用PCR方法检测基因缺失或杂合性丢失的初步探讨

对ＰＣＲ方法用于检测基因的缺失或杂合性丢失进行了初步探讨，通过选择ＰＣＲ循环数，选择内对照筛选标本等手段，采用ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ技术检测ＧＳＨ克隆７在鼻咽癌中的缺失状态，成功地检测到了１例标本中的存在缺失，这为ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ技术检测基因缺失或杂合性丢失的应用提供了可借鉴的实验手段和经验。     

PCR循环测序法检测K—ras和HCV5‘非编码区基因变异

建立一种简单，快速，可靠的ＤＮＡ序列分析方法，并利用此方法分析了Ｋ－ｒａｓ基因和ＨＣＶ５‘非编码区基因的变异情况。方法；ＰＣＲ循环测序法是将ＰＣＲ扩增与核酸序列分析相结合的一种研究方法。根据此技术原理，建立以ＰＣＲ扩增引物为测序引物，利用Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶，荧光标记的２’３‘－双脱氧核苷三磷酸直接进行ＰＣＲ扩增产物序列分析的方法。     

用PCR方法检测基因缺失或杂合性丢失的初步探讨

对ＰＣＲ方法用于检测基因的缺失或杂合性丢失进行了初步探讨。通过选择ＰＣＲ循环数、选择内对照及筛选标本等手段，采用ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ技术检测ＧＳＨ克隆７在鼻咽癌中的缺失状态，成功地检测到了１例标本中存在的缺失。这为ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ技术检测基因的缺失或杂合性丢失的应用提供了可借鉴的实验手段和经验。     

应用双链DNA循环测序技术检测Dystrophin基因内点突变

应用双链ＤＮＡ循环测序技术检测Ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ基因内点突变吴志英，王柠，邓余，余龙，慕容慎行关键词：ＰＣＲ，ＤＮＡ测序，点突变本研究采用ＰＣＲ扩增产物直接测序方法──双链ＤＮＡ循环测序技术［１］。检测基因内点突变，操作简单，费时短，只需１～２天即...     

聚合酶链反应

聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ,ＰＣＲ）是一种模拟ＤＮＡ复制的特定核酸序列体外扩增技术。在ＰＣＲ扩增的首轮循环中,待扩增的ＤＮＡ在高温下变性成为单链模板,在复性温度下,人工合成的两个寡核苷酸引物与目标片段两侧的两条链互补...     

通过优化PCR反应条件扩增富含GC的DNA片段

在被扩增的ＤＮＡ片段的特殊结构时，通过改变ＰＣＲ反应成分，并采用没的退火温度热启协，得到了满意的特异的ＰＣＲ扩增产物。     

PCR结合核酸分子杂交放射自显影检测HPV16,18实验条件的研究

为建立一种快速，简便，高敏感性和特异性的检测消化道肿瘤组织中ＨＰＶ１６，１８ＤＮＡ序列的方法，用ＰＣＲ扩增ＨＰＶ１６早期区Ｅ６的１２０ｂｐ片段和扩增ＨＰＶ１１８Ｅ６，Ｅ７区２６７ｂｐ片段，扩增产物与相应的５′－末端Ｐ３２标记的特异性寡核苷酸探针进行斑点杂交放射性自显影，探讨了影响ＰＣＲ和杂交的关键因素，从中选出较佳的以应条件，即ＰＣＲ退火温度及杂交温度均为５５℃，影响ＰＣＲ和杂交的关键因素，从中选     

通过优化PCR反应条件扩增富含GC的DNA片段

在被扩增的ＤＮＡ片段存在特殊结构时，通过改变ＰＣＲ反应成分，并采用不同的退火温度加热启动，得到了满意的特异的ＰＣＲ扩增产物。     

PCR诊断技术的实验条件研究

以白细胞中提取的基因组ＤＮＡ作为模板，研究了应用聚合酶链反应方法检测胰高血糖素受体第二外显子基因的反应条件，实验结果表明：循环时的变性温度、退火温度、引物浓度、等条件偏离最适实验时会导致错误的结果。研究结果对于想引入ＰＣＲ实验的临床实验室是有用的信息。     

