补肾活血方对血管性痴呆大鼠脑海马细胞凋亡及ERK2，CREB表达的影响

目的:探讨补肾活血方治疗血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型大鼠脑海马细胞凋亡的作用与机制。方法:75只SD雄性大鼠经水迷宫筛选后,随机分为假手术组,模型组,尼莫地平组,补肾活血方高、低剂量(10.14,5.07 g·kg~(-1)·d~(-1))组,共5组,除假手术组外,其余各组采用两血管阻断法制备VD大鼠模型。补肾活血方高、低剂量组和尼莫地平组分别予补肾活血方药及尼莫地平片治疗30 d,各组大鼠进行Morris水迷宫测试,并采用原位细胞凋亡检测法(TUNEL)测定脑海马细胞凋亡情况,免疫组化法及蛋白免疫印迹(Western blot)法检测大鼠脑海马细胞外信号调节激酶2(ERK2),环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长(P0.05),穿越平台次数及原平台停留时间均减少(P0.01),脑海马细胞凋亡积分吸光度(IA)显著升高,平均灰度值显著下降(P0.01),脑海马ERK2,CREB(免疫组化)表达的IA明显下降,平均灰度值明显升高(P0.05),蛋白表达量(Western blot)显著下降(P0.01);与模型组比较,补肾活血方高、低剂量组能提高大鼠水迷宫学习记忆能力,降低细胞凋亡IA(P0.01),升高平均灰度值(P0.01),提高脑海马组织ERK2,CREB的IA和蛋白表达量(P0.05,P0.01)。结论:补肾活血方药可能通过调控大鼠海马ERK/CREB信号通路,抑制海马细胞凋亡,从而改善VD大鼠学习记忆能力。     

复心合剂对慢性充血性心力衰竭患者淋巴细胞β_1-AR mRNA表达的影响及临床观察

目的:评价具有温阳复心、活血利水作用的复心合剂对慢性心力衰竭(CHF)心阳虚衰证患者淋巴细胞β1-AR mRNA表达的影响及临床治疗效果。方法:60例慢性心力衰竭心阳虚衰证患者,随机分为对照组(缬沙坦组)30例、治疗组(复心合剂组)30例,经6周治疗后,观察患者外周血淋巴细胞β1-AR mRNA表达、6min步行试验(6MWT)、脑钠肽(BNP)及生活质量评分的变化,观察复心合剂改善心衰患者的临床疗效。结果两组心衰患者外周血淋巴细胞β1-AR mRNA表达量较治疗前明显提高(P0.01);患者6WMT距离较治疗前明显增加(P0.01),且6WMT心功能分级较治疗前明显改善(P0.01);患者血浆BNP水平较治疗前明显降低(P0.01);明尼苏达心力衰竭生活质量评分较治疗前明显降低(P0.01),患者生活质量明显改善。结论复心合剂能提高心衰患者外周血淋巴细胞β1-AR mRNA的表达,并有效提高CHF患者运动耐量,降低血浆BNP水平,改善生活质量。     

补肾助孕方对LPD模型大鼠卵巢SOD-2、GPX-1、P53表达水平的影响

目的研究补肾助孕方对由米非司酮诱导的(Luteal phase defect,LPD)模型大鼠卵巢SOD-2、GPX-1、P53表达水平的影响,探讨补肾助孕方治疗LPD的机制。方法 50只雌性育龄期SD大鼠按随机数字表法分配到空白组、米非司酮组、阳性药地屈孕酮组、补肾助孕方低剂量及高剂量治疗组5组,每组10只,分组造模给药。分别采用qPCR法与Western Blot法检测各组大鼠卵巢线粒体超氧化物歧化酶(SOD-2)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx-1)及P53的mRNA表达以及蛋白表达水平。结果与空白组相比较,米非司酮组SOD-2、GPX-1蛋白、mRNA表达水平下降(P0.01),P53蛋白、mRNA表达水平明显上升(P0.05);与米非司酮组相比,补肾助孕方低剂量、高剂量治疗组GPX-1、SOD-2蛋白及mRNA表达均显著上升(P0.05);阳性药地屈孕酮组SOD-2、GPX-1蛋白表达较米非司酮组明显升高(P0.05),但SOD-2mRNA、GPX-1mRNA表达与米非司酮组相比未见明显差异;阳性药地屈孕酮组与补肾助孕方低剂量治疗组P53蛋白及mRNA表达较米非司酮组明显下降(P0.05);而补肾助孕方高剂量治疗组P53mRNA表达未见明显差异(P0.05)。结论补肾助孕方可能通过提高LPD模型大鼠卵巢组织抗氧化能力,缓解大鼠卵巢组织凋亡水平,达到治疗LPD的目的。     

