金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞胞内钙离子的影响

目的:探讨金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染细胞内的钙离子影响.方法:体外建立RsV A型LONG株攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞模型,设正常细胞组、病毒组、空白血清组、利巴韦林组和金欣口服液组.采用激光共聚焦技术检测其对感染细胞不同时间点的胞内钙离子的变化.结果:RsV感染24 h细胞内钙离子与正常细胞组相比无显著性差别(P>0.05).空白血清、利巴韦林、金欣口服液组和病毒组相比无显著性差异(P>O.05).RSV感染48、72 h均高于细胞组(P0.05).72 h低于病毒组(P<0.05);利巴韦林组和金欣口服液组48、72 h均低于病毒组,且有显著性差异(P<0.05).金欣口服液组和利巴韦林组相比.48 h有显著性差异(P<0.05),但72 h无显著性差异(P>0.05).结论:金欣口服液可能抑制成纤维细胞的钙离子内流,这也许是金欣口服液抑制RSV感染细胞凋亡的一个因素.金欣口服液可作为早期抗RSV感染治疗药物.     

呼吸道合胞病毒感染BALB/c鼠活化Toll样受体7介导的抗病毒作用研究

目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染BALB/c鼠后,肺内Toll样受体7(TLR7)的水平变化及其介导所产生的I型干扰素(IFN)抗病毒作用。方法 48只BALB/c鼠,随机分为正常对照组、RSV感染组、咪喹莫特干预组。以RSV活病毒滴鼻感染BALB/c鼠,诱导急性肺炎模型,并预先给予TLR7特异性激动剂咪喹莫特处理,分别于感染后4、8、12和24 h不同时间点,用半定量RT-PCR法检测鼠肺TLR7、IFN-α/β、RSV融合蛋白(RSV F蛋白)的mRNA表达,HE染色观察肺的病理学改变。结果①RSV感染早期,TLR7、IFN-α/β、RSV F蛋白的mRNA表达均升高,并与RSV感染之间存在时间依赖性关系;肺的炎性细胞浸润及肺泡结构破坏程度与RSV感染时间相关;②咪喹莫特干预组预先给予TLR7激动剂咪喹莫特处理后,再行相同RSV感染,TLR7、IFN-α/β的mRNA表达量进一步升高,但RSV F蛋白的mR-NA表达下降;肺的炎性细胞浸润程度及肺泡结构破坏较RSV感染组明显减轻。结论 RSV感染可活化上调BALB/c鼠肺组织中TLR7表达,其表达量与感染之间存在时间依赖关系;其介导产生的Ⅰ型IFN起着抗病毒作用,在一定程度上可抑制病毒的增殖水平,使肺部炎症减轻。     

The antiviral role of Toll-like receptor 7 in BALB/c mice infected with respiratory syncytial virus

目的 探讨呼吸道合胞病毒(RSV) 感染BALB/c鼠后,肺内Toll样受体7(TLR7)的水平变化及其介导所产生的I型干扰素(IFN)抗病毒作用.方法 48只BALB/c鼠,随机分为正常对照组、RSV感染组、咪喹莫特干预组.以RSV活病毒滴鼻感染BALB/c鼠,诱导急性肺炎模型,并预先给予TLR7特异性激动剂咪喹莫特处理,分别于感染后4、8、12和24 h不同时间点,用半定量RT-PCR法检测鼠肺TLR7、IFN-α/β、RSV融合蛋白 (RSV F蛋白)的mRNA表达,HE染色观察肺的病理学改变.结果 ① RSV感染早期,TLR7、IFN-α/β、RSV F蛋白的mRNA表达均升高,并与RSV感染之间存在时间依赖性关系;肺的炎性细胞浸润及肺泡结构破坏程度与RSV感染时间相关;② 咪喹莫特干预组预先给予TLR7激动剂咪喹莫特处理后,再行相同RSV感染,TLR7、IFN-α/β的mRNA表达量进一步升高,但RSV F蛋白的mRNA表达下降;肺的炎性细胞浸润程度及肺泡结构破坏较RSV感染组明显减轻.结论 RSV感染可活化上调BALB/c鼠肺组织中TLR7表达,其表达量与感染之间存在时间依赖关系;其介导产生的Ⅰ型IFN起着抗病毒作用,在一定程度上可抑制病毒的增殖水平,使肺部炎症减轻.     

