在晶状体损伤诱导的视神经长时程再生过程中MMP-12的表达规律

目的:探讨晶状体损伤诱导SD大鼠视神经钳压损伤后轴突长时程再生过程中MMP-12的表达变化。方法:建立SD大鼠视神经损伤模型和晶状体损伤模型,将实验动物24只分为对照组(仅开放眼眶暴露视神经)、晶状体损伤组、视神经损伤组、晶状体损伤联合视神经损伤组,每组各6只大鼠。采用有参转录组测序分析损伤视神经区域差异基因表达变化,筛选相关高表达差异基因,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)定量分析损伤区MMP-12的表达量变化。结果:转录组测序主成因分析表明,晶状体损伤联合视神经损伤是基因表达变化中的主要成因。基因表达差异分析显示,晶状体损伤联合视神经损伤组中,存在MMP-12基因表达上调。在建模成功后14、21d时,晶状体损伤联合视神经损伤组的MMP-12 mRNA表达量与对照组、视神经损伤组和晶状体损伤组比较上调(P<0.05);在7、28d时,各组间表达无差异。在建模成功后7、14、21d时,晶状体损伤联合视神经损伤组的MMP-12蛋白表达量与对照组和视神经损伤组比较上调(P<0.05);21d时,晶状体损伤联合视神经损伤组与视神经损伤组比较上...     

MMP-2和MMP-9在视网膜母细胞瘤中的表达及意义

目的探讨视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)中基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达及其与临床病程的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测41例Rb组织中MMP-2和MMP-9的表达;用HMIAS-2000型全自动医学彩色图像分析系统测量其平均光密度值。统计学方法比较不同临床和病理阶段Rb表达MMP-2和MMP-9的差异。结果在41例Rb组织切片中均有MMP-2和MMP-9的表达。有视神经浸润的肿瘤MMP-2和MMP-9表达水平明显高于无视神经浸润的肿瘤(P<0.01),处于眼外期的肿瘤MMP-2和MMP-9的表达水平明显高于眼内期和青光眼期的肿瘤(P<0.01)。结论Rb细胞内有MMP-2和MMP-9的表达。MMP-2和MMP-9的表达水平与视神经浸润和临床分期存在密切的关系,提示其表达水平与该肿瘤的浸润与发展有关。     

塞来昔布与羊膜匀浆提取液对兔角膜热烧伤后角膜新生血管面积及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响

目的 比较塞来昔布与羊膜匀浆提取液对兔角膜热烧伤后角膜新生血管(comeal neovascularization,CNV)面积及基质金属蛋白酶-2(matrix metallo-proteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响,为临床上塞来昔布治疗CNV提供理论依据.方法 建立36只兔角膜热烧伤动物模型,随机分为3组:阴性对照组、羊膜匀浆提取液组、塞来昔布组,每组12只,8只用于观察,4只用于取材.各组兔均于造模后第1天开始球结膜下注射,至造模后第14天;阴性对照组注入90g· L-1生理盐水0.1 mL,羊膜匀浆提取液组注入羊膜匀浆提取液0.1 mL,塞来昔布组注入8 mg·mL-塞来昔布溶液0.1 mL.对比热烧伤后4d、7d、14 d在裂隙灯显微镜下所观察到的各组角膜的组织形态及新生血管的生长状况,并测算CNV面积;各组均于热烧伤后第7天随机取4只兔完整角膜,行免疫组织化学染色并用计算机图像分析系统检测MMP-2、MMP-9的表达.结果 角膜热烧伤后第4天,阴性对照组、羊膜匀浆提取液组、塞来昔布组都可见不同程度的角膜水肿,角膜缘血管充血扩张,新生的小血管芽呈毛刷状,垂直角膜缘切线向内生长.热烧伤后4d、7d、14 d,CNV面积阴性对照组为(11.32±1.11)mm2、(38.49±4.64)mm2、(43.30±4.39) mm2;羊膜匀浆提取液组为(9.69±1.30) mm2、(31.15±4.85) mm2、(37.19±5.27) mm2;塞来昔布组为(8.47±1.20) mm2、(30.31±4.93) mm2、(36.69±3.54)mm2.热烧伤后4d、7d、14 d,阴性对照组的CNV面积均明显大于羊膜匀浆提取液组和塞来昔布组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);羊膜匀浆提取液组的CNV面积与塞来昔布组相比,差异均无统计学意义(均为P＞0.05).热烧伤后第7天MMP-2和MMP-9表达阴性对照组大于羊膜匀浆提取液组和塞来昔布组,差异均有统计学意义(均为P ＜0.05);羊膜匀浆提取液组与塞来昔布组相比,差异均无统计学意义(均为P ＞0.05).结论 塞来昔布与羊膜匀浆提取液均能有效抑制角膜热烧伤后新生血管的生长,可能与其抑制MMP-2、MMP-9在热烧伤后角膜中的表达有关.     

