急性白血病儿童外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞和NK细胞的变化及其在白血病免疫中的意义

本研究观察急性白血病患儿外周血CD4^＋CCD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）及自然杀伤细胞（nature killer cell,NK）在不同病程阶段的变化,了解白血病患儿的免疫状态,以探讨CD4^＋CD25^＋Treg细胞及NK细胞在急性白血病肿瘤免疫中的意义。建立流式细胞术检测外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞和NK细胞的方法：检测急性白血病初诊患儿25例、完全缓解患儿28例及20例正常健康对照者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞及NK细胞的数量及比例。结果表明：初诊组、完全缓解组及对照组外周血CD4^＋CD25^＋CD127^＋占CD4^＋T细胞的比例分别为（9．55±2．41）％,（8．54±2．51）％和（6．25±0．85）％,在初诊患儿组和缓解患儿组高于正常对照组,且在初诊患儿组高于完全缓解组（P〈0．05）;同时,与正常对照组比较,急性白血病患儿的NK细胞数量减少,完全缓解后患儿组NK细胞数量仍低于正常对照（4．11±3．87％和10．41±7．20％w14．06±5．95％,P〈0．05）。结论：联合应用CD4、CD25及cDl27检测Treg细胞简便可行、重复性好、检测结果可靠、准确,CD4^＋CD25^＋CD127^＋T细胞可较好地反映CD4^＋CD25^＋Treg细胞的比例。急性白血病患儿外周血中Treg细胞数量升高,NK细胞数量降低,表明急性白血病患儿NK细胞免疫功能处于抑制状态。Treg细胞可能在白血病的发生、发展中起一定作用,参与NK细胞的调节可能是Treg细胞在白血病免疫中的一个环节。     

不同试剂检测北京地区健康献血者淋巴细胞CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋百分比参考值调查

目的探讨北京地区健康献血者CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋百分比的参考值范围，并对国产和进口的淋巴细胞免疫表型双染试剂进行比较。方法收集北京地区500例健康献血者全血标本，分别使用进1：3和国产的CD3FITC／CD4PE和CD3FITC／CD8PE双染试剂，应用同一台流式细胞仪进行检测，并对不同性别、民族和年龄段的结果以及不同试剂的结果进行比较。结果进口试剂检测的北京地区健康献血者CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋百分比以及CD3^＋CD4^＋／CD3^＋CD8^＋的范围（95％可信限）分别为22．92～49．96、14．86～41．70、0．37～2．47，不同年龄段（18-29、30～39与40岁以上组）各项指标均值的差异有统计学意义（P〈0.05），而不同性别的比较仅CD3^＋CD4^＋（％）的差异有统计学意义（P〈0.01），比较汉族（n=484）与少数民族（n=16）中各项指标的差异均无统计学意义（P〉0.05）。国产与进口试剂的检测结果显著相关，CD3^＋CD4^＋（％）、CD3^＋CD8^＋（％）以及CD3^＋CD4^＋／cD3^＋CD8^＋的r值分别为0．970、0．953、0．967。u检验结果显示CD3^＋CD4^＋（％）的差异无统计学意义（P〉0．05），而CD3^＋CD8^＋（％）、CD3^＋CD4^＋／CD3^＋CD8^＋的差异有统计学意义（P〈0．01）。结论初步建立北京地区健康献血者CD3^＋CD4^＋（％）、CD3^＋CD8^＋（％）的参考值，参考值受年龄、性别、民族、检测试剂和仪器等多种因素的影响。国产和进口淋巴细胞免疫表型双染试剂检测结果基本一致，相关性具有显著性。     

CD4^＋、CD25^＋调节性T细胞在重型乙型肝炎发病中的作用

目的探讨CD4＋、CD25＋调节性T细胞（CD4＋、CD25＋ Tr）在重型乙型肝炎病人发病机制中的作用。方法采用流式细胞术检测重型乙型肝炎病人及对照组外周血CD4＋、CD25＋ Tr的水平及应用PCR测定重型乙型肝炎病人及对照组外周血中HBVDNA滴度。结果重型乙型肝炎组外周血CD4＋、CD25＋ Tr的百分率为（2.63±0.83）%,较慢性乙型肝炎组的（4.15±1.17）%差异有显著性（P〈0.05）,较无症状HBV携带者组及健康对照组差异有非常显著性（P均〈0.01）;重型乙型肝炎组外周血HBVDNA滴度为1.2×10^4copies/ml,较慢性乙型肝炎组（2.3×10^6copies/ml）和无症状HBV携带者（7.8×105copies/ml）差异有非常显著性（P均〈0.01）;不同乙型肝炎病人外周血CD4^＋、CD25^＋ Tr的百分率与HBVDNA滴度正相关。结论CD4^＋、CD25＋^ Tr能抑制T细胞对HBV的免疫反应;重型乙型肝炎患者发病与CD4^＋、CD25^＋ Tr表达过低有关。     

