蜂毒对离体乳鼠心肌细胞的影响(简报)

本实验室研究了蜂毒对大白鼠乳鼠(Wisfar)心肌细胞的搏动功能和DNA合成的影响,发现: 1.不同浓度的蜂毒对离体培养心肌细胞搏动功能有不同的影响。浓度为1mg/ml(10~(-3))时可抑制心肌细胞收缩力和减慢心率,心肌细胞很快停止跳动,浓度下降到0.5mg/ml(0.5×10~(-3))时则可见心肌细胞比用药前的心率加快、收缩力加强、但若浓度再降到0.01mg/ml(10~(-5))时则心率和收缩力均未见明显变化。     

番茄红素对离体蟾蜍心功能影响的实验研究

目的:观察番茄红素(lycopene)溶液对离体蟾蜍心脏心率和心肌收缩力的影响。方法:根据斯氏蛙心插管方法,用不同浓度的番茄红素对离体蟾蜍心脏进行灌流,采用BL-420生物机能实验系统记录心率和心肌收缩力的变化。结果:灌注0.001g/ml的番茄红素溶液时,对离体蟾蜍的心脏收缩力和心率影响不大;分别灌注0.002 g/ml和0.004g/ml的番茄红素溶液时,离体蟾蜍的心脏收缩力和心率下降均较为明显(P<0.05);灌注0.008g/ml的番茄红素溶液时,心脏收缩幅度更为明显(P<0.05),心率明显减慢(P<0.05),心脏甚至停止跳动;结论:番茄红素溶液降低离体蟾蜍心肌收缩力,但减少心率不明显。     

四逆汤水提物对缺氧-复氧损伤心肌细胞的保护作用

目的:观察四逆汤水提物(Sini decoction,SND)对培养乳鼠心肌细胞在缺氧复氧条件下的直接保护作用.方法:动态采集并分析正常对照组、缺氧复氧组、四逆汤水提物8.0、17.9、40.0、89.4、200μg/ml给药组心肌细胞在缺氧前,缺氧30、60、90、120、150、180min以及复氧30min和60min细胞搏动频率及收缩面积的变化;比色法测定培养液中LDH;使用MTT法测定心肌细胞存活量.结果:心肌细胞搏动频率及收缩幅度随着缺氧时间延长而逐渐降低,四逆汤水提物给药组(除8.0μg/ml组外)较缺氧复氧组搏动维持时间长,且200.0μg/ml组在复氧后能恢复搏动.缺氧3h缺氧复氧组乳酸脱氢酶(LDH)漏出率较正常对照组升高(P＜0.05);除8.0μg/ml组外,四逆汤水提物不同浓度组LDH漏出率较缺氧复氧组降低,存在浓度-效应关系.复氧1h,各给药组LDH漏出率也较缺氧复氧组低.缺氧复氧组与正常对照组比较,存活的心肌细胞减少(P＜0.01);给药组心肌细胞存活量较高,呈浓度-效应关系.结论:四逆汤水提物可延长缺氧状态下心肌细胞的搏动时间,减缓收缩力的衰减,减少细胞膜损伤及提高缺氧复氧心肌细胞的存活量,表现出对心肌细胞的直接保护作用.     

杭白菊水提液对离体灌流蛙心收缩力和心率的影响

目的:观察不同浓度的杭白菊水提液对离体灌流蛙心收缩力和心率的影响。方法:取60只青蛙制备离体灌流蛙心,随机分为6组:正常对照组,阴性对照组,杭白菊极低、低、中、高浓度组,每组10只。正常对照组的灌流液中加入任氏液,阴性对照组的灌流液中加入1×10-4 g/ml肾上腺素,杭白菊极低、低、中、高浓度组的灌流液中分别加入80μl不同浓度的杭白菊水提液(0.125,0.25,0.5,1.0 g/ml)。用BL-410生物机能实验系统记录各组给药前和给药后离体蛙心收缩力和心率,并进行比较分析。结果:阴性对照组心收缩力和心率明显高于正常对照组(P<0.05或P<0.01);杭白菊极低浓度组心收缩力和心率与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05);低浓度组心收缩力与极低浓度组比较无显著性差异(P>0.05),但明显低于正常对照组(P<0.01),低浓度组心率与极低浓度组和正常对照组比较均无显著性差异(P>0.05);中、高浓度组心收缩力明显低于极低、低浓度组和正常对照组(P<0.05或P<0.01),中浓度组心率明显慢于正常对照组(P<0.05),但与极低、低浓度组比较无显著性差异(P>0.05),高浓度组心率明显慢于其余各实验组(P<0.01)。结论:杭白菊达到一定浓度之后有降低心收缩力和减慢心率的作用,减慢心率比降低心收缩力的出现要滞后,且降低心收缩力和减慢心率的作用存在量效关系。     