罗汉果黄酮对运动大鼠心肌能量代谢酶及PPARα mRNA表达的影响

目的:研究运动前补充罗汉果黄酮(MGF)对力竭运动大鼠心肌能量代谢酶和过氧化物酶体增殖剂活化受体α(PPARα)mRNA表达的影响,以初步探讨其作用机制.方法:SD雄性大鼠50只,随机分为5组,每组10只,分别为安静对照组(NC),运动对照组(ME),运动+ ig低剂量罗汉果黄酮组(MGFL),运动+ig中剂量罗汉果黄酮组(MGFM),运动+ig高剂量罗汉果黄酮组(MGFH).每天在运动前30 min ig 1次,连续ig 6周,6d/周,低、中、高3组的ig剂量分别为100,200,400mg·kg-1,对照组ig等量生理盐水.力竭训练结束后测定大鼠心肌组织肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定心肌组织PPARα mRNA表达.结果:力竭游泳运动引起大鼠心肌CK活性下降,运动对照组显著低于安静对照组(P＜0.01),MGF低剂量组低于安静对照组(P＜0.05),但MGF各组均显著高于运动对照组(P＜0.01).LDH活性在力竭游泳运动组显著低于安静对照组(P＜0.01),在MGF各组均高于运动对照组(P＜0.05或P＜0.01).SDH活性在力竭游泳运动组显著低于安静对照组(P＜0.01),MGF低剂量组低于安静对照组(P＜0.05),MGF中、高剂量组高于运动对照组(P＜0.05).运动对照组PPARα mRNA表达水平显著低于安静对照组(P＜0.01),MGFL组PPARα mRNA表达水平高于运动对照组(P＜0.05),在MGF中、高剂量组PPARα mRNA表达水平均显著高于运动对照组(P＜0.01).结论:补充罗汉果黄酮能够提高能量代谢酶CK,LDH,SDH的活性和上调PPARα mRNA表达水平,对改善机体能量代谢和保护心肌组织的过度损伤具有良好的作用.     

竹节参总皂苷对棕榈酸诱导HepG2细胞凋亡的保护作用研究

探讨竹节参总皂苷(TSPJ)对棕榈酸(PA)诱导的HepG2细胞凋亡的保护作用及分子机制。体外培养HepG2细胞,分为5组:对照组,模型组,竹节参参总皂苷高(50 mg·L~(-1))、中(25 mg·L~(-1))、低(12.5 mg·L~(-1))剂量组。5组细胞均培养24 h后,采用MTT法检测细胞活力,用Hoechst染色和Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡,用RT-PCR法检测TNF-α,IL-1β,BCL-2,CHOP和GAPDH mRNA表达水平,用Western blot法和流式检测BCL-2,CHOP和Toll样受体4(TLR4)蛋白表达量。结果表明,与正常组比较,模型组细胞数量显著减少(P0.01),凋亡细胞增多,与模型组比较,高,中剂量组细胞数量显著增多(P0.01),凋亡细胞减少;与正常组比较,模型组CHOP和TLR4蛋白表达量,TNF-α,IL-1β和CHOP mRNA表达水平显著升高(P0.01),BCL-2蛋白表达水平和mRNA表达水平显著降低(P0.01),与模型组比较,高剂量组CHOP和TLR4蛋白表达量,TNF-α,IL-1β和CHOP mRNA表达水平显著降低(P0.01),BCL-2蛋白表达量和mRNA表达水平显著升高(P0.01),提示竹节参总皂苷可以减轻PA诱导的炎症反应及凋亡,对肝细胞有一定的保护作用。     

