散结通脉方对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化主动脉钙库操纵性钙通道信号分子及血清炎症因子的影响

目的研究散结通脉方对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化模型血清中炎症因子含量及主动脉根部Orai1、STIM1蛋白表达的影响。方法采用高脂饲料(2%胆固醇、0.4%胆酸盐、10%脂肪、69.6%普通饲料)喂养ApoE~(-/-)小鼠12周建立动脉粥样硬化斑块模型,造模同时灌胃给予供试药品混悬液治疗。给药周期结束,检测各组动物血清TC、TG、HDL-cho、LDL-cho含量及TC/HDL-cho比值;血清hs-CRP、E-selectin、IL-6含量;主动脉根部STIM1、Orai1蛋白表达。结果散结通脉方13.5、6.75和3.40 g/kg 3个给药组具有明显降低模型动物血清TC、TG和LDL-cho的作用,与动脉粥样硬化模型组比较,分别为P0.01或P0.05;13.5 g/kg剂量组血清E-selectin、IL-6水平明显低于模型组,具有统计学差异(P0.05);13.5、6.75 g/kg 2个剂量组主动脉根部Orai1、STIM1蛋白表达及血清中hs-CRP水平均明显低于模型组,具有统计学差异(P0.01或P0.05);3.40 g/kg剂量组主动脉根部Orai1蛋白表达明显低于模型组,具有统计学差异(P0.05)。结论散结通脉方可以通过下调钙离子信号蛋白的表达抑制血管平滑肌细胞增殖迁移,并通过发挥调脂、抗炎等多种效应,对动脉粥样硬化发生发展过程中多因素多环节起到调节作用,进而延缓甚或逆转不稳定斑块的病理进程。     

黄连素降低ApoE-/-小鼠内脏脂肪素表达

目的:观察黄连素(Ber)对载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠主动脉粥样硬化(AS)病变、内脏脂肪素(visfatin)及炎症因子表达的影响。方法:50只SPF级8周龄雄性Apo E-/-小鼠予高脂饲料喂养随机分为5组:Ber低、中、高剂量组分别ip给予Ber 2.5,5,7.5 mg·kg-1·d-1;辛伐他汀组ig辛伐他汀5 mg·kg-1·d-1;模型组ig等量生理盐水。另设10只相同基因背景和周龄的雄性C57BL/6J小鼠为对照组予普通饲料喂养。16周后测小鼠体重、血清脂质及visfatin,血浆白介素(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;HE染色观察小鼠主动脉组织AS斑块面积;免疫组化法测AS斑块内visfatin的表达;Western blotting测小鼠主动脉visfatin蛋白的表达。结果:小鼠体重增加值,血清visfatin,总胆固醇(TG),三酰甘油(TC),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,血浆IL-6及TNF-α含量,主动脉visfatin蛋白表达方面,模型组均显著高于对照组(P0.05),各给药组均显著低于模型组(P0.05);辛伐他汀组,Ber中、高剂量组小鼠主动脉AS斑块面积比显著低于模型组(P0.05)。结论:Ber可通过降血脂、减小AS斑块面积、降低IL-6及TNF-α含量等发挥抗AS效应,其机制可能与降低visfatin表达有关。     

葛根素降低ApoE-/-小鼠visfatin表达抑制动脉粥样硬化形成的研究

目的观察葛根素对载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠主动脉粥样硬化(AS)病变、血脂水平、内脏脂肪素(visfatin)及炎症因子IL-6及TNF-α表达的影响。方法 50只SPF级8周龄雄性Apo E-/-小鼠予高脂饲料喂养随机分为5组:葛根素低、中、高剂量组分别给予葛根素300,600,1200 mg·kg-1·d-1灌胃;辛伐他汀组灌服辛伐他汀5 mg·kg-1·d-1;模型组灌服等剂量生理盐水。另设10只相同基因背景和周龄的雄性C57BL/6J小鼠为对照组予普通饲料喂养。16周后测小鼠体质量、血清脂质及visfatin、血浆IL-6及TNF-α含量;HE染色观察小鼠主动脉组织AS斑块面积;western blotting测小鼠主动脉visfatin蛋白的表达。结果各给药组小鼠体质量增加值、血清visfatin、TG、TC、LDL-C水平、血浆IL-6及TNF-α含量、主动脉visfatin蛋白表达均显著低于模型组(P0.05),血清HDL-C高于模型组(P0.05);辛伐他汀组、葛根素中、高剂量组小鼠主动脉AS斑块面积百分比显著低于模型组(P0.05)。结论葛根素可通过降血脂、减小AS斑块面积、降低IL-6及TNF-α含量等发挥抗AS效应,其机制可能与降低visfatin表达有关。     

