甲磺酸帕珠沙星对映异构体的拆分方法及其应用

目的:建立一种用手性流动相拆分并测定甲磺酸帕珠沙星对映异构体的方法。方法:使用HYPERSIL BDS C18柱(4.6mm×250 mm,5μm),流动相为含有3 mmol·L-1硫酸铜、6 mmol·L-1 D-苯丙氨酸的溶液-甲醇(78:22),流速为1 mL·min-1,在250nm检测。结果:R-(+)和S-(-)甲磺酸帕珠沙星的保留时间分别为8.1和9.7 min,分离度为2.2。结论:方法的重现性好,操作简单,可用于药品质量控制。     

高效液相色谱—手性配位基交换流动相法拆分甲状腺片中甲状腺素对映体

目的:运用正相高效液相色谱-手性配位基交换流动相法,建立甲状腺片中甲状腺素对映体(L-,D-T_4)的拆分方法。方法:通过流动相中添加L-脯氨酸、醋酸铜及三乙胺对甲状腺片中甲状腺素对联体进行测定。最佳色谱条件为流动相:乙腈-水(35:65),每升流动相水中(未加乙腈)含有0.1mmol·L~(-1)醋酸铜(Ⅱ),0.2 mmol·L~(-1)L-脯氨酸和0.5mmol·L~(-1)三乙胺;pH为5.42;柱温:40℃;流速:1.0mL·min~(-1);色谱柱:Hypersil SiO_25μm(4.6mm×250mm);紫外测定波长:225nm。结果:在所建立的色谱条件下甲状腺素L-,D-2种异构体得到基线分离,并测定了甲状腺片中的L-,D-T_4的含量,结果显示同一厂家不同批号甲状腺片中L-,D-T_4含量不同。结论:所建立的方法简便、快速、准确、成本低,可作为样品的检测及药品质量控制方法。     

反相高效液相色谱法直接拆分并测定佐匹克隆对映体

目的:建立一种用手性固定相拆分并测定佐匹克隆对映异构体的方法。方法:使用CHIRALCEL OD-R色谱柱(4.6mm×250 mm),乙腈-0.05 mol·L-1硫酸铵溶液(20:80)为流动相,流速0.8 mL·min-1在304 nm检测。结果:R-(-)和.S-(+)佐匹克隆峰的保留时间分别为10.6 min和12.0 min,分离度为1.8。结论:方法的重现性好,操作简单,可用于药品质量控制。     

柱前手性衍生化-HPLC法测定人血浆和尿液中D-谷氨酸和D-丝氨酸的浓度

目的:建立手性分离D-谷氨酸和D-丝氨酸的方法,测定人血浆和尿液中D-谷氨酸和D-丝氨酸的浓度。方法:12对极性氨基酸标准液混合后,加入衍生化试剂邻苯二甲醛、N-乙酰-L-半胱氨酸衍生化后,采用高效液相色谱法进样测定。色谱柱为大连依利特HypersilC18,流动相为甲醇-50mmol·L-1醋酸铵缓冲液(pH6.0),梯度洗脱,流速为1.0mL·min-1,柱温为室温,进样量为20μL,荧光检测波长为350nm(激发波长)、450nm(发射波长)。结果:D-谷氨酸、D-丝氨酸检测浓度分别在0.5～20、0.5～80nmol·L-1范围内线性关系良好,平均方法回收率分别为96.4%～103.6%、97.1%～100.5%,日内、日间RSD均<8%。测得正常人血浆中D-谷氨酸和D-丝氨酸平均含量分别为(2.43±0.37)、(1.07±0.11)nmol·mL-1,尿样中未能检测到2种D型氨基酸。结论:本研究建立的手性分离测定D-谷氨酸和D-丝氨酸的分析方法可行,可用于测定人血浆和尿液中二者的浓度。     

