电离辐射对肺腺癌细胞A549线粒体的影响

目的 研究电离辐射对肺腺癌细胞A549线粒体的影响。方法 0、0.5、3和8 Gy ⁶⁰Co γ射线照射A549细胞后,利用JC-1探针检测照射后肺腺癌细胞A549线粒体膜电位的变化;使用ATP试剂盒检测辐射对A549细胞ATP生成的影响;利用实时定量PCR方法检测线粒体拷贝数。结果 在照射后24 h,各剂量组A549细胞膜电位出现明显改变（F=243.44,P<0.05）,与0 Gy照射组相比,0.5和3 Gy照射的A549细胞线粒体膜电位显著升高（t=-10.12、-5.59,P<0.05）,而8 Gy照射的线粒体膜电位显著降低（t=15.22,P<0.05）,照后48 h各照射组线粒体膜电位基本恢复正常（F=10.36,P<0.05）;照射后24 h ATP水平与膜电位变化趋势一致（F=97.08,P<0.05）,其中0.5和3 Gy A549细胞中ATP水平升高（t=1.66、7.27,P<0.05）,8 Gy照射组降低（t=-8.24,P<0.05）;照射后48 h,ATP水平也发生变化（F=39.49,P<0.05）,0.5和3 Gy照射后A549细胞中ATP水平显著高于0 Gy组（t=4.60、8.53,P<0.05）。照射后24 h线粒体拷贝数显著增加,其中0.5 Gy mtDNA拷贝数增加至对照组的12倍（t=0.02,P<0.05）,3和8 Gy组mtDNA拷贝数分别增加至对照组的7和10倍（t=9.68、15.10,P<0.05）。结论 大剂量电离辐射会导致A549细胞线粒体膜电位降低,从而影响ATP的生成,中等剂量以下的照射会导致A549细胞线粒体膜电位代偿性增高,从而使ATP的生成增多,8 Gy以内的电离辐射可使mtDNA拷贝数代偿性升高。     

A549细胞线粒体DNA缺失模型建立及其放射敏感性变化

目的 建立肺癌A549细胞线粒体DNA（mtDNA）缺失模型（ρ⁰细胞）,观察其放射敏感性变化。 方法 用含微量溴化乙锭（EB）的特殊培养液持续培养正常的A549细胞（ρ⁺细胞）以获得mtDNA完全缺失的ρ⁰细胞,利用生长缺陷及PCR鉴定该细胞模型。利用克隆形成实验分别检测两种细胞的放射敏感性,利用碘化丙啶（PI）染色法及二氯荧光素双醋酸盐（DCFH-DA）染色法,分析两种细胞在6 MV X射线照射后的细胞周期及活性氧簇（ROS）变化情况。 结果 成功建立A549 ρ⁰细胞。ρ⁰细胞较ρ⁺细胞放射敏感性降低（t=12.57,P<0.01）。放射照射8 Gy后,ρ⁰细胞较ρ⁺细胞G₂期阻滞时间延长,G₂期细胞比例降低（t=6.82,P<0.01）,ρ⁰细胞ROS升高水平明显低于ρ⁺细胞（t=14.51,P<0.01）。 结论 ρ⁰细胞较ρ⁺细胞放射敏感性降低,其机制可能与放射照射后ROS产量降低及G₂期阻滞延长有关。     