比伐芦定对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的观察比伐芦定对Apo E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响。方法将20只Apo E-/-小鼠随机分成模型组和治疗组,10只C57BL/6J小鼠作为空白对照组。模型组和治疗组给予高脂饲料喂养,空白组给予普通饲料喂养。于第9周开始,治疗组给予比伐芦定治疗4周。全自动生化分析仪检测血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C含量,Elisa法检测各组小鼠血清TN F-α、IL-6水平变化,R T-PCR法检测主动脉VEGF、MMP-9、HIF-1αm R N A表达水平。结果与空白对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-6水平显著升高(P0.01),HDL水平显著降低(P0.01),VEGF、MMP-9、HIF1-αm R N A表达水平显著升高(P0.01);与模型组比较,治疗组小鼠血清水平、炎症因子水平以及VEGF、MMP-9、HIF1-αm R N A表达水平明显改善(P0.01)。结论中药水蛭的有效成分水蛭素的人工合成药物比伐芦定能够通过改善血脂水平,血清炎症因子水平及血管新生等方面发挥良好的抗动脉粥样硬化作用。     

补阳还五汤加味预防动脉粥样硬化形成机制

目的:探究补阳还五汤加味对动脉粥样硬化(AS)形成的预防及机制研究。方法:将30只雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠(Apo E-/-小鼠)随机分为Apo E-/-小鼠组、模型组、补阳还五汤加味组和辛伐他汀组,另以正常雄性C57BL/6J小鼠设组。模型组、补阳还五汤加味组和辛伐他汀组采用高脂饮食造模。第4周后,补阳还五汤加味组和辛伐他汀组分别灌以补阳还五汤20 g·kg~(-1)+水蛭粉0.46 g·kg~(-1),辛伐他汀3 mg·kg~(-1)。第9周后,检测血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)值,取动物主动脉根部经苏木素-伊红(HE)常规染色后观察组织形态变化并测量纤维帽厚度和内-中膜厚度、检测主动脉p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和细胞外信号调节激酶5(ERK5)蛋白表达变化。结果:血脂水平,与C57BL/6J小鼠正常组比较,Apo E-/-小鼠组和模型组TC,TG,LDL-C均升高且HDL-C均降低(P0.01);与模型组比较,补阳还五汤加味组与辛伐他汀组均能降低Apo E-/-小鼠TC,TG,LDL-C水平,同时升高HDL-C(P0.05,P0.01)。HE染色,C57BL/6J小鼠正常组主动脉管壁无斑块形成,Apo E-/-小鼠组管壁有极少斑块形成,内-中膜略有增厚。模型组斑块形成明显,内-中膜明显增厚。补阳还五汤加味组与辛伐他汀组较模型组斑块减少,内-中膜厚度减少。蛋白表达,与C57BL/6J小鼠正常组比较,模型组主动脉组织中p38MAPK的蛋白表达量增多(P0.01),ERK5的蛋白表达量减少(P0.01);与模型组比较,补阳还五汤加味组和辛伐他汀组均能降低p38MAPK蛋白的表达量(P0.01),增加组织中ERK5蛋白的表达(P0.01)。结论:补阳还五汤加味与辛伐他汀均有预防AS的作用。补阳还五汤加味预防AS发生的机制可能与干预MAPK信号通路中的p38MAPK,ERK5途径有关。     