基质金属蛋白酶-2和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在视网膜母细胞瘤中的表达

目的：：探讨基质金属蛋白酶-2( matrix metalloproteinase-2, MMP-2)和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)在视网膜母细胞瘤( retinoblastoma,Rb)中的表达及其与临床病程的关系。方法：用免疫组织化学 SABC 法分别检测39例 Rb 中MMP-2及EMMPRIN的表达;用LEICA IM 50型全自动医学图像分析系统测量其平均灰度值,比较不同临床和病理阶段Rb中表达MMP-2和EMMPRIN的差异及二者阳性表达之间的关系。结果：Rb患者39例中MMP-2阳性表达35例(灰度值为109.64±14.52),占90％;EMMPRIN阳性表达33例(灰度值为108.01±13.60),占85％;青光眼期Rb中MMP-2和EMMPRIN 的表达(灰度值分别为108.21±11.47,107.56±14.32)明显高于眼内期(灰度值分别为121.13±11.32,119.34±12.66;P<0.01,P<0.05),眼外期二者表达(灰度值分别为91.03±11.71,92.26±12.93)明显高于青光眼期(P<0.01,P<0.05);视神经浸润组Rb中MMP-2和EMMPRIN的表达(灰度值分别为103.89±13.39,105.23±14.00)明显高于无视神经浸润组(灰度值分别为118.39±15.11,117.53±16.13;P<0.01,P<0.05)。结论：MMP-2及EMMPRIN的表达水平可能与Rb的浸润转移有关。     

MMP-2和MMP-14在视网膜母细胞瘤中的表达及意义

目的:探讨视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-14的表达及其与临床病程的关系。方法:应用免疫组织化学SP法检测50例Rb组织中MMP-2和MMP-14的表达;用HMIAS-2000型全自动医学彩色图像分析系统测量其平均光密度值。统计学方法比较不同临床和病理阶段Rb表达MMP-2和MMP-14的差异。结果:患者50例Rb组织切片中MMP-2阳性表达38例,占76%;MMP-14的阳性表达41例,占82%;有视神经浸润的肿瘤MMP-2和MMP-14表达水平明显高于无视神经浸润的肿瘤(P<0.01),处于眼外期的肿瘤MMP-2和MMP-14的表达水平明显高于眼内期和青光眼期的肿瘤(P<0.01);Rb中MMP-2和MMP-14的阳性表达水平呈密切相关(P<0.01)。结论:MMP-2和MMP-14的表达水平与视神经浸润和临床分期存在密切的关系,提示其表达水平与该肿瘤的浸润与发展有关。     

注射用盐酸多西环素对兔角膜新生血管的抑制作用

目的　研究基质金属蛋白酶抑制剂盐酸多西环素对兔角膜新生血管（corneal neovascularization,CNV）生长的影响。方法　成年大耳白兔33只（66眼）,随机分为对照组、碱烧伤组和多西环素组。对照组3只（6眼）不做处理。剩余30只（60眼）利用1 mol·L^-1NaOH滤纸片建立双眼碱烧伤模型,右眼为多西环素组,左眼为碱烧伤组。碱烧伤组不给予药物治疗,多西环素组隔日结膜下注射0.1 mL注射用盐酸多西环素（10 g·L^-1）。观察兔CNV的生长情况,应用免疫组织化学化法检测角膜组织中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）、组织型金属蛋白酶抑制剂-2（tissue inhibitors of metalloproteinase-2,TIMP-2）的表达情况。结果　造模后3 d,可见碱烧伤组和多西环素组CNV长入透明角膜。造模后4 d、7 d、14 d、21 d,多西环素组CNV的面积分别为（6.15±2.85）mm²、（14.39±4.04）mm²、（18.07±5.74）mm²、（19.44±6.95）mm²,碱烧伤组CNV的面积分别为（17.00±4.60）mm²、（37.93±6.91）mm²、（42.25±9.32）mm²、（38.81±4.87）mm²,各时间点多西环素组CNV的面积均明显小于碱烧伤组（均为P<0.05）。造模后1 d、4 d、7 d、14 d、21 d,多西环素组角膜上皮层VEGF灰度值分别为167.74±10.59、140.14±12.14、128.69±9.21、103.06±8.29、176.16±9.72,碱烧伤组角膜上皮层VEGF灰度值分别为129.79±10.97、100.51±21.73、81.38±9.98、62.54±10.30、148.81±8.65,造模后各个时间点多西环素组VEGF的表达均明显少于碱烧伤组（均为P<0.05）。造模后4 d、7 d、14 d,多西环素组角膜上皮层MMP-2灰度值分别为83.50±14.81、123.42±16.20、110.90±8.98,碱烧伤组角膜上皮层MMP-2灰度值分别为65.27±12.84、91.31±13.22、94.28±6.46,造模后4 d、7 d、14 d多西环素组角膜上皮层MMP-2表达均明显低于碱烧伤组（均为P<0.05）。造模后21 d,角膜上皮层TIMP-2的表达最强,但造模后多西环素组角膜上皮层TIMP-2表达和碱烧伤组表达强度相似,两组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论　VEGF、MMP-2、TIMP-2在CNV发生发展中发挥着重要的调控作用,盐酸多西环素可通过抑制基质胶原纤维的降解来降低炎症反应,并通过抑制角膜碱烧伤后兔角膜组织中VEGF、MMP-2的表达,进而抑制CNV的发生发展。     

