠IL-1β表达的调控作用

[目的]探讨金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染肺巨噬细胞(Raw264.7)及BALB/c小鼠白介素-1β(IL-1β)表达的调控作用。[方法]体外实验:培养Raw264.7细胞,共分4组(n=6),分别是正常细胞组,RSV感染模型组,利巴韦林注射液组,金欣口服液组。进行含药血清干预,收集24h的上清以酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组IL-1β的含量;体内实验:分为A组(感染前高剂量及等效剂量给药)、B组(感染前感染后高剂量及等效剂量给药)、C组(感染后高剂量及等效剂量给药)三大组,观察金欣口服液不同剂量、不同给药时间对RSV感染BALB/c小鼠24h、72h、144h时IL-1β表达的调控作用。[结果]RSV感染Raw264.7细胞后24h上清中未检测到IL-1β的表达。其中RSV感染BALB/c小鼠24h后IL-1β的表达量显著增加,A组中金欣口服液高预防组和等效预防组均能下调其表达且以等效预防组的下调作用明显;RSV感染BALB/c小鼠72h后IL-1β的表达量也显著增加,但较RSV感染24h时的表达量稍有减少,B组中金欣高预防组和治疗组IL-1β的表达均下调;RSV感染BALB/c小鼠144h后IL-1β的表达量显著减少,而C组中的金欣治疗组均能上调其表达。[结论]金欣口服液预防和治疗组在RSV感染BALB/c小鼠早期能显著下调其表达,防止机体因过度免疫而致肺损伤,随着感染时间持续延长IL-1β的表达开始急剧下降,而金欣口服液又能将其恢复到合适的水平,以增强机体的免疫力。     

金欣口服液对感染RSV大鼠血清IL12表达水平的影响

目的?观察金欣口服液对感染呼吸道合胞病毒（RSV）大鼠血清IL12表达水平的影响,以寻找更有效的抗RSV感染方式。方法?将96只SD大鼠随机分为12组,分别为空白对照组,模型组,金欣高、中、低灌胃组,金欣高、中、低灌肠组,利巴韦林灌肠、灌胃组,金欣预先灌胃、灌肠组。用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组SD大鼠血清IL12的水平。结果? 与空白对照组比较,模型组感染RSV后血清IL12水平明显下降(P<0.01）;金欣组的高剂量灌胃组、中剂量灌胃组、中剂量灌肠组及预先灌胃组的IL12水平较模型组显著升高(P<0.01）,且与利巴韦林组有明显差异(P<0.01）。灌胃组中预先给药的IL12含量比其他给药组相比显著增加(P<0.01）。与灌肠给药相比,灌胃给药的预先组和金欣高剂量组的IL12较高(P<0.01）。 结论?金欣口服液能提高血清IL12的表达,且以灌胃方式提前给药能够更有效地抑制大鼠感染RSV。      

基于高分辨率质谱的金欣口服液治疗小鼠RSV感染的血清脂质组学研究

目的 基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS高分辨率质谱,观察RSV诱发的肺炎模型小鼠的血清中脂质代谢的变化,分析金欣口服液对RSV肺炎小鼠中脂质代谢紊乱的调节作用,探讨金欣口服液治疗RSV诱发的病毒性肺炎的潜在机制。方法 用RSV诱导小鼠病毒性肺炎,灌胃金欣口服液予以治疗,分别采集对照组、模型组、金欣口服液组小鼠的血清样本,提取脂质成分,采用LC-MS分析,采用主成分分析法（PCA）、聚类分析法（CA）等多元统计方法,对小鼠血清脂质代谢轮廓进行分析,同时进行Kruskal–Wallis test以及fold change法进行统计,寻找差异性脂质。结果 RSV感染导致小鼠肺部炎性细胞浸润及不同程度的肺炎,血清中多种脂质代谢物代谢紊乱,具体表现多数PC、PE出现明显上调,金欣口服液均能改善小鼠肺炎症状且显著恢复血清中异常紊乱的脂质。结论 RSV感染可导致小鼠血清中脂质代谢紊乱,而金欣口服液可一定程度恢复RSV模型中代谢紊乱的脂质,提示金欣口服液可通过调节脂质改善RSV诱发的肺炎。      

呼吸道合胞病毒肺炎

呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial vires,RSV)简称合胞病毒,是引起小儿病毒性肺炎最常见的病原,可引起间质性肺炎及毛细支气管炎.RSV属副黏液病毒科,电镜下所见与流感病毒类似,因其在组织培养中能形成特殊的细胞融合病变而得名.RSV为单股负链RNA病毒,在其表面有两个主要的糖基蛋白,G蛋白和F蛋白.G蛋白帮助病毒粘附在气道上皮细胞上,F蛋白具有使细胞融合形成多核巨细胞的能力.     