白藜芦醇调节STIM1抗动脉粥样硬化的机制

目的:实验利用apoE~(-/-)小鼠高脂喂养建立动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)模型,观察基质相互作用因子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)在白藜芦醇抗AS中的具体机制。方法:雌性apoE~(-/-)小鼠卵巢切除后高脂喂养建立AS模型,实验分为正常组、模型组、白藜芦醇低、中、高剂量(50,100,150 mg·kg~(-1))组及补充雌激素组(0.3 mg·kg~(-1))。分别检测各组小鼠血清中血脂4项,油红O染色观察胸主动脉形态改变,蛋白质免疫印迹(Western blot)分析各组小鼠血管组织中STIM1,钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)及雌激素受体α(ERα)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分析各组小鼠血管组织中STIM1及Orai1 mRNA表达情况。结果:与正常组比较,模型组血清中总胆固醇(CHOL),甘油三酯(TG)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)升高,而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量明显下降(P0.05),给予白藜芦醇及雌激素后可明显降低高脂饮食所致的CHOL,TG及LDL-C明显升高,并可明显增加HDL-C含量(P0.05)。油红O染色显示:正常组血管结构完整、清晰、内膜连续;模型组内膜增厚、可见明显脂质斑块;而加入不同剂量白藜芦醇或雌激素后,内膜增厚减轻且内膜下脂质斑块显著减少。Western blot及Real-time PCR结果显示:与正常组比较,模型组STIM1,Orai1蛋白及mRNA表达明显升高(P0.05),而加入不同剂量白藜芦醇或雌激素后STIM1,Orai1蛋白及mRNA表达较模型组均明显下降(P0.05);同时Western blot结果还显示,与模型组比较,加入不同剂量白藜芦醇或雌激素后均可增加血管组织中ERα表达。结论:白藜芦醇可通过增加ERα表达,下调STIM1及Orai1表达,抑制钙池操纵性钙通道(SOCC)介导的钙内流,延缓AS发生。     

参元丹优化方对动脉粥样硬化小鼠胰岛素抵抗及血清血栓素A_2/前列环素比值和DNA甲基化水平的影响

目的观察参元丹优化方对高脂喂养Apo E基因敲除(Apo E-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)胰岛素抵抗及血清血栓素A2(TXA2)/前列环素(PGI2)比值和DNA甲基化(5-m C)水平的影响,探讨其相关作用机制。方法 40只8周龄雄性Apo E-/-小鼠高脂饲料喂养6周,随机分为模型组、立普妥组、参元丹原方组和参元丹优化方组,各给药组给予相应药物干预6周。检测小鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、胰岛素、TXA2、PGI2、DNA甲基化转移酶(DNMT1)和5-m C水平。HE染色,图像分析测量小鼠主动脉AS斑块面积。结果与模型组比较,参元丹原方组和参元丹优化方组小鼠血清TC和TG水平明显降低,HDL-C水平明显升高(P0.01),AS指数明显降低,校正后主动脉AS斑块面积显著降低(P0.05),参元丹优化方组小鼠血清5-m C、DNMT1、胰岛素水平及TXA2/PGI2比值显著降低(P0.05),参元丹优化方组优于参元丹原方组(P0.01)。结论参元丹优化方降低血清胰岛素、5-m C水平和TXA2/PGI2比值均优于原方,改善血脂和AS效果与原方相当。     

四妙勇安汤对动脉粥样硬化小鼠动脉血管斑块外膜滋养血管通透性的影响

目的:观察四妙勇安汤对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)易损斑块病理形态及外膜滋养血管(vasa vasorum,VV)通透性的影响,并以VV为靶点探讨其干预机制。方法:采用健康雄性Apo E~(-/-)小鼠,随机分为模型组、四妙勇安汤组(11.7 mg·kg~(-1)·d~(-1))和辛伐他汀组(2.6 mg·kg~(-1)·d~(-1)),给予添加1.1%L-蛋氨酸的高脂饲料喂养;以C57BL/6小鼠作为正常组,喂养8周后进行模型评价,在模型成功基础上,持续药物干预8周,采用油红O染色观察小鼠主动脉的病理形态变化;通过免疫组化染色观察主动脉根部斑块外膜基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9),基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)蛋白的表达情况。结果:油红O染色结果显示,与正常组比较,模型组主动脉血管内壁斑块面积显著增加(P0.01);与模型组比较,辛伐他汀组主动脉内壁斑块面积显著减少(P0.01);四妙勇安汤组主动脉内壁斑块面积明显减少(P0.05)。免疫组化染色结果显示,与正常组比较,模型组小鼠主动脉外膜MMP-9阳性表达面积明显增大(P0.01);与模型组比较,辛伐他汀组与四妙勇安汤组MMP-9阳性表达明显减小(P0.01);与辛伐他汀组比较,四妙勇安汤组MMP-9阳性表达明显减小(P0.01)。结论:四妙勇安汤能减轻小鼠主动脉斑块面积,通过调节MMP-9,TIMP-1的表达,降低斑块外膜VV通透性,稳定易损斑块。     