蒙药广枣中3种黄酮类成分对离体心功能的影响

采用Langendorff灌流法,观察广枣中3种黄酮类成分对离体心功能的影响,为找到一种抗心律失常作用较强的主要化学单体或简单复合物打下基础.结果表明：样品1和样品2减慢心率作用在0.027g生药1/ml～0.22g生药/ml范围内,具有明显的浓度依赖性,当浓度大于0.22g生药/ml时,减慢心率作用反而随着剂量增加而减小;样品3减慢心率作用与剂量成反比.在0.027g生药1ml～1.72g生药/ml范围内,样品1、样品2和样品3使心肌收缩幅度的变化均无统计学意义.结论：广枣中3种黄酮类成分均可减慢心率,对心肌收缩力影响不明显.     

附子心脏毒-效物质基础及相关作用机理研究

目的:探讨不同煎煮时间对附子在心脏方面的功效、毒性的影响,并探索其相关机制。方法:用八木氏法进行离体蛙心灌流,运用四导生理记录仪记录其心率、左心室收缩压、左心室舒张末压、+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)等参数,观察不同煎煮时间、不同浓度的附子提取物对处于Ringer液及低钙Ringer液环境下蛙心的影响,同时测定其小鼠口服急性毒性作用。结果:在低钙Ringer液中:附子煎煮0.5小时在1 000原生药mg/ml浓度时,可迅速引起室性心动过速,并很快出现心力衰竭、停搏等现象,但在冲洗后可逐渐恢复正常;附子煎煮4小时在低于0.1原生药mg/ml～1 000原生药mg/ml浓度下,对离体蛙心有一定的抑制作用;附子煎煮10小时在低于100原生药mg/ml浓度下,可显著增加心内压最大上升速率和最大下降速率,增加左心室收缩压,增加心内压最大下降速率的作用最明显。附子煎煮24小时在低于0.1原生药mg/ml～1 000原生药mg/ml浓度下对离体蛙心无明显影响。在Ringer液中:附子煎煮0.5小时在100原生药mg/ml浓度时,可显著减慢心率、减慢心室内压最大上升速率和最大下降速率,其中,减慢心率及抑制心脏最大下降速度的作用最明显;而在1 000原生药mg/ml浓度时,可迅速引起室性心动过速,并迅速出现心力衰竭、停搏等现象,但在冲洗后可逐渐恢复正常;附子煎煮4小时在低于0.1原生药mg/ml～1 000原生药mg/ml浓度下,对离体蛙心有一定的抑制作用;附子煎煮10小时在低于100原生药mg/ml浓度下,对离体蛙心无明显影响,但在100原生药mg/ml浓度以上时,可显著减慢心室内压最大上升速率和最大下降速率,显著降低左心室收缩压。附子煎煮24小时在低于10原生药mg/ml浓度下,对离体蛙心无明显影响。但在10原生药mg/ml～1000原生药mg/ml浓度下,可显著增加心室内压最大上升速率和最大下降速率,增加左心室收缩压。测得小鼠口服附子0.5 h水煎液的LD_(50)为8.2415原生药g/kg,附子4h水煎液LD_(50)为183.2原生药g/kg,附子10 h水煎液、附子24 h水煎液的最大耐受量均为大于300原生药g/kg。结论:附子对心脏的毒性作用主要来源于乌头双酯型生物碱,其强心作用主要与乌头原碱等有关,其作用机理与细胞内外钙离子失衡密切相关。     

