核酸适配体技术在海洋生物毒素检测中的应用

核酸适配体是利用指数富集的配基系统进化技术体外筛选得到的单链DNA或RNA片段,能高亲和、高特异性地结合氨基酸、糖类、蛋白质、细胞、细菌和病毒等多种目标物质,具有操作简单、灵敏度高和检测成本低等优点.在海洋生物毒素的检测和预防中,核酸适配体技术已显示出巨大的潜力.本文概述了核酸适配体技术的基本原理、目前的应用现状及优势,分析了海洋生物毒素分子的特点及现有检测手段的局限,并对核酸适配体技术在海洋生物毒素检测中的应用前景进行了展望.     

一种核酸适配体高敏检测方法的建立及应用评价

本文建立一种基于免疫印迹的核酸适配体高敏定量分析的检测方法,并探讨其在适配体药物靶向性研究中的应用价值。首先用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行核酸适配体的分离,然后利用电转的方法将凝胶上的核酸适配体转移至PVDF膜上,先后孵育Rabbit Anti-Biotin和HRP-Streptavidin抗体,最后利用化学发光仪进行成像。结果显示核酸适配体可以通过该方法进行定量检测分析,且该方法检测灵敏度高,能够识别荧光染料法检测不到的浓度范围。此外,该方法只识别被生物素修饰的核酸适配体,特异性强。结果提示,核酸免疫印记法可以作为核酸适配体药物靶向性研究的一个定量检测手段。     

雌激素受体核酸适配体在乳腺癌免疫组织化学检测中的应用

  目的  筛选出能应用于乳腺癌免疫组织化学检测的雌激素受体（ER）核酸。  方法  制备ER蛋白,用指数富集的配体系统进化（SELEX）技术筛选出对ER具有高亲和力和特异性的核酸适配体。采用配体－受体相互反应实验来测定合成的ER适配体复合物的亲和力,用生物素化ER适配体和ER单克隆抗体分别作为一抗对105例乳腺癌组织进行免疫组化染色,以检测合成的ER适配体在癌组织中的特异性表达。用Kappa检验进行一致性检验。  结果  线性回归法计算获得生物素化适配体与ER复合物的解离常数Kd值为（0.34±0.05）nmol/L (n=3, r=0.989),最大结合力（B_max）为769.23 fmol/(mg prot·nmol-1·L-1)。实验结果表明,分别用生物素化ER适配体和ER单克隆抗体分别作为一抗进行免疫组化染色的结果具有高度一致性。其中ER阳性和阴性样本n=105,kappa值=0.943,95%可信区间=0.879~1.006,P<0.05;而ER弱阳性和中度/强表达样本n=75,kappa值=0.805,95%可信区间=0.642~0.967,P<0.05。进一步观察发现,ER适配体和ER抗体能使乳腺癌组织同一部位出现阳性表达,而阴性对照组均无表达。2例子宫内膜癌用生物素化ER适配体检测,癌细胞ER表达均为阳性。  结论  我们合成的ER适配体在体外能高度结合ER,ER适配体和ER抗体都能检测乳腺癌组织中ER的特异性表达。     

以大肠埃希菌tolC蛋白为靶标的适配体的筛选及结构分析

目的:筛选大肠埃希菌外排泵tolC蛋白的核酸适配体.方法:重组表达大肠埃希菌外排泵外膜蛋白tolC,利用指数富集的配体系统进化技术(stematic evolution of ligand by exponential enrichment,SELEX)从单链DNA文库中筛选出一组能够特异性与其结合的核酸适配体.利用FITC荧光素标记技术检测每轮单链DNA文库与靶蛋白的亲和力,直至亲和力的上升趋于饱和,将最后一轮筛选产物克隆测序,并用DNAman软件分析其二级结构.结果:经过12轮筛选,单链DNA文库与靶标蛋白的亲和力趋向稳定,将第12轮筛选产物克隆测序,对获得的23个适配体进行分析.一级结构分析显示23个适配体并无共同的保守序列,但分别有3对和2对适配体序列完全一致.二级结构预测分析表明,茎环结构为适配体主要的结构形式,提示其可能是适配体与tolC蛋白蛋白特异性结合的基础.根据二级结构特点可将23个适配体分为4个家族,其中20号适配体与靶标蛋白亲和力最高.结论:成功利用SELEX技术筛选获得了特异结合tolC的高亲和力的核酸适配体,为大肠埃希菌耐药干预及机制研究奠定了基础.     