(-)，(+)黄皮酰胺对乙酰胆碱酯酶的抑制作用

用Ellman比色法测定乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性， 观察(-)，(+)黄皮酰胺对小鼠脑组织海马，前脑皮层和红细胞膜AChE活性的影响， 以探索药物作用机制并比较左右旋体黄皮酰胺作用的异同.结果表明:(-), (+)黄皮酰胺对海马和皮层AChE均有抑制作用, (-)黄皮酰胺对小鼠脑皮层和海马AChE抑制的IC₅₀(95%可信限)值分别为0.31(0.27-0.36)和0.33(0.28-0.39)mmol·L^-１; (+)黄皮酰胺对小鼠脑皮层和海马AChE抑制的IC₅₀(95%可信限)值分别为0.71(0.53-0.94)和0.77(0.55-1.07)mmol·L^-１. (-), (+)黄皮酰胺对红细胞膜AChE的抑制作用是可逆性的，抑制特点属于竞争与非竞争混合型抑制， (-)黄皮酰胺的K_i值为0.26 mmol·L^-１, K_i′值为1.205 mmol·L^-１；（+）黄皮酰胺K_i值 为0.72 mmol·L^-1, K_i′值为1.856 mmol·L^-１. 提示：(-)黄皮酰胺作用强于(+)黄皮酰胺. 黄皮酰胺的抑制AChE作用存在手性选择性.     

手性衍生化-反相高效液相色谱法测定L-肌肽的光学纯度

目的建立柱前手性衍生化-反相高效液相色谱法(HPLC)测定L-肌肽对映体的纯度。方法以邻苯二甲醛/N-乙酰基-L-半胱氨酸(OPA/NAC)为手性衍生化试剂,反应生成具有荧光吸收的一对非对映异构体衍生物,采用C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流速1.0mL·min-1,50mmol·L-1乙酸铵缓冲溶液(pH6.0)-甲醇(70:30,V/V)流动相,柱温35℃,λex=350nm,λem=450nm。结果L-肌肽与其光学异构体分离度大于3,在0.104～2.68mg·L-1范围内,D-肌肽衍生物色谱峰面积与其浓度呈良好线性关系,检测限浓度为0.02mg·L-1。结论建立的L-肌肽光学异构体(杂质)手性衍生化-HPLC拆分检查法方便准确,可用于L-肌肽的光学纯度控制。     

HPLC法测定盐酸多培沙明含量及有关物质

目的:采用高效液相色谱法测定盐酸多培沙明含量及有关物质。方法:色谱柱为VP-ODS C_(18)柱(150 mm×4．6 mm,5μm),流动相为50 mmol·L~(-1)枸橼酸溶液(含50 mmol·L~(-1)枸橼酸钠)-乙腈(90:10),流速为1 mL·min~(-1),检测波长为280 nm。结果:盐酸多培沙明的线性范围为4～600μg·mL~(-1)(r=0．999 98),平均回收率为99．92％(RSD为0．26％);各杂质峰与主峰达到基线分离。结论:本方法简便、快速,结果准确,重复性好。     

混合取代基—β—环糊精—毛细管电泳法分离测定麻黄碱和伪麻黄碱

目的:建立毛细管电泳法同时分离测定同分异构的2对手性化合物麻黄碱和伪麻黄碱的含量。方法:Waters CapillaryIon Analyzer,50μm×60cm空心熔融石英毛细管柱,柱上紫外检测。电泳条件:分离用缓冲液为25mmol·L~(-1)的磷酸-Tris 缓冲液,含18mmol·L~(-1)的羧甲基-β-环糊精和7.5mmol·L~(-1)的β-环糊精-硫酸酯,pH3.02。分离电压:18kV;温度:25℃;虹吸进样,高度10cm,时间1s;紫外检测波长214nm。结果:左旋伪麻黄碱、右旋麻黄碱、左旋麻黄碱和右旋伪麻黄碱线性范围分别为23.7～237μg·ml~(-1),25.0～250μg·mL~(-1),25.0～250μg·mL~(-1),25.4～254μg·mL~(-1),以信噪比等于3:1为标准,最小检测浓度均为5.0μg·mL~(-1);日内和日间精密度RSD在2.4％～4.3％之间。结论:方法分离效率高、简便、快速、成本低。     