脉血康胶囊联合瑞舒伐他汀对冠脉临界病变患者冠脉病变程度的影响

目的研究脉血康胶囊联合瑞舒伐他汀对冠脉临界病变患者钙库操纵性钙通道蛋白(SOCC)基质交联分子1(STIM1)、钙释放激活钙通道蛋白Orai1及瞬时受体电位通道1(TRPC1)蛋白水平和冠脉病变严重程度的影响。方法将2015年1月—2016年12月北京安贞医院经定量冠脉造影检查确诊冠脉临界病变(BCL)住院患者160例设为临界病变组(BCL组),150例无冠脉病变的受试者为对照组(简称CTR组)。BCL组随机分为常规治疗组(简称RTT组,80例)和联合治疗组(简称CBT组,80例)。RTT组给予生活方式改善、阿司匹林、AECI、β受体阻滞剂及瑞舒伐他汀10 mg等药物。CBT组在常规药物治疗基础上,每日加用瑞舒伐他汀15 mg和脉血康胶囊3.0 g,连续治疗12个月。检测血小板STIM1、Orai1、TRPC1、高敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平及TC、LDL-C、HDL-C、TG浓度。评价BCL组平均狭窄程度(MPS)。结果BCL组130例受试者复查冠脉造影。与本组治疗前比较,治疗后CBT组和RTT组血小板STIM1、Orai1、TRPC1水平均降低(P<0.05);CBT组冠脉临界病变的MPS明显减低(59.74±9.72vs.38.92±13.84,P<0.05),RTT组MPS有所下降(58.96±8.67vs.55.43±10.03),但差异无统计学意义(P>0.05)。与RTT组比较,治疗后CBT组血小板STIM1、Orai1、TRPC1、TC、LDL-C、TG、和hs-CRP明显降低(P<0.05,P<0.01),且CBT组MPS差值大于RTT组(P<0.01)。结论脉血康胶囊3.0 g和瑞舒伐他汀15 mg每日联合应用可降低SOCC水平,其可能是冠脉临界病变治疗的优化选择。     

栀子苷对动脉粥样硬化并发非酒精性脂肪肝ApoE~(-/-)小鼠炎症和氧化应激的影响

目的观察栀子苷对动脉粥样硬化(AS)并发非酒精性脂肪肝(NAFLD)Apo E-/-小鼠炎症和氧化应激的影响。方法将50只Apo E-/-小鼠随机分为模型组,辛伐他汀组(5 mg·kg-1·d-1),栀子苷低、中、高剂量组(12.5,25,50 mg·kg-1·d-1),每组10只,另取10只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。采用高脂饲料喂养16周的方式建立AS模型,分别于胸主动脉与肝脏部位切片观察主动脉斑块及肝脏病理形态,检测各组小鼠血脂、肝功能以及血清和肝脏中炎症因子、丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)水平。结果与正常对照组比较,模型组小鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、天冬氨酸氨基酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平明显增高(P0.01),血清和肝匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、MDA显著升高(P0.01),T-SOD水平降低(P0.01)。模型组主动脉内可见纤维斑块形成,肝细胞可见大量脂肪变性;辛伐他汀与栀子苷各剂量组均能降低血清及肝脏中TNF-α、IL-6、MDA水平,升高T-SOD水平,并且能抑制主动脉斑块形成,减轻肝脏脂肪变性。结论对AS并发NAFLD Apo E-/-小鼠,栀子苷具有显著治疗作用,其机制可能为抑制炎症,抗氧化应激损伤。     