层粘连蛋白对人视网膜母细胞瘤株基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的影响

目的研究层粘连蛋白(laminin,LN)对人视网膜母细胞瘤株(Hxo-Rb44)基质金属蛋白酶-2(matrix metallopro-teinase,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase,MMP-9)及其mRNA表达的影响。方法在体外培养的人视网膜母细胞瘤细胞株(Hxo-Rb44)内分别加入含0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/mlLN的无血清RPMI-1640培养基,培养24h后,分别利用免疫组化SP染色法和PT-PCR检测每个实验组Hxo-Rb44表达MMP-2,MMP-9及其mRNA的含量,统计学方法比较不同实验组Hxo-Rb44表达MMP-2,MMP-9及其mRNA的差异。结果视网膜母细胞瘤细胞经LN刺激后,细胞内MMP-2和MMP-9及其mRNA表达均增加,免疫组化结果显示5μg/ml、10μg/ml、20μg/mlLN处理组MMP-2和MMP-9的染色灰度值分别是178.1±11.7和167.0±15.7、147.9±13.4和140.3±12.0、114.4±13.6和104.0±10.6,和对照组相比,差异有显著性(P<0.05),且LN浓度越高,其表达越强。5μ/ml、10!g/ml、20!g/mlLN处理组的MMP-2/β-actin、MMP-9/β-actin灰度值比值分别是0.181±0.016和0.254±0.023、0.201±0.021和0.287±0.020、0.243±0.019和0.320±0.022,与对照组相比,差异均有显著性(P<0.05),且随着LN浓度增高而增高,呈明显的量效关系。结论LN可诱导视网膜母细胞瘤细胞中表达的MMP-2和MMP-9及其mRNA增加,并呈剂量依赖型。提示LN对视网膜母细胞瘤的侵袭和转移可能具有促进作用。     

MMP-1、MMP-3、TIMP-1对外伤性PVR的影响研究

目的:观察外伤性PVR大鼠和外伤后应用人工合成基质金属蛋白酶抑制剂(GM6001)中大鼠视网膜组织MMP-1、MMP-3及TIMP-1在不同病程中的表达变化。方法:将180只SD大鼠随机分为正常对照组、外伤性PVR组和外伤后应用GM6001组。应用免疫组化法在不同时间对各组大鼠视网膜组织MMP-1、MMP-3及TIMP-1的表达进行定性、定位、半定量检测。结果:1)MMP-1、MMP-3、TIMP-1主要表达于视网膜组织的视锥视杆层、视网膜外网状层、视网膜内网状层、神经纤维层。2)各个亚组在正常对照组、外伤后应用GM6001组MMP-1、MMP-3微弱表达。3)MMP-3在外伤性PVR组1,3,7d显著表达,MMP-1在外伤性PVR组3,7,14d显著表达(P<0.05)。TIMP-1在外伤性PVR组与外伤后应用GM6001组的各个亚组均有明显表达(P<0.01)。MMP-3/TIMP-1的比率在外伤性PVR组1,3,7d增高(P<0.05)。MMP-1/TIMP-1的比率在外伤性PVR组3,7,14d增高(P<0.05)。结论:MMP-1、MMP-3与PVR形成的病理过程有关,TIMP-1与二者特异性结合抑制其活性。GM6001通过调节MMP-1/TIMP-1和MMP-3/TIMP-1达到平衡,能抑制PVR的发生和发展,干预PVR的发展进程。     

