蛇毒多肽X在巨噬细胞泡沫化过程中的Ca~(2+)拮抗作用

为研究由中华眼镜蛇毒分离纯化而得的蛇毒多肽X在巨噬细胞泡沫化过程中的Ca2 +拮抗作用。将C5 7BL/ 6J小鼠腹膜巨噬细胞置于 10mg/L氧化型低密度脂蛋白中培养 ,制备泡沫样细胞 ;应用Ca2 +荧光指示剂技术 ,检测蛇毒多肽X对泡沫样细胞Ca2 +水平的缓慢与即刻影响。结果发现 ,在 10mg/L蛇毒多肽X中孵育的泡沫样细胞Ca2 +水平为 3.61× 10 -7mol/L ,为对照细胞的 40 .2 % ;而蛇毒多肽X对细胞Ca2 +水平的即刻影响不明显。结果提示 ,在巨噬细胞泡沫化过程中 ,蛇毒多肽X可拮抗细胞Ca2 +水平的增高 ,从而阻止泡沫细胞的形成     

泽泻汤对巨噬细胞泡沫化脂质沉积及其LXRα和ABCA1表达的影响

目的 以大鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,经ox-LDL（50 mg/L）诱导后建立巨噬细胞泡沫化模型,观察泽泻汤对细胞LXRα 和ABCA1表达的影响。 方法 分别采用ox-LDL（50 mg/L）和Dil-ox-LDL（10 mg/L）处理大鼠腹腔巨噬细胞24 h,同时20%泽泻汤血清干预后,油红O染色和荧光显微镜观察细胞内脂质沉积情况;蛋白免疫印迹检测细胞LXRα 和ABCA1的表达情况。结果 ox-LDL（50 mg/L）和Dil-ox-LDL（10 mg/L）处理巨噬细胞成功建立巨噬细胞泡沫化模型;与空白组的巨噬细胞比较,模型组巨噬细胞内脂质沉积增加,泽泻汤血清干预组巨噬细胞内脂质沉积明显减少。空白组巨噬细胞和模型组巨噬细胞LXRα呈低水平表达,泽泻汤血清干预组细胞LXRα表达明显增加;与空白组比较,模型组巨噬细胞ABCA1表达明显增加,泽泻汤血清干预组巨噬细胞中ABCA1亦呈高表达,但较模型组略低。结论 ox-LDL（50 mg/L）和Dil-ox-LDL（10 mg/L）处理巨噬细胞可以成功建立巨噬细胞泡沫化模型;泽泻汤能改善巨噬细胞泡沫化过程的脂质沉积,可能通过上调LXRα表达来实现的。     

钙敏感受体对巨噬细胞内胱硫醚-γ-裂解酶表达的调控

目的研究钙敏感受体(CaR)是否通过增强钙调蛋白(Ca M)的表达提高胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)的活性,进而抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转化。方法 Western印迹法检测各组细胞中CSE、PI3K和p-AKT的表达;敏感硫电极法检测巨噬细胞中H_2S含量的变化;油红O染色检测阳性细胞的相对含量;HPLC测定细胞内胆固醇含量。结果与空白对照组比较,Gd Cl_3组明显增强CSE的表达,而PI3K和p-AKT的表达被明显抑制;Ca M抑制剂U73122组和Gd Cl3+U73122组PI3K和p-AKT的表达明显增强,而CSE的表达被明显抑制。敏感硫电极法检测H_2S的相对含量结果显示:与空白对照组比较,Gd Cl_3组作用泡沫细胞48 h后H_2S的相对含量明显增加;而U73122组和Gd Cl_3+U73122组H_2S的相对含量明显降低。油红O染色检测和HPLC检测结果显示:与空白对照组比较,Gd Cl_3组作用泡沫细胞48 h后,巨噬细胞泡沫化程度明显降低,而U73122组和Gd Cl_3+U73122组巨噬细胞泡沫化程度均明显增加。结论 CaR可以通过增强Ca M的表达激活细胞内CSE的活性,进而抑制巨噬细胞向泡沫细胞转化。     