褪黑素通过调控p53介导的细胞早衰抑制紫外线诱导的HaCaT细胞中黑色素合成

目的 探索褪黑素对中波紫外线（UVB）引起人永生化表皮角质形成（HaCaT）细胞黑色素合成的影响及机制,为褪黑素的皮肤保护机制提供理论基础。方法 80 mJ/cm² UVB照射10^-5 mol/L褪黑素预处理的HaCaT细胞,照后48和72 h,利用NaOH法检测细胞黑色素水平。照后72 h,利用β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测早衰阳性细胞并分析其比例,蛋白免疫印迹法检测衰老相关蛋白p53和酪氨酸酶（TYR）的表达变化。80 mJ/cm² UVB照射分别经毛细血管扩张性共济失调突变激酶/毛细血管扩张性共济失调Rad3相关激酶（ATM/ATR）抑制剂、p53抑制剂和褪黑素预处理的HaCaT细胞,照后72 h检测细胞早衰阳性比例和黑色素水平变化。结果 褪黑素抑制UVB诱导的黑色素水平增加（t=56.65、13.39,P<0.05）,同时抑制UVB诱导的TYR表达增加（t=16.46,P<0.05）;并可缓解UVB诱导的HaCaT细胞早衰（t=6.37,P<0.05）,抑制UVB诱导的p53表达增加（t=19.08,P<0.05）;ATM/ATR抑制剂、p53抑制剂和褪黑素预处理均可抑制UVB诱导的HaCaT细胞黑色素水平升高（t=13.88、7.86、8.96,P<0.05）。结论 褪黑素通过调控p53介导的细胞早衰,抑制UVB诱导的HaCaT细胞黑色素水平增加。     

电离辐射对成骨细胞核因子κB受体活化因子配体和骨保护素mRNA及其蛋白表达的影响

目的 研究电离辐射对成骨细胞RANKL和OPG表达的影响,探讨辐射导致骨损伤的分子机制。方法 采用MC3T3-E1细胞诱导分化为成骨细胞,经0、2和4 Gy¹³⁷Cs γ射线照射后,采用实时定量PCR及Western blot方法检测电离辐射对于成骨细胞RANKL和OPG mRNA及其蛋白水平表达的影响。结果 4 Gy照射可以导致成骨细胞RANKL mRNA(t=5.41,P<0.05)及其蛋白(t=68.37,P<0.01)表达水平上调;2和4 Gy照射可以导致成骨细胞OPG mRNA(t=5.20、7.02,P<0.05)及其蛋白(t=7.78、9.45,P<0.05)表达水平下调。结论 2和4 Gy电离辐射可以导致成骨细胞中RANKL/RANK/OPG通路发生改变,促进破骨细胞的分化和成熟,进而促进破骨细胞的骨吸收作用。     

紫外线B辐射敏感的miR-365在皮肤鳞癌发生中的作用研究

目的 探讨紫外线(UVB)辐射敏感miR-365在皮肤鳞状细胞癌发生中的作用.方法 取对数生长期正常人皮肤角质细胞HaCaT分为对照组和照射组,照射组给予50 J/m²的UVB照射.照射后培养不同时间,分析miRNA的表达谱.实时荧光定量PCR分析HaCaT细胞和皮肤鳞癌细胞系A431、Tca8113和HSC-1的miR-365的表达.平板克隆形成实验和Transwell小室细胞运动实验分别检测细胞的克隆形成能力和体外运动能力.构建miR-365高表达的HaCaT细胞系HaCaT^{pre-miR-365-2}.裸鼠皮下注射HaCaT^{pre-miR-365-2}观察其成瘤能力.结果 UVB照射后,HaCaT差异表达的miRNAs共30个,其中miR-365最敏感,且照后6 h升高最明显,为对照的6.7倍;皮肤鳞癌细胞系A431、Tca8113和HSC-1的miR-365的表达均高于HaCaT细胞(P<0.05),其中,A431增加最多,为(15.67±1.12)倍,Tca8113最少,为(4.72±0.85)倍;抑制皮肤鳞癌细胞系miR-365的表达可以显著抑制其克隆形成能力(t=13.68,P<0.05)和体外细胞迁移能力(t=19.98,P<0.05),而提高HaCaT的miR-365的表达则可以显著提高其克隆形成能力(t=7.11,P<0.05)和体外细胞迁移能力(t=22.03,P<0.05),且能够在裸鼠皮下成功地成瘤.结论 miR-365是一种皮肤鳞状细胞癌的促癌基因.     