类风湿关节炎患者外周血CD5^＋B细胞及其亚群变化和意义

目的通过检测外周血CD5^＋B淋巴细胞及其亚群变化,探讨其与类风湿关节炎（RA）发病及活动的关系。方法采用流式细胞仪技术对RA患者（RA组39例）和健康对照者（对照组18例）外周血CD5^＋B细胞（包括CD5^＋CD19^＋和CD5^＋CD20^＋亚群）进行定量分析,同时判断RA患者的疾病活动状态。结果外周血CD5^＋B细胞在RA组和对照组间差异无统计学意义（P〉0．05）。RA组外周血CD5^＋CD19^＋和CD5^＋CD20^＋B细胞亚群百分率显著高于对照组（P〈0．01）。RA活动组患者CD5^＋CD19^＋和CD5^＋CD20^＋B细胞亚群百分率与RA非活动组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CD5^＋CD19^＋和CD5^＋CD20^＋B细胞亚群可能参与RA发病,但与RA的活动无显著关联。     

炎症性肠病患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞的表达及意义

[目的]探讨CD4^＋CD25^＋Treg细胞在炎症性肠病（IBD）发病中的作用及其与疾病活动性的关系。[方法]采用三色流式细胞术检测40例IBD患者，其它肠病患者30例和健康对照者30例。IBD患者中活动期患者25例，缓解期患者15例，使用和未使用激素和／或免疫抑制剂活动期IBD患者分别为16例和9例。对以上各组外周血中CD4^＋CD25^＋T细胞亚群的百分率进行测定。[结果]疾病活动期IBD患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞比例明显低于其他肠病和正常对照组（P〈0．01），疾病活动期IBD患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞比例明显低于疾病稳定期患者（P〈0．01）。活动期IBD患者中使用激素和／或免疫抑制剂与未使用激素和／或免疫抑制剂结果差异有统计学意义。IBD患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞表达率与疾病活动指数评分呈负相关性。[结论]IBD患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞异常表达，可能参与疾病的发生发展，与疾病的活动性密切相关。     

大肠癌患者外周血CD4^＋CD25^＋CD127^lo/-调节性T细胞的含量及临床意义

目的探讨大肠癌患者外周血CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-调节性T细胞（Treg）的变化及意义。方法流式细胞术检测36例大肠癌患者及30例健康人外周血中CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg的变化；ELISA检测同一标本血清中转化生长因子β（TGF—β）的表达水平。结果36例大肠癌患者外周血中CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg占CD4^＋、淋巴细胞的比例为（6．92±1．31）％，与正常对照组（4．91±1，24）％相比差异有显著性（P〈0．05）。20例腺癌、7例黏液癌、9例未分化癌患者外周血中CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg比例分别为（6．81±1．52）％、（6.99±1．21）％、（7．08±1．17）％，各组间比较差异无显著性（P〉0．05），均高于对照组的（4．91±1．24）％，差异有显著性（P〈0，05）。IV期大肠癌患者外周血CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg高于Ⅱ期大肠癌患者（P〈0．05）。大肠癌组外周血清中TGF—β水平显著高于正常对照组，随着TGF—β水平增加，CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg比例逐渐增高，两者呈正相关。结论大肠癌患者外周血中CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg表达增高，与临床分期相关，但与组织学分类无关，导致机体免疫抑制，可能参与大肠癌发生。     

CD4^＋CD25^highT细胞在特发性血小板减少性紫癜发病机制中的作用

本研究探讨特发性血小板减少性紫癜（ITP）治疗前后患者外周血中CD4^＋CD25^highT细胞（CD25-PE染色阳性〉10^2为CD4^＋CD25^highT细胞）的表达情况及其可能的作用机制。应用免疫荧光标记和流式细胞术检测20例治疗前ITP患者、20例治疗后患者及14名正常人外周血中CD4^＋CD25^highT细胞的表达。结果表明：ITP患者治疗前外周血T细胞表面CD4^＋CD25^highT细胞表达水平明显低于治疗后组及正常对照组（P均〈0．01）；ITP治疗后患者组与正常对照组相比无显著性差异（P〉0．05）。结论：ITP治疗前患者外周血中CD4^＋CD25^highT细胞水平较正常对照组明显降低，而在治疗有效后有所升高。外周血CD4^＋CD25^highT细胞表达率与血小板数量呈正相关。CD4^＋CD25^highT细胞水平的检测可作为对ITP患者预后判断的一个有效指标，并可以作为免疫治疗的靶点进行进一步研究。     