高糖损伤兔主动脉内皮依赖性舒张反应(英文)

目的:研究高糖对兔胸主动脉内皮依赖性舒张反应(EDR)的影响及L-精氨酸、超氧化物歧化酶(SOD)和高糖撤除的作用。方法:以主动脉环EDR为检测指标。结果:高糖可使乙酰胆碱(ACh)诱导的EDR明显受损,高糖撤除24h后不能恢复ACh的舒血管作用,而甘露醇(19.5mmol·L~(-1))不影响血管环EDR。L-精氨酸1mmol·L~(-1)或SOD 150U·L~(-1)可取消高糖对EDR的损伤作用,高糖不影响硝普钠的舒血管作用。结论:高糖可损伤血管EDR,短时间高糖撤除不能逆转,其机制可能与自由基产生及L-精氨酸代谢改变有关。     

柱前衍生化HPLC测定潘洛多特片中蛋氨酸的含量

目的建立柱前衍生化HPLC测定潘洛多特片中蛋氨酸含量的方法。方法以2,4-二硝基氟苯为衍生化试剂,流动相为乙腈-水-0.05mol·L-1醋酸钠缓冲液(35∶35∶30),检测波长360nm,用外标法定量。结果线性范围2.00~40.02mg·L-1,r=0.9904,平均回收率为98.49%,RSD=0.52%(n=9)。结论方法重现性好,灵敏度高,可用于潘洛多特片的质量控制。     

反相离子对高效液相色谱法测定血浆吗啡及其代谢物M3G的含量

目的:建立反相离子对高效液相色谱法测定血浆吗啡及其代谢物3-葡萄糖醛酸吗啡(M3G)的浓度。方法:血浆样品以乙酸乙酯提取,以纳洛酮为内标。应用HPLC-UV方法测定吗啡浓度,分析柱DiamonsilTMC18(250mm×4.6mm),流动相为0.01mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液(含0.5mmol·L-1的十二烷基磺酸钠)-乙腈(71:29),检测波长210nm,流速0.65ml·min1。血浆样品经β-葡萄糖醛酸苷酶水解测定其代谢物含量。结果:吗啡标准曲线线性范围宽(10-4000μg·L-1),线性关系良好;最低检测限10μg·L-1;高、中、低浓度的回收率在85·3%以上。血浆M3G在250-8250μg·L-1浓度范围内与水解增加吗啡浓度呈线性关系。结论:本法简单,快速,血浆中杂质不干扰样品的测定,满足生物样品分析要求。     

RP-HPLC测定雷诺嗪含量及有关物质

目的:建立测定雷诺嗪(ranolazine)含量及有关物质的反相高效液相色谱法。方法:依利特Hypersil BDS C_(18)硅烷键合硅胶柱(250mm×4．6mm,5μm),流动相:甲醇-7mmol·L~(-1)醋酸铵与3．5mmol·L~(-1)醋酸的缓冲液(65:35),流速:1．0mL·min~(-1),柱温:30℃,检测波长:272nm。结果:雷诺嗪在0．102～2．034mg·mL~(-1)的范围内,浓度和峰面积线性良好,r=0．9999。重复性试验的RSD为0．92%。结论:测定方法简便快速、重现性好、准确度高,可适用于雷诺嗪的含量测定及其有关物质检查。     

高效液相色谱-荧光检测法测定大鼠生物样品中阿德福韦

目的:建立生物样品中阿德福韦的反相高效液相色谱分析方法。方法:生物样品经沉淀蛋白处理后进行衍生化反应,用Intersil C8反相柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),乙腈-10 mmol·L-1磷酸盐缓冲液(2 mmol·L-1氢氧化四丁基铵,氢氧化钠溶液调节pH为7.0)(10:90)为流动相,流速1.5 mL·min～1,荧光检测波长为λex309 nm和)λem425 nm。结果:测定血药浓度的线性范围为0.020-7.9 μg·mL-1(r=0.9993),最低检测限为5 μg·L～1。方法回收率为95.1％-99.0％。结论:本法准确,灵敏度高,重复性好,为阿德福韦酯的临床前及临床药代动力学研究提供了方法学基础。     