金欣口服液阻断呼吸道合胞病毒入侵的实验研究

目的 研究金欣口服液含药血清时呼吸道合胞病毒入侵宿主细胞环节的影响.方法 在病毒和细胞接触期间采用转换温度方法观察金欣口服液含药血清对 RSV 黏附、侵入的影响.观察药物作用前后宿主细胞表面F蛋白的表达.结果 温度转换前(黏附阶段)加入金欣口服液含药血清,实验组和对照组OD值无差异;温度转换后(侵入阶段)加入金欣口服液含药血清组OD值明显升高,与对照组比有显著性差异.荧光标记的F蛋白位于感染细胞表面,RSV 感染后,细胞发生融合的部位荧光明显增强,金欣口服液含药血清作用后荧光减少.结论 金欣口服液拮抗呼吸道合胞病毒的机制之一是抑制病毒的膜融合,作用位点是病毒的F蛋白或其受体.     

金欣口服液对感染RSV大鼠血清IL12表达水平的影响

目的?观察金欣口服液对感染呼吸道合胞病毒（RSV）大鼠血清IL12表达水平的影响,以寻找更有效的抗RSV感染方式。方法?将96只SD大鼠随机分为12组,分别为空白对照组,模型组,金欣高、中、低灌胃组,金欣高、中、低灌肠组,利巴韦林灌肠、灌胃组,金欣预先灌胃、灌肠组。用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组SD大鼠血清IL12的水平。结果? 与空白对照组比较,模型组感染RSV后血清IL12水平明显下降(P<0.01）;金欣组的高剂量灌胃组、中剂量灌胃组、中剂量灌肠组及预先灌胃组的IL12水平较模型组显著升高(P<0.01）,且与利巴韦林组有明显差异(P<0.01）。灌胃组中预先给药的IL12含量比其他给药组相比显著增加(P<0.01）。与灌肠给药相比,灌胃给药的预先组和金欣高剂量组的IL12较高(P<0.01）。 结论?金欣口服液能提高血清IL12的表达,且以灌胃方式提前给药能够更有效地抑制大鼠感染RSV。      

清肺口服液减轻RSV感染加重哮喘小鼠气道炎症作用的研究(英文)

清肺口服液是临床治疗儿童呼吸道合胞病毒(RSV)性肺炎的有效经验方。前期研究发现,清肺口服液可以减轻RSV感染加重哮喘小鼠的气道炎症,本研究拟探讨清肺口服液对RSV感染的哮喘小鼠肺组织自噬及凋亡蛋白表达的影响。将50只雄性BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、RSV感染+哮喘组、清肺口服液组、利巴韦林组。采用卵清蛋白(OVA)致敏及雾化激发哮喘模型;采用RSV隔日滴鼻、连续3次诱导感染,构建RSV感染哮喘模型。各药物组给予相应干预。末次激发24 h后,采集血清,分离肺组织。HE染色后观察气道炎症反应;ELISA法检测血清炎症因子白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)水平;Western blot检测肺组织Atg5、Bax、Bcl-2蛋白表达情况。结果显示,清肺口服液可以明显减轻RSV感染哮喘小鼠肺组织炎症细胞浸润及充血水肿,显著降低血清炎症因子IL-6、IL-8的水平(P0.01),显著下调Atg5、Bax蛋白表达水平(P0.01),并上调Bcl-2蛋白表达水平(P0.01)。以上结果提示清肺口服液能够减轻RSV感染哮喘小鼠的气道炎症,其机制可能与抑制自噬和调节凋亡相关。     

金欣口服液对RSV感染细胞TLR4及TNF-α表达的影响

目的 研究开肺化痰清热止咳中药金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的Hep-2细胞TLR4及该通路下游细胞因子TNF-α表达的影响.方法 制备血行药物成分溶液,作用于RSV感染的Hep-2细胞,通过RT-qPCR、免疫荧光标记结合激光共聚焦技术及ELISA法,分别观察分析细胞TLR4 mRNA、蛋白和相关细胞因子的表达水平,分析药物作用机制.结果 与病毒对照组比较,金欣口服液作用于RSV感染的Hep-2细胞后,TLR4 mRNA及蛋白表达显著降低,TNF-α表达显著降低,细胞病变程度减轻.结论 金欣口服液含药血清可以通过下调TLR4和TNF-α表达水平减轻感染RSV后Hep-2细胞的病变程度.     