卡介苗免疫大鼠的抗结核发病和CD4^＋CD8^＋双阳T细胞

目的：探讨卡介苗（BCG）对大鼠结核感染及CD4^＋CD8^＋双阳（DP）T细胞的影响。方法：60只PPD皮试阴性SD大鼠随机分成（1）卡介苗免疫（BCG）组、（2）BCG免疫后结核分枝杆菌（Mtb）攻击（BCG-TB）组、（3）Mtb攻击后不化疗（TB）组。BCG组、BCG-TB组于观察开始接种BCG。BCG-TB组、TB组于3个月末接受Mtb攻击。比较全部大鼠接种Mtb后的死亡率；实验开始和其后3、4、5、6、8个月末检测外周血中T细胞亚群。结果：BCG组、BCG-TB组无死亡；TB组感染后5个月内死亡率45％（9／20）。TB组死亡率高于BCG组和BCG-TB组，P〈O．01。实验开始时3个组组间对应参数比较差异均无显著性（P〉0．05）；3个月末BCG组、BCG-TB组之间各对应参数比较差异均无显著性（P〉O．05）；BCG组和BCG-TB组第3个月末与接种前比较，CD8^＋、DP升高，且显著高于TB组（Mtb干预之前），P〈0．01或P〈0．05。BCG组DP细胞于接种BCG后第6个月后开始回落，但仍显著高于接种前；BCG-TB组于Mtb攻击1个月后CD8^＋、DP继续升高，观察的第8个月CD8^＋、DP回落，但仍显著高于BCG接种前；TB组Mtb攻击后1个月末CD8^＋、DP有升高但低于BCG组和BCG-TB组，同时伴有CD3^＋、CD4^＋降低，差异均有显著性，P〈0．05或P〈0．01，此后维持在相近水平。Mtb攻击2个月末BCG-TB组DP高于BCG组和TB组，P〈0．05或P〈0．01。Mtb攻击5个月后3个组间DP差异无显著性（P〉0．05）。结论：BCG预防接种可保护Mtb感染宿主免于发病和死亡，增强抗结核保护性细胞免疫力表现之一为DP细胞升高，DP细胞是抗结核保护性免疫相关T细胞。DP细胞的形成与CD4^＋SP细胞上CD8^＋抗原表达有关。     

腹腔镜下直肠癌手术对免疫平衡及CD4^＋CD45RA^＋和CD4^＋CD45RO^＋T细胞的影响

目的通过分别测定腹腔镜手术和开腹手术直肠癌患者Th1／Th2平衡偏移情况及CD4^＋CD45R细胞的比例变化,以比较两种术式对直肠癌患者免疫功能的影响。方法分别采用流式细胞学和酶联免疫吸附法方法检测行腹腔镜下直肠癌手术和常规开腹手术2组患者术前1d、术后2、7d的外周血中CD4^＋IFN-γ^＋T和CD4^＋IL4^＋T细胞比率及IFN-γ和IL-4血清浓度,同时检测CD4^＋CD45RA^＋T细胞和CD4^＋CD45RO^＋T细胞在不同手术影响下的比例变化。结果开腹组术后2、7d的Th1细胞[（4．51±1．52）％,（7．26±2．59）％]与术前[（12．06±1．82）％]相比明显减少（P均〈0．05）,Tha2细胞[（6．70±2．41）％,（6．70±2．41）％]与术前[（4．47±1．90）％]相比明显增加（P均〈0．05）;开腹组术后2、7d的IFN-γ[（57．15±23．64）ng／L,（72．70±27．31）ng／L]与术前（123．47±32．52）ng／L相比明显下降（P均〈0．05）,而术后2、7d的IL-4[（55．55±7．29）ng／L,（57．56±7．13）ng／L]与术前[（41．87±5．83）ng／L]相比明显升高（P均〈0．05）;腹腔镜组Th1细胞、Th2细胞、IFN-γ和IL-4手术前后数量无明显变化（P均〉0．05）;术后7d开腹组CD4^＋CD45RA^＋T细胞（35．11±7．82）与术前（31．11±6．72）相比明显增加（P均〈0．05）,开腹组术后CD4^＋CD45RO^＋T细胞（61．21±9．13）较术前（68．11±11．42）减少（P〈0．05）。结论腹腔镜下直肠癌手术较开腹手术对机体免疫平衡影响较小,有利于保护直肠癌患者的细胞免疫功能。     