外泌体在乳腺癌中的研究进展

外泌体是一类由自体细胞分泌的纳米级囊泡样小体,参与细胞及内环境之间的物质运输和信号传递。外泌体可以通过在肿瘤细胞和细胞外基质间运输细胞内的核酸、蛋白和脂类等物质,影响肿瘤的发生和发展,甚至可以影响肿瘤的治疗。不同类型的肿瘤细胞分泌的外泌体,在肿瘤的发生过程中发挥着不同的作用。近来,与乳腺癌相关的外泌体逐渐成为一项新的研究热点,并发现乳腺癌细胞可以刺激分泌某些特定类型的外泌体,并有望成为早期乳腺癌筛查的新型生物学标志。外泌体传递的核酸、蛋白质等物质在乳腺癌的发生、转移和治疗耐药中起到了重要作用。同时外泌体也可以将抗肿瘤药物转运出乳腺癌细胞导致耐药。但外泌体作为肿瘤药物载体时,表现出极低的免疫原性和生物毒性,将为今后的肿瘤靶向治疗提供可行的技术基础。     

基于核酸适配体-荧光染料EvaGreenTM快速检测ATP的研究

目的 利用荧光嵌入染料EvaGreenTM在单双链DNA溶液中不同的荧光性质构建基于核酸适配体的ATP检测体系,建立一种简单、高效的检测ATP的新方法.方法 利用ATP核酸适配体双链DNA(dsDNA)和核酸绿色荧光染料Eva GreenTM嵌合作用,实现了对ATP的检测.考察了ATP的孵育温度、pH、浓度等因素对荧光...     

乳腺癌早期诊断没备及其技术进展——联合成像及微创活检的技术进展(四)

乳腺癌普查和早期诊断是降低乳腺癌死亡率的关键环节.本文从10个方面分别介绍乳腺X线摄影、超声、MRI,核医学和计算机辅助诊断(CAD)以及如电阻抗、电子触诊、热图、光学成像及联合成像等新技术的应用和发展.本期内容是全文第9～10大题,主要介绍联合成像及微创活检孜术在乳腺癌早期诊断方面的技术进展.四期连载所述乳腺癌早期诊断设备及技术的发展,提高了乳腺癌早期诊断水平,实现了快速筛查和使用上的灵活简便.无创化、诊断与治疗相互融合、多方法综合诊断今后势必成为一种趋势.     

核酸适配子及其筛选进展

随着对单链DNA/RNA的不断研究,人们发现这些单链的寡核苷酸序列具有特殊的三维结构,能高亲和力和高特异性地结合各类靶标.根据单链DNA/RNA的这一性质.人们应用指数富集配体的系统进化技术在体外进行数轮筛选和扩增到特异性高、亲和性强的寡核苷酸序列,即核酸适配子,也称为适配子.基于适配子的化学结构和特点.稳定性的不断提高和筛选的方法不断改进,适配子被广泛运用于早期临床诊断和治疗等生物医学研究领域,并不断取得进展.本文就适配子技术及其筛选进展作一综述.     

动态增强磁共振成像在乳腺癌诊断和治疗中的应用价值

乳腺癌是严重危害女性健康和生命的恶性肿瘤。乳腺癌的早期发现、早期诊断和早期治疗是改善预后的重要因素。在乳腺癌的诊断、分期、治疗及治疗后随访中,动态增强磁共振成像（DCE-MRI）具有较高的应用价值。     

近红外线及B超检查在乳腺疾病普查中的联合应用

乳腺癌是危害妇女健康的一种主要恶性肿瘤,近年来其发病率呈上升趋势.乳腺普查可提高早期乳腺癌的检出率,使其获得早期发现、早期治疗及较好的治疗效果.本文应用近红外线与B型超声相结合来共同诊断乳腺疾病,提高了乳腺疾病的诊断准确率及乳腺癌的检出率,降低了乳腺癌的漏检率.     