呼吸道合胞病毒感染BALB/c鼠活化TLR7介导的抗病毒作用研究

目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染BALB/c鼠后,肺内Toll样受体7(TLR7)的水平变化,初步研究TLR7活化在RSV感染中介导产生的I型干扰素(IFN)抗病毒作用及其可能的调控机制。方法以RSV滴鼻感染BALB/c鼠建立急性肺炎模型,并预先给予TLR7特异性激动剂咪喹莫特(Imiquimod)处理,分别于感染后4、8、12、24 h不同时间点处死小鼠取肺组织,并以未感染病毒的BALB/c鼠为正常对照组。①HE染色观察肺的病理学改变;②用TRIzol提取肺组织总RNA,RT-PCR法检测鼠肺内TLR7、干扰素调节因子3(IRF3)、干扰素调节因子7(IRF7),干扰素α(IFN-α),干扰素β(IFN-β)及RSV融合蛋白基因(F基因)mRNA的表达;③Western blot法检测鼠肺组织TLR7蛋白的表达变化;④空斑形成实验(PFU)测定各组不同时间点肺组织匀浆中RSV滴度。结果①HE染色显示肺部炎性细胞浸润及肺泡结构破坏程度随感染时间延长而加重,经Imiquimod干预后肺部炎性细胞浸润程度及肺泡结构破坏较RSV感染组明显减轻;②在mRNA转录水平,RSV感染早期,感染组上调TLR7、IRF3/7、IFN-α/β、RSV F基因的表达;在预先给予TLR7特异性激动剂Imi-quimod处理组,TLR7、IRF7、IFN-α的mRNA比感染组相同时间点的表达量明显升高,且升高有显著性差异,而IRF3、IFN-β表达量在Imiquimod干预后与RSV感染组相比升高不明显;而RSV F基因的mRNA表达量较RSV感染组明显下降;③在蛋白水平,RSV感染组上调TLR7蛋白的表达;在预先给予TLR7特异性激动剂Imiquimod处理组,TLR7蛋白表达量较感染组显著升高;④RSV感染BALB/c鼠肺后,肺组织匀浆中RSV滴度随感染时间的延长而增加;给予TLR7激动剂Imiquimod处理组,RSV复制滴度水平较感染组明显减少。结论 RSV感染BALB/c鼠后通过活化TLR7,诱导Ⅰ型IFN的产生。用Imiquimod激动TLR7后,Ⅰ型IFN表达量较RSV感染组明显升高,RSV F基因和肺组织匀浆中RSV滴度水平明显减少,以及肺部炎症减轻,表明RSV引起的抗病毒免疫机制与TLR7活化的转导途径有关;而且激动TLR7后,IRF7和IFN-α的表达较IRF3和IFN-β明显升高,表明了IFN-α可能是主要通过IRF7通路由TLR7诱导产生的最主要Ⅰ型IFN。     

冬凌草甲素对LPS诱导Raw264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用

目的 研究冬凌草甲素对脂多糖(LPS)诱导的Raw264.7巨噬细胞炎症反应的影响.方法 选用小鼠巨噬细胞Raw264.7,CCK-8法确定冬凌草甲素作用的最适浓度;设立正常对照组、模型对照组(LPS组)、实验组(冬凌草甲素预处理+LPS组)和阳性药组(地塞米松预处理+LPS组),实时定量PCR法检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10和TLR4 mRNA表达水平的改变;Western blot法检测NF-κB p65、磷酸化p65(p-p65)蛋白表达水平的改变.结果 冬凌草甲素作用于Raw264.7细胞的最佳浓度为10 μmol/L;与LPS组比较,冬凌草甲素预处理实验组Raw264.7细胞内TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平明显下降,IL-10 mRNA表达水平明显升高,TLR4基因表达降低,NF-κB活化入核减少.结论 冬凌草甲素能下调LPS诱导的Raw264.7细胞促炎因子表达,其抗炎免疫作用机制与抑制TLR4-NF-κB信号通路的活化有关.     

