CCR10的表达对非小细胞肺癌细胞在增殖、迁移和侵袭的影响

目的 本研究旨在探讨趋化因子受体10（chemokine receptor 10,CCR10）的表达对NSCLC细胞在增殖、迁移和侵袭方面的影响。方法 应用基因工程技术将CCR10siRNA导入NSCLC细胞中,干扰CCR10的正常表达,进而研究CCR10对NSCLC细胞在增殖、迁移和侵袭等功能方面的影响。结果 转染了CCR10siRNA的人NSCLC腺癌细胞A549的细胞增殖率明显低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,空白对照组与阴性对照组的细胞增殖率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组及阴性对照组比较,转染了CCR10siRNA的人NSCLC腺癌细胞A549的细胞迁移率明显低于空白对照组及阴性对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,空白对照组和阴性对照组的细胞迁移率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。转染了CCR10siRNA的人NSCLC腺癌细胞A549的细胞侵袭率明显低于空白对照组及阴性对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,空白对照组及阴性对照组的细胞侵袭率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 CCR10促进NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力,CCR10可能参与非小细胞肺癌的发生、发展、侵袭及转移过程。     

microRNA干扰抑制MTDH的表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨microRNA干扰技术沉默异黏蛋白（MTDH,metadherin蛋白）基因表达及对人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞增殖、转移、侵袭能力的影响。方法 将人工合成的针对MTDH基因的miRNA片段瞬时转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231,通过Western blot法、RT-PCR法检测MTDH蛋白表达和MTDHmRNA;应用MTT检测法、划痕实验、Transwell实验检测抑制MTDH基因后对乳腺癌细胞增殖、转移、侵袭能力的影响。结果 MTDHmiRNA能有效抑制MTDH蛋白和MTDHmRNA表达,最佳抑制率分别为79.41%、80.56%（P<0.05）;经miRNA干扰的细胞,生长速度明显受到抑制（P<0.05）,侵袭迁移能力显著下降（P<0.05）。结论 MTDH miRNA瞬时转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞可明显抑制癌细胞中MTDH表达,沉默MTDH基因表达后可明显抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长增殖、侵袭迁移能力。     

CXCR1调控STAT3信号通路对结肠癌细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨化学趋化因子受体1（CXCR1）对结肠癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 收集结肠癌组织和对应的癌旁组织,提取组织蛋白,Western blot法检测组织中CXCR1表达水平。以人结肠癌细胞HCT116为研究对象,细胞转染CXCR1小干扰RNA（CXCR1 siRNA组）,同时转染siRNA对照组。设置对照组,对照组中只加入转染试剂。培养48h后,Western blot法检测细胞中CXCR1、Bcl-2、Bax、STAT3、p-STAT3表达水平,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况。人结肠癌细胞与STAT3信号通路抑制剂AG490作用后,检测细胞增殖凋亡情况。结果 CXCR1在结肠癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织（P<0.01）。CXCR1 siRNA组细胞中CXCR1、p-STAT3、Bcl-2蛋白水平和细胞存活率明显低于对照组（P<0.01）。CXCR1 siRNA组细胞中Bax水平和细胞凋亡率明显高于对照组（P<0.01）。siRNA对照组细胞中CXCR1、Bcl-2、Bax、STAT3、p-STAT3水平和细胞凋亡率、细胞存活率与对照组比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。抑制剂作用后的细胞增殖凋亡趋势与CXCR1 siRNA组细胞相一致。结论 CXCR1在结肠癌组织中表达上调。抑制CXCR1的表达可以抑制结肠癌细胞增殖,促进结肠癌细胞凋亡,作用机制与STAT3信号通路有关。     