Visfatin在ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化发展中的作用及丹参酮ⅡA干预研究

目的 探讨visfatin蛋白在动脉粥样硬化（AS）病变形成中的作用,以及丹参酮ⅡA抗载脂蛋白E基因缺陷（apoE-/-）小鼠AS病变的可能机制。方法 将C57BL/6J背景的apoE-/-小鼠随机分为4组：模型组,丹参酮ⅡA高、低剂量组,阳性对照组（辛伐他汀组）,每组8只。并以8只C57BL/6J小鼠作为空白对照组。apoE-/-小鼠给予高脂饮食,并按分组情况给予丹参酮ⅡA磺酸钠（20,10 mg·kg-1）或辛伐他汀（5 mg·kg-1）干预。第14周后全部处死,HE染色观察动脉斑块形成程度,测定斑块面积与管腔面积之比。酶法检测血清脂质含量。ELISA方法检测血清高敏C反应蛋白（hs-CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、金属基质蛋白酶-9（MMP-9）含量。采用western blotting法检测主动脉壁visfatin表达。结果 （1）空白对照组主动脉未见动脉粥样硬化改变,模型组有较明显的主动脉内膜增厚及粥样斑块的形成。模型组血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平及hs-CRP、TNF-α、MMP-9表达、动脉壁visfatin表达显著高于空白对照组,而高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平则显著低于空白对照组（均P＜ 0.05）。（2）与模型组比较,丹参酮ⅡA高、低剂量组、辛伐他汀组均可显著减少斑块面积与管腔面积比值,降低血脂中TC、TG、LDL-C水平（P＜ 0.05）,升高HDL-C水平（P＜ 0.05）;明显降低血清细胞因子hs-CRP、TNF-α、MMP-9水平,降低小鼠主动脉壁visfatin表达。（3）在减少斑块面积、改善血脂水平、抑制炎症、抑制visfatin表达方面,丹参酮ⅡA均具有显著的剂量依赖性。丹参酮ⅡA高剂量在减少斑块面积、改善血脂水平方面与辛伐他汀差异无显著性意义,但在降低hs-CRP、TNF-α、MMP-9水平,以及下调主动脉壁visfatin表达方面显著优于辛伐他汀组。（4）apoE-/-小鼠动脉壁组织visfatin表达水平与血清hs-CRP、TNF-α、MMP-9水平具有显著的正相关关系。结论 visfatin参与了AS的发生发展,其参与机制可能与炎症机制有关。丹参酮ⅡA可能通过调节apoE-/-小鼠血脂代谢、抑制炎症细胞因子hs-CRP、TNF-α、MMP-9的表达,及下调主动脉壁visfatin表达,进而抑制apoE-/-小鼠AS病变的形成发展。     

养阴活血解毒方对载脂蛋白E基因敲除动脉粥样硬化小鼠调节性T细胞的影响

目的探讨养阴活血解毒方(YHF)对Apo E基因敲除(Apo E~(-/-))小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)病变及其外周血调节性T细胞(regulatory T-cell,Treg)的影响。方法 Apo E~(-/-)小鼠随机分为正常组、模型组、YHF高、低剂量组(36,18 mg·kg~(-1))和辛伐他汀组(33 mg·kg~(-1)),除正常组喂食普通饲料之外,其余各组均高脂饮食造模并灌胃给药20周后收集血清及抗凝血,试剂盒检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C);油红O法染色法观察主动脉血管内膜脂质聚积情况;Elisa检测血清IL-10、TGF-β、IL-6、IL-12p70含量;流式细胞术检测外周血中Treg细胞比例变化;用蛋白免疫印迹(Western blot)法分析主动脉组织叉头状螺旋转录因子3(forkhead box protein3,Foxp3)蛋白的表达。结果与模型组相比,YHF低剂量组TG水平降低、HDL-C水平升高,主动脉斑块面积减少,血清IL-10含量升高,IL-6、IL-12p70含量降低,Treg细胞比例升高(P0.05),Foxp3蛋白表达水平显著上调(P0.01);YHF高剂量组TC、TG、LDL-C水平较模型组均显著降低(P0.05,P0.01),HDL-C水平提高,主动脉斑块面积减少,血清IL-10、TGF-β含量升高,IL-6、IL-12p70含量降低,Treg细胞比例升高(P0.05),Foxp3蛋白表达水平显著上调(P0.01)。结论 YHF可以改善高脂饮食诱导的Apo E~(-/-)小鼠脂质代谢异常、减少主动脉粥样斑块面积的同时能够上调Treg细胞的比例以及相关细胞因子(IL-10、TGF-β)的分泌。     