MMP-2和VEGF在视网膜新生血管的表达

目的检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)在视网膜新生血管中的表达,探讨两者的相互关系。方法 取7 d龄C57BL/6J小鼠40只,随机分为高氧组和对照组,每组各20只。建立高氧诱导的视网膜新生血管小鼠模型。采用ADP酶组织化学染色、HE染色和免疫组化方法分别观察2组视网膜血管的变化、计数突破视网膜内界膜的内皮细胞核数目和检测MMP-2、VEGF的表达。结果 高氧组视网膜铺片可见大量视网膜新生血管形成,对照组未见新生血管形成;高氧组突破视网膜内界膜内皮细胞核数目为14(14.230±5.388),与对照组数目0(0.110±0.386)相比差异有统计学意义(t=23.537,P<0.001);对照组和高氧组视网膜组织中VEGF的积分光密度值分别为36.81±14.60、60.85±24.55,差异有统计学意义(t=3.348,P<0.01);对照组和高氧组视网膜组织中MMP-2的积分光密度值分别为16.33±4.13、21.12±6.29,差异有统计学意义(t=3.160,P<0.01)。高氧组视网膜组织中MMP-2和VEGF的表达呈正相关(r=0.633,P<0.01)。结论 在ROP小鼠模型的视网膜组织中,VEGF、MMP-2的表达同步升高,二者的高表达可能与视网膜新生血管形成密切相关。     

TIMP-2基因转染FDM豚鼠模型早期后极部巩膜中MMP-2的动态表达

目的通过对形觉剥夺性近视豚鼠模型脉络膜上腔注射外源性组织金属蛋白酶抑制剂-2(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases,TIMP-2)基因,观察近视早期后极部巩膜中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的表达,探讨外源性TIMP-2基因对后极部巩膜MMP-2表达的影响。方法采用单眼遮盖法对3周龄三色豚鼠进行形觉剥夺,2周后从模型建立成功的豚鼠中随机选取60只,随机分成4组,分别为TIMP-2组(脉络膜上腔注射外源性TIMP-2质粒)、空质粒组(脉络膜上腔注射空质粒)、生理盐水组(脉络膜上腔注射生理盐水)、对照组,每组15只。TIMP-2组、空质粒组、生理盐水组对右眼完成注射操作后继续遮盖,其中TIMP-2组左眼为自身对照组;对照组右眼持续遮盖不做任何处理。分别于注射后2d、7d、14d采集后极部巩膜标本,用RT-PCR及Western blot法检测MMP-2 mRNA、TIMP-2 mRNA及MMP蛋白的表达,统计分析各组之间不同时间的表达差异。结果 TIMP-2组注射后2d与7dMMP-2 mRNA及蛋白表达变化差异有统计学意义(均为P<0.05),7d与14d表达差异无统计学意义(均为P>0.05)。注射后2d、7d、14d,TIMP-2组与自身对照组、对照组之间比较,MMP-2 mR-NA及蛋白的表达变化均有统计学意义(均为P<0.05);空质粒组、生理盐水组、对照组之间比较,差异无统计学意义(均为P>0.05)。TIMP-2组注射后2d与7dTIMP-2 mRNA表达变化差异有统计学意义(P<0.05),7d与14d差异无统计学意义(均为P>0.05)。注射后2d、7d、14dTIMP-2组与自身对照组、对照组之间比较,TIMP-2 mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05);空质粒组、生理盐水组、对照组之间比较,TIMP-2 mRNA表达差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论外源性TIMP-2基因转染能明显抑制形觉剥夺性近视眼后极部巩膜MMP-2 mRNA及蛋白的表达,这种改变早期就已经开始发生,随着转染时间的延长出现先降低后增高的变化。     