miR-577在胃癌中的表达及对SGC-7901细胞侵袭的影响

目的 研究微小RNA 577（microRNA-577,miR-577）在人胃癌（gastric cancer,GC）组织内的表达情况及对肿瘤细胞侵袭能力的影响。方法 选择2013年1月~2015年3月于第三军医大学大坪医院普通外科收治并行手术切除的70例胃癌与对应癌旁组织。通过qRT-PCR方法检测miR-577在组织中的相对表达量,分析miR-577的临床病理意义;采用人工合成的miR-577模拟物（miR-577 mimics）转染人胃癌SGC-7901细胞,并检测SGC-7901细胞过表达miR-577后侵袭能力及miR-577下游潜在靶点β-catenin mRNA及蛋白的表达变化。结果 MiR-577在胃癌组织中表达显著下调（P=0.000）并与与淋巴结转移（P=0.003）、高TNM分期（P=0.006）等不良临床特征呈正相关;过表达miR-577能够显著抑制SGC-7901细胞侵袭能力（P=0.000）及细胞内β-catenin的表达水平。结论 miR-577在胃癌中低表达,并可能通过下调β-catenin的表达来抑制胃癌细胞的侵袭。     

丹参酮ⅡA诱导人小细胞肺癌细胞凋亡及其分子机制

目的 了解丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌细胞（H446细胞）的凋亡诱导作用,并探讨其可能的分子机制。方法 采用MTT法检测不同浓度丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌H446细胞增殖的影响结果;Hoechst 33258法检测不同浓度丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响;qPCR法检测不同浓度丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌H446细胞凋亡基因的影响;Westen blot法检测不同浓度丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响。结果 不同药物浓度的丹参酮ⅡA （0.3、0.6、1.25、2.5、5和10μg/ml）抑制人小细胞肺癌H446细胞增殖且呈浓度和时间依赖性;随着药物浓度的提高,人小细胞肺癌H446细胞凋亡小体的形成数量增加,高浓度组差异有统计学意义（P<0.05）;高浓度组丹参酮ⅡA促进凋亡基因（Bax,caspase-9、caspase-3）的表达,抑制凋亡抑制基因（Akt,Bcl-2）的表达且差异有统计学意义（P<0.05）;高浓度组丹参酮ⅡA促进凋亡蛋白（Bax,caspase-9,caspase-3）的表达,抑制凋亡抑制蛋白（Akt,Bcl-2）的表达且差异有统计学意义（P<0.05）。结论 丹参酮ⅡA可能是通过Akt-Bax/bcl-2-caspase9-caspase3信号通路诱导人小细胞肺癌H446细胞的凋亡。     

Wnt信号通路及靶基因在非小细胞肺癌组织中的表达

目的 研究Wnt信号通路中β-catenin 、TCF-4和Wnt-2在非小细胞肺癌中的活化状态及其与靶基因VEGF和Survivin表达的相关性,探讨Wnt信号通路对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭转移以及对靶基因表达的影响,为非小细胞肺癌多靶点基因治疗提供实验依据.方法 应用RT-PCR、免疫组化和Western blot等方法,检测非小细胞肺癌的癌组织及癌旁正常组织中β-catenin 、TCF-4和Wnt-2的表达,以及在Wnt信号通路的活化状态下靶基因VEGF和Survivin表达情况.结果 在非小细胞肺癌组织中,β-catenin 、TCF-4和Wnt-2的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.01);Wnt^-组与Wnt⁺组在癌旁正常组织和NSCLC组织中分布差异具有统计学意义(P=0.000);VEGF和Survivin在Wnt⁺组中的表达频率均明显高于Wnt^-组.结论 非小细胞肺癌组织中Wnt信号通路被活化,其通路活化可能是导致非小细胞肺癌各靶基因表达增加的重要因素,并与非小细胞肺癌的发生、发展密切相关.     

EphA2 siRNA转染对人卵巢癌细胞SKOV3生物学行为的影响

目的 探讨促红素人肝细胞受体酪氨酸激酶A2（EphA2）干扰性小RNA(siRNA)转染人卵巢癌细胞SKOV3后,对其生物学行为的影响。方法 根据EphA2序列合成一对siRNA,转染SKOV3细胞,通过荧光倒置显微镜观察转染效率和细胞形态;Western blot检测EphA2蛋白表达水平;台盼蓝染色细胞计数法绘制细胞生长曲线;集落形成实验、黏附力测定、细胞侵袭重建基底膜实验测定细胞的集落形成率、黏附和侵袭力。结果 构建的EphA2 siRNA转染SKOV3后,荧光倒置显微镜下可见大量荧光颗粒;Western blot检测EphA2蛋白水平表达降低（P<0.05）;细胞的增殖、黏附力、侵袭力均受到抑制（P<0.05）;集落形成率无明显影响（P>0.05）。结论 EphA2 siRNA有效降低细胞中EphA2基因表达,抑制细胞的增殖,降低细胞的黏附力和侵袭力,从而逆转其恶性生物学行为,为肿瘤的有效干预和治疗提供新的靶点。     