清道夫受体CD36在CML抑制泡沫细胞迁徙中的作用

目的探讨清道夫受体CD36在羧甲基赖氨酸(CML)抑制泡沫细胞迁徙中的作用。方法 (1)首先观察CML对RAW264.7巨噬细胞脂质蓄积和细胞迁移的影响,继之观察泡沫细胞中CML与CD36的相互作用,实验分为:对照组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组(40 mg/L ox-LDL)、CML组(40 mg/L ox-LDL+10μmol/L CML);(2)观察CD36在CML抑制泡沫细胞迁移中的作用。实验分两部分:首先观察CD36抑制剂SSO对RAW264.7泡沫细胞迁移的影响,分对照组(40 mg/L ox-LDL+10μmol/L CML)和SSO组(40 mg/L ox-LDL+10μmol/L CML+25μmol/L SSO);其次观察不同受体阻断对CML抑制泡沫细胞迁移的影响,分对照组(40 mg/L ox-LDL+10μmol/L CML),anti-CD36组(40 mg/L ox-LDL+10μmol/L CML+2μmol/L anti-CD36),anti-RAGE组(40 mg/L ox-LDL+10μmol/L CML+2μmol/L anti-RAGE),mal BSA组(40 mg/L ox-LDL+10μmol/L CML+400 nmol/L mal BSA)。连续24 h 1%BSA的培养基培养干预后进行相关检测(油红O染色、Transwell细胞迁移实验、免疫共沉淀实验、CD36免疫荧光染色等)。结果胆固醇氧化酶法定量及油红O染色定性显示CML可以有效促进RAW264.7巨噬细胞脂滴的蓄积并形成动脉粥样硬化斑块的关键组分泡沫细胞。Transwell细胞迁移实验和定量分析结果显示:与对照组相比,ox-LDL组中迁移泡沫细胞数减少43.5%(P0.05);与ox-LDL组相比,CML使泡沫细胞迁移数目减少49.2%(0.287±0.031比0.565±0.061,P0.05),表明CML抑制RAW264.7源性泡沫细胞迁移。免疫共沉淀实验及免疫荧光染色结果显示泡沫细胞中CML-CD36存在显著的相互作用。进一步的,用SSO或中和性抗体anti-CD36阻断CD36和清道夫受体抑制剂mal BSA阻断所有清道夫受体情况下,迁移的细胞数均较对照组显著增加(P0.05)。统计学分析显示,anti-CD36组细胞迁移指数为mal BSA组的81.3%(2.35±0.39比2.89±0.41,P0.05)。结论清道夫受体CD36是CML抑制RAW264.7泡沫细胞迁移的关键受体。     

巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中载脂蛋白E基因表达的变化

研究单核－巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中细胞载脂蛋白E表达的变化,以佛波醇酯（10^-7mol/L)诱导人单核细胞性THP－1细胞分化为巨噬细胞（72h),再以氧化型低密度脂蛋白（50mg/L)刺激巨噬细胞形成泡沫细胞（48h),用逆转录－聚合酶链反应检测这一过程中载脂蛋白E在mRNA水平上的变化。结果显示,单核细胞分化为巨噬细胞的同时伴随着载脂蛋白E表达的增加,巨噬细胞吞噬脂质转化为泡沫细胞后载脂蛋白E的表达进一步增加。     

黄芪多糖对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响

目的 探讨黄芪多糖(APS)对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响.方法采用体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导,建立泡沫细胞模型.用油红O染色在光镜下鉴定泡沫细胞形态及变化.再以不同浓度APS(0 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L)作用泡沫细胞24 h;以100 mg/L APS作用泡沫细胞不同时间(0 h、6 h、12 h、24 h、48 h)后,酶比色法检测泡沫细胞内胆固醇的含量.结果①巨噬细胞经ox-LDL诱导48 h后转化为泡沫细胞.②与对照组相比,10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L的APS作用于巨噬细胞源性泡沫细胞24 h后,细胞内胆固醇含量均明显减少(P＜0.01).③与对照组相比,100 mg/L的APS作用于巨噬细胞源性泡沫细胞6 h、12 h、24 h、48 h,细胞内胆固醇含量均明显减少(P＜0.01).结论①巨噬细胞经ox-LDL诱导后,有大量泡沫细胞形成.②APS可减少RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量.     