1例男性乳腺癌的临床研究并文献分析

与女性乳腺癌相比,男性乳腺癌非常少见,由于其较少见,无法在临床进行大量研究,临床医生对男性乳腺癌的认识大部分是从一些小型的医疗机构或是回顾性研究以及从女性乳腺癌的治疗经验中得知,因此对于男性乳腺癌的临床、病理和预后仍需要进一步研究,在临床中男性乳腺癌患者虽比较少见,但是近年来发病率也在逐渐上升,同时,很多临床医生缺少管理男性乳腺癌的经验。本文报告了1 例男性乳腺癌的诊断及治疗过程,并复习有关男性乳腺癌诊断治疗和临床管理的相关文献,就男性乳腺癌的病因、流行病学、病理特征、临床特点、诊断及治疗进行综述,为临床治疗男性乳腺癌提供参考。     

多模态超声诊断乳腺腺病研究进展

近年来,乳腺腺病发病率居乳腺疾病首位,是女性最为常见的乳腺良性病变,其中,乳腺硬化性腺病极易与乳腺癌相混淆,故早期鉴别诊断对患者后续治疗有着积极的临床意义。常规超声是诊断乳腺腺病的基础,随着超声技术的快速发展,超声造影、弹性成像及自动乳腺全容积成像等技术的应用进一步提高了该病的诊断正确率。因此,本文整理了近年来相关文献,对乳腺腺病和乳腺癌的不同类型超声特点及表现情况进行总结分析,以提高鉴别水平,希望对临床上乳腺腺病与乳腺癌的鉴别诊断提供一定的理论参考依据。     

卢雯平基于孙桂芝学术思想治疗乳腺癌思路探讨

孙桂芝教授从医60余年,在乳腺癌的中西医诊疗方面积累了丰富的临床经验。卢雯平教授在20多年的临床诊疗过程中,基于孙桂芝教授中西医结合治疗乳腺癌的核心思想,发展提出三辨论治思想,根据不同治疗阶段的病机特点,结合全方位、全周期综合管理治疗模式治疗乳腺癌,临床疗效颇佳。     

基于百度指数的乳腺癌防治健康信息网络关注特征分析

利用百度指数获取乳腺癌诊治健康信息的网民搜索及媒体报道数据，从时间分布、群体特征、相关搜索词、头条新闻内容及来源等维度分析公众网络关注特征。结果显示网民关注乳腺癌早期症状及预后效果，关注度随乳腺癌发病率提高而增加。媒体多发布乳腺癌致病因素、治疗方式、预防保健相关新闻，报道主题与乳腺癌防治的突破性进展相关。     

不能触及肿块型乳腺癌35例临床体会

目的提高不能触及肿块型乳腺癌的诊治水平。方法对我科2011年3月～2018年3月期间收治的35例,不能触及肿块型乳腺癌患者的临床资料进行回顾性分析。结果 32例患者在B超协助下,完成病变组织活检,余3例直接切取乳头乳晕病变组织活检,35例病理确诊为乳腺癌后,给予以手术治疗为主的个体化综合治疗;随访35例,随访时间6个月～7年,未发现复发转移26例,发现有复发转移9例,其中4例已死亡。结论不能触及肿块型乳腺癌,容易漏诊,导致患者病期进展,增加治疗难度,临床医生要引起警惕,及时诊治,才能提高治疗效果。     