miR-149-5p靶向FGF5调节人口腔鳞状细胞癌细胞凋亡和上皮-间质转换及微管形成

目的：　探究miR-149-5p对人口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）细胞凋亡、上皮-间质转换（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及微管形成的影响及作用机制。方法：　miR-149-5p mimic（mimic）和pcDNA-FGF5（FGF5）单转或共转CAL-27细胞系,RT-PCR、Western blot检测FGF5表达;双荧光素酶报告实验验证miR-149-5p和FGF5靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Bax/Bcl-2蛋白表达;观察EMT细胞形态转化,Western blot检测CAL-27细胞上皮标记物E-钙黏蛋白（E-cadherin,E-cad）及间质标记物N-钙黏蛋白（N-cadherin,N-cad）表达;成管实验检测CAL-27细胞微管样形成能力,Western blot检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达。结果：　miR-149-5p mimic能明显抑制CAL-27细胞中FGF5的表达（P=0.000）;miR-149-5p mimic能明显减弱FGF5野生质粒的荧光素酶活性（P=0.000）;miR-149-5p mimic可明显上调CAL-27细胞凋亡率及Bax/Bcl-2比值（P=0.000）,并逆转FGF5过表达导致的细胞凋亡率（P=0.014）及Bax/Bcl-2比值上调（P=0.000）。miR-149-5p mimic抑制EMT细胞形态由圆形到纺锤形转变,并逆向转换FGF5过表达导致的间质样细胞形态。miR-149-5p mimic可上调CAL-27细胞中E-cad的表达（P=0.000）、下调N-cad的表达（P=0.000）,逆转FGF5过表达引起的E-cad表达下调（P=0.020）和N-cad表达上调（P=0.000）。miR-149-5p过表达能明显抑制CAL-27细胞微管结节形成（P=0.002）,降低VEGF蛋白表达水平（P=0.000）,逆转过表达FGF5引起的VEGF表达上调（P=0.000）。结论：　miR-149-5p能抑制OSCC细胞的EMT和微管形成能力并促进细胞凋亡,作用机制与靶向抑制FGF5表达有关。     

PDE5基因沉默对肾透明细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨PDE5基因对肾透明细胞癌细胞株786-O细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计、合成PDE5 siRNA序列,按照HiPerFect转染试剂盒操作手册转染786-O细胞.采用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR)和Western blot法检测转染后PDE5 基因的表达,通过WST-1法检测细胞增殖情况,caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性.结果 与空白对照组和阴性对照组相比较,PDE5 siRNA转染组的mRNA及蛋白表达水平显著降低,786-O细胞增殖能力明显受到抑制,caspase-3活性明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 siRNA干扰PDE5基因表达可抑制肾透明细胞癌细胞株786-O细胞的增殖并促进凋亡.     

SIRT-1和NF-κB在小细胞肺癌中的表达及其意义

目的 探讨沉默信息调节因子2相关酶-1（SIRT-1）、核因子-κB（NF-κB）在小细胞肺癌（SCLC）中的表达及其与临床特征的相关性,分析其与临床预后的关系。方法 采用SP法免疫组化检测79例局限期小细胞肺癌癌组织和69例癌旁正常肺组织中SIRT-1和P65的表达情况,结合临床资料进行相关性分析。采用电话形式进行随访,利用Kaplan-Meier曲线进行单因素生存分析,生存率比较采用Log-rank检验。结果 SCLC癌组织中,SIRT-1（χ²=38.581,P=0.000）和P65（χ²=26.348,P=0.000）的表达率均显著高于癌旁正常肺组织,与术前血清NSE水平呈正相关（χ²=6.707,P=0.010和χ²=4.017,P=0.045）。SCLC癌组织中,SIRT-1与P65的表达呈低度正相关（r=0.223,P=0.042）。SCLC中,SIRT-1表达阴性（χ²=15.117,P=0.000）、P65表达阴性（χ²=3.971,P=0.046）的患者,预后更好。结论 SIRT-1和NF-κB在SCLC患者的发生、发展过程中起到促进作用,并且可能与术后患者的预后相关。     