泽泻汤对巨噬细胞源性泡沫细胞MMP-9表达的影响及其与ERK通路的相关性

目的 以大鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,经ox-LDL（50 mg/L）诱导后建立巨噬细胞源性泡沫细胞模型,观察泽泻汤对泡沫细胞MMP-9表达的影响及其与ERK通路的相关性。方法 用ox-LDL（50 mg/L）处理大鼠腹腔巨噬细胞24 h,经20%泽泻汤含药血清干预24 h,油红O染色检测泡沫细胞形成情况,RT-PCR检测泡沫细胞MMP-9 mRNA的表达,蛋白免疫印迹检测泡沫细胞MMP-9和ERK信号分子的表达情况。结果 ox-LDL（50 mg/L）处理巨噬细胞成功建立巨噬细胞源性泡沫细胞模型;与空白组比较,模型组MMP-9mRNA和蛋白表达明显增加,经20%泽泻汤含药血清、U0126干预后,MMP-9 mRNA和蛋白、p-ERK蛋白表达水平较模型组显著降低。结论 ox-LDL（50 mg/L）处理巨噬细胞可以成功建立巨噬细胞源性泡沫细胞模型;ERK通路受抑制能减少泡沫细胞中MMP-9的表达,泽泻汤能抑制巨噬细胞源性泡沫细胞MMP-9表达,其作用机制可能与ERK的磷酸化密切相关。     

RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及鉴定

目的 以小鼠巨噬细胞RAW264.7为对象,建立简便而又准确的泡沫细胞诱导及鉴定方法.方法 将实验分为正常对照组和不同浓度氧化型低密度脂蛋白与细胞孵育组,在以孵育时间为24 h的前提下,用MTT法和流式细胞术来确定诱导泡沫细胞的氧化型低密度脂蛋白合适浓度区间范围,并用总胆固醇试剂盒和游离胆固醇试剂盒测定不同程度泡沫细胞内胆固醇酯含量.结果 氧化型低密度脂蛋白浓度范围为20～30 mg/L时,细胞存活率已受到显著抑制,并随着氧化型低密度脂蛋白浓度的增高细胞凋亡率和坏死率逐渐增大,起初以细胞凋亡为主,当氧化型低密度脂蛋白浓度大于40 mg/L时凋亡的细胞不断坏死.20 mg/L和30 mg/L氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7细胞共孵育24 h,细胞内胆固醇酯比重分别为66.26%和71.19%,而10 mg/L的氧化型低密度脂蛋白诱导24 h的泡沫细胞不典型,40 mg/L以上的氧化型低密度脂蛋白诱导的泡沫细胞泡沫化程度严重,贴壁不牢,大部分细胞破裂或凋亡,脂滴散布于细胞外.结论 20～30 mg/L氧化型低密度脂蛋白诱导的RAW264.7巨噬泡沫细胞模型稳定且形态较完整,符合泡沫细胞的形态学特征.     

载脂蛋白A-I对THP-1单核/巨噬源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响

目的 探讨载脂蛋白A-I(APOA-I)对泡沫细胞内胆固醇含量的影响.方法 ①一次性密度梯度超速离心法分离人血清脂蛋白,获取LDL;用Cu'2+>(15 μmol/L)氧化法获得氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)鉴定.160 nmol/L的佛波脂(PAM)诱导THP-1细胞成巨噬细胞,巨噬细胞与ox-LDL孵育成泡沫细胞,建立泡沫细胞模型.②不同浓度(0、5、10、15、20 mg/L)的APOA-I蛋白刺激泡沫细胞24 h;15 mg/LAPOA-I蛋白以不同时间(0、6、12、18、24、36 h)刺激泡沫细胞.测定各组泡沫细胞内胆固醇含量.结果 各浓度APOA-I蛋白刺激泡沫细胞24 h后,细胞内胆固醇含量减少,且呈浓度依赖性;15 mg/L APOA-I蛋白在不同时间刺激泡沫细胞后,细胞内胆固醇含量减少,以前24 h明显.结论 ApoA-I蛋白能减轻泡沫细胞内胆固醇负荷,这可能是ApoA-I蛋白防治动脉粥样硬化的机制之一.     