金欣口服液不同给药途径对呼吸道合胞病毒肺炎大鼠模型SIgA的影响

目的:探讨金欣口服液不同给药途径对呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎模型幼年大鼠支气管肺泡及大肠、小肠灌洗液中模型免疫球蛋白(SIgA)的影响。方法:将88只幼年大鼠随机分为正常组,模型组,金欣口服液高剂量、中剂量、低剂量灌胃组(金高胃组、金中胃组、金低胃组),金欣口服液高剂量、中剂量、低剂量灌肠组(金高肠组、金中肠组、金低肠组),预先给药灌胃组(预灌胃组),预先给药灌肠组(预灌肠组),利巴韦林组共11组。RSV滴鼻3 d后灌胃给药,连续用药7 d后处死。ELISA法测定各组大鼠支气管肺泡及大肠、小肠灌洗液中SIgA的水平。结果:模型各组黏膜SIgA的含量表达水平均高于正常组(P<0.01)。与模型组相比,预先给药,高剂量、中剂量组的支气管肺泡及小肠灌洗液中的SIgA水平均显著高于模型组(P<0.01)。与利巴韦林组比较,金欣口服液预先给药、高、中剂量组的支气管肺泡中SIgA水平高于利巴韦林组(除金中灌胃组P<0.05外,其余均为P<0.01),在小肠灌洗液中SIgA表达水平方面,金欣高剂量组显著高于利巴韦林组(P<0.01)。两种给药途径比较,预先给药及高剂量给药时,灌胃组的支气管肺泡中SIgA水平高于灌肠组(P<0.05);在小肠灌洗液中SIgA方面,预先给药时,灌胃组高于灌肠组(P<0.05),而高剂量给药时,灌胃组则低于灌肠组(P<0.05)。结论:金欣口服液可有效增加RSV肺炎模型幼年大鼠SIgA的分泌,与利巴韦林比较,具有调节机体免疫抗病毒之优势,是治疗RSV感染的有效方剂。在灌胃、保留灌肠两种给药途径方面,两者差异不明显。     

基于LIGHT/HVEM通路研究白藜芦醇对子痫前期大鼠肾损伤的保护作用研究

目的探讨白藜芦醇(RSV)对子痫前期(PE)大鼠淋巴毒素类似物(LIGHT)/疱疹病毒介入体(HVEM)通路的影响,及对肾损伤的保护作用。方法将50只SD孕鼠随机分为正常孕鼠组(Normal组)、子痫前期模型组(PE组)、白藜芦醇(RSV)低(50 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组、LIGHT/HVEM通路阻断剂(淋巴毒素β受体,LTβR-Ig融合蛋白,1600μg/kg,LTβR-Ig组),每组10只。除Normal组外,其余各组大鼠腹腔注射亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME,300 mg/kg,共5 d,每天1次)建立大鼠子痫前期模型,造模成功后开始给药,RSV各剂量组灌胃给予相应剂量RSV溶液,LTβR-Ig组经尾静脉注射LTβR-Ig溶液,Normal组和PE组灌胃+尾静脉注射给予等量生理盐水,各组连续给药5 d,每天1次。末次给药后收集大鼠24 h尿液,并取血液,酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测肾功能指标血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)及尿液中24 h尿蛋白量;苏木精-伊红(HE)染色检测各组大鼠肾组织病理变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肾组织LIGHT、HVEM mRNA相对水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织LIGHT、HVEM、核转录因子-κB(NF-κB)、白细胞介素-6(IL-6)蛋白相对表达水平。结果与Normal组相比,PE组大鼠出现肾小球内皮细胞弥漫性增生等病理损伤,血清Scr、BUN及尿液中24 h尿蛋白量、肾组织LIGHT mRNA及蛋白、HVEM mRNA及蛋白、NF-κB、IL-6蛋白表达升高(P0.05);与PE组相比,RSV低、高剂量组、LTβR-Ig组大鼠肾组织病理损伤缓解,血清Scr、BUN及尿液中24 h尿蛋白量、肾组织LIGHT mRNA及蛋白、HVEM mRNA及蛋白、NF-κB、IL-6蛋白降低(P0.05),且RSV高剂量组上述指标变化均优于RSV低剂量组; LTβR-Ig组上述指标变化与RSV高剂量组相比差异不明显(P0.05)。结论 RSV可抑制PE大鼠肾组织LIGHT/HVEM通路蛋白表达,改善PE肾损伤。     