沉默氯离子通道蛋白1基因表达对胃癌细胞的影响

目的 观察沉默细胞内氯离子通道蛋白1（chloride channel protein 1,CLIC1）的基因表达后对胃癌BGC-823细胞增值、侵袭、迁移以及周期和凋亡的影响。方法 化学合成针对CLIC1的靶向siRNA （CLIC1 siRNA组）,以转染脂质体试剂细胞（MOCK组）和空白细胞（CTRL组）作为对照。用MTT、流式细胞术以及Transwell分别观察细胞的增值、周期、凋亡、侵袭和迁移能力的变化。结果 转染24h、48h和72h后,CLIC1 siRNA组与MOCK组、CTRL组相比,其增殖能力均显著增强（P<0.05）;转染48h后CLIC 1siRNA组G₂/M期细胞明显增多（P<0.05）、凋亡率显著降低（P<0.05）、侵袭及迁移细胞数明显下降（P<0.05）。结论 CLIC1在胃癌的发生、发展及侵袭迁移中过程发挥重要作用。     

siRNA沉默MACC1基因表达对宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨siRNA沉默结肠癌转移相关基因1(MACC1)表达对Hela宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响。方法通过脂质体将siRNA MACC1及siRNA NC转入Hela细胞中,RT-PCR及western blot检测转染效果,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell法检测细胞侵袭能力,western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cyclin E,基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达及细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化水平。结果与siRNA NC组比较,siRNA MACC1组中MACC1蛋白及mRNA表达量降低(P0.01),细胞活力及侵袭能力下降(P0.01),细胞周期阻滞在G1期,cyclin D1、cyclin E、MMP2、MMP9及p-ERK表达量下调(P0.01)。结论siRNA MACC1能显著的抑制宫颈癌Hela细胞增殖与侵袭,可能与下调ERK磷酸化水平有关。     

沉默Yes相关蛋白1对人非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 研究Yes相关蛋白1(YAP1)在非小细胞肺癌细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭中的作用.方法 通过慢病毒介导的小干扰RNA靶向抑制人非小细胞肺癌细胞株A549中YAP1基因的表达,采用CCK-8法、流式细胞术分别检测沉默YAP1对A549细胞增殖及凋亡周期的影响,Transwell实验观察沉默YAP1对A549细胞迁移、侵袭能力的影响.结果 沉默YAP1后,A549细胞YAP1 mRNA和蛋白表达均下调(P＜0.01),CCK-8实验结果显示沉默YAP1抑制A549的增殖、增加G0/G期的细胞比例(P＜0.01),Transwell实验结果示沉默YAP1抑制A549细胞的迁移、侵袭(P＜0.01).结论 沉默YAP1基因对非小细胞肺癌细胞的恶性生物学特征具有抑制作用,YAP1可能成为肺癌治疗的潜在靶标.     

骨桥蛋白对甲状腺癌细胞生物学效应的影响

目的探讨骨桥蛋白(OPN)对甲状腺癌生物学行为的影响。方法 SW579细胞置于6孔板中培养,采用随机数字表法分成对照组、阴性对照组、OPN siRNA干扰组3组,每组3个孔,每个孔2 m L,细胞密度为1×10~4/m L。对照组不作任何处理,阴性对照组转染OPN阴性序列,OPN siRNA干扰组转染OPN siRNA序列。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)测定并比较转染后3组细胞OPN、MMP-2、MMP-9、Caspase-3的mRNA水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)测定转染后3组细胞的抑制率,流式细胞仪检测转染后3组细胞凋亡率,Transwell小室检测转染后3组细胞的侵袭力,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测3组OPN、MMP-2、MMP-9、Casepase-3的蛋白水平。结果 OPN siRNA干扰组的OPN mRNA的表达水平显著低于对照组和阴性对照组,细胞凋亡率显著高于对照组以及阴性对照组,侵袭能力显著低于对照组和阴性对照组,OPN、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白水平显著低于对照组和阴性对照组,Casepase-3mRNA和蛋白水平显著高于对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论 OPN干扰后SW579细胞增殖和侵袭能力下降,凋亡率增加,其机制可能与凋亡蛋白caspase-3水平增加,MMP-2、MMP-9水平下降有关。     