胰高血糖素样肽-1对脂质合成关键酶CD_(36)、ACAT1影响的研究

目的探索胰高血糖素样肽-1[GLP-1(7-36)]对巨噬细胞源性泡沫细胞内CD_(36)、 ACAT1基因及蛋白表达的影响。方法培养巨噬细胞,用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导传代培养的巨噬细胞泡沫化。实验分为8组:巨噬细胞组,泡沫细胞组,不同浓度0 nmol/L、1.5 nmol/L、3.0 nmol/L、5.0 nmol/L、10.0 nmol/LGLP-1(7-36)干预组,GLP-1(7-36)5.0 nmol/L联合GLP-1抑制剂Exendin(9-39)50 nmol/L组。结果与巨噬细胞组比较,泡沫细胞组CD_(36)、ACAT1mRNA和蛋白表达水平较高(P0.05);与泡沫细胞组比较,GLP-1组CD_(36)、ACAT1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05);与不同浓度GLP-1干预组比较,GLP-1抑制剂Exendin组CD_(36)、ACAT1mRNA和蛋白表达水平较高(P0.05)。结论 GLP-1干预浓度的增加与CD_(36)、ACAT1基因及蛋白表达呈负相关。当GLP-1(7-36)浓度为5 nmol/L时,抑制效果达到最大。     

白细胞介素10对人THP-1源巨噬细胞泡沫化过程中SR-A表达的影响

目的:本研究旨在观察白细胞介素-10(IL-10)对人THP-1源巨噬细胞泡沫化过程中清道夫受体A(SR-A)表达的影响,探讨在动脉粥样硬化形成中IL-10对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞泡沫化的干预作用。方法:体外建立泡沫细胞培养体系,将细胞分为5组即THP-1单核细胞组,巨噬细胞组,IL-10刺激巨噬细胞组,ox-LDL刺激巨噬细胞组(泡沫细胞组),ox-LDL和IL-10联合刺激巨噬细胞组。采用RT-PCR和Westernbloting分别检测SR-A的mRNA和蛋白表达变化,脂质油红O化学染色方法检测各组细胞脂质摄取量的情况。结果:当THP-1分化为巨噬细胞时,SR-A开始大量表达;IL-10刺激可显著抑制巨噬细胞组SR-A的表达,其mRNA和蛋白分别下降为未刺激前的0.6倍和0.7倍,泡沫细胞形成率也下降为未刺激前的0.6倍。巨噬细胞经ox-LDL刺激形成泡沫细胞时,SR-A的表达进一步升高,其mRNA和蛋白分别增加为巨噬细胞组的1.5倍和1.4倍,泡沫细胞形成率提高为巨噬细胞组的1.7倍。在此过程中加入IL-10联合刺激,观察到SR-A的表达量有显著降低,其mRNA和蛋白均下降为单用ox-LDL刺激巨噬细胞组的0.4倍,ox-LDL的摄取量也下降为单用ox-LDL刺激巨噬细胞组的0.3倍。结论:IL-10抑制巨噬细胞SR-A表达,IL-10对ox-LDL诱导巨噬细胞SR-A的表达具明显干预作用。IL-10通过抑制SR-A表达可能在抗动脉粥样硬化的发生中发挥重要作用。     

血清淀粉样P物质对泡沫细胞形成的影响

目的通过观察泡沫细胞形成、脂滴形态以及脂滴表面蛋白分子表达的情况,探讨血清淀粉样P物质(SAP)对泡沫细胞发生发展的影响。方法利用THP-1细胞,通过佛波酯(PMA)处理48 h,诱导其分化成为巨噬细胞,再用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)联合脂多糖(LPS)诱导其成为泡沫细胞作为对照组,实验组在上述过程中加入不同浓度SAP(10、20 mg/L)进行干预。采用油红O染色分析SAP对泡沫细胞形成的影响,观察脂质蓄积;同时利用Bodipy493/503染色,在荧光显微镜下观察泡沫细胞内脂滴形态及数量;提取上述泡沫细胞内的脂质,通过试剂盒定量测定细胞内甘油三酯(TG)和胆固醇酯(CE)含量;利用Western blot对脂滴表面相关的蛋白进行分析,如乙酰辅酶A羧化酶(ACC1)、脂肪分化相关蛋白(ADRP)、47 k Da的尾连蛋白(TIP47)、组蛋白去甲基化酶(JMJD3)、脂肪酸合成酶(FAS)的表达水平。结果油红O染色和Bodipy493/503染色显示,实验组细胞内的脂滴大小更大、数量更多,且20 mg/L SAP干预组较10 mg/L SAP干预组趋势更明显;脂质定量检测结果显示,实验组TG、CE含量增高,20 mg/L SAP干预组较10 mg/L SAP干预组更高; Western blot结果显示,SAP能够增强ADRP、TIP47、JMJD3、FAS的表达水平,除了FAS在不同SAP浓度干预组表达水平一样外,其余均随着SAP浓度的增加表达水平也增强。结论 SAP能够促进泡沫细胞形成,增强脂质蓄积; SAP能够增强相关脂蛋白的表达水平。     

