荧光定量RT-PCR检测Rac1 mRNA基因及其与胃癌转移的关系

目的 探讨肿瘤转移相关基因Rac1水平与胃癌转移的相关性,并评价分析Rac1 mRNA基因在胃癌转移和区分胃良、恶性病变中的价值.方法 用荧光定量RT-PCR TaqMan探针技术,选择Rac1基因目的 片段,与pET-20b(+)载体连接构建重组质粒,建立Rac1 mRNA荧光定量RTPCR标准曲线,并用于检测52份胃癌、癌旁组织及12份胃良性病变组织标本中Rac1 mRNA的含量,分析评价其与胃癌转移的关系.结果 胃癌组织中Rac1 mRNA表达阳性率和含量为100.0%,7.41×103 (3.50×105 ～4.36×106)拷贝/μl,癌旁组织为46.2%,0(0～1.73×104)拷贝/μl,良性病变组织为33.3%,0(0～3.55×103)拷贝/μl,3组间阳性率和Rac1 mRNA含量水平差异均有统计学意义(x2=43.16,x2k-w=64.19,P均＜ 0.01).当ROC曲线确定荧光定量RT-PCR检测Rac1含量的最佳临界值为1.73×104 拷贝/μl时,诊断胃癌组织标本的敏感度为88.5%,特异度为100.0%;当最佳临界值为7.49×103 拷贝/μl时,诊断胃癌是否发生淋巴结转移的敏感度为57.9%,特异度为78.6%.结论 荧光定量RT-PCR检测Rac1 mRNA对鉴别胃良、恶性病变及评价胃癌转移均有参考价值.     

人胃癌组织CCR7和COX-2的表达及意义

【目的】检测胃癌患者癌组织中趋化因子受体7（CCR7）和环氧化酶-2（cox-2）的表达及意义。【方法】检测43例胃癌患者癌组织和35例癌旁正常胃组织中CCR7mRNA和COx-2mRNA的表达情况。【结果】胃癌组织中CCR7mRNA和COX-2mRNA的表达阳性率分别为62．79％和58．14％,相对表达量分别为0．59±0．28和0．66±0．21,均明显高于癌旁正常胃组织阳性率（分别为14．29％和8．57％）和相对表达量（分别为0．13±0．05和0．09土0．01）,两组比较差异均有显著性（P〈0．05）。CCR7mRNA和COX-2mRNA在胃癌组织中的阳性表达率和相对表达量均随癌细胞浸润程度的加深、临床分期的增加及淋巴结转移明显增高（P〈0．05）,但与性别和肿瘤分化程度无明显相关（P〉0．05）。【结论】CCR7和COX-2在胃癌组织中高表达,可能与癌细胞的浸润与淋巴转移有关。     

胃癌组织FAT10 mRNA表达与临床病理特征的关系

目的研究FAT10 mRNA在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理学间的关系。方法用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测FAT10 mRNA在48例胃癌组织、癌旁组织及正常组织的表达水平，并观察它与临床病理特征的关系。结果48例胃癌组织、癌旁组织及正常组织的FAT10 mRNA阳性率分别为37．50％、10．42％和8．33％，差异具有统计学意义（P〈0．05）。胃癌组织FAT10 mRNA阳性表达率在大体类型、肿瘤长径≥5cm和〈5cm、发生部位以及分化程度之间比较，差异无统计学意义（P〉0．05），而在有无淋巴结及远处转移之间的差异有统计学意义（均P〈0．05）。结论FAT10 mRNA在胃癌组织中的表达明显上调，在胃的正常黏膜组织也有少量表达，胃癌组织中FAT10 mRNA的阳性表达可能与肿瘤转移相关。     

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1表达水平与胃癌生物学行为的关系

目的探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（Tiam1）在胃癌组织、癌旁组织、胃良性病变组织中的表达水平，及其与胃癌转移等生物学行为的关系。方法用实时荧光定量逆转录PCR（FQ-Rt-PCR）方法，对66例胃癌患者的癌组织、癌旁组织及11例胃良性病变患者的组织标本中Tiam1 mRNA进行定量检测。结果66例胃癌患者的癌组织、癌旁组织中Tiam1 mRNA表达阳性率分别为92．4％、19．7％，11例胃良性病变患者的组织标本中有1例患者有Tiam1 mRNA表达，3类组织标本的差异有统计学意义（χ^2=78．96，P〈0．01）；胃癌组织中Tiam1 mRNA表达量高于癌旁组织，且与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤原发部位无关（P〉0．05），但随着淋巴结转移的发生、浸润深度加深、分化程度降低、TNM分期增高，而呈现增高趋势（P〈0．05）。结论FQ-Rt-PCR检测Tiam1表达具有较高的敏感性和特异性，Tiam1与胃癌生物学行为密切相关，有可能成为胃癌转移的基因治疗新靶点。     