白细胞介素-37在结肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞增殖、侵袭的作用

目的 探讨白细胞介素-37（IL-37）在结肠癌组织中表达的变化，并通过体外实验探讨其对结肠癌细胞增殖、侵袭的作用。方法 收集2017年4月—2019年4月在西安市第四医院手术切除的结肠癌组织及对应的癌旁组织，检测其IL-37的表达量；培养结肠癌HT29细胞，随机分为对照组、转染空白pcDNA3.1质粒的空白质粒组、转染表达IL-37的pcDNA3.1重组质粒的IL-37质粒组，MTS检测3组结肠癌HT29细胞的增殖能力，Transwell实验检测细胞的侵袭能力，qRT-PCR检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）mRNA相对表达量，Western blotting法检测IL-37、p-STAT3及p-Akt蛋白相对表达量。结果 结肠癌组织中IL-37的蛋白相对表达量低于癌旁组织（P <0.05）；3组细胞增殖及侵袭能力，CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9 mRNA相对表达量，p-STAT3、p-Akt的蛋白相对表达量比较，差异有统计学意义（P <0.05），IL-37质粒组的细胞增殖及侵袭能力，CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9 mRNA相对表达量，p-STAT3、p-AKT的蛋白相对表达量均低于对照组、空白质粒组。结论 IL-37在结肠癌组织中表达减少，上调IL-37的表达能够抑制结肠癌细胞的增殖、侵袭，该抑制作用可能与抑制STAT3/Akt通路有关。     

miR-132调节非小细胞肺癌hedgehog信号通路受体基因PTCH1及细胞增殖、迁移和侵袭

 目的  研究miR-132在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞系H1299中的作用及相应的靶基因。方法  real-time PCR检测7种细胞系中miR-132的表达量。用CCK-8检测稳定株细胞H1299-pEGP-miR-132与H1299-pEGP-miR-null 的生长速率的变化。使用稳定株细胞H1299检测miR 132对于细胞克隆形成、细胞迁移和细胞侵袭的影响。用Transwell结合matrigel的方法检测H1299-pEGP-miR-132细胞与H1299-pEGP-miR-null细胞在72 h时细胞迁移和侵袭的变化,同时在H1299-pEGP-miR-132细胞中使用anti-miR-132进行了相关的实验验证。运用生物信息学方法预测miR-132的靶基因,并运用双荧光实验、real-time PCR和Western blot验证。在H1299-pEGP-miR-132细胞中共同转染anti-miR-132和PTCH1 siRNA检测其对细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果   miR-132在肺癌细胞系中呈现高表达,在NSCLC细胞H1299中miR-132通过靶向调节PTCH1基因的表达发挥作用。H1299-pEGP-miR-132细胞的增殖(P<0.01)、迁移(P<0.05)、侵袭(P<0.05)能力明显高于对照组。在H1299-pEGP-miR-132细胞中转入PTCH1 siRNA后细胞增殖能力升高(P<0.05),迁移和侵袭能力降低(P<0.001)。H1299-pEGP-miR-132细胞15天形成的克隆数目是对照组细胞的1.41倍(P<0.05)。Western blot法检测显示miR-132使H1299中PTCH1蛋白表达量显著降低(0.68倍),anti-miR-132使PTCH1表达量显著升高(1.97倍)。结论  miR-132可能参与NSCLC的细胞增殖、迁移和侵袭。它的致癌性部分归因于对Hh信号通路关键的负调控蛋白PTCH1的调节。