二烯丙基三硫通过Caspase-3途径诱导人胃癌MGC803细胞凋亡

背景与目的:大蒜及其烯丙基硫化物具有抗肿瘤作用,但其具体的作用机制尚不十分清楚。本研究探讨二烯丙基三硫(diallyltrisulfide,DATS)诱导人胃癌MGC803细胞凋亡及凋亡过程中Caspase-3的变化及其意义。方法:采用荧光显微镜和电子显微镜观察以及流式细胞术和Westernblot检测等方法,观察DATS诱导MGC803细胞凋亡的作用及对活化的Caspase-3的影响。结果:在荧光显微镜及电子显微镜下,DATS作用的胃癌细胞出现了典型的凋亡形态学改变;流式细胞术检测出现明显的亚G1峰;12mg/L的DATS处理MGC803细胞0、4、8、12、24h后,活化的Caspase-3的表达率分别为1.9%、3.0%、7.3%、14.4%、27.6%,提示DATS呈时间依赖性促进活化的Caspase-3的表达;用特异的Caspase-3抑制剂预处理细胞后,再用12mg/LDATS处理细胞24h,与单用DATS组相比,凋亡率从23.0%降低到5.1%(P<0.01),提示Caspase-3的抑制剂能抑制DATS诱导的胃癌MGC803细胞凋亡。Westernblot显示酶原形式的Caspase-3被水解活化。结论:DATS诱导人胃癌MGC803细胞凋亡可能与活化Caspase-3有关。     

活性氧在EGCG诱导人胃癌MGC803细胞凋亡中的作用

背景与目的:表没食子儿茶素没食子酸(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)抗肿瘤作用的机制目前尚不十分清楚,本研究旨在探讨活性氧(reactive oxygen species,ROS)在EGCG诱导人胃癌MGC803细胞凋亡中的作用.方法:采用噻唑蓝比色法(MTT)检测MGC803细胞的存活率;采用荧光显微镜观察MGC803细胞的凋亡率;流式细胞术检测MGC803细胞凋亡率及细胞内活性氧水平.结果:EGCG可诱导MGC803细胞凋亡,细胞内活性氧水平升高.抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cystein,NAC)干预后,EGCG抑制MGC803细胞生长的作用明显减弱,细胞凋亡率下降,NAC抑制了细胞内活性氧水平的升高.结论:EGCG可诱导MGC803细胞凋亡,该作用可被NAC显著抑制,提示EGCG诱导MGC803细胞凋亡与细胞内活性氧产生增加有关.     

抑制细胞外信号调节激酶对As2O3诱导胃癌细胞系MGC-803凋亡的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶在三氧化二砷(As2O3)诱导胃癌细胞系MGC-803凋亡的信号转导途径中的作用.方法采用MTT法检测As2O3对胃癌细胞系MGC-803的增殖抑制作用,采用瑞氏-姬姆萨染色和流式细胞仪检测As2O3诱导MGC-803凋亡以及加入选择性ERK抑制剂PD98059后细胞凋亡率的变化.结果5 μmol/L与10 μmol/L的As2O3作用24 h后凋亡率分别为(4.74±0.03)%和(11.93±0.06)%,而与PD98059联合作用24 h后凋亡率分别增加至(11.65±0.09)%和(18.15±0.10)%,P＜0.05.As2O3抑制MGC-803细胞的增殖,并诱导凋亡.结论预先抑制ERK途径增加了As2O3诱导MGC-803细胞的凋亡效应.ERK途径可能参与了As2O3诱导胃癌细胞系MGC-803凋亡的信号转导途径.     