一株庚型肝炎病毒NS3区和NS5区部分基因序列的分析

用ＲＴ－ＰＣＲ的方法从非甲、乙、丙、丁、戊型肝炎病人血清中检测到一株庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）。其中扩增ＮＳ３区基因采用５６例循环周期减温ＰＣＲ方法；扩增ＮＳ５区基因采用３５个循环周期的正常ＰＣＲ方法。并对其ＰＣＲ产物进行了克隆测序。在ＮＳ３区，样品与ＧＢＶ－Ｃ和ＨＧＶ的核苷酸序列同源性分别为８４．２％和８９．９％；而在ＮＳ５区样品与ＨＢＶ－Ｖ和ＨＧＶ的核苷酸同源性分别为９４．９％和９８．     

PCR—SSCP应用于HLA—DRB基因分型重现性的影响因素

本文探讨了ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法应用于ＨＬＡ－ＤＲＢ基因分型重现性的主要影响因素。结果表明，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ应用于ＨＬＡ－ＤＲＢ基因分型中受到的影响因素较多，如电泳温度、样品预处理，聚胶时间、ＴＢＥ缓冲液贮存时间及银染色过程等。     

含尿嘧啶DNA糖基化酶的聚合酶链反应检测血清HBV DNA

为探讨含ｄＵＴＰ／尿嘧啶ＤＮＡ糖基化酶（ｄＵＴＰ／ＵＤＧ）ＰＣＲ试剂（抗污染ＰＣＲ试剂，ＰＣＲ－ｄＵＴＰ／ＵＤＧ）抗ＰＣＲ产物污染的能力及其在临床检测中的应用，采用该试剂检测２０４份病毒性肝炎患者血清中ＨＢＶＤＮＡ，并与普通ＰＣＲ试剂比较。结果显示：抗污染ＰＣＲ试剂有较强的抗污染能力，至少可阻止１００ｎｇ的ＰＣＲ产物的污染。该试剂与地戈辛素探针分子杂交所测结果的符合率（８９．３２％）高于普通ＰＣＲ与分子杂交所测的符合率（８１．４５％）。表明抗污染ＰＣＲ试剂的应用有利于防止ＰＣＲ产物的污染，提高ＰＣＲ的准确性和特异性。     

PCR循环测序法检测K-ras和HCV 5'非编码区基因变异

目的：建立一种简单、快速、可靠的ＤＮＡ序列分析方法，并利用此方法分析Ｋｒａｓ基因和ＨＣＶ５′非编码区基因的变异情况。方法：ＰＣＲ循环测序法是将ＰＣＲ扩增与核酸序列分析相结合的一种研究方法。根据此技术原理，建立了以ＰＣＲ扩增引物为测序引物，利用ＴａｑＤＮＡ聚合酶、荧光标记的２′，３′双脱氧核苷三磷酸（ｄｄＮＴＰ）直接进行ＰＣＲ扩增产物序列分析的方法。应用该方法对人肺癌组织中的Ｋｒａｓ癌基因和丙型肝炎病毒５′非编码区（ＨＣＶ５′ＮＴＲ）进行了序列测定。结果：肺癌组织中的Ｋｒａｓ基因第１外显子第３５位碱基发生点突变（ＧＧＴ→ＧＡＴ）；属于高度保守区的ＨＣＶ５′ＮＴＲ存在基因变异。结论：ＰＣＲ循环测序法具有简单、快速、结果可靠等特点，为基因突变的检测和病原体的核酸序列分析提供了一个快速实用的方法。     

PCR－SSCP应用于HLA－DRB基因分型重现性的影响因素

本文探讨了ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法应用于ＨＬＡ－ＤＲＢ基因分型重现性的主要影响因素。结果表明，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ应用于ＨＬＡ－ＤＲＢ基因分型中受到的影响因素较多，如电泳温度、样品预处理、聚胶时间、ＴＢＥ缓冲液贮存时间及银染色过程等。在严格控制电泳温度、单链变性及银染色过程等实验条件下可保证实验的可靠性及重现性     

