GPD2基因敲减对肺癌细胞H1299生物学功能的影响

目的沉默甘油-3-磷酸脱氢酶2（GPD2）基因表达,验证对肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭等生物功能及行为学的影响。方法构建GPD2基因的RNA干扰慢病毒载体（shGPD2）和对应的对照载体（shCtrl）,并感染H1299细胞,实时荧光定量（PCR）检测GPD2基因在癌细胞中的mRNA变化情况,Western blotting检测GPD2基因在癌细胞中蛋白质变化情况,验证敲减效率;CCK8法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况;Transwell实验检测细胞侵袭情况。结果成功构建慢病毒干扰载体shGPD2并感染H1299细胞,mRNA及蛋白质含量均减少,其敲减效率达到73.5%（P < 0.05）;GPD2基因敲减后的H1299细胞增殖明显减缓,细胞凋亡显著增多,细胞侵袭能力明显下降（P < 0.01）。结论GPD2基因敲减能够有效抑制肺癌细胞H1299的增殖。     

难治性癫痫大鼠海马线粒体蛋白质的差异表达

目的 建立难治性癫痫大鼠模型,通过对海马线粒体蛋白质组的研究,探讨其发病机制并寻找新的治疗靶点。方法 应用固相pH梯度等电聚焦和十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS PAGE）二维电泳,基质辅助激光解析/电离-飞行时间质谱（MALDI TOF）技术分析和鉴定耐药/非耐药癫痫大鼠海马线粒体差异蛋白。结果 耐药组癫痫大鼠海马线粒体19种蛋白表达异常,5种表达上调的蛋白为3-磷酸甘油醛脱氢酶、磷酸丙糖-1、电压依赖性阴离子通道1、醛糖A和微管蛋白,14种表达下调的蛋白质为顺乌头酸酶、谷氨酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、NADH脱氢酶、ATP合成酶、丙酮酸激酶同工酶类似物、ATP结合盒B亚家族、磷脂酶A2、丝氨酸蛋白酶抑制剂、热休克蛋白、解偶联蛋白、Cofilin 1、醛脱氢酶和电压依赖性阴离子通道2。结论 难治性癫痫大鼠海马线粒体存在大量差异表达蛋白,可能参与癫痫耐药的发生。     

神经元特异性烯醇化酶与神经系统疾病

烯醇化酶普遍存在于生物体内，在糖酵解过程中，它催化α磷酸甘油形成磷酸烯醇式丙酮酸。现已发现五种烯醇化酶同工酶，分别由免疫性质不同的3种亚基α、β、γ组成，即αα、ββ、γγ、αβ、αγ，均为α胞浆二聚体酶。脑组织中存在αα、γγ、αγ三种烯醇化酶同工酶，用免疫组织化学方法研究表明，γγ型特异定位于神经元和神经内分泌细胞，故命名为神经元特异性烯醇化酶(NSE)；     

线粒体融合蛋白2基因与肿瘤发生和发展关系研究进展

线粒体融合蛋白2(Mfn2)是一种由Mfn2基因编码的高度保守的跨膜三磷鸟苷酶,广泛存在于人体多个器官组织,定位于细胞线粒体外膜,其具有促进线粒体融合和维持线粒体正常结构的功能,并参与信号转导、增殖及凋亡等细胞生物学过程。近年研究发现,Mfn2基因与肿瘤的发生、发展有密切关系,可能在肿瘤细胞增殖、凋亡及自噬等方面扮演着重要角色,Mfn2基因参与肿瘤发生、发展的机制已成为肿瘤研究领域的热点。本文就Mfn2基因与肿瘤细胞增殖、凋亡及自噬的关系及Mfn2基因在肿瘤中的表达和作用、目前针对Mfn2基因靶向治疗的临床转化研究相关进展加以综述,以期加深对Mfn2基因参与肿瘤生物学行为机制的认识。     