香加皮杠柳苷联用TRAIL对胃癌SGC-7901和MGC-803细胞的作用及其机制

目的:探讨香加皮杠柳苷(cortex periplocae,CPP)联用肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对胃癌细胞的作用及其机制.方法:人胃癌细胞系SGC-7901、MGC-803培养完成后,采用50、100、200 ng/ml的CPP和1μg/ml的TRAIL单用或联合处理.MTS法检测SGC-7901和MGC-803细胞的增殖情况,流式细胞术检测其凋亡率,Westcm boltting检测pro-BID、Mcl-l、cleaved caspase-3、DR4、DR5的表达水平.结果:SGC-7901和MGC-803细胞经CPP (50、100、200 ng/ml)和TRAIL(1 μg/ml)联合处理24 h后,细胞增殖率明显低于空白对照组和对应的CPP各剂量单独处理组(/＜0.05或P＜0.01).SGC-7901和MGC-803细胞凋亡率均明显高于空白对照组和对应的CPP各剂量单独处理组(P＜0.05或P＜0.01).SGC-7901和MGC-803细胞中pro-BID、Mcl-1表达水平明显降低(均P＜0.05),cleaved caspase-3表达水平明显升高(P＜0.05),DR4和DR5受体的表达水平升高(均P＜0.05).结论:CPP协同TRAIL可明显诱导人胃癌SGC-7901和MGC-803细胞凋亡,增强人胃癌细胞对TRAIL的敏感性.     

表没食子儿茶素没食子酸酯诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡及机制

[目的]探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的生物学效应及抗肿瘤机制.[方法]通过MTT还原法检测EGCG对该细胞系生长的影响;用普通光镜、流式细胞仪和DNA断裂片段分析研究EGCG诱导的细胞凋亡.S-P免疫组化法检测细胞内Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达.[结果]EGCG能抑制MGC-803细胞的生长,抑制作用呈时间和剂量依赖性关系;EGCG处理MGC-803细胞后,普通光镜下细胞呈凋亡特征性改变;流式细胞仪示同一时间不同浓度EGCG(60、80、100、120μmol/L,48h)处理MGC-803细胞和同一浓度不同时间(80μmol/L,48、72h)处理MGC-803细胞,亚G1期细胞都逐渐增多;MGC-803细胞经EGCG(80、100、120μmol/L,48 h)后,其DNA电泳图中出现梯形条带;S-P免疫组化结果表明80μmol/L EGCG处理细胞48h后,Bcl-2蛋白表达下降,Bax和Caspase-3蛋白表达升高.[结论]EGCG有诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的作用,其机制可能与Bax/Bcl-2比值增高导致Caspase-3的活化从而启动细胞凋亡有关.     

百草枯诱导AML12细胞凋亡过程中线粒体活性氧的作用

目的: 探讨百草枯诱导小鼠肝细胞系AML12细胞凋亡过程中线粒体活性氧的作用。方法: AML12细胞分别给予0、25、50、100、200、300 μmol/L的百草枯处理。采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;AnnexinV/PI双染法结合流式细胞术检测细胞凋亡率;DCFH-DA荧光探针经流式细胞仪测定细胞内活性氧水平;MitoSOX荧光探针检测线粒体活性氧变化;激光共聚焦测定JC-1探针荧光强度以检测线粒体膜电位变化。结果: 与对照组比较,25~300 μmol/L的百草枯处理后可以诱导AML12细胞活力下降,且具有剂量效应关系(r=-0.94,P<0.01);300 μmol/L的百草枯作用24 h可明显诱导AML12细胞发生凋亡(P<0.05);25~300 μmol/L 百草枯处理24 h后细胞内活性氧依次增加(P<0.05),25~100 μmol/L百草枯作用24 h时线粒体活性氧增加且呈剂量效应关系(r=0.98,P<0.05),而200 和300 μmol/L的百草枯作用24 h时线粒体活性氧水平降低(P<0.05)。细胞活力下降与细胞内活性氧升高呈负相关(r=-0.90 P<0.05);晚期凋亡细胞的比例与细胞内活性氧呈正相关(r=0.96,P<0.01);JC-1检测线粒体膜电位结果显示,与对照组相比,300 μmol/L的百草枯处理24 h时线粒体膜电位显著降低(P<0.05)。结论: 百草枯诱导AML12细胞凋亡过程主要由细胞整体水平的活性氧介导,提示线粒体活性氧并未直接参与百草枯诱导的肝损伤过程。     