血小板反应素mRNA表达与甲状腺乳头状癌血管生成、转移的关系

目的研究甲状腺乳头状癌组织中血小板反应素(TSP)表达与微血管密度(MVD)及淋巴结转移之间的关系。方法对40例甲状腺乳头状癌手术标本和10例癌旁正常组织标本采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测TSP1和TSP2mRNA表达,并采用CD105单克隆抗体标记免疫组化法检测微血管密度。结果正常组织TSP1mRNA阳性率为80.0%,TSP2mRNA阳性率为90.0%;癌组织TSP1mRNA阳性率为45.0%,TSP2mRNA阳性率为47.5%,二者表达组MVD(25.4±11.7vs23.9±16.4)低于不表达组(43.6±10.4vs45.1±11.9),MVD差异具有统计学意义(t值分别为2.36和2.64,P均<0.05),二者同时表达者MVD更低于同时不表达者(P<0.01),TSP1mRNA和TSP2mRNA阳性表达率在发生淋巴结转移的病例显著低于未发生转移的病例(χ2=9.42,P<0.01)。结论甲状腺乳头状癌组织TSPmRNA表达可降低MVD和抑制淋巴结转移。     

VEGF mRNA和bFGF mRNA在胃癌组织中的表达及其意义

目的探讨VEGFmRNA和bFGFmRNA在胃癌组织中的表达及意义。方法应用原位杂交染色检测5 7例胃癌手术切除标本中VEGFmRNA和bFGFmR NA表达情况。结果VEGFmRNA和bFGFmRNA表达与胃癌浸润及转移有关。癌细胞浸润深度≥ 2 /3肌层病例VEGFmRNA和bFGFmRNA阳性率分别为70 .6 %和 73.5 % ,明显高于浸润深度 <2 /3肌层病例(P <0 .0 5 ) ;伴区域淋巴结转移病例VEGFmRNA和bFGFmRNA阳性率分别为 73.0 %和 70 .3% ,明显高于无淋巴结转移病例 (P <0 .0 5 )。结论VEGFmRNA和bFGFmRNA可作为胃癌的预后指标 ,可望为胃癌抑血管生成治疗提供实验依据和新线索     

CK6和CK18mRNA的表达与胃癌患者淋巴结微转移的关联

目的 定量检测细胞角蛋白CK6和CK18 mRNA在胃癌淋巴结中的表达水平,从分子水平上探讨CK6、CK18 mRNA联合检测在胃癌淋巴结微转移中的诊断价值和临床意义,提高胃癌淋巴结转移诊断的阳性率.方法 应用RT-PCR方法,以CK6、CK18为标志基因,检测癌旁5 cm处胃黏膜70例,原发胃癌组织70例,胃癌组无转移淋巴结(PN0) 210枚,比较其表达差异及其与临床病理参数的关系.结果 (1)70例癌旁5 cm处胃黏膜中几乎无CK6、CK18表达;(2)原发胃癌组织及其相应的淋巴结转移灶中CK6、CK18的表达一致;(3)在原发肿瘤以及淋巴结转移灶CK6、CK18的表达中,患者的性别、年龄差异均无统计学差异(P＞0.05).(4)胃癌淋巴结微转移CK6阳性率与肿瘤临床病理参数浸润(T)呈负相关.CK6的表达与较好的分化程度、较轻的病变进展、较早的肿瘤分期和较浅的肿瘤浸润有关.(5)胃癌淋巴结微转移 CK18阳性率与肿瘤临床病理参数浸润(T)呈正相关.CK18在胃癌原发肿瘤及淋巴结转移灶中均有较高水平的表达,尤其是胃腺癌、肿瘤直径大于6 cm、Ⅲ期以上及较深浸润的肿瘤.结论 用RT-PCR法检测胃癌无转移淋巴结CK6和CK18 mRNA是发现胃癌淋巴结微转移敏感而特异的方法,对胃癌临床分期及指导治疗有较大的临床意义.     