类风湿关节炎患者外周血CD23^＋／CD19^＋细胞表达状况的研究

目的研究外周血CD19^＋及CD23^＋／CD19^＋细胞的表达在类风湿关节炎（RA）发病机制和病情进展中的意义。方法RA组和正常对照组各20例,应用流式细胞术检测外周血中CD19^＋及CD23^＋／CD19^＋细胞的表达率,比较两组的差异,并分析其与血沉（ESR）、C反应蛋白（CRP）的相关性。结果RA组外周血CD19^＋及CD23^＋／CD19^＋细胞表达率均高于对照组,（10．236±2．212）％vs（6．870±1．052）％,（5．134±1．069）％vs（2．100±0．652）％（P〈0．05或〈0．01）。CD23^＋／CD19^＋细胞的表达率与实验室指标ESR、CRP均呈正相关（P〈0．01）,CD19^＋细胞表达率与ESR、CRP无明显相关关系（P〉0．05）。结论RA患者外周血存在CD19^＋及CD23^＋／CD19^＋细胞的表达增高,检测CD23^＋／CD19^＋细胞的表达情况可能对RA病情监控具有一定的应用价值。     

再生障碍性贫血外周血Th17和CD4~+ CD25~+ Treg细胞表达情况研究

本研究旨在探讨成人再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)外周血Th17和CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)表达情况。45例初发AA患者分为轻型AA(n=25)和重型AA(n=25)两组,15例正常人作为对照。应用流式细胞术检测AA患者外周血中Th17和CD4+CD25+Treg的比例,ELISA检测血清及刺激后外周血单个核细胞(PBMNC)上清液中的白介素(IL-17)、γ干扰素(IFN-γ)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,并与正常对照组比较。结果表明:重型AA(SAA)组外周血Th17细胞比例,血清中IL-17及IFN-γ表达高于轻型AA(MAA)和正常人组,而重型AA组外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例降低。与轻型AA和正常对照相比,重型AA患者单个核细胞培养后上清液中IL-17及IFN-γ表达水平显著增加。AA患者血红蛋白计数与Th17细胞及血清IL-17表达呈负相关,与CD4+CD25+Treg表达成正相关。结论:重型AA患者外周血Th17细胞应答增强,而CD4+CD25+Treg细胞缺乏,贫血的严重程度与外周血Th17/Treg免疫应答失衡密切相关。     

慢性乙型肝炎患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的检测与意义

目的：探讨慢性乙型肝炎患者外周血CD4^＋CD25＋调节性T细胞（Treg）频率的变化及其意义。方法：分离20例慢性乙型肝炎（CHB）患者和10例健康者的外周血单个核细胞,以CD4、CD25、CD127单克隆抗体标记细胞后以流式细胞仪检测并分析Treg频率。采用实时荧光定量RT—PCR检测血清HBVDNA载量。结果：CHB组的Treg频率高于健康对照组（P〈0．05）,HBeAg阳性CHB组Treg频率高于HBeAg阴性CHB组（P〈0．01）,乙型肝炎肝硬化组Treg频率高于无肝硬化CHB组（P＜0．01）;CHB患者的Treg频率与HBVDNA载量成直线正相关（r=0．87,P＜0．01）。结论：慢性乙型肝炎患者外周血Treg频率明显升高,且与病毒复制和肝脏慢性病变程度有关。     