龙牙葱木皂苷对培养心肌细胞游离钙浓度的影响

目的:观察龙牙葱木皂苷对培养心室肌细胞游离钙离子浓度的影响,旨在从细胞水平进一步证明了As的正性肌力作用的机制。方法:采用特异性的荧光指示剂Fluo-3/AM(5μmmol/l)负载心肌细胞,应用激光共聚焦显微镜观察并连续动态扫描细胞内荧光强度的变化,从而反映其对细胞内游离钙浓度的影响。结果:As(10μg/ml)明显增加培养乳鼠心肌细胞内的游离钙离子浓度。Ca2+平均荧光强度明显升高,与对照组相比,P<0.01,差异显著。荧光强度比正常对照组增30%。结论:增加心肌细胞的钙离子浓度,影响心肌兴奋-收缩藕过程,As增加心肌细胞的收缩力,进而实现正性肌力作用。     

贯叶金丝桃中原矢车菊甙元类化合物对豚鼠离体心脏的作用

最近研究已表明贯叶金丝桃(Hypericum perforatum L.)提取物中的原矢车菊甙元(PC)部位对血管有活性,其中含PC寡聚物的部位对离体猪冠状动脉的作用最强。另外,已知蔷薇科山楂属(Cratacgus)植物提取物中的含PC部位能提高离体豚鼠心脏的冠脉流量。木文研究贯叶金丝桃中寡聚物PC在1×10~(-8)～5×10~(-6)g/ml浓度范围内对离体豚鼠心脏博动及冠脉流量的影响。结果表明:1.房前收缩力:在低浓度时(1×10~(-8)～1×10~(-6)g/ml时)没有影     

沙苑子总黄酮药理作用研究

沙苑子总黄酮iv 25mg/kg、50mg/kg,对麻醉大鼠有显著的降压作用,并随剂量加大而加强,在降压同时伴有心率减慢。对NE引起收缩的大鼠主动脉条,在10~(-4)g、3×10~(-4)g浓度时有明显的松弛作用,且呈剂量依赖关系。此外,还有明显的抗血小板聚集作用。     

石菖蒲挥发油对心肌细胞形态学及细胞活力的影响

目的:观察石菖蒲挥发油对正常心肌细胞形态学及细胞活力的影响.方法:采用胰酶冷消化法消化培养心肌细胞,用免疫细胞化学方法鉴定心肌细胞纯度;将不同浓度石菖蒲挥发油与心肌细胞作用24h,用倒置显微镜观察细胞形态的变化,并用MTT比色法检测细胞活力.结果:原代培养的乳鼠心肌细胞纯度达95%以上;不同浓度的石菖蒲挥发油能降低正常心肌细胞的搏动频率;终浓度为100～160 mg/L的石菖蒲挥发油能提高心肌细胞活力D(λ)值,与基质组比较有统计学差异,其量效关系是以140 mg/L剂量组D(λ)值为顶点的抛物线.结论:一定浓度的石菖蒲挥发油有降低心肌细胞搏动频率、提高心肌细胞活力的作用.     

独一味对蟾蜍离体心脏功能的影响

目的 研究独一味对蟾蜍离体心脏的作用及其相关机制.方法 采用离体蛙心灌流法观察独一味提取物对离体心脏的收缩力、心输出量和心率的影响.结果 ①独一味提取物使蟾蜍离体心脏的收缩力减弱,心输出量减少,心率略有减慢.在0.01～2.0 mg·ml~(-1)浓度范围内,独一味提取物抑制心肌收缩力的作用与剂量之间呈现明显的量效关系,最大效应可使心肌收缩力降低36.4%.②随灌流液中钙离子浓度增加,独一味对心脏的抑制作用增强;另外,独一味的心脏抑制作用可部分被阿托品拮抗.结论 独一味可抑制蟾蜍离体心脏的功能,其作用可能与抑制细胞外的钙离子内流,减少细胞内钙有关,而与心肌细胞受体的关系有待进一步研究.     