125I粒子持续低剂量率照射对人喉癌细胞系Hep-2的抑制作用

目的 探讨¹²⁵I粒子持续低剂量率照射对人喉癌细胞Hep-2的抑制作用及其机制。方法 实验分为空白对照组、X射线单次高剂量率照射组（SDR组）、¹²⁵I粒子持续低剂量率照射组（¹²⁵I-CLDR组）。克隆形成实验检测Hep-2细胞在两种照射方式下的放射敏感性,并计算¹²⁵I-CLDR的相对生物学效应。锥虫蓝染色计数两种照射方式下Hep-2细胞的增殖情况。流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期阻滞情况。Western blot检测细胞内总γ-H2AX的表达水平。结果 Hep-2细胞对¹²⁵I-CLDR的放射敏感性高于SDR,¹²⁵I-CLDR相对生物学效应约为1.61,且α/β比值高于SDR。SDR和¹²⁵I-CLDR均能抑制Hep-2细胞增殖（t=30.9、40.7,P<0.05）,且后者的抑制作用更为明显（t=9.8,P<0.05）。¹²⁵I-CLDR诱导细胞凋亡和G₂/M期细胞阻滞的效应强于SDR（t=5.8、19.8, P<0.05）。结论 ¹²⁵I-CLDR对Hep-2细胞的抑制作用高于SDR,主要机制是降低Hep-2细胞的DNA损伤修复能力,促进细胞死亡;诱导细胞凋亡和G₂/M期阻滞,抑制细胞再增殖。     

γ射线对小鼠造血功能及T细胞亚群功能的影响

目的 观察γ射线对小鼠造血功能及外周血T细胞相关细胞因子和脾脏T细胞转录因子的影响,探讨射线引起的造血功能损伤与免疫异常的相关性。方法 将50只BALB/c小鼠用随机数字表法分为两组：照射组（40只）和空白对照组（10只）,照射组小鼠予⁶⁰Co γ射线（1.0 Gy/min,5.5 min）照射,空白对照组予假照射,照射组于照射后4、8、12及20 d,空白对照组于20 d,计数小鼠外周血白细胞和血小板;骨髓病理切片观察骨髓造血组织增生情况;流式细胞微球芯片捕获技术（CBA）检测外周血中Th1/Th2/Th17细胞因子含量变化;Western blot法检测脾脏Th1/Th2、Th17/Treg细胞分化特异性转录因子T-bet/GATA-3、RORγt/Foxp3蛋白表达水平。结果 照射组小鼠外周血白细胞和血小板计数较空白对照组显著降低（t_白细胞=18.48、15.72、9.79、3.30,t_血小板=22.52、19.74、11.78、4.70,P<0.05）。照射组骨髓病理切片与空白对照组相比,骨髓增生显著低下,造血组织面积减少,被脂肪组织大量替代,巨核细胞少见,照射后8 d较20 d骨髓抑制更明显。照后8和12 d,照射组小鼠外周血Th1类细胞因子IFN-γ、TNF-α及Th2类细胞因子IL-4、IL-6含量较空白对照组明显升高,IL-17A含量照射组较空白对照组亦明显升高（t_IFN-γ=2.93、3.36,t_TNF-α=6.09、8.11、6.43、4.49,t_IL-4=4.49、3.18,t _IL-6 =5.11、8.67、6.67、8.55,P<0.05）。与空白对照组比较,照射组脾脏RORγt蛋白在照射后4、8和12 d及GATA-3、Foxp3蛋白在各时间点表达水平均降低（t_RORγt=6.79、4.31、4.47,t_GATA-3=3.88、8.06、2.84,3.23,t_Foxp3=10.00、8.06、2.89、5.93,P<0.05）。而照射组T-bet蛋白表达较空白对照组升高（t=5.64、2.75、3.56、4.65,P<0.05）。结论 5.5 Gy γ射线照射后引起小鼠骨髓造血抑制,同时导致Th1/Th2、Th17/Treg细胞亚群功能失衡,提示由射线引起的免疫异常可能参与骨髓造血功能的损伤。     