外伤性PVR大鼠视网膜中MMP-9、TIMP-1的表达及意义

目的:为研究外伤性PVR和外伤后应用GM6001干预大鼠视网膜组织MMP-9及TIMP-1、在不同病程中的表达变化。方法:360只SD大鼠随机分为正常对照组、外伤性PVR组和外伤后应用GM6001组。正常对照组玻璃体腔内注射生理盐水;外伤性PVR组玻璃体腔内注射PRP血浆制成外伤性PVR大鼠动物模型;外伤后应用GM6001组在外伤后12h玻璃体腔内注射GM6001。应用免疫组化染色方法分别于1,3,7,14,21,28d对各组大鼠视网膜组织MMP-9及TIMP-1的表达检测。结果:免疫组化结果示MMP-9、TIMP-1蛋白均主要表达于视锥视杆层、视网膜内外网状层、神经纤维层。MMP-9在正常对照组、外伤后应用GM6001组的各个亚组微弱表达。MMP-9在外伤性PVR组1,3,7d显著表达,与正常对照组和外伤后应用GM6001组的差异有显著性(P(0.01),随着病程的延长,MMP-9的表达呈进行性减弱的趋势;TIMP-1在外伤性PVR组与外伤后应用GM6001组的各个亚组均有明显表达,与正常对照组的差异均有显著性(P(0.01)。MMP-9/TIMP-1比率在外伤性PVR组1,3,7d增高,与正常对照组和外伤后应用GM6001组的差异均有显著性(P(0.05)。结论:MMP-9、TIMP-1参与了PVR发生发展的病理过程,MMP-9/TIMP-1比率增高促进PVR发生发展的进程。人工合成基质金属蛋白酶抑制剂GM6001可促进MMP-9/TIMP-1动态平衡的重新建立,从而在外伤性PVR的防治中起重要作用。     

富血小板血浆在兔外伤性视神经损伤中的修复作用及其机制

目的研究自体富血小板血浆(PRP)对兔外伤性视神经损伤及视网膜的修复作用及机制。方法选取清洁级成年新西兰白兔40只,构建兔右眼视神经钳夹损伤模型,将造模成功的36只新西兰白兔按照随机数表法随机分为模型对照组、生理盐水对照组和PRP组,每组12只,均以右眼为实验眼,另取12只健康未造模兔作为正常对照组。抽取兔自体血制备PRP,造模后每隔1 d分别在PRP组和生理盐水组实验眼球后近视神经损伤处注射20μl PRP和相同体积的生理盐水,共注射10次。正常对照组实验兔不做注射干预。分别在造模后30 d和60 d过量麻醉法处死各组3只实验兔,摘取右侧眼球和视神经,采用组织病理学方法观察视网膜和视神经的形态学变化,并计算视网膜神经节细胞(RGCs)密度、视网膜神经纤维层(RNFL)厚度变化;采用免疫组织化学染色法比较凋亡蛋白家族caspase-3、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的表达;采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测视神经和视网膜脑源性神经生长因子(BDNF)和生长相关蛋白43(Gap-43)的mRNA和蛋白表达。结果PRP组造模后30 d和60 d时RNFL厚度值分别为(6.60±1.16)和(6.89±1.21)μm,均大于模型对照组相应时间点的(4.80±0.43)和(2.18±0.23)μm,差异均有统计学意义(均P<0.05)。PRP组造模后30 d和60 d时RGCs数量分别为(13.00±1.00)/视野和(20.00±2.65)/视野,均多于模型对照组相应时间点的(6.33±0.58)和(10.33±1.53)/视野,差异均有统计学意义(均P<0.05)。PRP组造模后60 d时的RGCs数量较造模后30 d时显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);造模后30 d和60 d,生理盐水组、模型对照组视网膜caspase-3蛋白阳性表达A值均明显高于正常对照组和PRP组,PRP组Bcl-2蛋白阳性表达A值均较模型对照组和生理盐水组明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。PRP组视网膜和视神经中BDNF和Gap-43的mRNA水平和蛋白含量均较模型对照组有不同程度增高,PRP组造模后60 d时各组织中BDNF和Gap-43的mRNA和蛋白相对表达量均较造模后30 d时水平有所降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论PRP可有效抑制视神经损伤后RGCs的凋亡及视网膜的继发性损伤,促进RGCs抗凋亡作用,从而减缓外伤性视神经病变后的视网膜和视神经损伤,同时通过上调神经生长因子的表达促进视神经和视网膜的修复。     

MMP-9、TIMP-3在小鼠脉络膜新生血管形成中的作用(英文)

目的:研究MMP-9及TIMP-3 mRNA在实验性小鼠CNV形成过程中的表达,探讨二者在CNV发生机制中的作用。方法:使用半导体二极管激光器(810nm)对C57BL/6J小鼠视网膜进行照射(120mW,75μm,0.1s)以诱导CNV形成,分别于激光后1,3d;1,2,4wk取出眼球,采用原位杂交技术及图象分析对MM-9、TIMP-3 mRNA的表达情况进行检测。结果:MMP-9、TIMP-3 mRNA表达在CNV形成过程中均有一动态过程,MMP-9 mRNA水平1,2,4wk>3d>1d(P<0.05),而TIMP-3mRNA表达3d;1,2,4wk>1d(P<0.05)。结论:MMP-9与TIMP-3 mRNA表达变化的失衡促使基质降解作用的发挥,在CNV的形成中可能发挥了一定作用。     