丹瓜方对ApoE－/－糖尿病小鼠肝脏AdipoR2表达的影响

目的研究祛瘀化痰的复方中药丹瓜方对载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)糖尿病小鼠肝脏脂联素受体(AdipoR2)表达及其对肝脏的影响。方法将8周龄的Apo E-/-小鼠,随机分为模型对照组、丹瓜方组、吡格列酮组和联合治疗组,另设同龄C57BL/6J小鼠为C57组,4组Apo E-/-小鼠均注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,并分别予以相应的药物干预,12周后,观察丹瓜方对糖脂代谢的影响,并分别检测肝脏AdipoR2 mRNA及蛋白表达,用HE、红油O脂肪染色、Masson等观察肝脏组织形态学改变。结果丹瓜方组Apo E-/-小鼠的空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)较模型组显著降低;丹瓜方组Apo E-/-小鼠肝脏AdipoR2蛋白及mRNA表达明显高于模型对照组(P0.01),并优于吡格列酮组(P0.05,P0.01);丹瓜方组在改善糖尿病Apo E-/-小鼠肝细胞脂肪异位沉积和纤维化等病理改变上明显优于吡格列酮组和联合治疗组。结论丹瓜方能够明显地改善肝脏脂代谢,减轻肝脏脂肪沉积和纤维化,可能与丹瓜方促进肝脏AdipoR2的表达有关。     

白藜芦醇调节TRPC1/STIM1介导的SOCC抗动脉粥样硬化机制

目的:研究白藜芦醇通过调节瞬时受体电位通道蛋白1(transient receptor potential channel protein 1,TRPC1)及基质交互分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)介导的钙库操纵性钙通道(store-operated calcium channel,SOCC)发挥抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的具体机制。方法:雌性C57BL/6J小鼠卵巢去势后高脂饮食建立AS模型,分为空白组,模型组,白藜芦醇低、中、高剂量组(50,100,150 mg·kg~(-1)),雌激素组(0.3 mg·kg~(-1))。高脂喂养16周后,收集血清检测各组小鼠血清中血脂4项及Ca~(2+)水平;油红O染色从形态学观察动脉粥样硬化斑块形成;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠胸主动脉TRPC1,STIM1及内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白表达水平;实时荧光定量PCR法(Realtime PCR)检测小鼠胸主动脉血管中TRPC1与STIM1 mRNA信号表达。结果:与模型组相比,白藜芦醇高剂量组及雌激素组小鼠血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白(LDL)均降低(P0.05),但高密度脂蛋白表达(HDL)升高,血清Ca~(2+)浓度下降;油红O染色提示,与空白组相比,模型组AS病理改变明显,内膜增厚,不完整,连续性被破坏,有较明显的脂质斑块;补充白藜芦醇或雌激素后,动脉管壁AS病理改变明显减轻,脂滴明显减少。Western blot结果显示,补充白藜芦醇中、高剂量及雌激素后,与模型组相比,TRPC1与STIM1蛋白表达明显减少,而eNOS蛋白表达增加(P0.05);通过Real-time PCR检测发现,与模型组相比,白藜芦醇中、高剂量组及雌激素组TRPC1与STIM1 mRNA基因表达的水平明显降低(P0.05)。结论:白藜芦醇可通过下调TRPC1及STIM1基因表达及蛋白水平,抑制SOCC介导的Ca~(2+)内流,增加eNOS蛋白表达及活性,发挥抗动脉粥样硬化的作用。     

天香丹对动脉粥样硬化秽浊痰阻证ApoE-/-小鼠斑块内MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的:观察天香丹对As秽浊痰阻证Apo E-/-小鼠斑块病理变化、MMP-9及TIMP-1表达的影响,探讨天香丹对As秽浊痰阻证斑块稳定性的影响及其机制。方法:将12只Apo E-/-小鼠正常对照组以普通饲料喂养,36只Apo E-/-小鼠以高脂饲料复合寒燥环境喂养12周,构建As秽浊痰阻证模型,造模成功后按随机数字表法分为天香丹组、阿托伐他汀组、模型组。12周后处死、HE染色测定PA/LA比值,免疫组化检测MMP-9及TIMP-1的表达。结果:与正常对照组比较,模型组的PA/LA比值上升,斑块内MMP-9比值上升,TIMP-1比值下降。与模型组比较,天香丹组、阿托伐他汀组PA/LA比值减小,斑块内MMP-9比值下降,TIMP-1比值上升。结论:天香丹可有效降低As秽浊痰阻证Apo E-/-小鼠PA/LA的比值,降低斑块内MMP-9水平的表达,增加TIMP-1水平表达,从而抑制胶原纤维分解,对As秽浊痰阻证斑块具有稳定性作用。     