CK19 mRNA和CK20 mRNA检测对腹腔镜胃癌根治术的意义

目的分别检测腹腔镜及开腹胃癌根治术患者外周静脉血细胞角蛋白19（CK19）和细胞角蛋白20（CK20）的mRNA表达,并探讨其临床意义。方法应用荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法检测4-5例腹腔镜下胃癌根治术和39例开腹胃癌根治术患者外周静脉血的CK19mRNA、CK20mRNA的表达。结果腹腔镜胃癌根治术患者CK19mRNA开始时阳性率与结束时阳性率之间比较差异无显著性（P〉0．05）;开腹组CK19mRNA阳性率手术前后差异无显著性（P〉0．05）。腹腔镜胃癌根治术患者CK20mRNA开始时阳性率与手术结束时之间比较无显著性差异（P〉0．05）。开腹组CK20mRNA阳性率手术前后相比差异无显著（P〉0．05）。结论通过胃癌微转移指标的联合检测,可以得出初步结论：腹腔镜胃癌手术不增加肿瘤术后微转的机会,进而促进胃癌的复发和转移。     

内镜活检组织CD44v6蛋白检测对胃癌转移诊断的价值

目的：探讨内镜活检组织CC44v6检测对胃转移的诊断价值,方法：采用免疫组化方法检测胃癌活检组织和对照组织中CD44V6的表达。结果：慢性胃炎,胃溃疡,胃腺瘤和胃癌活检组织中CD44V6的表达阳性率分别为0％,5．3％,11．8％和62．8％。胃癌转移组活检组织CD44V6阳性表达率为80．7％,高于无转移组（27．6％）,具有高度显著性差异（P＜0．001）,癌前病变即开始逐渐出现高表趋势,结论：CD44V6与肿瘤的转移相关,胃癌活检组织中CD44V5蛋白表可作为预测胃癌转移潜能的生物学指标并在术前决策方面有临床价值。     

E-钙粘附素和DNA含量与胃癌侵袭、转移的相关性研究

目的探讨E 钙粘附素 (E cadherin ,)在胃癌组织中的表达和癌细胞核DNA含量与胃癌侵袭、转移的相关性。方法应用免疫组织化学S P法对 83例胃癌组织、2 5例正常胃组织进行E cadherin表达的测定 ,同时以经典的Feulgen染色法及图象分析技术对癌细胞DNA含量进行测定 ,分析与胃癌侵袭转移之间的关系。结果正常胃粘膜E cadherin呈强阳性表达 ,胃癌组织中E cadherin表达率明显减低为 16 .9% (14 / 83)。E cadherin表达减低与胃癌细胞分化差、浸润深度、生长方式、淋巴结转移密切相关 (P <0 .0 5 ) ;而与TNM分期及肿瘤大小未见明显相关性。DNA指数在胃癌组织和正常胃组织中分别为 1.4 7± 0 .2 3和 0 .97± 0 .15 ,胃癌组织的DNA指数明显高于正常胃组织 (P <0 .0 1) ,DNA指数与胃癌的分化程度、浸润深度、生长方式、淋巴结转移相关 (P <0 .0 1) ,而与TNM分期和肿瘤大小无明显相关性。胃癌中E cadherin表达与DNA含量呈负相关。结论E cadherin表达和DNA含量与胃癌侵袭转移密切相关 ,二者在癌组织中水平的变化是胃癌细胞重要的恶性生物学特征 ,对其检测有助于对胃癌患者的转移及预后作出判断。     

HL-60细胞IRP2 mRNA、TfR mRNA、Fn mRNA的表达关系研究

为了探讨白血病细胞铁代谢及其调节机制，以及铁调节蛋白2（IRP2）在HL-60细胞铁代谢中的作用，将FeCl3或去铁胺（desferrioxamine，DFO）加入含有10％胎牛血清的RPMl1640培养液中，使HL-60细胞处于缺铁或富铁的不同状态下进行培养。分别于细胞培养后第12、24和48小时收集细胞，提取总RNA，采用RT-PCR半定量法测定IRP，mRNA、铁蛋白（Fn）mRNA和转铁蛋白受体（TfR）mRNA等指标的相对表达量。结果表明：①各实验组之间IRP2 mRNA的表达量变化不大，组间差异无统计学意义（F组间=1．199，P〉0．05）；而细胞培养时间对IRP2 mRNA的表达有影响，组内差异有统计学意义（F组内=43．418，P〈0．01），表现为随时间的延长，IRP2 mRNA的表达降低。②各实验组之间TfR mRNA的表达差异有统计学意义（F组内=7．184，F组间=113．926，P〈0.01）。在加入DFO的两个实验组中，TfR mRNA的表达升高。在加铁的两个实验组中，与对照组相比较，于12小时时TfR mRNA的表达量上升，24小时时达到高峰，之后迅速下降。③在加铁的两个实验组中，Fn mRNA的表达量较高，大约是对照组的2倍，它们与对照组比较，差异具有统计学意义（P〈0．05）；而在加入DFO的两个实验组中Fn mRNA的表达与对照组相比较，无明显的差异（P〉0．05）。④IRP，mRNA与TfR mRNA及Fn mRNA的表达均不相关（r=-0．005，r=0．074，P〉0．05）。结论：①IRP2在转录水平上可能是通过自身不同片段的量的变化，而在转录后水平上是以氧化修饰的方式通过自身降解，对HL-60细胞的铁代谢进行调节。②Fn mRNA和TfR mRNA不同程度地参与了对HL-60细胞内铁的调控过程。     