化痰祛湿活血方干预非酒精性脂肪性肝炎大鼠ADPN/AKT/NF-κB通路的研究

目的探讨化痰祛湿活血方对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)大鼠ADPN/AKT/NF-κB信号通路中关键蛋白ADPN、AdipoR2、p-AKT(ser473)、p-NF-κBp65(ser536)表达的影响及抗炎作用。方法 72只雄性SD大鼠,随机分为空白组、模型组、对照组及化痰祛湿活血方高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组12只;空白组予普通饲料、不给药,其余5组予高脂饲料;模型组予生理盐水1 m L/100g灌胃,对照组予多烯磷脂酰胆碱28.5 mg/100 g灌胃,高剂量、中剂量、低剂量组分别予化痰祛湿活血方5.04、2.52、1.26 g/100 g灌胃,连续7周。检测肝功能(ALT、AST、ALP)、血脂(TC、TG)、血糖(GLU)水平,HE染色观察肝组织病理学变化,免疫组化测定ADPN、AdipoR2、p-AKT(ser473)、p-NF-κBp65(ser536)蛋白表达。结果 (1)与空白组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、ALP、TC、TG、GLU水平明显升高(P0.01);与模型组比较,各用药组大鼠血清ALT、AST、ALP、TC、TG、GLU水平均明显下降(P0.05,P0.01);与化痰祛湿活血方高剂量组比较,化痰祛湿活血方中、低剂量组及对照组大鼠血清ALT、AST、ALP、TC、TG、GLU水平明显升高(P0.05,P0.01)。化痰祛湿活血方高剂量组少数肝细胞胞内有细小脂滴,小叶分界清晰,肝索呈放射状排列;中剂量组部分肝细胞存在大小不等的脂滴,少数汇管区有炎症细胞浸润。(2)与空白组比较,模型组大鼠肝组织ADPN、AdipoR2、p-AKT(ser473)蛋白表达明显下降,p-NF-κBp65(ser536)蛋白表达明显升高(均P0.01);与模型组比较,各用药组大鼠肝组织AdipoR2、p-AKT(ser473)蛋白表达明显升高,pNF-κBp65蛋白表达明显下降(均P0.01),化痰祛湿活血方高、中剂量组及对照组大鼠肝组织ADPN蛋白表达明显升高(P0.01);与高剂量组比较,化痰祛湿活血方中、低剂量组及对照组大鼠肝组织ADPN、AdipoR2蛋白表达明显下降,p-NF-κBp65蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01)。结论化痰祛湿活血方能通过上调肝组织中ADPN、AdipoR2、p-AKT(ser473)的蛋白表达,抑制p-NF-κBp65(ser536)的蛋白表达,而有效改善肝功能、血脂、GLU,改善NASH大鼠肝组织脂肪变程度,减轻肝脏炎症。     