热烧伤后的人角膜组织中基质金属蛋白酶-2、-9表达的研究

目的:研究热烧伤后人角膜组织中的基质金属蛋白酶-2、-9(MMP-2、MMP-9)的表达与分布,探讨其含量的变化与角膜病变的相关性。方法:收集铁水烫伤后行角膜移植患者病变角膜19例,正常角膜组织10例。应用免疫组化染色方法检测MMP-2、MMP-9在角膜各层次中的分布与表达,应用图像分析系统进行半定量分析。结果:MMP-2、MMP-9在正常角膜组织中均未见阳性表达,平均灰度值分别为117.8188±3.7967,119.1902±0.9679。热烧伤后角膜组织中,MMP-2的阳性表达主要分布于角膜基质层,平均灰度值为94.4197±5.8327;MMP-9的阳性表达主要分布于角膜上皮层和基底膜附近,平均灰度值为115.0188±0.7149。将正常角膜组织中和病变角膜组织中两种酶的平均灰度值分别进行统计学分析,P值均<0.05。随着病程的发展,在病变角膜组织中MMP-2的阳性表达先呈现逐渐增高趋势14d后逐渐下降,角膜基质层溶解达高峰时阳性表达的量最高;MMP-9在患病初期角膜基底膜病变明显时表达较高,后期逐渐下降。结论:MMP-2、MMP-9对热烧伤后的人角膜组织病变的发展起重要的作用。MMP-2主要参与角膜基质层的损害,MMP-9主要参与角膜上皮层和基底膜的损害。     

MEK/ERK和PI3K/Akt通路对大鼠脉络膜新生血管中DDR2和MMP-13表达的调控作用

背景 研究表明盘状结构域受体2(DDR2)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)在肿瘤新生血管发生中具有重要作用,是相关疾病治疗的关键靶点,但DDR2和MMP-13在脉络膜新生血管(CNV)发生中的作用尚不清楚.目的 探讨DDR2和MMP-13在大鼠CNV中的表达特点以及MEK/ERK和PI3 K/Akt通路对DDR2及MMP-13表达的调控作用.方法 采用532 nm倍频激光视网膜光凝法制备棕色挪威(BN)大鼠CNV模型,将78只BN模型鼠按照随机数字表法分为正常对照组(n=7)、模型对照组(n=39)、PD98059(MEK1抑制剂)组(n=16)和LY294002(PI3K抑制剂)组(n=16),PD98059组和LY294002组大鼠分别于光凝后1d、7d玻璃体内注射5 mmol/L PD98059 3μl或5 mmol/L LY294002 3μl.分别于光凝前和光凝后1、3、7、14 d用过量麻醉法处死动物并制备样本和切片,采用Western blot法检测各组大鼠眼杯中ERK、p-ERK、Akt和p-Akt蛋白的表达变化,采用逆转录PCR(RT-PCR)法检测各组大鼠眼杯中DDR2 mRNA和MMP-13 mRNA的表达变化,采用组织病理学方法测定各组大鼠CNV厚度,采用免疫组织化学和免疫荧光染色法分别定位和测定大鼠CNV区域DDR2和MMP-13的表达.结果 光凝后3d,光凝局部细胞增生,光凝后7 d CNV形成,至光凝后14 d CNV趋于稳定.免疫组织化学染色结果显示,DDR2在正常大鼠视网膜血管内皮细胞层、视网膜神经节细胞(RGCs)层和内核层细胞中呈弱表达,但在CNV中呈强阳性表达;MMP-13在正常对照组大鼠视网膜内界膜层、光感受器层和巩膜层均呈强阳性表达,在模型对照组中呈强阳性表达.免疫荧光结果显示,CNV组织中DDR2和MMP-13共表达.RT-PCR结果显示,模型对照组光凝后1、3、7、14 d DDR2 mRNA相对表达水平分别为55.22±4.03、47.74±2.23、14.82±4.56和5.59±2.47,MMP-13 mRNA相对表达水平分别为25.54±3.83、43.51±4.36、10.90±4.00和5.23±3.23,与正常对照组相比,差异均有统计学意义(均P＜0.05).免疫荧光结果显示,模型对照组光凝后3、7、14 d大鼠CNV区DDR2相对荧光密度单位(RFU)值分别为2.73±0.53、5.21±0.31和3.22±0.33,MMP-13 RFU值分别为1.66±0.17、3.57±0.44和2.67±0.21,组间总体比较差异均有统计学意义(F=81.01,P＜0.05;F=40.31,P＜0.01);PD98059组和LY294002组光凝后14 d CNV区DDR2 RFU值分别为1.14±0.19和1.03±0.14,与模型对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05),MMP-13RFU值分别为1.37±0.25和1.24±0.20,与模型对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).Western blot结果显示,模型对照组光凝后7d眼杯中p-ERK和p-Akt水平升高,与正常对照组大鼠相比差异均有统计学意义(均P＜0.05);至光凝后14 d恢复至近正常水平,与正常对照组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).PD98058组大鼠眼杯p-ERK水平明显下降,注射后7d、14 d PD98058组大鼠眼杯中p-ERK表达的抑制率分别为71.58％和65.21％,PD98058组7d与模型对照组7d比较、PD98058组14 d与模型对照组14 d比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).LY294002组大鼠眼杯中p-Akt表达水平明显下降,LY294002注射后7d、14d大鼠眼杯中p-Akt表达的抑制率分别为65.62％和67.04％,LY294002组7d与模型对照组7d比较、LY294002组14d与模型对照组14 d比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).各组眼杯中ERK和Akt的表达水平总体比较差异均无统计学意义(F=0.62,P＞0.05;F=0.81,P＞0.05).模型对照组、PD98059组和LY294002组光凝后14 d大鼠CNV厚度分别为(119.19±18.03)、(51.00±11.29)和(59.18±9.00) μm,总体比较差异有统计学意义(F=29.376,P＜0.05),与模型对照组比较,PD98059和LY294002注射后CNV厚度分别减少57.21％和50.34％,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 DDR2和MMP-13在大鼠CNV中表达上调,参与CNV的形成;MEK/ERK和PI3K/Akt通路通过参与调控DDR2和MMP-13在CNV局部的表达而抑制CNV的发生和进展.     