胃癌患者外周血癌胚抗原、细胞角蛋白20及生存素基因检测的临床意义

目的:研究癌胚抗原(CEA)mRNA、细胞角蛋白20(CK20)mRNA及生存素(survivin)mRNA与胃癌患者诊断、转移的相关性,评估其检测的临床应用价值。方法:采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法联合检测79例胃癌、56例癌前病变及50例正常对照者外周血survivin、CEA、CK20基因的转录,并分析其与临床病理及预后关系。结果:正常对照组外周血未检测到CEA、CK20、survivin mRNA的转录,癌前病变患者survivin转录检测的阳性率为16.1%,平均拷贝数为1.6±0.8。胃癌外周血CEA、CK20、survivin mRNA转录阳性率分别为48.1%、60.8%、87.3%,其阳性率和肿瘤的分期、淋巴结转移等相关。Survivin mRNA高转录者5年生存率显著低于低转录者。胃癌患者外周血CEA、CK20、survivin mRNA转录的联合检测对肿瘤预后的判断具有较高的特异度和阳性似然比。结论:实时RT-PCR联合检测胃癌外周血中多个肿瘤标志物基因的表达,是一种较为理想的监测肿瘤复发、判断预后的方法。     

MPO mRNA,IgH mRNA和CD3ε mRNA表达对急性白血病分型的意义

比较基因分型和免疫分型在急性白血病诊断分型中的意义。采用链亲和素－胶体金细胞原位杂交技术，研究了９例急性白血病的髓过氧化物酶ｍＲＮＡ，免疫球蛋白重链ｍＲＮＡ和ＣＤ３ε ｍＲＮＡ的基因表达并同时分析了白血病的免疫表型。     

PRAME mRNA和SOX9 mRNA在肺腺癌中的表达及临床意义

目的探讨黑色素瘤特异性抗原(PRAME)mRNA和性别决定基因盒9(SOX9)mRNA在肺腺癌中的表达及临床意义。方法选取2015年2月至2018年4月于该院接受手术治疗的73例肺腺癌患者为研究对象,术中收集肺腺癌癌组织及癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR检测不同组织中PRAME mRNA、SOX9 mRNA的相对表达水平并进行比较;分析肺腺癌患者癌组织PRAME mRNA、SOX9 mRNA表达与临床病理特征的关系;采用Spearman相关分析PRAME mRNA表达与SOX9 mRNA表达的相关性;分析PRAME mRNA、SOX9 mRNA表达与肺腺癌患者预后的关系;采用COX回归模型分析影响肺腺癌患者预后的因素。结果与癌旁正常组织相比,肺腺癌癌组织PRAME mRNA的相对表达水平降低(P<0.05),SOX9 mRNA的相对表达水平升高(P<0.05)。PRAME mRNA、SOX9 mRNA表达与肺腺癌患者性别、年龄、肿瘤大小无关(P>0.05),与病理分级、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。Spearman相关分析显示,肺腺癌癌组织PRAME mRNA表达与SOX9 mRNA表达呈负相关(P<0.05)。与预后良好组相比,预后不良组肺腺癌患者PRAME mRNA的相对表达水平降低(P<0.05),SOX9 mRNA的相对表达水平升高(P<0.05)。COX回归模型分析结果显示,PRAME mRNA低表达、SOX9 mRNA高表达、低分化、临床分期Ⅲ期、有淋巴结转移均是影响肺腺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论肺腺癌癌组织中PRAME mRNA、SOX9 mRNA表达异常,且两者呈负相关,可能为肺腺癌的病情及预后评估提供参考依据。     