呼吸道合胞病毒融合蛋白变异及其对抗体和药物效果的影响

呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)是造成婴幼儿与老年人下呼吸道感染和住院的主要原因之一。目前开发疫苗、抗体及药物成为防控RSV的热点,其主要靶点是融合蛋白(fusion glycoprotein, F)。本文分析了现有RSV病毒株融合蛋白的变异情况,剖析了融合蛋白的结构特点,并针对融合蛋白的单克隆抗体及小分子药物的结合部位及逃逸情况进行了综述,以期为设计广谱、高效的RSV疫苗及药物提供参考。     

呼吸道合胞病毒感染研究的新进展

呼吸道合胞病毒(简称RSV)于1956年首先从呼吸道感染的猩猩体内分离得到,在组织培养过程中因其繁殖时能引起明显的细胞融合现象而得名.RSV是一种RNA病毒,含有8种结构蛋白,其中,使病毒吸附于细胞的G蛋白和使细胞融合的F蛋白是该病毒的主要抗原决定簇,可诱导机体产生中和抗体和保护性抗体.以往认为RSV只有一个血清型,近年来用单克隆抗体和新分离的RSV试验,根据反应模式的不同,可将RSV分为A、B两大亚型.     

人气道上皮细胞感染呼吸道合胞病毒后细胞间黏附分子－１ ｍＲＮＡ 的变化

呼吸道合胞病毒(RSV)是婴幼儿下呼吸道感染最主要的病原体之一,几乎所有2岁以下的小儿均有过RSV感染[1].黏附分子是近年来发现的一类重要的生物活性物质.     

双黄连对呼吸道合胞病毒感染的气道上皮细胞炎症因子释放的影响

目的：探讨双黄连及其含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的气道上皮细胞(A549)的炎症因子释放的影响及其药物作用机理。方法：以ELISA法测定炎症介质的含量，观察复方双黄连及其含药血清以不同的给药方式(Ⅰ组：感染前给药、Ⅱ组：感染时给药、Ⅲ组：感染后给药)对RSV刺激A549细胞引发的炎症介质IL-8、IL-6、TNF-α释放的作用。结果：RSV刺激气道上皮细胞A549后IL-8的分泌水平增加，而对IL-6、TNF-α影响不大；双黄连复方及其含药血清均能显降低RSV诱导A549释放的IL-8水平，并以感染前给药的途径下调IL-8的作用最为明显。结论：RSV能诱导气道上皮细胞释放炎症因子IL-8，双黄连可通过抑制RSV引起的IL-8释放，并在病毒感染的气道炎症控制中起着一定的作用。     

The antiviral role of Toll-like receptor 7 in BALB/c mice infected with respiratory syncytial virus

目的 探讨呼吸道合胞病毒(RSV) 感染BALB/c鼠后,肺内Toll样受体7(TLR7)的水平变化及其介导所产生的I型干扰素(IFN)抗病毒作用.方法 48只BALB/c鼠,随机分为正常对照组、RSV感染组、咪喹莫特干预组.以RSV活病毒滴鼻感染BALB/c鼠,诱导急性肺炎模型,并预先给予TLR7特异性激动剂咪喹莫特处理,分别于感染后4、8、12和24 h不同时间点,用半定量RT-PCR法检测鼠肺TLR7、IFN-α/β、RSV融合蛋白 (RSV F蛋白)的mRNA表达,HE染色观察肺的病理学改变.结果 ① RSV感染早期,TLR7、IFN-α/β、RSV F蛋白的mRNA表达均升高,并与RSV感染之间存在时间依赖性关系;肺的炎性细胞浸润及肺泡结构破坏程度与RSV感染时间相关;② 咪喹莫特干预组预先给予TLR7激动剂咪喹莫特处理后,再行相同RSV感染,TLR7、IFN-α/β的mRNA表达量进一步升高,但RSV F蛋白的mRNA表达下降;肺的炎性细胞浸润程度及肺泡结构破坏较RSV感染组明显减轻.结论 RSV感染可活化上调BALB/c鼠肺组织中TLR7表达,其表达量与感染之间存在时间依赖关系;其介导产生的Ⅰ型IFN起着抗病毒作用,在一定程度上可抑制病毒的增殖水平,使肺部炎症减轻.