桦褐孔菌多糖对脂多糖刺激小鼠巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响

[目的]观察桦褐孔菌多糖对脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞株Raw264.7细胞与小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响.[方法]利用桦褐孔菌多糖(40mg/L)处理被LPS(100μg/L)刺激的Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞,采用半定量RT-PCR方法测定促炎性细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1βmRNA的表达;采用ELISA法测定TNF-α和IL-1β水平.[结果]与给予LPS刺激相比较,给予桦褐孔菌多糖和LPS同时刺激的Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平均明显降低(P<0.05);给予桦褐孔菌多糖和LPS同时刺激的Raw264.7细胞株在48 h后与只给予LPS刺激相比较,细胞所分泌的促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β水平均明显下降(P<0.05).[结论]桦褐孔菌多糖对LPS刺激Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平及Raw264.7细胞株促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌均有抑制作用.     

姜黄素对肿瘤相关巨噬细胞分泌细胞因子基因表达的影响

目的：研究姜黄素对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞（Cal27细胞）上清液诱导的肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）分泌细胞因子基因表达的影响,阐明姜黄素抗OSCC的作用机制。方法：将Raw264.7细胞随机分为对照组及不同浓度（1.25、2.50、5.00、10.00、20.00和40.00μmol·L^-1）姜黄素组,各组细胞加入Cal27细胞上清液共同孵育48 h,CCK-8法检测细胞活性。将Raw264.7细胞随机分为对照组及不同浓度（5、10和20μmol· L^-1）姜黄素组,各组细胞加入Cal27细胞上清液共同孵育36和48 h后,采用Real-time PCR法检测各组细胞中白细胞介素12（IL-12）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素10（IL-10）mRNA表达水平;Cal27细胞上清液孵育Raw264.7细胞48 h后,姜黄素组加入不同浓度（5、10和20μmol·L^-1）姜黄素干预48 h,采用Real-time PCR法检测各组细胞中IL-12、iNOS、TNF-α、IL-10和精氨酸酶1（Arg-1）mRNA表达水平。结果：与对照组比较,40 μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞活性明显降低（P<0.01）。不同浓度姜黄素与Cal27细胞上清液共同孵育Raw264.7细胞36 h,与对照组比较,20 μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞中IL-12 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,10和20μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞中iNOS和TNF-α mRNA表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,20μmol·L^-1组Raw264.7细胞中IL-10 mRNA表达水平降低（P<0.01）;不同浓度姜黄素与Cal27细胞上清液共同孵育Raw264.7细胞48 h,与对照组比较,5和20 μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞中IL-12 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,5和20μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞中iNOS、TNF-α和IL-10 mRNA表达水平均明显降低（P<0.01）。Cal27细胞上清液孵育Raw264.7细胞48 h后,采用不同浓度姜黄素进行干预,与对照组比较,10和20 μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞中IL-12 mRNA表达水平升高（P<0.01）,不同浓度姜黄素组Raw264.7细胞中iNOS、TNF-α和Arg-1 mRNA表达水平降低（P<0.05或P<0.01）,20μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞中IL-10 mRNA表达水平均明显降低（P<0.01）。结论：姜黄素可以在诱导TAMs的不同阶段调节TAMs分泌细胞因子IL-12、iNOS、TNF-α、IL-10和Arg-1 mRNA表达水平。     

基于高分辨率质谱的金欣口服液治疗小鼠RSV感染的血清脂质组学研究

目的 基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS高分辨率质谱,观察RSV诱发的肺炎模型小鼠的血清中脂质代谢的变化,分析金欣口服液对RSV肺炎小鼠中脂质代谢紊乱的调节作用,探讨金欣口服液治疗RSV诱发的病毒性肺炎的潜在机制。方法 用RSV诱导小鼠病毒性肺炎,灌胃金欣口服液予以治疗,分别采集对照组、模型组、金欣口服液组小鼠的血清样本,提取脂质成分,采用LC-MS分析,采用主成分分析法（PCA）、聚类分析法（CA）等多元统计方法,对小鼠血清脂质代谢轮廓进行分析,同时进行Kruskal–Wallis test以及fold change法进行统计,寻找差异性脂质。结果 RSV感染导致小鼠肺部炎性细胞浸润及不同程度的肺炎,血清中多种脂质代谢物代谢紊乱,具体表现多数PC、PE出现明显上调,金欣口服液均能改善小鼠肺炎症状且显著恢复血清中异常紊乱的脂质。结论 RSV感染可导致小鼠血清中脂质代谢紊乱,而金欣口服液可一定程度恢复RSV模型中代谢紊乱的脂质,提示金欣口服液可通过调节脂质改善RSV诱发的肺炎。      