谷胱甘肽S-转移酶基因家族的研究进展

<正> 谷胱甘肽S-转移酶(Glutathione S-transferases,GST,EC 2.5.1.18)是一个同源二聚体酶的超基因家族,属Ⅱ相代谢酶系,普遍存在于各种生物体内。研究表明GST在体内表达水平的高低是决定细胞对一些有毒化学物质的敏感性的关键因素。迄今为止,在入GST家族中共发现5类胞浆型同工酶,并分别进行了基因定位(表1)。其中,同工酶α、π、μ及θ在人体内含量较丰富。人群中并非每个个体都含有这5种同工酶,不同的GST表型是由其编码基因的多态性决定的。该同工酶编码基因的纯合缺失导致了个体对某种同工酶的缺乏。已证明GST基因家族中GSTT1,GSTM1,GSTP1基因位点具有多态性。目前,国内外的研究主要集中在GSTμ、GSTθ、GSTπ这3类同工酶及其编码基因的     

一碳代谢酶MTHFD2在肿瘤中的研究进展

细胞的一碳代谢包括细胞质途径和线粒体途径。肿瘤细胞发生一碳代谢重塑,主要表现为线粒体途径通量明显上升。其中亚甲基四氢叶酸脱氢酶2（MTHFD2）在肿瘤中一致性地表达上调,与患者的多种临床参数相关,而在正常成人组织中却表达缺失。近年来,多项研究显示MTHFD2不仅可以在线粒体中通过一碳代谢酶活性参与生物大分子合成、表观遗传修饰、ATP及NAD(P)H生成,影响多种恶性表型,还可定位于细胞核内发挥非代谢的兼职作用,促进肿瘤的进展。多种原癌基因及抑癌基因可从转录及转录后水平调控MTHFD2的表达。此外,MTHFD2抑制剂不断取得进展,且表现出显著的抑癌作用,这提示着MTHFD2的潜在临床应用价值。本文就目前MTHFD2在肿瘤中的研究进展作一综述,以期为肿瘤的诊疗提供新的策略。     

PAGE电泳检测阴道毛滴虫酶学特性

目的：研究九江地区阴道毛滴虫3个分离株（九江1号、九江2号、九江3号）的同工酶特性。方法：用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、同工酶染色方法进行分析。结果：检测苹果酸脱氢酶（MDH）、乳到脱氢酶（LDH）、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）、葡萄糖磷酸异构酶（PGI）、葡萄糖磷酸变位酶（PGM）5种同工酶。在G6PD、PGI、PGM酶谱中，九江1株、九江2株、九江3株完全相同；在MDH、LDH酶谱中，九江3株与九江1株、九江2株不同。结论：九江1株、九江2株与九江3株部分同工酶谱存在显著差异，提示此三株阴道毛滴虫虫株可能存在一定种内分化。     

黄牛与水牛的枯氏肉孢子虫同工酶研究

目的 比较寄生于黄牛和水牛的枯氏肉孢子虫(Sarcocystis cruzi)乳酸脱氢酶、磷酸葡萄糖变位酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶、苹果酸酶四种同工酶的酶谱。方法进行聚丙烯酰胺垂直平板梯度凝胶电泳的方法。结果黄牛与水牛的枯氏肉孢子虫两种酶酶带相似,只在活性上略有差异。结论同工酶谱分析证明黄牛和水牛都是枯氏肉孢子虫的自然中间宿主。     

巨噬细胞吞噬过程中糖和能量代谢的相关酶活性的研究

本实验观察了离体的小鼠腹腔巨噬细胞在吞噬加热致死的白色葡萄球菌过程中,细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、肌酸激酶(CK)及其同工酶,乳酸脱氢酶(LDH)及其同工酶和线粒体异柠檬酸脱氢酶(mICD)活性的变化。根据酶活性的变化动态探讨了巨噬细胞吞噬过程中能量和糖代谢的改变规律。证明小鼠腹腔巨噬细胞的LDH只有LDH_4和LDH_5两种同工酶,CK是MM同工酶。     