芷辛方对骨癌痛大鼠胶质细胞蛋白表达及核因子κB的影响

目的探讨芷辛方镇痛作用的可能机制。方法将70只SD大鼠随机分为空白组、模型组、西药对照组(盐酸曲马多,0.01 g/kg)、芷辛方高剂量组(芷辛方水煎浓缩制剂,9 g/kg)、芷辛方正常剂量组(芷辛方水煎浓缩制剂,4.5 g/kg)、芷辛方低剂量组(芷辛方水煎浓缩制剂,2.25 g/kg)、中药对照组(五灵止痛胶囊,0.06 g/kg),每组10只。除空白组外,其余各组大鼠采用左侧后肢胫骨注射腹水瘤Walker 256细胞悬液的方法建立骨癌痛大鼠模型,在造模后14天开始灌胃给予相应药物,每日1次,连续7天。取大鼠脊髓L4-L5部位检测脊髓组织神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、分化群11b(CD11b)mRNA、核因子κB(NF-κB)的表达。结果模型组GFAP染色阳性细胞明显多于空白组、芷辛方正常剂量组和芷辛方高剂量组。模型组CD11b mRNA表达较西药对照组、芷辛方正常剂量、芷辛方高剂量组明显升高(P0.01),各药物治疗组比较差异无统计学意义(P0.05)。模型组NF-κB表达高于空白组,芷辛方高剂量组NF-κB表达明显低于模型组(P0.01)。结论芷辛方对骨癌痛大鼠镇痛作用的机制可能与抑制脊髓胶质细胞增殖活化和下调NF-κB蛋白有关。     

健脾活血方对SMMC-7721肝癌裸鼠抑瘤作用的研究

目的观察健脾活血方对肝癌裸鼠皮下移植瘤模型细胞凋亡和血管生成的影响,探讨其可能的作用机制。方法建立SMMC-7721肝癌荷瘤裸鼠模型。将60只雄性荷瘤裸鼠随机分为空白组、模型组、5-Fu组和健脾活血方高、中、低剂量组,每组10只。健脾活血方各剂量组给予相应浓度健脾活血方药液灌胃,每日1次,5-Fu组给予5-Fu隔日腹腔注射,连续2周。2周后比较各组裸鼠体质量、瘤质量和抑瘤率,免疫组化检测血管内皮生长因子(VEGF)和VEGF受体2(VEGFR-2)的蛋白表达,计算微血管密度(MVD),q RT-PCR检测Caspase-3和生存素(Survivin)的m RNA表达。结果与模型组比较,各给药组VEGF、VEGFR-2蛋白表达,MVD和Caspase-3、Survivin m RNA表达均降低,其中5-Fu组和健脾活血方高剂量组作用最明显(P0.05)。结论健脾活血方可能通过抑制血管生成和诱导细胞凋亡作用抑制肿瘤生长。     

蛭龙活血通淤胶囊对大鼠急性脑梗塞缺血/再灌注后神经细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的 探讨蛭龙活血通淤胶囊对大鼠急性脑梗塞缺血/再灌注后神经细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法 采用线拴法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,将40只雄性SD大鼠随机分为观察组(蛭龙活血通淤胶囊)10例,对照组(步长脑心通)10例、模型组10例及假手术组10例,用药7 d,应用TUNEL法和免疫组织化学法检测各组大鼠脑组织凋亡细胞的分布及bcl-2、Caspase-3蛋白的表达.结果 实验证实了急性脑梗塞缺血再灌注损伤凋亡细胞的存在,模型组脑神经细胞凋亡数量显著高于假手术组(P＜0.01),蛭龙活血通淤组与步长脑心通药物干预组与模型组相比细胞凋亡指数显著下降(P＜0.01),但蛭龙活血通淤组与步长脑心通药物干预组二者比较无明显差异(P＞0.05).模型组脑神经细胞bc1-2和Caspase-3基因蛋白表达均显著高于假手术组(P＜0.01),与模型组相比,蛭龙活血通淤组与脑心通组明显上调bc1-2的基因表达(P＜0.01),明显抑制Caspase-3基因蛋白表达(P＜0.01),蛭龙活血通淤组与步长脑心通药物干预组间比较无明显差异(P＞0.05).结论 蛭龙活血通淤胶囊对急性脑梗塞引起的神经细胞凋亡有明显抑制作用.其机制可能与上调bcl-2,抑制Caspase-3有关.     