红花多糖对胃癌MGC-803细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨红花多糖对胃癌MGC-803细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法:以不同浓度（0、0.16、0.32和0.64 mg/ml）红花多糖作用于MGC-803细胞48 h后，分别采用MTT法、克隆形成实验、流式细胞仪和Transwell法检测细胞的增殖能力、克隆形成能力、周期分布情况和侵袭能力，Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin、c-Myc、CyclinD1、VEGF和MMP-9的表达情况。采用0.32 mg/ml红花多糖和Wnt/β-catenin信号通路抑制剂VXAV939单独或联合处理MGC-803细胞48 h后，进一步观察细胞的增殖和侵袭情况。结果:与对照组（0 mg/ml）相比，0.16、0.32和0.64 mg/ml红花多糖处理组细胞增殖率、克隆形成率、侵袭细胞数和细胞内β-catenin、c-Myc、CyclinD1、VEGF、MMP-9蛋白的表达水平均显著降低，而细胞在G0/G1期所占百分比显著升高（P＜0.05）。使用VXAV939后，红花多糖对MGC-803细胞的上述作用进一步加强。结论:红花多糖可抑制胃癌MGC-803细胞增殖和侵袭并诱导细胞周期阻滞于G0/G1期，其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

抗癌生物活性肽-S对胃癌细胞周期和凋亡的影响

目的 探讨抗癌生物活性肽-S(ACBP-s)对人胃癌细胞MGC-803细胞周期和凋亡的影响.方法 (1)体外实验:以不同浓度ACBP-S处理人胃癌MGC-803细胞,采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法测定增殖抑制率;电镜下观察细胞凋亡现象;流式细胞术分析细胞周期与凋亡率;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法检测p27基因mRNA和蛋白表达的变化.(2)动物体内实验:建立裸鼠胃癌移植瘤模型,每只裸鼠经尾静脉注射7μg ACBP-S,隔日给药,2周后处死,计算抑瘤率;HE染色观察肿瘤细胞形态变化;免疫组化法检测Bcl-2、Bax和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果 (1)5.0、10.0和15.0μg/ml的ACBP-S均能抑制MGC-803细胞的生长,且随浓度增加和作用时间延长抑瘤率增加.电镜下可见,MGC-803细胞经15.0μg/ml ACBP-S作用48h后,呈现典型的凋亡特征.流式细胞术分析结果显示,5.0和20.0μg/ml ACBP-S作用MGC-803细胞24h的凋亡率较高,分别为(5.7±0.2)%和(13.9±0.6)%(P<0.05);20.0μg/ml ACBP-S可使G0/G1期MGC-803细胞的构成比明显上升.ACBP-S上调MGC-803细胞p27基因mRNA和蛋白的表达.(2)ACBP-S能抑制胃癌移植瘤的生长,抑制率达34.2%.镜下可见,治疗组肿瘤组织中出现大片坏死及大量凋亡细胞,异型细胞及核分裂相减少.免疫组化分析结果显示,治疗组Bcl-2和PCNA表达降低,Bax表达增高.结论 ACBP-S能抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,其作用机制与调控胃癌细胞的细胞周期和凋亡有关.     