异基因造血干细胞移植CD34^＋CD61^＋巨核系前体细胞与血小板植入的相关分析

本研究通过定量测定G—CSF动员后外周血及骨髓采集物的CD34^＋CD61^＋细胞，以探索巨核前体细胞CD34^＋CD61^＋亚群输注量与异基因外周血和／或骨髓移植后血小板恢复时间的相关性。24例不同血液病患者接受HLA全相合同胞、非血缘供者或单倍体相合同胞造血干细胞移植。20例可评估的患者依移植方法不同分为HLA全相合组和单倍体相合组，HLA全相合组采用PBSC移植方案，单倍体相合组采用PBSC＋BM联合移植方案，对外周血干细胞和骨髓样本CD34^＋CD61^＋亚群通过流式细胞仪立即测定或隔夜保存后测定。结果表明，单倍体相合组输注CD34^＋、CD34^＋CD61^、CD34^-CD61^＋细胞数中位值分别为6．24×10^6／kg（1．53—20．48）、66．19×10^4／k（8．16—493．83）、34．38×10^6／kg（14．71—109．16）；HLA全相合组中位值分别为4．88×10^6／kg（1．00—8．24）、14．16×10^4／kg（11．63—96．87）和13．50×10^6／kg（1．74—35．61）。中性粒细胞计数（ANC）〉0．5×10^9／L和血小板计数〉20×10^9／L的中位时间，单倍体相合组分别为18．5（11．00—29．00）和16．5（9．00—35．00）天；HLA全相合组为14．5（9．00—24．00）和10．5（6．00—37．00）天，血小板的植入时间在两组差别无显著性，中性粒细胞植入时间在HLA全相合组和单倍体相合组差异有显著性（p=0．048），对于两组中CD34^＋细胞量〉2×10^6／kg的受者血小板的植入时间分析，两组差别有显著性（p=0．006）。CD34^＋CD61^＋亚群与血小板植入的相关性明显优越于CD34^＋细胞，可评估20例（r=-0．449p=0．047CD34^＋细胞群），单倍体相合组12例CD34^＋CD61^＋亚群（r=-0．768p=0．004），HLA相同纽8例CD34^＋CD61^＋亚群（r=-0．747p=0．033），CD34^＋CD61^＋亚群与血小板的植入时间呈负相关关系，输注CD34^＋CD61^＋亚群细胞量大，血小板的植入时间缩短。结论     

尿毒症患者血液透析前后CD4＋CD25＋CD127lo变化的意义

【目的】探讨透析前后调节性T细胞（Treg）的变化的意义。方法采用三色荧光染色通过流式细胞仪（FCM）分析外周血中CD4＋CD25＋CD127lo细胞水平。结果①血液透析前、后、CKDⅢ-Ⅳ组Treg较正常组显著减少（P〈0.01）;血液透析前后差值,TregP〉0.05;尿素氮（BUN）、血磷（P）,P〈0.01。②根据患者Kt/V、尿素氮下降率〉65%等,将患者分为透析充分与透析不充分组。BuN透析后2组有显著性差异P〈0.01。结论尿毒症毒素可导致Treg不足,Treg参与了尿毒症的发生和发展,透析后并不能改善Treg的不足。     

CD4~＋ CD25~＋细胞和CD8~＋ CD28~-调节性T细胞在原发性肝癌患者外周血中的水平变化

目的研究原发性肝癌（HCC）患者外周血中CD4＋ CD25＋细胞和CD8＋ CD28-调节性T细胞的表达及意义。方法采用流式细胞仪测定93例HCC患者和24名健康人外周血中的CD4＋ CD25＋细胞和CD8＋ CD28-调节性T细胞水平。结果 HCC患者外周血中的CD4＋ CD25＋细胞[（14.39±4.58）%]和CD8＋ CD28-调节性T细胞[（24.05±5.64）%]表达均显著高于对照组[（8.37±1.73）%、（15.93±4.84）%,P〈0.05];CD8＋CD28-调节性T细胞与HCC的分期呈正相关（r=0.463,P〈0.001）。结论 CD4＋ CD25＋细胞和CD8＋ CD28-调节性T细胞在HCC患者外周血中呈高表达,且CD8＋ CD28-调节性T细胞与HCC的病情及预后相关。     

Castleman′s病患者的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的研究

目的：探讨Castleman′s病患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的变化及其与疾病的关系。方法：用流式细胞术对14例Castleman′s病患者及30例正常对照的外周血中CD4^＋CD25^lowT细胞、CD4^＋CD25^highT细胞、CD4^＋CD25^highFOXP3＋T细胞的比例进行检测。结果：局灶型Castleman′s病患者外周血中CD4^＋CD25^lowT细胞、CD4^＋CD25^highT细胞和CD4^＋CD25^highFOXP3＋T细胞比例在治疗前分别为（4.55±0.53）%、（0.73±0.09）%、（0.64±0.09）%;治疗后分别为（4.88±0.24）%、（1.0±0.10）%、（0.93±0.10）%,均低于正常对照组。治疗后这3种T细胞的比例较治疗前有显著升高（P〈0.05）。多中心型患者外周血中这3种T细胞比例在治疗前分别为（9.43±0.81）%、（2.79±0.17）%、（2.46±0.09）%;治疗后（8.82±1.01）%、（2.71±0.10）%、（2.23±0.10）%,均高于正常对照组。结论：CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在局灶型和多中心型Castleman′s病中的变化是不同的,这种不同的变化可能和这两型的临床表现和预后不同有关。