槐耳颗粒逆转肝癌细胞对索拉非尼耐药的初步研究

目的 初步探讨槐耳颗粒对索拉非尼（Sorafenib）耐药肝癌细胞BEL-7402/S的作用及其相关机制。方法 CCK-8法测定槐耳颗粒对BEL-7402/S细胞的增殖-毒性作用以及对Sorafenib的耐药逆转倍数;qPCR及Western blot法检测槐耳颗粒对BEL-7402/S细胞的缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及血管内皮生长因子（VEGF） mRNA和蛋白表达水平的影响。结果 槐耳颗粒能够抑制BEL-7402/S细胞的活性;在无显著细胞毒性的剂量下,槐耳颗粒能够部分逆转BEL-7402/S细胞对Sorafenib的耐药,其耐药逆转倍数为2.08;qPCR结果显示槐耳颗粒可以下调BEL-7402/S细胞中HIF-1α的mRNA水平,但对VEGF的mRNA水平无显著性影响;Western blot结果显示槐耳颗粒可以降低HIF-1α、VEGF的蛋白表达水平。结论 槐耳颗粒可能具有部分逆转BEL-7402/S细胞对Sorafenib耐药的作用,其机制可能与降低HIF-1α以及VEGF的表达水平有关。      

HPLC测定不同批次镰形棘豆中2’,4’-二羟基查耳酮含量

目的：建立镰形棘豆中2’,4’-二羟基查耳酮含量的HPLC方法,测定不同批次镰形棘豆中2’,4’-二羟基查耳酮的含量。方法：采用HPLC法对10个主产地12批次镰形棘豆中2’,4’-二羟基查耳酮进行含量测定。色谱条件：Dikma Technologies Diamonsil C18色谱柱（5μm,250mm×4.6mm）;流动相为乙腈-0.2%甲酸水溶液（50：50）;流速为1.0mL·min^-1;检测波长365nm。结果：2’,4’-二羟基查耳酮在0.0834～0.8340μg范围内与峰面积呈良好线性关系,R^2=0.9999,加样回收率平均值为105.2%,RSD=2.078%。结论：该方法准确、灵敏度高、重现性好,可用于镰形棘豆药材的质量控制。     

肾癌细胞系中HOTAIR表达的测定及稳定高表达HOTAIR肾癌细胞株的建立

目的:检测常用肾癌细胞系中HOTAIR的表达情况及建立稳定高表达HOTAIR肾癌细胞株?方法:①q-PCR检测正常肾细胞系(HK-2)和4种肾癌细胞系(os-rc-2,kevt-3,achn和769-p)中HOTAIR的表达;②利用携带HOTAIR基因的慢病毒(pLenti GFP Puro-HOTAIR)感染肾癌细胞系(769-p)后,并采用嘌呤霉素(Puro)抗性筛选方法建立高表达HOTAIR肾癌细胞株?结果:①5种细胞系HOTAIR表达的高低依次是kevt-3?os-rc-2?achn?769-p?HK-2;②慢病毒(pLenti GFP Puro-HOTAIR)转染肾癌细胞系(769-p)后,HOTAIR表达明显升高?结论:①高侵袭性肾癌细胞株(kevt-3?os-rc-2)中HOTAIR的表达明显高于低侵袭性肾癌细胞株(achn?769-p)及正常肾细胞株(HK-2);②成功建立稳定表达的HOTAIR的769-p-HOTAIR细胞系?     

金振口服液治疗呼吸道合胞病毒感染引起咳嗽的作用机制研究

目的探讨金振口服液治疗呼吸道合胞病毒感染幼年豚鼠咳嗽的作用及其机制。方法选取幼年豚鼠,随机分为空白组、模型组、磷酸苯丙哌林组、金振口服液(1.3、2.6g/kg)组。除空白组外,每鼠用10~(6.29) TCID_(50) mL~(-1)滴度的呼吸道合胞病毒(RSV)溶液滴鼻造模,空白组给予等体积无病毒DMEM溶液,次日起各给药组连续给药7d。第8天用枸橼酸引咳法检测豚鼠5min内咳嗽次数与咳嗽潜伏期,计数肺泡灌洗液中白细胞总数,ELISA法检测肺泡灌洗液中TNF?α、IL-4、IL-13含量,HE染色进行肺组织学检查,免疫组织化学染色法检测支气管中神经生长因子(NGF)、P物质(SP)、神经肽受体1(NK-1)的表达,Western blot法检测肺组织中NGF、NK-1的表达。结果金振口服液能够抑制RSV感染导致的豚鼠咳嗽次数增多,下调肺泡灌洗液中白细胞总数及TNF?α、IL-4、IL-13的含量,改善肺组织的炎性浸润,降低支气管NGF、SP和NK-1及肺组织NGF和SP的表达。结论金振口服液能改善RSV感染引起的病毒性咳嗽,其机制可能与减少气道炎性反应,降低神经源性介质,调节咳嗽敏感性有关。     

基于羊水代谢组学策略评价妊娠禁忌中药的安全性

妊娠期用药的安全性是当前亟需解决的问题,羊水作为一种生物体液,能同时反映胎儿和母体的健康状况,被用作临床条件下有力的诊断学工具。该文总结了近年来羊水代谢组学在胎儿预测中的相关研究,并以课题组前期研究为例,讨论了羊水代谢组学应用于妊娠期中药安全性评价的优势与可行性。我们认为羊水代谢组学作为一种创新工具,具有更高的敏感性和相关性,在中药的毒性筛查及机制研究方面有广泛的应用前景。      