2Gy60Coγ射线照射诱导调节性T细胞的辐射凋亡机制

目的 分析2 Gy ⁶⁰Co γ射线照射对小鼠调节性T细胞存活率的影响,并初步探讨Treg细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax与CD39表达之间的关系。方法 用2 Gy ⁶⁰Co γ射线全身照射小鼠,分离胸腺、脾脏中的淋巴细胞,计数细胞数后利用流式细胞仪对Treg细胞亚群的凋亡率、CD39及凋亡相关因子的表达进行分析。结果 受照后Treg细胞较CD4+FOXP3-T细胞的存活率高,胸腺和脾脏中Treg细胞存活率的时间效应关系不同;受照后Treg细胞凋亡率增加,以照后4 d增幅最为显著(t=-3.6、-7.4, P<0.05);受照后胸腺与脾脏中Bax/Bcl-2的比值变化规律不同,前者中该比值增加,以照后4 d增加最为显著(t=-3.4, P<0.05),而脾脏中该比值于照后4 d减小(t=2.4, P<0.05);受照后4 d胸腺Treg细胞中CD39表达上调(t=-6.6, P<0.05),而脾脏中表达下调(t=2.6, P<0.05)。结论 受照后Treg细胞凋亡率、Bax/Bcl-2比值的变化规律与CD39的表达规律基本一致。     

137Cs γ射线诱导人外周血线粒体DNA缺失的时间和剂量-效应关系

目的 研究¹³⁷Cs γ射线诱导的人外周血线粒体DNA 4934 bp和4977 bp缺失的时间和剂量-效应,并探讨其在电离辐射受照者剂量估算中的应用意义。方法 采集5名健康成人外周血进行¹³⁷Cs γ射线离体照射,取其中1份血样给予5 Gy照射后分别培养2、24、48和72 h,另4份血样均经6等分后分别给予0、0.5、1、2、5和10 Gy照射,孵养2 h后采用实时荧光定量PCR方法和凝胶电泳,检测人外周血线粒体DNA 4934 bp(mtDNA 4934 bp)和4977 bp(mtDNA 4977 bp)缺失的表达水平,并用Curve Expert 1.4软件拟合剂量-效应曲线。结果 ¹³⁷Cs γ射线照射离体人血后,诱发的mtDNA 4934 bp 缺失和mtDNA 4977 bp 缺失在照后2 h即升高,mtDNA 4934 bp缺失水平在照后2 h和48 h有相对表达高点(t=10.782和8.966, P<0.05);而mtDNA 4977 bp缺失水平在照后48 h表达最高(t=7.433, P<0.05)。0.5~10 Gy的¹³⁷Cs γ射线照射诱发的mtDNA 4934 bp 缺失(t=2.895~8.105, P<0.05)和mtDNA 4977 bp 缺失(t=3.006~7.715, P<0.05)均随照射剂量增加。其中,mtDNA 4977 bp缺失在相同照射剂量下变化更大,尤其是在10 Gy剂量照射时,二者差异更明显(t=2.919, P<0.05),即对于大剂量照射,mtDNA 4977 bp缺失可能更为灵敏,但是个体差异较mtDNA 4934 bp缺失大。拟合的剂量-效应曲线回归方程分别为Ŷ₁=1.178+0.1219D(R²=0.9269, mtDNA 4934 bp缺失)和Ŷ₂=1.2578+0.1933D(R²=0.9016, mtDNA 4977 bp缺失)。结论 ¹³⁷Cs γ射线诱发的线粒体DNA片段缺失与辐射剂量有良好的数学回归关系,有可能为照射后生物剂量快速估算和预后评估提供依据。     