EGCG诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡相关基因的差异表达

  目的   研究表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的生物学效应,并探讨其分子机制。   方法   运用DNA含量分析、Annexin Ⅴ/PI双标记法、DNA琼脂糖凝胶电泳以及透射电子显微镜形态学方法来观察细胞凋亡。通过SuperArray人细胞凋亡基因芯片检测100μmol/L EGCG作用于MGC-803细胞12 h后凋亡相关基因的表达谱,采用RT-PCR和Western blot技术验证上调基因Fas-L和下调基因Bag-1。   结果   25、50、100、200 μmol/L EGCG作用于MGC-803细胞24 h后,DNA含量分析出现了明显的亚二倍体峰;100 μmol/L EGCG作用4、8、12、24 h后,Annexin Ⅴ/PI双标记法表明早期凋亡细胞显著增加。100 μmol/L EGCG作用24 h后,在琼脂糖凝胶上电泳可见DNA凋亡特征性的阶梯状条带。电子显微镜观察到细胞体积缩小,核浓缩和凋亡小体形成等典型的形态学改变。通过基因芯片检测发现,100 μmol/L EGCG作用12 h后有8个凋亡相关基因表达差异显著,选择其中Fas-L和Bag-1运用RT-PCR和Western blot技术进行验证,其结果与基因芯片一致。   结论   EGCG能够诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡,这可能是多个基因和多条信号转导通路共同作用的结果。      

N-马来酰-L-缬氨酸酯姜黄素诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的机制

目的研究N-来酰-L-缬氨酸酯姜黄素(MVC)诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的分子机制。方法采用MTT法检测MVC对肿瘤细胞的生长抑制作用;Hoechst 33342/PI核荧光双染色法检测细胞凋亡的改变;运用Western blot技术检测参与细胞凋亡相关基因的蛋白表达。结果20 μmol/L MVC可明显抑制MGC-803细胞生长,48 h IC50值为126 μmol/L;20 μmol/L MVC可诱导MGC-803细胞凋亡;MVC作用后,增加了促凋亡蛋白Bax的表达,抑制了凋亡蛋白Bcl-2 的表达,提高了Caspase-3活性。结论MVC可通过Bcl-2介导的线粒体途径诱导MGC-803 细胞凋亡。     

Garlic compounds generate reactive oxygen species leading to activation of stress kinases and cysteine proteases for apoptosis in human glioblastoma T98G and U87MG cells

BACKGROUND: Garlic-derived organosulfur compounds such as diallyl sulfide (DAS), diallyl disulfide (DADS), and diallyl trisulfide (DATS) provide significant protection against carcinogenesis. METHODS: Dose-dependent cytotoxic effects of the garlic compounds (DAS, DADS, and DATS) were tested in human glioblastoma T98G and U87MG cells. Wright staining and ApopTag assay confirmed induction of apoptosis. Measurements showed that production of reactive oxygen species (ROS) and an increase in intracellular free [Ca(2+)] promoted apoptosis. Western blot analysis indicated that increased expression and activities of the stress kinases and cysteine proteases caused apoptosis. Use of JC-1 showed changes in mitochondrial membrane potential (Delta psi(m)) for mediation of apoptosis. Use of the specific inhibitors monitored the activation of different kinases and proteases in apoptosis. RESULTS: Treatment of glioblastoma cells with garlic compounds triggered production of ROS that induced apoptosis with the phosphorylation of p38 MAPK and activation of the redox-sensitive JNK1 pathway. Pretreatment of cells with ascorbic acid attenuated ROS production, p38 MAPK phosphorylation, and JNK1 activation. Pretreatment with JNK1 inhibitor I also significantly reduced cell death. Increases in intracellular free [Ca(2+)], expression of calreticulin, and activation of caspase-4 indicated involvement of endoplasmic reticulum (ER) stress in apoptosis. Other events in apoptosis included overexpression of Bax, down-regulation of Bcl-2 and some BIRC proteins, mitochondrial release of cytochrome c and Smac into the cytosol, and activation of calpain, caspase-9, and caspase-3. CONCLUSIONS: Garlic compounds induced apoptosis in glioblastoma cells due toproduction of ROS, increase in ER stress, decrease in Delta psi(m), and activation of stress kinases and cysteine proteases.     