房角关闭对兔眼小梁组织MMP-2、TIMP-2及AQP-1表达的影响

目的建立兔眼房角关闭模型,比较基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)、水通道蛋白-1(AQP-1)在对照组和模型组表达水平的变化,探讨房角关闭对小梁网功能变化的影响。方法实验研究。健康成年新西兰大白兔24只(48只眼)随机分为4组,每组6只(12只眼),每只随机选取一眼作为实验组,予玻璃体腔注入透明质酸钠联合前房放液,建立房角关闭模型,另一眼不作处理为对照组,应用免疫荧光和计算机图像分析技术分别于造模成功后1个周、1个月、2个月、4个月观察各组MMP-2、TIMP-2、AQP-1的表达情况。结果正常对照组和各实验组均有MMP-2、TIMP-2、AQP-1的表达。MMP-2在实验组的表达量随造模时间延长先升高后降低,各组与正常对照组相比均有明显差异(P<0.05);TIMP-2在实验组的表达量随造模时间延长先升高后降低,各组与正常对照组相比均有明显差异(P<0.05);MMP-2/TIMP-2比值在造模后1个周、1个月组与正常对照组相比无明显差异(P>0.05),而2个月组、4个月组与正常对照组相比差异明显(P<0.05);AQP-1在实验组的表达量随造模时间延长先升高后降低,各组与正常对照组相比均有明显差异(P<0.05)。结论房角关闭早期,小梁网因代偿机制,仍存有部分功能,应尽早采取干预措施。     

基质金属蛋白酶在兔干眼症动物模型中的表达

目的检测兔干眼动物模型角膜组织中基质金属蛋白酶-1(matrix metalloprotein-ase,MMP-1)和MMP-9的表达,探讨MMP在干眼发病机制中的作用。方法新西兰大白兔共30只,采用摘除泪腺、第3眼睑及Harders’腺的方法造模。造模前及造模后第3天、第5天、第7天、第14天、第21天、第28天行ShirmerⅠ试验和荧光素角膜染色检查。分别于造模后第14天、第28天各取15只实验兔角膜组织行免疫组织化学检查。结果造模前兔ShirmerⅠ试验值(16.4±3.8)mm,造模后第3天、第5天、第7天、第14天、第21天、第28天分别为(13.1±3.2)mm、(10.5±2.2)mm、(8.4±1.7)mm、(6.5±2.1)mm、(5.6±2.4)mm、(5.2±2.3)mm,造模后ShirmerⅠ试验值随着时间的推移逐步下降,7d后稳定在10mm以下。造模后各时间点ShirmerⅠ试验值与造模前比较均存在显著性差异(均为P<0.01)。造模前兔角膜荧光素染色阴性,造模后出现阳性染色,并随着时间的推移染色程度逐渐加重。造模后第14天、第28天术眼角膜光学显微镜下可见明显组织结构异常,且MMP-1和MMP-9的表达呈高度相关性,随时间的推移均显著提高。结论 MMP-1和MMP-9均参与了干眼的病理发展过程。     