OPN和uPA mRNA在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨骨桥蛋白(OPN)mRNA及尿激酶犁纤溶酶原激活物(uPA)mRNA在肝细胞癌(HCC)组织巾的表达及与临床病理特征的关系.方法 应用RT-PCR方法检测60例HCC癌组织、20例正常对照肝组织中OPN和uPAmRNA的相对表达量.结果 HCC癌组织中OPN和uPA mRNA的阳性表达率均分别高于对照正常肝组织(P均<0.05):痛组织中OPN mRNA的表达量在有门静脉癌栓形成组及在有早期复发转移组均高于无门静脉癌栓形成组和无早期复发转移组(分别P<0.05和P<0.01),uPA mRNA的表达水平在有包膜浸润和有门静脉痛栓形成组中均高于无包膜浸润和无门静脉癌栓形成组(分别P<0.05和P<0.01):OPN mRNA的高表达和uPA mRNA的高表达呈正相关(P<0.05).结论 HCC癌组织中OPN的表达水平可以作为判断肝癌细胞转移能力和预示肝癌早期复发的重要指标.阻断OPN的表达可能可以降低uPA的分泌,从而减少肿瘤的浸润和转移.     

胃癌组织中Kangai-1 mRNA和基质金属蛋白酶-9 mRNA的表达及临床意义

目的：检测Kangai-1（KAI-1）mRNA和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）mRNA在胃癌组织中的表达．探讨其与胃癌临床病理特征之间的关系。方法：采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测86例胃癌组织中KAI-1mRNA、MMP-9mRNA的表达。结果：KAI-1mRNA在高分化腺癌组织中的表达率（58．82％）明显高于低分化者（15．56％）（P〈0．05）,MMP-9mRNA表达率在高分化和低分化腺癌间差异无统计学意义（P〉0．051：无淋巴结转移的胃癌组织中KAI-1mRNA表达率（61．90％）明显高于有淋巴结转移者（23．08％）（P〈0．05）,MMP-9mRNA则相反（p〈0．05）;KAI-1mRNA表达率随浸润深度增加而逐渐降低,MMP-9则逐渐升高（P〈0．05）。KAI-1mRNA在TNMI期胃癌的表达率明显高于TNMⅢ期和Ⅳ期者fP〈0．05）,MMP-9差异则无统计学意义（P〉0．05）。结论：KAI-1mRNA在胃癌组织中的表达与肿瘤浸润深度、分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关;MMP-9mRNA在胃癌组织中的表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关。     

mRNA deadenylation and telomere disease

Dyskeratosis congenita (DC) is an inherited BM failure disorder that is associated with mutations in genes involved with telomere function and maintenance; however, the genetic cause of many instances of DC remains uncharacterized. In this issue of the JCI, Tummala and colleagues identify mutations in the gene encoding the poly(A)-specific ribonuclease (PARN) in individuals with a severe form of DC in three different families. PARN deficiency resulted in decreased expression of genes required for telomere maintenance and an aberrant DNA damage response, including increased levels of p53. Together, the results of this study support PARN as a DC-associated gene and suggest a potential link between p53 and telomere shortening.     

系统性红斑狼疮患者外周血滤泡辅助性T细胞与CXCR5及其配体CXCL13基因表达水平的研究

目的检测滤泡辅助性T细胞(Tfh)的CXCR5、CXCL13在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中的表达,探讨其与SLE的发生及病情活动性的关系。方法 90例SLE患者和60例健康对照者,采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中CXCR5+PD-1+/CD4+T细胞(Tfh)比例,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中CXCR5、CXCL13浓度,实时荧光定量RT-PCR检测PBMC中CXCR5 mRNA、CXCL13 mRNA的表达。结果活动组SLE患者外周血Tfh比例(11.01%±1.31%)、血清中CXCR5、CXCL13浓度[分别为(368.21±171.56)pg/ml、(387.59±213.54)pg/ml]和CXCR5 mRNA、CXCL13 mRNA(分别为2.15±0.63、1.71±0.37)的表达均高于健康对照组[分别为1.78%±0.11%,(210.6±100.17)pg/ml,(149.45±104.52)pg/ml,0.53±0.22,0.46±0.13;均P<0.05];SLE患者外周血Tfh比例与CXCR5 mRNA的表达水平呈正相关(r=0.68,P<0.01),与SLEDAI亦呈正相关(r=0.67,P<0.01),其中CXCR5 mRNA的表达水平与SLEDAI呈高度正相关(r=0.82,P<0.01)。SLE患者外周血Tfh比例与CXCL13 mRNA的表达水平呈正相关(r=0.73,P<0.01),与SLEDAI亦呈正相关(r=0.87,P<0.01)。结论 SLE患者外周血中Tfh细胞比例、CXCR5、CXCL13明显升高,可能在其发病过程中起了一定的作用。