应用套式聚合酶链反应检测母婴垂直感染乙型肝炎的研究

目的：为准确、迅速诊断乙型肝炎，本研究在１１３例母婴血清标本中建立套式ＰＣＲ检测技术并与ＰＣＲ方法进行比较。方法：应用套式聚合酶链（ＰＣＲ）法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ１１３例。结果：１１３例孕妇，第一对引物ＰＣＲ扩增１０１例阳性，第二对引物ＰＣＲ扩增９７例阳性。７７例为乙肝的婴儿，第一对引物ＰＣＲ扩增６９例阳性，第二对引物ＰＣＲ扩增６５例阳性。二对引物经套式ＰＣＲ，孕妇又有１２例阳性，其中阳性率提高８．８５％，婴儿有８例阳性，阳性率提高７．８％。结论：套式ＰＣＲ比ＰＣＲ方法更快、更敏感、更特异、更简便，直接支持了母婴垂直感染的论点     

小儿肺炎支原体感染诊断及发病机制探讨

探讨小儿肺炎支原体（Ｍｐ）感染的敏感诊断方法与发病机制。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测咽拭子Ｍｐ－ＤＮＡ，同时做血清冷凝集试验（ＣＡＴ），对４９８例呼吸道感染的住院患儿进行配对资料研究，４８例测定了有关免疫指标。结果ＰＣＲ法阳性率为３７．５５％（１８７／４９８），ＣＡＴ法阳性率为１０．０４％（５０／４９８），二法差异有极显著性意义。３～１０岁组感染率明显高于３岁以下组与１０岁以上组。ＰＣＲ法不受自然病程的影响，ＣＡＴ法明显受到病程的影响。１２例Ｍｐ－ＤＮＡ－ＰＣＲ和循环免疫复合物（ＣＩＣ）均阳性者多伴有肺外并发症。结论ＰＣＲ法是早期诊断Ｍｐ感染的敏感方法，明显优于ＣＡＴ法。感染可能与Ⅲ型变态反应参与的免疫介导损伤有关     

提高半巢式PCR特异性探讨

提高半巢式ＰＣＲ特异性探讨金杨季晓辉李玉峰姚（南京医科大学微生物学教研室，南京２１００２９）关键词半巢式ＰＣＲ；Ｂ淋巴细胞白血病；特异性近年来，在巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）的基础上半巢式ＰＣＲ亦有所发展。普通ＰＣＲ需用一对（即两段）引物，巢式ＰＣ...     

抗-HCV阳性群体的PCR-HCV检测结果分析

抗—ＨＣＶ阳性群体的ＰＣＲ—ＨＣＶ检测结果分析附属医院检验科韩亚群薛承岩选用抗—ＨＣＶ—ＩｇＧ（ＥＬＩＳＡ法）阳性者为实验对象，单独抽取静脉血为ＰＣＲ—ＨＣＶ实验标本，ＰＣＲ—ＨＣＶ试剂盒由华美生物工程公司提供，ＰＣＲ方法用反转录套式ＰＣＲ法。ＰＣＲ...     

PCR对SSCP检测p53基因杂合性缺失的影响

对比观察了常规ＰＣＲ及半巢式ＰＣＲ对ＳＳＣＰ检测乳腺用ｐ５３基因杂合性缺失的影响。结果显示，半巢式ＰＣＲ能将石蜡包埋组织ｐ５３基因第４外显子ＤＮＡ片段ＰＣＲ扩增成功率由８２．５％提高到１００％，但应用半巢式ＰＣＲ产物对１３例杂合子病人ＳＳＣＰ分析显示，乳腺癌组织ｐ５３基因杂合性缺失由常规ＰＣＲ─ＳＳＣＰ检出阳性６例降低至１例。本研究结果表明，半巢式ＰＣＲ虽能提高ＰＣＲ的敏感性，但由于乳腺癌组织往往混杂有一些正常组织成分，二次ＰＣＲ扩增增加了正常组织ＤＮＡ对肿瘤组织ＤＮＡ的影响，因而不适用于乳腺癌ｐ５３基因杂合性缺失的研究。     

多聚酶链反应检测淋巴细胞白血病微小残留分析

根据ＩｇＨ、ＴＣＲ克隆性基因重排原理，用半重叠ＰＣＲ和单轮ＰＣＲ技术分别同一份ＡＬＬ患儿的骨髓标本进行检测，并对两法的检出率进行了比较。结果：半重叠ＰＣＲ阳性检出率为８０％，单轮ＰＣＲ阳性检出率５２％，前者较后者提高了２８％，尤其对ＡＬＬ－ＭＲＤ组的检测，半重叠ＰＣＲ的阳性检出率有显著提高。