牛皮蝇不同发育阶段五种同工酶的比较分析

本文应用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(PAGE):1,对我国西北地区的牛皮蝇(Hypoderma bovis)的Ⅱ、Ⅲ龄幼虫和蛹期作了酯酶(EST)、乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)和异柠檬酸脱氢酶(ICDH)等五种同工酶的比较测定。结果表明在牛皮蝇生活史的不同发育阶段,其中四种同工酶(除ICDH外)的酶带数目和相对迁移率(R_f)均有差异;2,将专性寄生性蝇类——牛皮蝇与营自由生活的蝇类——舍蝇(Musca domestica vicina macquart)进行了相同发育阶段的五种同工酶对比,发现二者在酶带数目和R_f上均有显著差别。本文认为,在牛皮蝇不同发育阶段有着不同的控制基因以适应虫体生长代谢的需要。而寄生性蝇类与非寄生性蝇类也可由于生态环境完全不同而形成不同的代谢途径。     

Mfn2调节线粒体自噬

线粒体融合蛋白2(Mfn2)是由位于人体1号染色体短臂36.22上的Mfn2基因所编码的一种高度保守的跨膜GTP酶,位于线粒体外膜或内质网.Mfn2可调控线粒体融合、转运及线粒体自噬,胰岛素抵抗,抑制肿瘤细胞增殖,促进细胞凋亡,通过线粒体-内质网结构偶联参与内质网应激调控等.本文概括介绍Mfn2的结构和功能基础,总结Mfn2调控线粒体自噬机制及其在线粒体-内质网结构偶联中的作用的研究新进展.     

OPA1相关显性遗传视神经萎缩患者体内线粒体ATP产量不足

显性遗传视神经萎缩与O PA1基因突变相关,该基因编码了dynam in相关GTP酶,该G TP酶是一种线粒体蛋白质,与线粒体网络及形态的形成和维持有关。本研究采用磷元素磁共振光谱分析评估2个不相关家族的6例患者腓肠肌的氧化代谢情况,这些患者O PA1基因27区2708-2711的TTAG碱基缺失。磷酸肌酸再合成速率能够估计线粒体三磷酸腺苷产率,运动后患者的磷酸肌酸再合成速率明显减慢。在体研究结果表明,OPA1相关显性遗传视神经萎缩患者氧化磷酸化不足。OPA1相关显性遗传视神经萎缩患者体内线粒体ATP产量不足@Lodi R.$Dipto. Med. Clin./Biote…     

小鼠淋巴细胞及白血病细胞脱氢酶的定量细胞化学研究

用定量细胞化学方法观察了小鼠白血病淋巴细胞及正常淋巴细胞中6-磷酸葡萄糖脱氢酶、乳酸脱氢酶、琥珀酸脱氢酶及两种黄递酶的活性变化.结果提示:磷酸戊糖途径在小鼠白血病细胞的糖代谢中占有重要地位,6-磷酸葡萄糖脱氢酶的活性变化似乎是细胞癌变的一种生物化学标志.     

人胃癌细胞系(BGC 823)的同工酶研究——乳酸脱氢酶(LDH1～5)

乳酸脱氢酶(LDH)是糖代谢中的一个酶系,它存在于人体所有组织中.当正常细胞发生恶性转化是,乳酸脱氢酶将明显升高,因此成为恶性肿瘤细胞的一个特性.本之采用高度均一的人胃管状腺癌细胞系(BGC823)进行冻融提取,并用醋酶纤维素薄膜电泳技术,对人胃癌细胞系(BGC823)的乳酸脱氢酶进行定性、定量分析.同时作了组化染色制片的形态学观察。本报告使用标准乳酸脱氢酶同工酶电泳法(Z.C.1.1.1.27),实验结果表明,人胃癌细胞系的乳酸脱氢酶活性远远超过正常细胞系的水平,定位在人胃癌细胞系的细胞质中。本研究目的是了解人胃癌细胞系的酶谱,并为基因定位和调控提供初步依据.     