荆芥挥发油体外抗甲型流感病毒作用及机制的研究

目的:观察荆芥挥发油及其主要成分胡薄荷酮与薄荷酮体外对甲型流感病毒(H1N1)增殖的影响,并探讨其TLR/IFN信号通路机制。方法:MTT法检测受试药对狗肾传代细胞(MDCK)的半数中毒浓度(TC50)及最大无毒浓度(TC0);血凝法测定甲型流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/34(H1N1)对MDCK细胞的感染性;MTT法和细胞病变法(CPE)测定三种药物体外抑制流感病毒增殖的有效浓度(IC50)和治疗指数(TI)。Real-Time PCR法观察药物对H1N1感染MDCK细胞后8h细胞TLR7、IFN-βmRNA表达水平的影响。结果:荆芥挥发油、胡薄荷酮和薄荷酮对MDCK细胞的TC50分别为0.20mg/ml、0.36mg/ml与0.43mg/ml,TC0分别为0.10mg/ml、0.10mg/ml与0.25mg/ml。荆芥挥发油和胡薄荷酮3.1×10-3～0.1mg/ml浓度时能抑制流感病毒增殖,其IC50分别为1.7×10-3mg/ml与1.9×10-3mg/ml,TI分别为120.83、184.54,呈一定量效关系;薄荷酮对流感病毒染毒的MDCK细胞几乎无保护作用。荆芥挥发油3.1×10-3～0.10mg/ml浓度,胡薄荷酮1.3×10-2～0.10mg/ml及薄荷酮7.8×10-3～0.10mg/ml浓度时对流感病毒具有明显直接杀灭作用,其IC50分别为3.1×10-3、7.2×10-3与1.9×10-3mg/ml,TI分别为63.99、50.00和82.88。荆芥挥发油和胡薄荷酮0.1mg/ml浓度时均显著提高TLR7、IFN-βmRNA表达水平,0.25mg/ml薄荷酮显著提高TLR7mRNA表达水平。结论:荆芥挥发油与胡薄荷酮体外明显抑制甲型流感病毒(H1N1)在MDCK细胞中的增殖,薄荷酮作用不明显;三者均对流感病毒有显著直接杀灭作用。其抗病毒作用机制可能与其激活TLR7,诱导IFN-β高表达,激活病毒模式识别系统有关。     

注射用葛根素溶液对蟾蜍离体心脏功能的影响

目的:观察注射用葛根素溶液对蟾蜍离体心脏的作用及其机制。方法:采用斯氏离体蛙心灌流方法,通过BL420E描记心脏收缩力及心率变化,观察注射用葛根素溶液对离体心脏的心肌收缩力和心率的影响,并研究葛根素对肾上腺素、氯化钙心肌收缩量效关系曲线的影响。结果:注射用葛根素溶液使蟾蜍离体心脏的心肌收缩力减弱,心率减慢。在4.8×10-4~4.8×10-2mol/L浓度范围内,注射用葛根素溶液抑制心肌收缩力的作用与剂量之间呈明显量效关系,最大效应可使心肌收缩力降低49%;注射用葛根素溶液可使肾上腺素及氯化钙对心脏的兴奋作用降低。结论:注射用葛根素溶液可抑制蟾蜍离体心脏的收缩力和心率,其作用可能与其抑制β受体,抑制细胞外钙内流有关。     

附子多糖后处理对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞锰超氧化物歧化酶表达的影响

目的:观察附子多糖后处理对缺氧复氧心肌细胞的保护,并以锰超氧化物歧化酶(MnSOD)表达为着眼点,探讨其作用机制。方法:建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、缺氧后适应组、附子多糖(0.1mg/ml、1mg/ml、10mg/ml)后处理组。缺氧/复氧组给予心肌细胞缺氧3h后复氧6h;缺氧后适应组在细胞缺氧3h后,复氧前即给予3个循环的5min,复氧/5min缺氧,随后复氧6h;附子多糖后处理组在缺氧3h后,将心肌细胞换入含附子多糖浓度分别为10mg/ml、1mg/ml、0.1mg/ml的培养液中常规培养6h。流式细胞仪测定心肌细胞线粒体凋亡率和线粒体膜电位,荧光定量PCR测定Bcl-2mRNA和MnSODmRNA的表达量,黄嘌呤氧化酶法检测细胞内MnSOD的活性。结果:与缺氧/复氧组相比较,予10mg/ml浓度的附子多糖后处理可以有效保护线粒体膜电位的稳定,促进Bcl-2mRNA的表达,抑制心肌细胞凋亡的发生。附子多糖可有效促进MnSOD基因表达和增加MnSOD的活性,并呈一定的浓度依赖性。结论:附子多糖后处理对缺氧/复氧后心肌细胞具有保护作用,其机制可能与附子多糖促进锰超氧化物歧化酶的表达合成,保护线粒体,抑制细胞凋亡有关。     