调肝导浊方对apoE~(-/-)小鼠血脂及主动脉斑块面积的影响

[目的]观察调肝导浊方对apo E~(~(-/-))小鼠血脂及主动脉斑块的影响。[方法]将apo E~(-/-)小鼠随机分成模型组和调肝导浊组并予以高脂饮食12周,C57BL/6L小鼠作为对照组给予普通饮食,12周后,检测各组小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)的水平;油红O染色评估主动脉斑块的范围;小动物超声仪检测主动脉的斑块面积及狭窄程度。[结果]模型组与对照组相比,TC、TG、HDL-C、LDL-C均升高(P0.05或P0.01);调肝导浊组与模型组相比,LDL-C水平降低(P0.05),TC、TG、HDL-C无明显差异。油红O染色显示模型组的斑块范围最大,其次是调肝导浊组,最后是对照组。B超结果显示与对照组相比,模型组主动脉的斑块面积及狭窄程度明显增大(P0.01);调肝导浊方干预后,斑块面积减小(P0.05),狭窄程度明显减轻(P0.01)。[结论]调肝导浊方可以降低apo E~(-/-)小鼠的血清LDL-C水平,减少主动脉的斑块面积,并改善血管的狭窄程度。     

化瘀祛痰方对ApoE-/-小鼠主动脉MAPK信号通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨载脂蛋白敲除(Apoe-/-)小鼠主动脉丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关mRNA的表达变化及化瘀祛痰方药对其的干预作用,探讨化瘀祛痰方药抗AS作用及可能的机制。方法:50只Apo E-/-小鼠随机分为模型组,丹参酮ⅡA组(30 mg·kg~(-1)·d~(-1)),化瘀祛痰高剂量组(20 g·kg~(-1)·d~(-1)),化瘀祛痰中剂量组(10 g·kg~(-1)·d~(-1)),化瘀祛痰低剂量组(5 g·kg~(-1)·d~(-1)),10只C57BL/6/J小鼠作为正常组。全自动生化仪检测血清甘油三酯(triglyceride,TG),胆固醇(cholesterol,TC),高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的含量;苏木素-伊红(HE)检测各组小鼠主动脉斑块情况;油红O检测各组小鼠肝脏脂质沉积情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)测定各组小鼠血清中血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion protein 1,VCAM-1),细胞间黏附分子-1(ICAM-1),白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠主动脉c-Jun氨基末端激酶(c-Jun n-terminal kinase,JNK),磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK),p38 MAPK,p-p38 MAPK,细胞外调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK),磷酸化细胞外调节激酶(extracellular regulated protein kinases,p-ERK)蛋白的表达变化。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清TC,TG,LDL-C水平明显升高,HDL-C水平明显降低;主动脉管腔见较大粥样斑块,肝细胞中见大量脂质沉积;血清内相关炎性因子TNF-α,IL-6,VCAM-1,ICAM-1含量增加;血管内相关MAPK信号通路p-p38,p-JNK蛋白表达明显增加(P0.05)。与模型组比较,丹参酮ⅡA组与化瘀祛痰各组小鼠TC,TG,LDL-C明显下降,HDL-C明显升高,主动脉管腔中粥样斑块面积和肝脏脂质沉积量明显减少,血清内相关炎性因子TNF-α,IL-6,VCAM-1,ICAM-1含量降低(P0.05);血管内相关MAPK信号通路p-p38,p-JNK蛋白表达明显降低(P0.05),p-ERK表达趋势不明显。结论:化瘀祛痰方药可抑制Apo E-/-小鼠主动脉斑块形成,其机制可能与调控血管MAPK信号通路基因表达有关。     