合胞病毒肺部感染对小鼠大肠黏膜组织内源性代谢物的影响

目的通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)的代谢组学技术检测BALB/c小鼠合胞病毒(RSV)肺部感染对大肠黏膜组织内源性代谢物的影响。方法将小鼠随机分为对照组和RSV肺炎模型组,每组16只。采用RSV(100×TCID50,50μL/只,每日1次)滴鼻感染法建立小鼠RSV肺炎模型。于滴鼻7 d后处死各组小鼠,运用GC-MS检测大肠组织内源性代谢物及其相对含量的变化;使用SMCA-P12.0软件对大肠组织中内源性代谢物进行主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA);将大肠组织中的差异性代谢物导入代谢通路平台Metaboanalyst,以进一步分析相关代谢通路。结果 PCA和OPLS-DA分析均显示对照组和RSV肺炎模型组可显著区分。RSV肺炎小鼠的大肠黏膜组织中共测得32种代谢产物,与对照组比较,其中亮氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、丙氨酸、花生四烯酸、乳酸等含量均显著增高(P0.05),主要与缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸代谢、花生四烯酸代谢和丙酮酸代谢通路有关。结论 RSV肺炎可能引起小鼠大肠黏膜组织的代谢紊乱。     

基于GC-MS的金欣口服液对RSV肺炎小鼠脾脏代谢物的调控作用

目的通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术分析呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠脾脏组织中内源性代谢物的变化,探讨金欣口服液治疗RSV肺炎可能的作用机制。方法 RSV滴鼻感染BALB/c小鼠建立RSV肺炎模型,给予金欣口服液(27.6 g/kg)干预治疗,连续治疗7 d后处死小鼠,取脾脏组织,经甲醇提取后,先后予甲氧胺吡啶和BSTFA以肟化和衍生化,然后运用GC-MS检测脾脏中所含有的代谢物及其相对量的变化。结果 RSV肺炎小鼠的脾脏中共鉴定出35种代谢产物,其中L-脯氨酸、L-谷氨酸、缬氨酸、尿素、次黄嘌呤、葡萄糖为具有显著性差异的代谢物(P0.05),与之相关的代谢通路为D-谷氨酰胺和谷氨酸代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢。结论金欣口服液可以调节RSV肺炎小鼠脾脏的免疫功能,可能与氨基酸代谢有关。     

6种中药口服液抗炎、镇痛、解热作用比较实验研究

目的:对比研究6种临床常用于治疗感冒的中药口服液的抗炎、镇痛、解热作用。方法:通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验考察其抗炎作用差异。采用冰醋酸致小鼠扭体实验考察其镇痛作用差异。采用干酵母致大鼠发热模型考察其解热作用差异。结果:各组中药口服液均可对抗二甲苯所致的炎性反应(P0.05,P0.01),蒲地蓝组、蓝芩组、胆木组及双黄连组要稍优于柴桂组及银黄组;各组中药口服液均能对抗乙酸所致小鼠的疼痛性反应(P0.05,P0.01),蓝芩组、双黄连组、胆木组要稍优于蒲地蓝组、银黄组及柴桂组;各组中药口服液均可降低干酵母所致大鼠升高的体温(P0.05,P0.01),柴桂组、双黄连组、胆木组及蒲地蓝组要稍优于蓝芩组、银黄组;结论:6种中药口服液均有抗炎、镇痛、解热作用,但其作用程度存在差异。     

基于脂质代谢网络的虎杖抗呼吸道合胞病毒肺炎代谢组学研究

目的:探讨虎杖用于干预呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus,RSV)诱导BALB/c小鼠肺炎的脂质代谢网络的变化。方法:选取18只BALB/c小鼠,随机分为空白组、RSV肺炎组、虎杖组3组,RSV肺炎组、虎杖组滴鼻给予RSV病毒诱导产生肺炎,虎杖组灌胃给予虎杖提取物给予治疗,空白对照组灌胃给予生理盐水作为对照。实验结束,取血浆测定其血浆中的脂质代谢物质。建立基于高效液相-线性离子阱-静电场轨道杂交质谱(HPLC-LTQ-Orbitrap-MS)的脂质代谢组学技术,表征3组小鼠血浆中脂质代谢轮廓的变化,通过单因素方差分析筛选差异性化合物(P0.0.5),并对其差异化合物进行结构确定,阐明其可能调节的脂质代谢网络。结果:多变量数据统计结果显示,3组小鼠的血浆脂质代谢轮廓区分明显,受调控的脂质分子主要为磷脂酰胆碱、三酰甘油成分和磷酸化神经酰胺。代谢通路分析结果显示,虎杖主要调节了磷脂代谢。结论:虎杖提取物通过调节磷脂代谢发挥抗RSV肺炎的作用。     

功血颗粒治疗功能性子宫出血抗炎止血作用的实验研究

目的：研究功血颗粒对小鼠的抗炎和止血作用。方法：通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀和醋酸致毛细血管通透性增加,观察功血颗粒的抗炎作用;采用小鼠断尾法及玻片和毛细血管法观察功血颗粒对小鼠凝血、出血时间的影响;采用早孕大鼠灌服米非司酮和米索前列醇造成不完全流产模型,观察功血颗粒对该模型子宫出血量的影响。结果：功血颗粒能明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀和醋酸所致毛细血管通透性增加,缩短小鼠出血和凝血时间,减少子宫出血模型大鼠子宫出血量。结论：功血颗粒具有显著的抗炎和止血作用。