人参总皂甙对大鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的:观察人参总皂甙对由外源性羟自由基诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法:利用第4代心肌细胞,随机分成7组,以10~(-3)mol/L 外源性羟自由基(OH~-)诱导心肌细胞凋亡为模型,分别观察4种不同浓度的人参总皂甙(25、50、100、150 mg/L)对心肌细胞存活率、形态学、心肌细胞凋亡百分率、DNA 琼脂糖凝胶电泳等参数的影响。结果:与凋亡组比较,加用不同浓度的人参总皂甙各组,随着人参总皂甙浓度升高,心肌细胞存活率明显升高,心肌细胞凋亡程度降低,呈剂量依赖性。结论:人参总皂甙能抑制由外源性羟自由基诱导的心肌细胞凋亡。     

蒙药苏格木勒-3汤对异丙肾上腺素诱导HL-1心肌细胞钙超载损伤的影响

目的探讨苏格木勒-3汤治疗心力衰竭的可能作用机制。方法 HL-1心肌细胞按每孔1×10~5个细胞接种于96孔板,常规培养24h后进行分组:空白对照组的不加任何处理的正常心肌细胞;模型组加入终浓度为25μg/ml的异丙肾上腺素每孔100μl处理24h;苏格木勒-3汤高、中、低剂量组加入终浓度为25μg/ml异丙肾上腺素每孔100μl处理24h后分别加入75、50、25μg/ml苏格木勒-3汤水提液每孔100μl处理24h;苏格木勒-3汤对照组加入75μg/ml苏格木勒-3汤水提液每孔100μl处理24h。每组5个复孔。MTT法检测各组HL-1心肌细胞存活率,荧光显微镜检测细胞中钙离子浓度,Western blotting法检测HL-1心肌细胞中肌浆网钙ATP酶2a (SERCA2a)蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组HL-1心肌细胞存活率、SERCA2a蛋白表达下降(P0.01)。与模型组比较,苏格木勒-3汤高、中剂量组HL-1心肌细胞存活率增高,苏格木勒-3汤高、中、低剂量组HL-1心肌细胞SERCA2a蛋白表达量均增加(P0.01)。荧光显微镜下显示,模型组HL-1心肌细胞内钙离子浓度的荧光强度增加;与模型组比较,苏格木勒-3汤中、高剂量组对HL-1心肌细胞内钙离子浓度的荧光强度逐渐下降。结论蒙药苏格木勒-3汤对HL-1心肌细胞钙超载具有抑制作用,其机制可能与提高心肌细胞中SERCA2a蛋白表达有关。     

桂郁金醇提物和水提物对离体蛙心的影响

目的 探讨桂郁金醇提物和水提物对离体蛙心的影响.方法 采用斯氏蛙心灌流法制备离体蛙心标本,逐滴加入桂郁金提取物,观察药物对离体蛙心的作用.结果 当桂郁金醇提物和水提物的终浓度分别达到2.54×10-2g/ml和2.55×10-3g/ml时,开始明显抑制蛙心的收缩张力最大值;两种提取物的终浓度分别达到4.90×10-2g/ml和1.73×10-3g/ml时,开始明显抑制蛙心的收缩张力平均值,并表现出明显的量效关系.两种提取物对蛙心收缩频率的影响并不明显.药物溶媒(纯净水)对蛙心没有明显影响.结论 桂郁金醇提物和水提物有显著的负性肌力作用.     