蛭龙活血通淤胶囊对脑出血大鼠神经细胞凋亡与缺氧诱导因子-1α蛋白表达的作用研究

目的通过观察大鼠脑出血后神经细胞凋亡与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的动态变化及蛭龙活血通淤胶囊的干预作用,探讨蛭龙活血通淤胶囊可能的脑保护作用。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、蛭龙活血通淤胶囊低、中、高剂量组。采用自体血注入法制备脑出血大鼠模型。采用TUNEL法测定凋亡细胞的表达,免疫组化法测定HIF-1α蛋白的表达。结果与模型组比较,蛭龙活血通淤胶囊低、中、高剂量组的凋亡细胞表达明显下降,而HIF-1α蛋白的表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与低剂量组比较,中、高剂量组各时间点的凋亡细胞表达均明显下降,而HIF-1α蛋白的表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论蛭龙活血通淤胶囊能明显促进HIF-1α表达,抑制细胞凋亡,对脑出血大鼠具有明显的脑保护作用,且存在一定量效关系。     

健脾活血方对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠骨骼肌葡萄糖转运蛋白-4 基因表达的影响

目的 探讨健脾活血方对2型糖尿病胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)大鼠葡萄糖转运蛋白-4(Glucose Transporter-4,GLUT-4)mRNA表达的的改善作用及机理.方法 取Wistar大鼠60只,采用链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)加高脂饮食造成2型糖尿病IR大鼠模型,设空白组、模型组、健脾活血方低剂量组、健脾活血方高剂量组和罗格列酮组,以RT-PCR法检测大鼠骨骼肌GLUT-4 mRNA的表达.结果 健脾活血方高剂量组大鼠骨骼肌GLUT-4 mRNA的表达与罗格列酮组相当,与模型组比较有显著性差异(P<0.01).结论 健脾活血方能够上调大鼠骨骼肌GLUT-4 mRNA的表达,改善IR.     

健脾活血方对2型糖尿病大鼠肝细胞膜胰岛素受体的影响

目的 探讨健脾活血方对2型糖尿病胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)大鼠肝细胞膜胰岛素受体(Insulin Receptor,InsR)mRNA表达的改善作用及机理.方法 取Wistar大鼠60只,雌雄各半,采用链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)加高脂饮食造成2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型.设空白组、模型组、健脾活血方低剂量组、健脾活血方高剂量组和罗格列酮组,以RT-PCR法检测大鼠肝细胞膜InsR mRNA的表达.结果 健脾活血方高剂量组大鼠肝脏InsR mRNA的表达与罗格列酮组相当,与模型组比有显著性差异(P<0.01).结论 健脾活血方能够上调大鼠肝细胞膜InsR mRNA的表达,从而改善胰岛素抵抗.     

蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血SD大鼠AQP-4、MMP-9、TIMP-1 mRNA表达影响随机平行对照研究

[目的]观测蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血大鼠AQP-4、MMP-9、TIMP-1 mRNA表达影响。[方法]使用随机平行对照方法,45只SD大鼠常规饲料喂养3d,称重后随机数字表法分为5组,假手术组、模型组、蛭龙活血通瘀低、中、高剂量组(简称"ZL低、中、高剂量组"),9只/组。按指标检测时间分为12h、48h、72h三个亚组,3只/组。自体尾部血注入法复制脑出血大鼠模型。灌胃干预:蛭龙活血通瘀胶囊按人体用量(3.6g/d)5倍、10倍、20倍定为低、中、高剂量。RT-PCR法检测AQP-4、MMP-9、TIMP-1 mRNA表达。[结果]AQP-4 mRNA:假手术组有微量表达,12h、48h及72h表达无明显差异(P0.05);模型组及ZL低、中、高剂量组各时点均明显高于假手术组(P0.01);模型组呈进行性升高,72h最为显著;ZL各剂量组表达均低于模型组(P0.01);各时间点低、中剂量组均高于ZL高剂量组(P0.01)。MP-9 mRNA:假手术组有少量表达,术后12h、48h及72h表达无明显差异(P0.05);模型组及ZL低、中、高剂量组各时点均明显高于假手术组(P0.01);模型组术后48h上升明显并达到高峰,72h略有下降,ZL各剂量组均低于模型组(P0.01);ZL低、中剂量组在各时点均明显高于高剂量组(P0.01)。TIMP-1 mRNA:假手术组仅有微量表达,术后12h、48h及72h无明显差异(P0.05);模型组及ZL低、中、高剂量组各时点均明显高于假手术组(P0.01);模型组48h上升明显并达到高峰,72h略有下降;ZL各剂量组各时点均高于模型组(P0.01);ZL低、中剂量组各时点均明显高于高剂量组(P0.01)。[结论]蛭龙活血通瘀胶囊可明显降低脑出血大鼠脑组织AQP-4、MMP-9 mRNA,升高TIMP-1 mRNA,呈量效关系,ZL高剂量组作用最为明显。     