连花清瘟颗粒抗呼吸道合胞病毒感染BALB/c小鼠的药效作用研究

【目的】观察连花清瘟颗粒体内抗呼吸道合胞病毒(RSV)感染的药效作用。【方法】采用BALB/c小鼠RSV感染模型,通过观察小鼠体质量变化、肺病毒滴度、肺内炎症因子m RNA表达及肺组织病理变化评价药物的体内抗病毒药效。【结果】连花清瘟颗粒高剂量组可显著降低RSV感染小鼠肺内病毒滴度(P0.05)。连花清瘟高、低剂量组可显著降低RSV感染小鼠肺内炎症因子白细胞介素IL-6,IL-1βm RNA的表达量(P0.01);肺组织病理检查结果显示:连花清瘟颗粒高、低各剂量组均可以缓解病毒所致肺组织病理性炎症。【结论】连花清瘟颗粒可有效抑制RSV感染小鼠肺内病毒滴度,对小鼠病毒性肺炎具有一定的改善作用。     

祛湿通络方对肺炎支原体感染的RAW264.7细胞TNF-α、IL-6表达的影响

[目的]观察祛湿通络方含药血清对肺炎支原体(MP)感染的RAW264.7细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)表达的影响。[方法] 1)祛湿通络方含药血清的制备:SD大鼠随机分为空白对照组、中药低、中、高剂量组、阿奇霉素组,各组均连续给药7 d。2)MP感染的RAW264.7细胞炎症模型建立:模型组和各给药组分别加入MP菌液100μL,空白对照组加入100μL DMEM完全培养液,置于培养箱中培养2 h。3)酶联免疫吸附(ELISA)法检测祛湿通络方对MP感染的RAW264.7细胞TNF-α、IL-6表达的影响。[结果]与空白对照组比较,MP感染的RAW264.7细胞TNF-α、IL-6的分泌均显著上升(P0.05);与模型组比较,各给药组对TNF-α、IL-6均有不同程度的下调作用(P0.05),其中阿奇霉素组对TNF-α、IL-6的调节作用最优,中药低、中、高剂量组呈现剂量依赖性。[结论]祛湿通络方对MP感染的RAW264.7细胞TNF-α、IL-6的高表达具有下调作用,且呈剂量依赖性,这可能是祛湿通络方减轻炎症反应的机制之一。     

金欣口服液不同化学部位对呼吸道合胞病毒感染的影响

目的 观察金欣口服液不同化学部位在体内的抗呼吸道合胞病毒（RSV）作用。方法 小鼠经滴鼻感染RSV建立肺炎模型,随机分为正常对照组、模型对照组、利巴韦林组、金欣口服液组、金欣口服液石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取液组及母液组,光镜下观察肺组织的炎症病变情况,计算小鼠肺指数和肺指数抑制率、脾指数、胸腺指数、死亡保护率。结果 金欣口服液石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取液对RSV感染后小鼠的肺指数增高均有显著的降低作用(P<0.01),减轻感染小鼠肺组织炎症病变,同时能增加脾指数和胸腺指数(P<0.01)。金欣口服液正丁醇提取液能降低RSV感染小鼠的死亡率。结论 金欣口服液石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取液对RSV具有一定的抑制作用,并且能提高RSV感染小鼠的免疫功能。正丁醇提取液对RSV感染小鼠具有一定的死亡保护作用。     