天麻素对离体蟾蜍心脏活动影响的实验研究

目的：研究天麻素对离体蟾蜍心率和心脏收缩幅度的影响。方法：采用斯氏法制备离体蟾蜍心脏标本,用BL-410生物机能实验系统观察记录心率和心脏的收缩幅度的变化。结果：天麻素浓度为20μg／ml时,可使离体蟾蜍心率增加（P〉0．05）,但是不具有统计学意义;而随着浓度从40ug/ml增加至100ug／ml时,心率明显降低（P〈0．05）,有统计学意义。天麻素浓度从20ug／nd增加到100ug／ml时,心脏的收缩幅度明显增加（P〈0．05）,有显著差异;但是浓度为100ug／ml时,心脏收缩幅度反而降低,与分别加入60ug／ml、80ug／ml天麻素比较有显著差异,P〈0．01;但是与正常组相比不具有统计学意义P〉0．05。结论：在一定浓度范围内天麻素具有降低心率,增加心脏收缩幅度的作用。     

原花青素舒张家兔离体肺动脉的研究

目的:研究葡萄籽提取物原花青素(PC)对家兔离体肺动脉血管的舒张作用及机制.方法:采用家兔离体肺动脉平滑肌标本,以去甲肾上腺素(NA)预收缩后,给予PC(0.625,1.25,2.5 mg·L~(-1)),观察其舒张血管的量效关系;并分为对照组、PC组、Pc+吲哚美辛(1×10~(-5)mol.L~(-1)、PC+普萘洛尔(1×10~(-5)mol·L~(-1))、PC+左旋硝基精氨酸(1×10~(-4)mol·L~(-1))、Pc+甲烯蓝(1×10-5 mol.L~(-1))和PC+去内皮细胞7组,探讨PC舒张血管的机制;用PC(20 mg·L~(-1))温育标本后,观察Pc对NA(1 × 10~(-8)～1×10~(-5)mol·L~(-1)),KCI(6.3～100 mmol·L~(-1))和cacl:(1×10~(-5)～1×10~(-2)mol·L~(-1))量效曲线的影响.结果:PC能明显舒张肺动脉血管,并有量效关系(r=0.69,P＜0.01);去除血管内皮、L-NNA或MB可抑制PC的舒张作用,但吲哚美辛和普萘洛尔无影响;PC能压低NA,KCI和CaCl_2的量效收缩曲线,三者的pD2分别由对照的(7.57±2.41),(1.74±1.19),(3.72±1.88)降低为(6.47±1.42),(1.07±1.12),(3.17±1.55);PC也能抑制NA引起的第Ⅰ时相收缩,对CaCl_2引起的第Ⅱ时相收缩无影响.结论:PC舒张肺动脉的作用是内皮依赖性,且与NO/cGMP介导有关;也可能是拮抗ROC和PDC通道,降低胞浆Ca~(2+)而舒张血管.     

去甲乌药碱与6-姜酚对心肌细胞的正性肌力作用

目的:研究去甲乌药碱(higenamine)与6-姜酚(6-gingerol)单体及其配伍在正常心肌细胞的正性肌力作用.方法:急性分离成年SD大鼠左心室肌细胞,分别使用不同单体和单体间不同浓度的相互配伍作用于心肌细胞,使用Ion Optix单细胞收缩与离子测量系统检测细胞的最大收缩舒张速率(±dp/dt)、收缩幅度(ph/bl)、50％收缩舒张时间常数(T50S,T50D)的变化.结果:0.03 ～1 μmol·L-1去甲乌药碱能够浓度依赖性增强心肌收缩力和最大收缩舒张速率,起效浓度为0.1μmol·L-1,1 μmol·L-1能到最大效应,其使收缩幅度增加为234％,最大收缩速率增加为219％,最大舒张速率增加为272％,其对50％收缩舒张常数无影响,EC50约为0.205 μmol·L-,＞1 μmol·L-1即产生心肌毒性作用.3～30μmol· L-16-姜酚对心肌细胞收缩功能无显著影响,大于30 μmol·L-使心肌细胞产生不节律收缩.相互配伍不能增强去甲乌药碱的强心作用.结论:去甲乌药碱具有强心作用,与6-姜酚配伍不能显著增强去甲乌药碱的强心作用.