MMP-9、TIMP-3在小鼠脉络膜新生血管形成中的作用

目的：研究MMP-9及TIMP-3 mRNA在实验性小鼠CNV形成过程中的表达,探讨二者在CNV发生机制中的作用。 方法：使用半导体二极管激光器（810nm）对C57BL/6J小鼠视网膜进行照射（120mW,75μm,0.1s）以诱导CNV形成,分别于激光后1,3d;1,2,4wk取出眼球,采用原位杂交技术及图象分析对MM-9、TIMP-3 mRNA的表达情况进行检测。 结果：MMP-9、TIMP-3 mRNA表达在CNV形成过程中均有一动态过程,MMP-9 mRNA水平1,2,4wk〉3d〉1d（P〈0.05）,而TIMP-3mRNA表达3d;1,2,4wk〉1d（P〈0.05）。 结论：MMP-9与TIMP-3 mRNA表达变化的失衡促使基质降解作用的发挥,在CNV的形成中可能发挥了一定作用。     

晶状体损伤对视神经损伤后再生影响的研究

目的观察单纯视神经损伤及视神经损伤联合晶状体损伤后视神经中Nogo-A mRNA及Nogo-A的表达,探讨晶状体损伤促进视神经损伤后再生的机制。方法 66只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组,6只)、单纯视神经损伤组(B组,30只)和视神经损伤联合晶状体损伤组(C组,30只)。分别于造模后7d、14d、21d处死大鼠2只(A组)、10只(B组)、10只(C组),光镜下观察视神经的病理变化,免疫组织化学染色检测Nogo-A表达情况,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、半定量分析不同组视神经Nogo-A mRNA的表达。结果大鼠正常视神经中表达Nogo-A mRNA及Nogo-A,但表达量较低;损伤视神经后7d Nogo-A mRNA的表达量显著升高,至伤后21d B组及C组均维持较高的水平。B组损伤后7d Nogo-A表达阳性的细胞数开始增多(136.80±3.94),与A组比较差异有统计学意义(P<0.05),并保持高表达;C组损伤后21d Nogo-A的表达较B组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论视神经损伤后髓鞘相关抑制因子Nogo-A表达增高,晶状体损伤促进视神经再生的机制可能与Nogo-A有关。     

TIMP-2基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞基质金属蛋白酶2及其抑制剂表达

目的观察转染基质金属蛋白酶2抑制剂(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase2,TIMP-2)基因的豚鼠巩膜成纤维细胞不同时间增生能力及基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2,MMP-2)和TIMP-2的表达,探讨基因治疗近视的可行性。方法随机选取三色健康豚鼠,组织块法体外培养原代巩膜成纤维细胞,免疫组织化学法进行波形蛋白的鉴定,取第3～6代细胞进行实验。分子克隆构建携带TIMP-2基因的真核表达载体,转染豚鼠巩膜成纤维细胞,MTT法观察转染后12h、24h、48h、3d、5d、7d细胞增生能力。提取总RNA,二步法逆转录-聚合酶链反应检测MMP-2mRNA及TIMP-2mRNA的表达水平。结果豚鼠巩膜成纤维细胞原代、传代培养生长良好,波形蛋白鉴定阳性。转染3d、5d、7d TIMP-2基因转染组成纤维细胞的增生速度分别为0.6724±0.0092、0.7963±0.0060、0.8462±0.0064,明显快于正常对照组成纤维细胞(0.5810±0.0120、0.6525±0.0072、0.7129±0.0132),差异均具有显著统计学意义(均为P<0.01)。转染48h MMP-2mRNA表达即开始减少,转染3d时表达明显减少,达到最低,除转染12h与24h之间外,转染组与正常对照组、各转染不同时间组间MMP-2mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05)。TIMP-2mRNA表达在转染48h时即开始增加,除12h与24h外,转染组与正常对照组、各转染不同时间组间TIMP-2mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论转染TIMP-2基因对豚鼠巩膜成纤维细胞有促增生作用,TIMP-2基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞抑制MMP-2mRNA的表达,可在一定程度上阻止近视发展中巩膜组织的丢失与重塑。