Intracellular mechanisms involved in the stimulation of growth hormone release from rat anterior pituitary cells by Russell's viper venom.

We have previously shown that a heat-stable component of Russell's viper venom (RVV) releases GH in a dose-dependent manner from cultured rat anterior pituitary cells. We have now investigated the intracellular mechanisms involved in RVV-stimulated GH release by concomitant administration of RVV with known intracellular mediators in rat pituitary cells. 3-Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX; 0.5 mmol/l), added to cultured rat anterior pituitary cells simultaneously with RVV, at concentrations up to a maximally effective dose of 10 micrograms/ml, increased GH release (3.7-fold, 4.0-fold and 2.0-fold; P less than 0.001) compared with the effect of venom alone. These effects were additive, indicating that RVV and IBMX stimulate through different intracellular messengers. RVV failed to increase the formation of basal or IBMX-stimulated intracellular cyclic AMP (cAMP), confirming that RVV affects GH release through a cAMP-independent pathway. 12-0-Tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA; 0.1 mumol/l), added simultaneously with various doses of RVV (0.1-10 micrograms/ml), did not increase GH release beyond the maximal effect of RVV. This result indicates that RVV might be stimulating GH release through a similar mechanism to that of TPA (by activating protein kinase C). When pituitary cells were perifused with Ca(2+)-free medium or verapamil (50 mumol/l), RVV-stimulated GH release was inhibited by 65 and 42% respectively. This reflects the recognized requirement of Ca2+ for secretory processes. However, RVV (10 micrograms/ml) had no significant effect on intracellular free Ca2+ concentrations as measured using the fluorescent Ca2+ probe quin-2.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

槟榔碱对泡沫细胞胆固醇流出和ABCA1表达的影响

目的 探讨槟榔碱对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的鼠源性巨噬细胞性泡沫细胞形成的影响及可能机制.方法 采用体外培养的鼠源性巨噬细胞株作为研究对象,加入ox-LDL (50 mg/L)诱导泡沫细胞,同时加入不同浓度的槟榔碱处理,油红0染色进行形态学观察,高效液相色谱法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的水平,3H标记的胆固醇测定胆固醇流出率.采用实时定量PCR和蛋白印迹法分别检测细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A1( ABCA1)的表达.结果 ox-LDL处理48 h后,与正常巨噬细胞相比,油红O染色阳性细胞显著增加,细胞体积明显增大,形态多呈圆形或不规则形;槟榔碱(10-6、10-5和10-4mol/L)组油红O染色阳性细胞数比泡沫细胞模型组显著减少,细胞体积明显缩小.与泡沫细胞模型组相比,槟榔碱(10-5和10-4mol/L)显著性降低细胞内TC、FC、CE水平及CE/TC,显著性增加细胞胆固醇流出率和ABCA1的表达.结论 槟榔碱抑制ox-LDL诱导的鼠源性巨噬细胞性泡沫细胞形成,上调泡沫细胞中ABCA1的表达.     