MicroRNA-9 和microRNA-210 检测联合 彩色多普勒超声诊断乳腺癌的价值

目的 探讨microRNA-9（miR-9）和microRNA-210（miR-210）检测联合彩色多普勒超声诊 断乳腺癌的价值。方法 选取2015 年3 月至2018 年3 月四川省人民医院东院乳腺外科收治的乳腺癌患者175 例（乳腺癌组）和乳腺良性病变患者162 例（良性病变组）。以是否患有乳腺癌为因变量,采用Logistic 回归 分析影响宫颈癌患病的影响因素;以术后病理检查结果作为金标准比较彩色多普勒超声,miR-9、miR-210 检测及联合诊断乳腺癌的准确性。结果 乳腺癌发病的危险因素包括乳腺癌家族史、月经规律与否、人表皮生长 因子受体2（HER2）表达、miR-9 表达和miR-210 表达（P <0.05）;彩色多普勒超声诊断乳腺癌的敏感性为 83.43%,特异性为69.14%。miR-9 检测诊断乳腺癌的曲线下面积（AUC）为0.753,miR-210 的AUC 为0.747。 彩色多普勒超声联合miR-9、miR-210 检测诊断为乳腺癌AUC 为0.934,敏感性为89.78%,特异性为85.12%。 结论 彩色多普勒超声联合血清miR-9、miR-210 检测可以较好地诊断乳腺癌,为临床早期诊断、筛查乳腺癌 提供参考。     

乳腺血氧与多普勒联合检查在乳腺癌早期筛查中的应用

乳腺癌是世界卫生组织确认的可以通过早期诊断降低死亡率的恶性肿瘤之一,有效的早期诊断和及时治疗是乳腺癌死亡率下降的主要原因。提高乳腺癌的检出率是影像诊断的研究重点,多种影像检查联合应用是目前提倡的发展方向之一。将乳腺血氧功能成像检测方法与多普勒超声相结合,研究乳腺血氧功能成像与多普勒超声在乳腺肿块中的不同图像特征,考虑两种诊断方法联合应用可以提高乳腺疾病特别是早期乳腺癌的诊断率,使早期乳腺癌诊断水平得以提高,实现早期乳腺癌的早发现、早治疗,进而提高患者的生存率及生活质量。     

超声光散射成像与超声弹性成像技术联合应用在乳腺癌诊断中的价值

目的：探讨超声光散射成像（diffused optical tomography,DOT）与超声弹性成像技术（ultrasonic elastography,UE）联合应用在乳腺诊断中的价值。方法：通过117例患者的179个病灶分别进行DOT和UE检查,并与病理结果对照,对比分析DOT及UE在乳腺癌超声诊断中的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值。结果：DOT对乳腺癌诊断的敏感度87．14％、特异度79．82％、准确率82．68％、阳性预测值73．49％、阴性预测值90．62％。UE对乳腺癌诊断的敏感度72．86％,特异度90．83％、准确率83．80％、阳性预测值83．61％、阴性预测值83．90％。联合应用DOT和UE的敏感度91．43％、特异度92．66％、准确率92．18％、阳性预测值88．89％,阴性预测值94．39％。结论：DOT和UE检查均为有效的诊断方法,联合应用DOT和UE可以提高乳腺癌的诊断效能,对临床治疗方案的选择及患者的预后具有重要的意义。     

赵氏中医外科内外结合治疗乳腺疾病思路探究

乳腺疾病的非手术治疗是中医的特色与优势，赵氏中医世家在长期临床实践中坚持内外结合治疗乳腺病并取得良效。在内治中突出"郁"是贯穿乳腺疾病全过程的核心病机，创制了以“解郁”为主的系列治法与方药。在“乳络以疏通为贵”理论指导下，解郁为主的方药可明显提高以乳痈、乳癖、乳岩为代表的各类乳腺疾病的疗效。此外，赵氏中医外科重视外治法在乳腺疾病的中的应用，创立了以“赵氏一笔消膏”为代表的诸多外用药。该膏药配方精当，具有清热解毒、通经活络、破结软坚、活血化瘀、消肿止痛、生肌敛疮之功，在乳腺疾病中疗效斐然。本文主要介绍了赵氏中医外科内外结合治疗乳腺疾病思路，并以乳痈、乳癖、乳岩三种常见乳腺病作为代表论述了赵氏治法的临床疗效，为乳腺病的中医诊疗提供思路，为中医事业的传承贡献绵薄之力。     

老年男性乳腺癌1例

男性乳腺癌在临床中罕见,本文回顾分析1例男性乳腺癌患者的诊断、治疗、术后病理结果 ,并回顾国内外相关文献,对男性乳腺癌基础研究与诊治进展进行分析。认为男性乳腺癌的诊断与治疗方法同于女性乳腺癌。