丹红注射液对动脉粥样硬化小鼠主动脉斑块的干预作用及基因组DNA甲基化水平和甲基化转移酶的影响

目的:研究丹红注射液对高脂喂养的ApoE基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠动脉粥样硬化(As)斑块的干预作用及基因组DNA甲基化水平和DNA甲基化转移酶(DNMTs)的影响。方法:将40只8周龄雄性ApoE~(-/-)小鼠高脂饲料喂养6周后随机分为模型组、阿托伐他汀钙片(商品名:立普妥)(阳性对照组)、丹红注射液低剂量组和高剂量组(n=10),给予药物腹腔注射6周后。检测其血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)水平。行HE染色,图像分析测量小鼠主动脉As斑块面积。采用高效液相色谱(HPLC)法检测小鼠血清基因组甲基化水平,采用ELISA法检测各组小鼠血清DNMTs水平。免疫组化染色,图像分析测量小鼠主动脉As斑块内DNMT1的表达。结果:与模型组相比,丹红注射液高剂量和低剂量组小鼠血清TG水平明显降低(P0.01)、丹红注射液高剂量组LDL-C水平明显降低(P0.01),丹红注射液低剂量组HDL-C水平明显升高(P0.05),丹红注射液高剂量组小鼠动脉粥样硬化指数显著降低(P0.01)。丹红注射液高剂量和低剂量组小鼠血清基因组甲基化和DNMTs水平显著降低(P0.01)。丹红注射液与模型组相比,丹红注射液组As小鼠的校正后主动脉As斑块面积显著降低,以及斑块内DNMT1表达显著降低(P0.01)。结论:丹红注射液可降低As小鼠血脂水平,减少As斑块面积,其机制可能与降低As小鼠血清基因组甲基化水平和整体DNMTs水平和抑制As小鼠主动脉斑块DNMT1表达有关。     

天香丹对动脉粥样硬化秽浊痰阻证ApoE-/-小鼠的实验研究

目的观察天香丹对动脉粥样硬化(AS)秽浊痰阻证Apo E-/-小鼠血脂水平、主动脉内皮细胞的影响,探讨其抗AS秽浊痰阻证的机制。方法将12只Apo E-/-小鼠正常对照组以普通饲料喂养,48只Apo E-/-小鼠以人工气候箱模拟新疆寒燥环境,高脂饲料喂养12周建立AS秽浊痰阻证模型。造模成功后随机分为天香丹组、阿托伐他汀组、荷丹片组、模型组,灌胃12周后处死,摘眼球取血测定血脂含量,取主动脉电镜观察病理学改变。结果与正常对照组比较,模型组小鼠血清TC、LDL-C含量上升,与模型组比较,天香丹组小鼠的TC、LDL-C含量下降,TG、HDL-C含量无显著差异,透射电镜观察显示天香丹组主动脉的内皮细胞病变程度明显轻于模型组。结论天香丹可有效降低AS秽浊痰阻证Apo E-/-小鼠TC、LDL-C含量,对动脉粥样硬化形成有抑制作用。     

丹参酮ⅡA对ApoE~(-/-)动脉粥样硬化小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇流出相关基因表达的影响

目的:观察丹参酮ⅡA对ApoE基因敲除小鼠主动脉粥样斑块形成及对腹腔巨噬细胞胆固醇逆向转运相关基因的影响。方法:20只Apo E-/-小鼠随机分成模型组、丹参酮ⅡA组,10只C57BL/6J小鼠作为空白对照组。模型组、丹参酮ⅡA组给予高脂饲料喂养,空白组给予普通饲料。丹参酮ⅡA组每日灌胃丹参酮ⅡA(30mg/kg),模型组、空白对照组灌胃予等量生理盐水。检测各组小鼠血清TG、TC、HDL-C、LDL-C水平。油红O染色法观察各组小鼠主动脉脂质沉积情况,HE染色观察小鼠主动脉结构变化及动脉粥样硬化程度,采用RT-PCR和Western blot法检测腹腔巨噬细胞ABCA1、ABCG1、CD36的m RNA和蛋白表达,流式细胞术检测巨噬细胞CD36含量。结果:模型组小鼠血清HDL-C水平显著低于空白对照组,血清TG、TC、LDL-C水平显著高于空白对照组;组织形态学显示,模型组小鼠主动脉管腔中明显可见粥样斑块形成,管壁沉积大量脂质,腹腔巨噬细胞ABCA1 m RNA和蛋白表达显著低于空白对照组,ABCG1表达变化不明显,CD36 m RNA和蛋白表达显著高于空白对照组。与模型组比较,丹参酮ⅡA组小鼠血脂水平及动脉损伤水平明显改善;丹参酮ⅡA组巨噬细胞ABCA1基因和蛋白表达显著高于模型组,CD36基因和蛋白表达显著低于模型组,两组ABCG1表达差异无统计学意义。结论:丹参酮ⅡA对Apo E-/-小鼠主动脉斑块形成具有良好的抑制的作用,其机制可能与调控ABCA1及CD36等与巨噬细胞胆固醇流出相关基因及血脂有关。