黄连解毒汤含药血清对牛主动内皮细胞miR-133a/Caveolin-1/eNOS通路影响的研究

目的研究黄连解毒汤含药血清对牛主动脉内皮细胞(BAECs)miR-133a/Caveolin-1/eNOS通路的影响。方法选用WKY大鼠制备含药血清,将BAECs分为正常组、空白血清组、卡托普利组、黄连解毒汤低、中、高剂量组,检测各组细胞NO、ET-1及eNOS含量变化,RT-PCR检测各组细胞miR133a、Caveolin-1、eNOS mRNA表达,Western-Blot检测各组细胞Caveolin-1、eNOS、p-eNOS蛋白表达。结果与正常组比较,空白血清组NO与eNOS含量明显降低(P0.01),ET-1水平明显高于各干预组(P0.05),各干预组细胞中NO、eNOS的含量明显升高(P0.05,P0.01),血清中ET-1的含量明显降低(P0.05)。与正常组比较,空白血清组细胞中miR-133a、eNOS mRNA表达明显降低(P0.01),Caveolin-1 mRNA表达明显升高(P0.01),黄连解毒汤中、高剂量组、卡托普利组miR-133a、eNOS mRNA表达明显升高(P0.01),Caveolin-1 mRNA表达明显降低(P0.01)。与正常组比较,空白血清组中Caveolin-1蛋白表达明显升高(P0.01),空白血清组eNOS、p-eNOS蛋白表达明显降低(P0.01)。卡托普利组、黄连解毒汤中、高剂量组Caveolin-1蛋白表达水显明显降低(P0.05、P0.01),卡托普利组、黄连解毒汤高剂量组eNOS、p-eNOS表达明显升高(P0.01)。结论黄连解毒汤含药血清可能通过升高BAECs细胞miR-133a、eNOS mRNA表达水平、升高eNOS、p-eNOS蛋白的表达水平、降低Caveolin-1 mRNA及蛋白表达水平发挥保护血管内皮功能的作用。     

红芪多糖对脾虚型糖尿病大鼠Bcl-2/Bax表达的影响

目的观察红芪多糖对脾虚型糖尿病大鼠Bcl-2/Bax表达的影响,探究其对脾虚型糖尿病大鼠胃黏膜细胞凋亡的作用机制。方法 SPF级GK大鼠雄性65只,随机选出10只作为空白组,正常饮食喂养。剩余采用苦寒泻下法合并饮食不节法制备脾虚证模型,造模成功后,分为5组:即模型组,二甲双胍组,红芪多糖高、中、低剂量组。红芪多糖高剂量组、中剂量组、低剂量组分别以0.2,0.1,0.05g·kg~(-1)·d~(-1),二甲双胍组以0.675g·kg~(-1)·d~(-1)进行灌胃,连续灌胃8周后处死大鼠,取胃窦部组织采用TUNEI(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测胃窦部组织胃黏膜细胞凋亡率;实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测Bcl-2,Bax基因表达含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2,Bax蛋白表达含量。结果与空白组比较,模型组大鼠胃窦组织胃粘膜细胞凋亡率明显升高(P0.05),胃窦组织中Bcl-2 mRNA表达及蛋白表达降低(P0.05),Bax mRNA表达及蛋白表达升高(P0.01)。与模型组比较,红芪多糖高、中剂量组胃窦组织胃粘膜细胞凋亡率显著降低(P0.01),胃窦组织中Bcl-2 mRNA表达(P0.05)及蛋白表达升高(P0.01),Bax mRNA表达及蛋白表达降低(P0.05)。结论红芪多糖可能通过提高Bcl-2/Bax的表达,抑制脾虚型糖尿病大鼠胃窦组织胃黏膜细胞的凋亡。     