高效液相色谱法测定黄连药材中小檗碱型生物碱的含量

目的:分离并测定黄连药材中小檗碱型生物碱的含量。方法:采用ODS柱(15 mm×6.0 mm),以乙腈-50 mmol·L~(-1)磷酸二氢钾溶液(磷酸调 pH=3.0)(50:50),内含 25 mmol·L~(-1)SDS为流动相,345nm检测。结果:在以上条件下,药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马亭和小檗碱5种生物碱可以完全分离,测定了8种不同黄连药材中4种生物碱的含量。结论:本法可用于黄连药材的研究,也可用于黄连等含小檗碱中药材及制剂的常规检验。     

染料木黄酮对大鼠下丘脑脑片室旁核神经元放电的影响(英文)

目的研究染料木黄酮(GST)在心血管中枢神经系统的作用。方法应用细胞外记录单位放电技术,在下丘脑脑片上观察GST对静息状态下的室旁核神经元放电的影响。结果①26个脑片分别灌流GST 10,50,100μmol·L~(-1)2 min,有25个脑片放电频率明显降低,且呈浓度依赖性;②用0.2 mmol·L~(-1) L-谷氨酸灌流脑片,7/7个脑片放电频率明显增加,表现为癫痫样放电,在此基础上加灌GST 50μmol·L~(-1)2 min,其癫痫样放电被抑制;③用G蛋白激活的内向整流型钾通道阻断剂四乙胺1 mmol·L~(-1)灌流脑片,约10 min后加入GST 50μmol·L~(-1),8/8个脑片的放电抑制效应被完全阻断;④用一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯50μmol·L~(-1)灌流脑片,7/7个脑片的放电频率增加,在此基础上加灌GST 50μmol·L~(-1)2 min,放电被抑制。结论GST可抑制下丘脑室旁核神经元自发放电,并抑制L-谷氨酸诱发的神经元癫痫样放电。这种抑制作用可能与激活G蛋白激活的内向整流型钾通道,促进K~+外流,从而引起细胞膜超极化有关;而与NO释放无关。GST可能通过降低心血管中枢的活动性而产生一定的心血管系统保护作用。     

RP-HPLC法测定人体血浆中吉西他滨的浓度

目的:建立一种测定人体血浆中吉西他滨血药浓度的高效液相色谱方法。方法:取血浆样品1 mL,加内标100μL(含氟脲苷0.8μg·mL-1),混匀,加甲醇-乙腈(1:9)3 mL混匀,放置5 min,离心(3500 r·min-1,10 min),取上清液于60℃水浴放置,氮气吹干,残渣用0.5 mL流动相溶解,离心(15000 r·min～1,10 min),取上清液,进样50μL。色谱柱:Lichrospher 5-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相:40 mmol·L-1醋酸铵缓冲液(用醋酸调节pH=5.5)-乙腈(97.5:2.5),流速:0.8 mL·min～1,检测波长:268 nm,柱温:25℃。结果:本方法线性范围0.20—10.0μg·mL～1,r=0.9999,方法检测限为0.10μg·mL-1(S/N>4),定量限为(0.21±0.02)μg·mL-1(S/N>10);方法回收率为100.1％-106.6％(n=21),日内RSD为2.3％-4.0％(n=21),日间RSD为3.2％-5.2％(n=21)。结论:本方法灵敏度高,操作简便、准确,可用于人体血浆中吉西他滨浓度的测定及药动学研究。     