氧化低密度脂蛋白、荷叶生物碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的影响

目的：了解不同浓度氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）及荷叶生物碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1（ABCA1）表达的影响。方法：用佛波酯（PMA）诱导THP-1源性单核细胞分化为巨噬细胞：以不同浓度的ox-LDL孵育其24h;50mg/L的ox-LDL孵育使该细胞成为泡沫细胞,再以不同浓度荷叶生物碱对其进行干预24h。以PCR和蛋白质免疫印迹法（Western blot）分别检测不同浓度ox-LDL及荷叶生物碱干预下各组细胞ABCA1的表达。以油红O染色观察各组细胞。结果：镜下：ox-LDL处理组细胞内脂滴的大小与多少随着ox-LDL的浓度的增加而增加;随荷叶生物碱浓度的升高而减少。ABCA1mRNA表达量：ox-LDL各组的表达量均较空白对照组明显升高[25mg/L组：（1.4677±0.0907）,50mg/L组：（2.0510±0.1065）,100 mg/L组：（1.5356±0.0903）比0mg/L组：（1.00）,P均〈0.05],荷叶生物碱各组细胞的表达量[荷叶生物碱25mg/L：（1.0460±0.0580）,50mg/L：（0.8391±0.0661）,100mg/L：（1.1003±0.0752）]表达量均较单纯50mg/L ox-LDL干预组（0.5136±0.0632）明显升高（P均〈0.05）。ABCA1蛋白的表达与ABCA1mRNA表达水平改变相一致。结论：ox-LDL可上调PMA诱导的THP-1单核细胞源性巨噬细胞内ABCA1的表达,使其细胞内脂质蓄积。荷叶生物碱既使上述细胞内ABCA1表达上调,又使其细胞内脂质蓄积减少。     

Blood cells as targets of snake toxins

Snake venoms are mixtures of enzymes and peptides which exert toxicological effects by targeting their substrates or receptors upon envenomation. Snake venom proteins widely affect vascular system including circulating blood cells, coagulation factors, and vascular wall components. Many of the toxic proteins have multiple targets. For example, some metalloproteinase domain-containing snake venom protein cleaves not only fibrinogen but also receptors on platelets. Also, it is frequent that toxins from different snake venom protein families are capable of binding to a common target on cells. Most of the cytotoxic effects in the venom are usually results of the activities of metalloproteinase, C-type lectin, disintegrin, cysteine-rich protein, as well as phospholipase A(2). There has been a growing interest in studying the structure and function of these snake venom proteins because many of them have high structural homologies to proteins found in human. Therefore, the understanding of how these toxins interact with their targets may contribute to the discovery of novel physiological processes and the development of therapeutic agents for cardiovascular diseases. In this review, we summarize how snake toxins target blood cells with an emphasis on their effects on platelet function.     

异鼠李素通过抑制泡沫细胞形成增加动脉粥样硬化斑块稳定性的机制研究

背景 泡沫细胞的形成是动脉粥样硬化重要的病理基础,其是由巨噬细胞吞噬大量胆固醇和三酰甘油后转化而来.因此,如何促进巨噬细胞的脂质代谢、抑制其转化为泡沫细胞是延缓动脉粥样硬化病情进展的关键.目的 分析异鼠李素通过抑制泡沫细胞形成增加动脉粥样硬化斑块稳定性的机制.方法 本实验时间为2020年8月至2021年10月.动物实验...     

血清高密度脂蛋白亚类1对人单核源性巨噬细胞泡沫化的影响

目的 探讨血清高密度脂蛋白(HDL)亚类HDL1对人外周血单核源性巨噬细胞泡沫化的影响,认识其在HDL抗动脉粥样硬化(As)中所发挥的作用.方法 采用分段浓度聚丙烯酰胺凝胶电泳(sd-PAGE)法同步分离和定最制备血清HDL1.采用密度梯度离心法和塑料吸附法从人外周血中分离单核细胞,以50 nmol/L佛波酯(PMA)刺激48 h使之转化为巨噬细胞.细胞分为对照组与实验组,以HDL1干预后分别测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)与蛋白质的含量,观察HDL1对细胞内TC/蛋白比值影响的量效关系和时效关系.结果 成功地建立了人单核源性泡沫细胞的模型,采用sd-PAGE法有效地从血清中分离出HDL1.经不同浓度(0、0.1、1.0和10.0 ms/ L)的HDL1作用后,细胞中TC/蛋白的比值随HDL1浓度的增加而旱剂茸依赖性降低(由36.9±1.1下降至6.2±0.4,P<0.01).细胞的泡沫化程度也随着HDL1浓度的升高而降低,且在浓度(10.0 mg/ L)一定的情况下,细胞中TC/ 蛋白比值随HDL1处理时间(6～24 h)的延长而呈时间依赖性降低(6 h:16.9±0.9,24 h:6.4±0.6,P<0.01).结论 HDL1通过降低细胞内TC的含量,一定程度上减轻了巨噬细胞的泡沫化程度,从而在HDL抗As的过程中发挥作用.