保元解毒汤对癌性恶病质小鼠骨骼肌蛋白质降解及MAFbx、MuRF-1基因表达的影响

目的研究保元解毒汤对肺癌恶病质小鼠骨骼肌蛋白质降解及MAFbx、MuRF-1基因表达的影响,探讨其干预骨骼肌蛋白质代谢的可能机制。方法 C57BL/6小鼠皮下接种Lewis肺癌细胞株复制肺癌恶病质小鼠模型。40只小鼠随机分为正常对照组、模型组、保元解毒汤组和醋酸甲羟孕酮组。测定小鼠腓肠肌质量;高效液相色谱法检测腓肠肌3-甲基组氨酸(3-MH)含量;RT-PCR法测定腓肠肌MAFbx、MuRF-1mRNA表达。结果与正常对照组比较,模型组小鼠腓肠肌质量显著降低(P0.05),肌组织内3-MH含量明显升高(P0.05),MAFbx、MuRF-1 mRNA表达显著升高(P0.05);与模型组和醋酸甲羟孕酮组比较,保元解毒汤组小鼠腓肠肌质量显著增加(P0.05),肌组织内3-MH含量明显降低(P0.05),MAFbx、MuRF-1 mRNA表达显著降低(P0.05)。结论保元解毒汤能够改善癌性恶病质小鼠骨骼肌萎缩,其机制可能与MAFbx、MuRF-1基因表达下调,骨骼肌收缩蛋白降解减少相关。     

温肾活血化湿方对肾间质纤维化大鼠肾组织TGF-β_1、smad7蛋白表达的影响

目的:观察温肾活血化湿方对单侧输尿管梗阻(UUO)法致肾间质纤维化大鼠肾组织TGF-β1、smad7蛋白表达的影响,初步揭示该方防治肾间质纤维化的作用机制。方法:将雄性SD大鼠(120只)随机分为假手术组、UUO组、氯沙坦组和温肾活血化湿方组,每组30只。采用UUO建立大鼠肾间质纤维化模型(假手术组只分离但不结扎输尿管),于造模后第2天开始灌胃,假手术组、UUO组给予生理盐水,氯沙坦组灌胃氯沙坦(10 mg·kg-1·d-1),温肾活血化湿方组灌温肾活血化湿方(9.8 g·kg-1·d-1)。于造模后第7、14、21天留取梗阻侧肾组织HE、Masson染色,观察肾组织病理变化,免疫组化法检测肾组织TGF-β1、smad7蛋白的表达。结果:造模后第14天温肾活血化湿方较模型组明显降低尿蛋白定量(P0.05),第21天温肾活血化湿方与模型组比较有极显著降低(P0.05)。温肾活血化湿方组与模型组相比较TGF-β1蛋白表达明显降低(P0.05)。温肾活血化湿方组与模型组相比较smad7蛋白表达明显增加(P0.05)。结论:温肾活血化湿方通过抑制TGF-β1,上调smad7蛋白表达,从而延缓肾间质纤维化的进程。     