呼吸道合胞病毒感染后IL-17、hCLCA1表达变化及罗格列酮的抑制效应

目的 研究呼吸道合胞病毒（RSV）感染A549细胞后过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、IL-17及人钙激活氯离子通道辅助蛋白1（hCLCA1） mRNA和蛋白表达变化及罗格列酮和IL-17抗体的干预作用。方法 将传代细胞随机分6组：罗格列酮/RSV组、罗格列酮/GW9662/RSV组、DMSO/RSV组、IL-17抗体/RSV组、GW9662/RSV组、细胞对照组。DMSO/RSV组予0.02% DMSO预处理0.5h,罗格列酮/RSV组予罗格列酮（10μmol/L）预处理0.5h,罗格列酮/GW9662/RSV组在应用罗格列酮前先以GW9662（10μmol/L）预处理0.5h,IL-17抗体/RSV组在RSV感染前予IL-17抗体预处理2h。各组培养6、12、24h收获细胞及上清液待测。应用实时荧光定量RT-PCR检测PPARγ、IL-17、hCLCA1 mRNA表达,Western blot法检测hCLCA1蛋白水平,ELISA检测IL-17蛋白表达。结果 与细胞对照组相比,DMSO/RSV组PPARγ、IL-17、hCLCA1 mRNA和蛋白表达在3个时间点均明显升高,随时间增加表达量增加,24h达高峰,与12h比较,差异有统计学意义（P均< 0.05）;在同一时间点上罗格列酮/RSV组、IL-17抗体/RSV组IL-17、hCLCA1mRNA和蛋白均明显低于DMSO/RSV组,与罗格列酮/GW9662/RSV组相比,罗格列酮/RSV组IL-17、hCLCA1mRNA和蛋白表达均明显降低。罗格列酮及IL-17抗体对IL-17 mRNA和蛋白的抑制作用在干预后6h最强,与12、24h相比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 罗格列酮可抑制RSV感染后IL-17、hCLCA1mRNA及蛋白表达增加,机制可能为上调PPARγ基因的表达,使PPARγ活性增强,在转录水平下调IL-17表达,从而抑制气道黏液高分泌。     

大蒜新素对MCMV感染小鼠脾细胞Th1/Th2类细胞因子水平的影响

目的:探讨大蒜新素对鼠巨细胞病毒(MCMV)感染小鼠脾细胞Th1/Th2类细胞因子水平的影响及其抗MCMV作用机制.方法:复制小鼠巨细胞病毒感染模型,将模型小鼠随机分成大蒜新素治疗组和安慰剂组,于MCMV感染后48 h开始分别给予大蒜新素一般剂量(25 mg·kg-1/d)和等量9.0 g/L氯化钠注射液腹腔注射;另设大蒜新素处理组和空白对照组,不接种病毒,分别给予大蒜新素一般剂量(25 mg·kg-1/d)和等量9.0 g/L氯化钠注射液腹腔注射.用ELISA法检测小鼠脾细胞Th1类细胞因子IL-2、IFNγ和Th2类细胞因子IL-4,IL-10水平.结果:MCMV感染可导致BALB/c小鼠Th1类细胞因子IL-2表达明显下降(P《0.01),Th2类细胞因子IL-10表达显著增高(P《0.01).大蒜新素能诱导正常BALB/c小鼠和MCMV感染模型鼠脾细胞Th1类细胞因子IL-2和IFNγ的表达显著增加(P《0.01),Th2类细胞因子IL-10表达明显下降(P《0.01).结论:大蒜新素能显著上调正常和MCMV感染模型小鼠脾细胞 Th1类细胞因子IL-2和IFNγ的表达,并抑制Th2类细胞因子IL-10的表达,通过诱导和促进特异性Th1优势应答反应来发挥抗CMV效应.     

呼吸道合胞病毒感染时间对花粉诱导的过敏性反应的影响

目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染时间对花粉诱导的呼吸道过敏性反应是否有影响作用。方法用花粉抽提物JCP致敏BALB/c鼠,致敏前或后经鼻感染RSV,提取肺组织细胞,体外培养,ELISA试剂盒检测培养上清中细胞因子水平;姬姆萨染色法分类并计数肺组织内浸润细胞数量;ELISA方法检测血清特异性抗体IgE水平。结果JCP致敏鼠肺组织细胞培养上清中Th2型细胞因子IL-4明显升高,血清JCP特异性IgE抗体水平亦显著上升,提示JCP是Th2型免疫应答的诱导剂。致敏前RSV感染诱导BALB/c鼠肺组织细胞合成分泌Th1型细胞因子,下调JCP诱导的Th2型免疫应答,降低致敏鼠肺组织炎性细胞的浸润,减少前炎性因子TNF-α及趋化因子IL-8的分泌,降低血清JCP特异性IgE抗体水平。结论在某种条件下,RSV感染对花粉过敏原诱导的过敏性反应有一定的保护作用。