Sirt3介导的SOD2在电离辐射中的作用研究

目的 观察293T细胞经不同剂量¹³⁷Cs γ射线照射后,细胞中沉默信息调节因子3（sirt3）及相关抗氧化因子的变化,研究sirt3基因在辐射防护中的抗氧化活性机理。方法 采用¹³⁷Cs对293T细胞分别进行2、4、8 和16 Gy照射,采用Real-Time PCR的方法,检测照后6、12、24和48 h,细胞中sirt3和超氧化物歧化酶2（SOD2）mRNA的表达水平变化;采用免疫印迹法,检测细胞中sirt3和SOD2蛋白水平随时间的变化;采用siRNA干扰和抑制剂处理的方法,检测sirt3与SOD2的作用关系;采用SOD Assay Kit-WST试剂盒检测细胞中SOD2酶活力的变化;流式细胞术检测细胞中活性氧（ROS）随时间的变化。结果 各组细胞中sirt3和SOD2的mRNA水平和蛋白质水平均表现出不同程度的上升,与0 Gy组比较,分别在12 h（t=6.75、13.59、6.59、10.13,P<0.05）和24 h（t=6.80、8.73、11.09,P<0.05）达到最大值;sirt3 siRNA干扰和抑制剂处理结果显示sirt3是SOD2的上游调控因子;照射24 h后细胞中SOD2的活性显著增加,与0 Gy组比较,差异有统计学意义（t=46.04、23.19、26.28、14.70,P<0.05）,细胞中ROS水平也发生相应变化。结论 sirt3可能通过对细胞中SOD2的表达量及活性的调控加强抗氧化保护系统,为临床辐射防护和治疗提供实验依据。     

低温等离子体联合辐射对三种癌细胞系放射增敏效应的研究

目的 探讨低温等离子体对人肝癌细胞系HepG2、非小细胞肺癌细胞系A549及人宫颈癌细胞系HeLa的放射增敏作用及其机制。方法 应用克隆形成实验观察低温等离子体对3种细胞的放射增敏作用;流式细胞仪分析3种细胞周期分布、凋亡率及活性氧含量;Western blot法检测单纯照射(R组)、单纯等离子体作用(P组)及其联合辐射(P+R组)对3种细胞中Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响。结果 低温等离子体对HepG2、A549及HeLa细胞均有放射增敏作用,放射增敏比(SER_D0)分别为1.28、1.32、1.29。HepG2、A549及HeLa细胞P+R组G₂/M期比例、凋亡率及活性氧含量与R组比较均明显增高(t_G2/M期=9.52、8.24、9.53,P<0.05;t_凋亡率=10.67、38.56、6.74,P<0.05;t_{活性氧含量}=9.41、15.42、13.53,P<0.05)。HepG2和A549细胞P+R组G₂/M期比例、凋亡率及活性氧含量与P组比较均明显升高(t_G2/M期=8.75、20.37,P<0.05;t_凋亡率=8.43、9.99,P<0.05;t_{活性氧含量}=4.82、5.27,P<0.05)。3种癌细胞中P+R组Bcl-2蛋白表达较R组降低,而Caspase-3蛋白表达升高。结论 低温等离子体可提高HepG2、A549及HeLa细胞系的放射敏感性,其对HepG2及A549细胞系的放射增敏机制可能与抑制亚致死损伤修复,使细胞周期阻滞在G₂/M期,以及提高细胞内ROS水平诱导细胞凋亡有关。     

Phloroglucinol inhibits ultraviolet B radiation-induced oxidative stress in the mouse skin

Abstract

Purpose: Previously we demonstrated that phloroglucinol (1,3,5-trihydroxybenzene) protected human HaCaT keratinocytes against ultraviolet B (UVB, 280–320 nm)-induced oxidative stress in vitro by scavenging intracellular reactive oxygen species (ROS). The current study investigated whether phloroglucinol could similarly protect the mouse skin against UVB-induced oxidative tissue damage in vivo.