温肾活血方对RCS大鼠视网膜感光细胞凋亡的影响

目的观察温肾活血方对RCS大鼠视网膜感光细胞凋亡的影响。方法纯合子RCS大鼠16只在出生后14 d随机分为2组,即模型组、治疗组,每组8只,另8只SD大鼠作为正常对照组。治疗组予温肾活血方灌胃治疗,而模型组及对照组予蒸馏水灌胃治疗,连续治疗28 d。HE染色观察视网膜各层细胞形态和结构的变化,TUNEL荧光染色观察视网膜外核层细胞凋亡情况。免疫组化荧光染色测定视网膜Caspase-3,Bax,Bcl-2的表达。结果(1)HE染色:治疗后28 d,RCS大鼠各组视网膜外核层较对照组明显变薄,感光细胞数量明显减少,但治疗组较模型组视网膜更厚,感光细胞数更多。(2)TUNEL检测:治疗后28 d,RCS大鼠各组视网膜外核层凋亡细胞计数较对照组明显增多,3组间比较差异有显著统计学意义(F=71.58,P=0.000);与模型组比较,治疗组凋亡细胞计数显著减少(t=4.74,P=0.001)。(3)免疫组化:治疗后28 d,3组间比较,视网膜Caspase-3(F=59.37,P=0.000)、Bcl-2(F=31.35,P=0.000)表达水平差异有统计学意义;与模型组比较,治疗组Caspase-3表达显著减少(t=2.36,P=0.040),Bcl-2表达显著增多(t=3.15,P=0.010),均有统计学意义。结论温肾活血方可以抑制RCS大鼠视网膜感光细胞凋亡,其作用可能与抑制Caspase-3的表达并促进Bcl-2的表达有关。     

帕病2号方对帕金森病大鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的 研究帕病2号方对帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠模型多巴胺能神经元的保护作用.方法 采用6-羟多巴胺纹状体左侧两点注射法制作单侧PD损毁模型,将造模成功大鼠随机分为5组,即为帕病2号方高、中、低剂量组(32.0,16.0,8.0g生药·kg-1)、美多巴组(0.075 g· kg-1)、模型组.另设空白对照组,每组8只,各实验组ig给药,连续给药4周,空白对照组和模型组予等容积蒸馏水,应用TUNEL观察多巴胺能神经元凋亡的变化,TH染色检测大鼠黑质TH阳性神经元数目.结果 与空白对照组比较,模型组多巴胺能神经元显著减少,凋亡细胞数明显增多(P＜0.01).与模型组比较,帕病2号方高、中剂量组多巴胺能神经元明显增加(P＜0.05),凋亡细胞数明显减少(P＜0.05),其中高剂量组改变尤为明显(P＜0.01).结论 帕病2号方对帕金森病大鼠模型黑质多巴胺能神经元有保护作用,能抑制神经细胞的凋亡,增加黑质内TH的表达.     

补肾活血汤石油醚提取物对BMSCs迁移过程中Wnt5a/PKC通路的影响

目的探讨补肾活血汤(熟地黄、菟丝子、补骨脂,等)石油醚提取物对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的迁移作用及相关机制。方法全骨髓贴壁法培养BMSCs,取第3代细胞用于实验,采用流式细胞仪检测细胞表面抗原,细胞划痕、Transwell实验观察补肾活血汤石油醚提取物0、25、50、100、200μg/m L剂量组的细胞迁移能力,Western blot和RT-PCR检测Wnt5a、蛋白激酶C(PKC)表达情况。结果第3代BMSCs表面抗原CD29、CD90、CD44表达阳性,而CD45表达阴性;细胞划痕6 h及12 h后,药物各剂量组细胞迁移速度明显高于空白组(P0.05,P0.01);Transwell实验中100μg/m L补肾活血汤石油醚提取物为促细胞迁移最佳剂量,差异有统计学意义(P0.01);RT-PCR结果显示与空白对照组比较,药物各剂量组的Wnt5a mRNA水平均升高(P0.05,P0.01),而与空白对照组的PKC mRNA水平比较,药物只有100μg/m L剂量mRNA表达水平升高(P0.01);Western blot结果表明药物组各剂量的Wnt5a、PKC蛋白表达较空白对照组都明显升高(P0.01),均且以100μg/m L剂量最高(P0.01)。结论补肾活血汤石油醚提取物可以促进BMSCs体外迁移,其作用机制可能与Wnt5a/PKC信号通路有关。