亚叶酸钙消旋体在牛血清白蛋白手性柱上的拆分

目的:寻找一种快速、有效的分离定量亚叶酸钙(LV)的方法。方法:采用高效液相色谱法,利用采用新方法合成的牛血清白蛋白手性固定相,以50 mmol·L~(-1)磷酸盐缓冲溶液(pH 6.5)为流动相对其进行拆分。结果:[6S]-、[6R]-LV分别在4.46 min和7.59 min时出峰,全过程可在10 min内实现基线分离,其分离度α=2.10,Rs=2.78。结论:流动相pH值、缓冲溶液浓度以及温度对[6S]-LV、[6R]-LV的容量因子都有较大的影响,并初步推测[6S]-、[6R]-LV与牛血清白蛋白之间是单个位点的作用。     

胶束电动毛细管色谱法测定减肥保健品中的西布曲明、吲达帕胺、丁脲胺和氯噻嗪

目的:建立了胶束电动毛细管色谱法同时测定减肥保健品中的西布曲明、吲达帕胺、丁脲胺和氯噻嗪的方法。方法:以10.0 mmol·L~(-1)磷酸盐缓冲溶液-15.0 mmol·L~(-1)SDS(含35%乙腈,V/V,pH 7.5)为电泳介质,未涂层弹性石英毛细管(50μm×48cm,有效长度为40 cm)为分离通道,检测波长为210 nm,压力进样(5kPa×10s)。结果:西布曲明、吲达帕胺、丁脲胺和氯噻嗪的线性范围分别为4.0～100.0 m·L~(-1),2.0～80.0 mg·L~(-1),2.0～80.0 mg·L~(-1),2.0～80.0 mg·L~(-1),检出限分别为1.0,0.5,0.5,0.5 mg·L~(-1),5次重复测定的相对偏差为2.8%～4.5%;样品加标回收率为89%～103%。结论:该法简便快捷,准确可靠,用于中药成分减肥保健品分析,结果令人满意。     

用IE—HPLC、PAGE分析合成的硫代寡核苷酸相关物质“n—1”、“n—2”和“n—3”

目的:分析合成的n=20-mer硫代寡核苷酸中相关物质“n-1”、“ n-2”和“ n-3”杂质失败序列。方法:离子交换高效液相色谱(IE-HPLC)法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)。色谱柱为Gen-Pak~(TM)FAX离子交换柱(4.6 mm×100mm),流动相A为62.5mmol·L~(-1)三羟甲基氨基甲烷盐酸(Tris·Cl),pH 8.15,流动相B为62.5mmol·L~(-1) Tris·Cl,pH 8.15,2.5 mol·L~(-1) LiCl,流动相C为100％乙腈;梯度洗脱条件为B:30％→50％ 30 min,C:恒为20％;流速为0.75mL·min~(-1);检测波长为260nm。PAGE分析采用20％变性聚丙烯酰胺凝胶,恒定功率25W进行电泳。结果:IE-HPLC分离纯化出3种相关物质,通过PAGE印证了它们是由于合成偶联不完全而产生的n-1、n-2和n-3的杂质失败序列。结论:所用离子交换高效液相色谱法能将合成的硫代寡核苷酸中相关物质“n-1”、“n-2”和“n-3”杂质失败序列与全序列n一一分离出来,对硫代寡核苷酸的纯化和分析具有重要的参考价值。     

丹参酮ⅡA抑制去血清培养诱导的PC12细胞凋亡(英文)

目的:研究丹参酮ⅡA对无血清培养诱致PC12细胞凋亡的抑制作用。方法:以噻唑兰(MIT)法测定PC12细胞存活率;用流式细胞术检测DNA含量及凋亡细胞百分率;DNA琼脂糖电泳法观察DNA断裂。结果:去血清培养(12h)可诱导PC12细胞凋亡(细胞凋亡率96.07％)。丹参酮Ⅱ A(0.1,1μmol·L~(-1))显著降低凋亡细胞百分率(细胞凋亡率分别为25.71％和4.89％),并减少DNA断裂。丹参酮ⅡA(0.01-10μmol·L~(-1))抑制氰化钠(20mmol·L~(-1))、谷氨酸钠(0.5mmol·L~(-1))和硝普钠(0.5mmol·L~(-1))所致的细胞毒性。结论:丹参酮Ⅱ A可抑制去血清培养引起的PC12细胞凋亡。