Materials and methods: Male 7-week-old Balb/c mice were divided into the following untreated normal control, phloroglucinol only-treated, vehicle plus UVB (30 or 60 mJ/cm²)-exposed, and phloroglucinol (10 or 50 mg/ml) plus UVB (30 or 60 mJ/cm²)-treated groups. Following UVB exposure, phloroglucinol or phosphate buffered saline vehicle was applied to the dorsal skin of each mouse daily for 3 days. Studies were conducted at 24 h after the last of the UVB exposures. Histopathological analyses of dorsal skin lesions were performed on all mice. In addition, the levels of UVB-provoked injury to cellular components, including DNA, proteins, and lipids were detected by levels of 8-oxoguanine (8-oxoG), protein carbonyls, and 8-isoprostane. Apoptosis were assessed by using western blot for B-cell lymphoma-2-associated X protein (Bax) and activated caspase-3 expression, by using immunohistochemistry.

Results: UVB radiation increased the thickness of the epidermis and the dermis, and also stimulated the accumulation of mast cells in the irradiated skin. However, treatment with phloroglucinol significantly decreased all of these parameters. Furthermore, phloroglucinol decreased UVB-provoked injury to cellular components, including DNA, proteins, and lipids; down-regulated the expression of phospho-histone H2A.X in the injured skin; and reduced the UVB-generated levels of 8-oxoG, protein carbonyls, and 8-isoprostane, which are all markers of oxidative stress. In addition, phloroglucinol attenuated the UVB-induced expression of the pro-apoptotic proteins, Bax protein, and activated caspase-3.

Conclusion: These results suggest that phloroglucinol safeguards the mouse skin against UVB-induced oxidative stress and apoptosis.     

富氢水减轻造血干祖细胞的辐射损伤

目的 探讨富氢水对辐射诱导的造血干祖细胞（HSPCs）损伤的保护作用。方法 32只C57BL/6小鼠根据体重分层随机区组法分为健康对照组、富氢水组、照射组、照射+富氢水组,共4组,每组8只。富氢水组和照射+富氢水组小鼠于照射前5 min至照后7 d,每天灌胃给予0.5 ml富氢水,其余小鼠每天灌胃给予0.5 ml蒸馏水,照射组和照射+富氢水组小鼠接受2 Gy的¹³⁷Cs γ射线全身照射。照后15 d取小鼠骨髓,检测骨髓中HSPCs比例、骨髓细胞的克隆形成和移植重建能力、骨髓中LSK细胞的活性氧（ROS）水平和细胞凋亡情况。结果 与照射组相比,照射+富氢水组小鼠骨髓中造血祖细胞和LSK细胞比例升高（t=-4.935、-7.898,P<0.05）,骨髓细胞形成克隆的数目增加（t=5.488,P<0.05）,竞争性骨髓移植后受体小鼠的供体嵌合率升高（t=-12.769,P<0.05）,骨髓中LSK细胞的ROS水平和细胞凋亡比例降低（t=4.380、3.954,P<0.05）。结论 富氢水对2 Gy电离辐射诱导的HSPCs损伤具有一定的保护作用。     

塞来昔布对正常脑胶质细胞和脑胶质瘤细胞放射增敏效应的比较及其机制

目的 探讨塞来昔布对正常少突胶质细胞（oln93）及脑胶质瘤细胞（u373）的放射增敏作用及其作用机制。方法 将两种细胞按空白处理、单独接受塞来昔布或X射线、塞来昔布联合X射线4种不同处理方式分为对照组、给药组、照射组和联合组,MTT法、克隆形成法对比两种细胞的增殖和放射敏感性,流式法测细胞的周期分布,Western blot法分析相关蛋白表达。结果 与未加药物相比,塞来昔布能抑制oln93细胞和u373细胞生长（t=2.215~30.996,P<0.05;t=0.383~11.732,P<0.05）,但相同药物浓度下抑制两种细胞差异无统计学意义。放射增敏比SER分别为1.13和1.21,并诱导G₀/G₁期阻滞（t=-6.1~5.141,P<0.05）。联合组与照射组比较,oln93细胞发生S期阻滞（t=-18.174,P<0.05）,CyclinA蛋白表达增加（t=-8.087,P<0.05）;u373细胞发生G₂/M期阻滞,Cyclin B1、DNA-PKcs、MRE11蛋白表达下降（t=-8.838~10.45,P<0.05）。结论 塞来昔布对u373的放射增敏作用比oln93细胞明显,其机制与调节细胞周期分布及DNA损伤修复有关。     