细胞色素P4502D6遗传多态性的研究进展

细胞色素 P450(CYP450)是外源性物质在体内生物转化第一相时最主要的代谢酶,迄今为止,已发现人体肝脏有20多个 CYP450亚族,但参与肝脏代谢药物的主要是 P450家族的7种同工酶,CYP2D6便是其中之一。研究发现,CYP2D6参与异喹胍、抗心律失常药物、抗精神病药物、抗抑郁药物等50多种临床常用药物的代谢,是最具有遗传多态性的酶系。目前,已知 CYP2D6有43个等位基因,共有67个点突变,23个碱基发生9种缺失与插入,而 CYP2D6基因一旦发生变异,经 CYP2D6 所催化的药物代谢即发生变化。因此,P450基因多态性是构成药物代谢个体差异和种族差异的基     

细胞色素P4503A代谢模型的研究进展

细胞色素P450(CYPs)是一组结构和功能相关的超家族基因编码的同工酶,负责内源性底物、外源性物质和许多其他合成性化学物质的代谢.CYP3A亚家族成员因为其含量最多、底物谱大,是药物代谢反应中最主要的限速酶.本文综述了近年来CYP3A的代谢模型的研究进展,     

M2-PK的检测及其对恶性肿瘤的诊断价值

丙酮酸激酶 (pyruvatekinase ,PK)是糖酵解的关键酶之一 ,主要催化磷酸烯醇式丙酮酸形成丙酮酸并伴有ATP的形成。M2 -PK是PK的M2 型同工酶 ,是近年来研究较多的一种新型肿瘤标志物 ,在恶性肿瘤的早期诊断及预后判断中显示出较好的应用前景。本文就M2 -PK的检测方法及其对恶性肿瘤的诊断价值作一综述。1　PK及M2 -PK与恶性肿瘤的关系PK的相对分子质量约为 2 4 0 0 0 0 ,主要以由 4个亚基组成的四聚体形式存在。它有两种结构基因 ,L基因编码L和R型同工酶 ,M基因编码M1和M2 型同工酶。L -PK主要分布于哺乳动物肝脏、肾上腺皮质等与…     

同型半胱氨酸影响Caco-2细胞线粒体功能的实验研究

目的 观察同型半胱氨酸(Hcy)对Caco-2细胞线粒体功能的影响.方法 在Caco-2细胞中加入不同浓度(0、10、25、50、100、500、1 000 μmol/L) Hcy作用不同时间(3、6、12、24 h),采用MTT法及检测乳酸脱氢酶活性,观察Hcy对Caco-2细胞生长活力的影响,检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、三磷酸腺苷酶(ATPase)水平及线粒体肿胀度观察Hcy对Caco-2细胞线粒体功能的影响.结果 随着Hcy作用时间延长及作用浓度的增加,Caco-2细胞的生长活力受到明显抑制,MDA、SOD、GSH-Px水平较对照组明显增加,SDH、ATPase水平下降,线粒体肿胀度下降幅度较正常对照组降低.结论 Hcy具有损伤Caco-2细胞线粒体功能的作用,可能与Hcy氧化损伤有关.     

蛋白激酶CK2α’相互作用蛋白NADH脱氢酶4的筛选

目的研究新的男性不育候选基因蛋白激酶CK2α’在精子发生中的作用机制。方法以人蛋白激酶CK2α’为诱饵蛋白,用酵母双杂交实验从构建于pACT2质粒的人睾丸eDNA文库中筛选CK2α’亚基的相互作用蛋白。结果核酸序列分析及同源性检索表明,其中一种与NADH脱氢酶4（NADH dehydrogenase4）有99．0％同源性。结论NADH脱氢酶是线粒体内参与三羧酸循环的重要酶,也可调节细胞凋亡,深入研究GK2α’与NADH脱氢酶4之间的关系,对了解C池在精子发生过程中的作用有重要意义。     

三磷酸腺苷对低氧性肺动脉高压的治疗

三磷酸腺苷对低氧性肺动脉高压的治疗许辉邓静敏施焕中梁国荣（广西医科大学第一附属医院呼吸内科南宁５３００２１）三磷酸腺苷（ＡＴＰ）为一种能源物质，主要在细胞线粒体中合成，是能量代谢转化的中心，为机体各种生理活动供能，并作为辅酶参与多种代谢反应。ＡＴＰ制...