解耦联蛋白2对Siha细胞辐射敏感性的影响

目的探究沉默解耦联蛋白2(UCP2)联合辐照对Siha细胞辐射敏感性的影响,为宫颈癌放疗增敏提供新的靶点。方法将UCP2 siRNA转染入Siha细胞后进行X射线照射,通过集落形成、CCK-8、流式细胞实验来验证UCP2对Siha细胞辐射敏感性作用,检测线粒体膜电位和活性氧(ROS)的产生来进一步探讨相关机制。结果RT-PCR和Western blot表明Siha细胞经辐照后UCP2表达增加。成功构建UCP2沉默模型,沉默组(siUCP2)D0、Dq、N、SF2分别为1.54、1.31、2.31 Gy和0.52,空白对照组(mock)分别为2.50、3.64、4.30 Gy和0.83,阴性对照组(siNC)分别为3.34、2.16、1.91 Gy和0.69,沉默组较空白对照组和阴性对照组放射增敏比分别为0.62和0.46,并且沉默组细胞增殖活性较对照组明显降低(t=13.2,P<0.05);辐照后沉默组细胞凋亡水平显著高于对照组(t=3.14,P<0.05);照射后12 h,沉默组的ROS产量明显高于对照组(t=19.10,P<0.05);照射后24 h,沉默组的Siha细胞线粒体膜电位较对照组显著降低(t=8.87,P<0.05)。结论UCP2沉默后的Siha细胞辐射敏感性增强,并且可能会成为宫颈癌细胞辐射增敏的新靶点。     

BodyTom移动CT的辐射剂量和图像质量评估

目的 通过对新一代全身移动CT（BodyTom CT）与常用固定CT机的比较,对其辐射剂量和图像质量评估。方法 用CATPHAN 500性能测试体模评价图像质量,用常规的100 mm笔形电离室、CT聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）体部体模及头部体模测量辐射剂量（头模直径为160 mm,体部体模直径为320 mm,它们宽度均为140 mm）。结果 BodyTom CT的空间分辨率、密度分辨率与两类固定CT接近,差异无统计学意义（P>0.05）。对比度噪声比（CNR）降低20%左右：头部扫描模式下,明显低于飞利浦64排CT和东芝320排CT（重建函数soft时,t=-4.82、-6.98,P<0.05;重建函数standard时t=-20.60、-20.09,P<0.05）;体部扫描模式下,也明显低于飞利浦64排CT和东芝320排CT（重建函数soft时,t=-5.67、-12.82,P<0.05;重建函数standard时,t=-3.39、-9.18,P<0.05;重建函数sharp时,t=-3.88、-3.21,P<0.05）。BodyTom CT的辐射剂量高于固定CT,相同参数下体部体模比飞利浦64排CT机剂量高22.97%（t=9.48,P<0.05）,比东芝320排CT机高29.60%（t=11.66,P<0.05）;头模比飞利浦64排CT机高29.76%（t=23.44,P<0.05）,比东芝320排CT机高33.22%（t=23.11,P<0.05）。结论 移动CT的图像与常规CT图像质量相当时,辐射剂量增高20%以上。     

Enhanced autophagy protects hepatic cells from radiation injury

Objective To study the influence of radiation on autophagy and its protective effect on radiation injury of hepatic cells. Methods Autophagy in mouse liver tissues was examined by GFP-LC3 staining and Western blot. Radiation-induced hepatic injury was evaluated by ALT and AST in mouse serum, protein expressions, and H & E and TUNEL staining of liver tissue. L02 cells were used for in vitro study. Chloroquine and rapamycin were used to manipulate the level of autophagy. Results Total body irradiation (TBI) of 8 Gy caused an increase of autophagy in mouse liver tissue and AST level in serum(t=-7.47, P<0.05) at 12 h after irradiation. Irradiation significantly increased the apoptotic level in liver tissue as well. Inhibition of autophagy by chloroquine caused a further increases of AST[IR:(345.42±35.25)U/L vs. IR+CQ:(433.42±40.07)U/L, t=-2.86, P<0.05] and ALT[IR:(35.67±8.08)U/L vs. IR+CQ:(98.5±26.67)U/L, t=-3.09, P<0.05] in the serum, and it also promoted apoptosis in live tissue. However, rapamycin as an autophagy promoter showed protective effect for radiation-induced hepatic injury[AST:IR:(345.42±35.25)U/L vs. IR+Rap:(278.42±20.09)U/L, t=-2.86, P<0.05]. Similar changes of autophagy and apoptosis in L02 cells were also observed in the cells treated with chloroquine and rapamycin. Inhibition of autophagy by CQ caused an increase of ROS in vitro and in vivo and further increased ALT and AST levels in serum, reduced L02 cell viability. Activation of autophagy by Rap effectively reversed those changes. Conclusions Autophagy protects hepatic cells from radiation injury by decreasing ROS induction, which provides a potential target for the development of new clinical regimens against radiation induced liver injury.     

沉默细胞周期检测点激酶1(Chk1)对宫颈癌HeLa细胞放射敏感性的影响

目的 探讨siRNA沉默细胞周期检测点激酶1（Chk1）基因对宫颈癌HeLa细胞放射敏感性的影响。方法 合成Chk1基因的小分子干扰RNA（si-Chk1）,将si-NC或者si-Chk1分别转染到宫颈癌HeLa细胞中,0、2、4、6、8、10 Gy剂量的X射线照射细胞,RT-qPCR和Western blot检测转染后Chk1的mRNA水平和蛋白水平的表达,MTT方法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,克隆形成实验检测转染后HeLa细胞放射敏感性,Western blot检测转染后P21蛋白和抗凋亡基因Bcl-2蛋白的表达水平。结果 si-Chk1转染到HeLa细胞后,HeLa细胞Chk1基因的mRNA和蛋白表达水平均显著下降（t=2.12~5.86,P<0.05）,沉默Chk1的表达抑制了宫颈癌HeLa细胞的增殖（t=3.15~6.36,P<0.05）,同时降低宫颈癌HeLa细胞克隆形成能力（t=1.58~6.36,P<0.05）,上调P21（t=4.35,P<0.05）、下调Bcl-2蛋白（t=2.37,P<0.05）的表达水平。结论 siRNA沉默Chk1表达能够增强HeLa细胞放射敏感性。     

HAVCR2基因沉默对辐射诱发基因组不稳定肝细胞凋亡及细胞周期的影响

目的 研究HAVCR2基因沉默对辐射诱发基因组不稳定肝细胞凋亡及细胞周期的影响。方法 利用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）技术沉默辐射诱发基因组不稳定肝细胞中HAVCR2基因的表达,通过流式细胞术检测HAVCR2基因沉默对细胞周期及凋亡的影响;利用实时荧光定量PCR方法检测HAVCR2基因沉默后p53基因的表达变化。结果 慢病毒介导的RNAi技术能有效沉默HAVCR2基因的表达（t=19.21,P<0.05）,与对照组相比,HAVCR2基因的沉默可导致基因组不稳定肝细胞G₂期阻滞（t=-3.41,P<0.05）,细胞凋亡率降低（t=3.65,P<0.05）;实时荧光定量PCR检测结果表明,HAVCR2基因的沉默诱发基因组不稳定肝细胞p53基因的表达下调（t=4.82,P<0.05）。结论 HAVCR2siRNA使辐射诱发基因组不稳定肝细胞凋亡率降低,使基因组不稳定肝细胞发生G₂期的阻滞。