青蒿琥酯对人胃癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究青蒿琥酯对胃癌细胞增殖和凋亡的作用,探讨其对胃癌作用机制,为进一步的临床研究及应用提供依据。方法:采用MTT噻唑蓝法观察青蒿琥酯对胃癌细胞MGC-803生长增殖的影响,流式细胞仪和透射电镜检测药物作用前后细胞凋亡,逆转录-聚合酶链反应测定药物作用前后凋亡抑制基因survivin表达的变化。结果:青蒿琥酯在3.125~50μg/ml浓度范围内呈剂量依赖性方式抑制胃癌细胞MGC-803的生长增殖,并能显著抑制胃癌细胞survivin基因的表达。流式细胞仪检测出凋亡峰,透射电镜下可见部分MGC-803细胞呈典型的凋亡形态学改变。结论:青蒿琥酯能显著抑制胃癌细胞生长,并诱导胃癌细胞凋亡。     

盐酸罗哌卡因对胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨盐酸罗哌卡因对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响。方法:细胞计数试剂盒（CCK-8）检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞增殖能力的影响，并确定盐酸罗哌卡因的用药浓度，流式细胞术检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞周期的影响，Annexin V-FITC/PI法检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞凋亡的影响，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）蛋白表达水平。结果:随着盐酸罗哌卡因用药浓度的升高，MGC-803细胞增殖能力逐渐降低，根据CCK-8实验结果分别筛选出浓度为10、50 μg/ml和100 μg/ml的盐酸罗哌卡因用于后续实验。盐酸罗哌卡因能够明显阻滞细胞周期于G2期，诱导细胞凋亡，抑制Bcl-2蛋白表达，促进Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达。结论:盐酸罗哌卡因能够抑制胃癌MGC-803细胞增殖，阻碍MGC-803细胞周期进程，诱导细胞凋亡，该过程可能与下调Bcl-2蛋白表达，上调Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达有关。     

Diallyl trisulfide induces apoptosis in human primary colorectal cancer cells

Colorectal cancer (CRC) is one of the most prevalent types of cancer worldwide and a common cause of morbidity and mortality in humans. The garlic-derived organosulfur compound diallyl trisulfide (DATS) has been shown to induce apoptosis in many human cancer cell lines in?vitro and also affords significant protection against cancer in animal tumor models in?vivo. There is no available information to show DATS-induced apoptosis in?vitro and the molecular mechanisms of apoptosis in human primary colorectal cancer cells. In this study, we investigated the cytotoxic effects in DATS in primary colorectal cancer cells. DATS inhibited the viability of primary colorectal cancer cells in a time- and dose-dependent manner. After treatment with DATS, primary colorectal cancer cells exhibited DNA condensation by DAPI stain. DATS increased reactive oxygen species (ROS) production in primary colorectal cancer cells. The mitochondria-dependent apoptotic signaling pathway was shown to be involved as determined by increase in the levels of cytochrome c, Apaf-1, AIF and caspase-3 and caspase-9 in DATS-treated primary colorectal cancer cells. The decrease in the level of ΔΨm was associated with an increase in the Bax/Bcl-2 ratio which led to activation of caspase-9 and -3. Based on our results, DATS induces apoptotic cell death in human primary colorectal cancer cells through a mitochondria-dependent signaling pathway.     

KDR基因沉默对胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响

[目的]探讨KDR基因对胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响。[方法]设计及合成KDR的siRNA序列,LipofectamineTM 2000转染MGC-803细胞。通过RT-PCR、Western Blot检测KDR在干扰后的mRNA和蛋白的表达情况,利用流式细胞仪检测细胞周期,WST-1法检测细胞增殖活性,TUNEL法检测细胞凋亡情况。[结果]KDR mRNA和蛋白表达,观察组较对照组和空白组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组细胞的生长速度明显减慢,细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少,差异有统计学意义(P<0.05)。转染KDRsiRNA的MGC-803细胞的增殖能力明显受到抑制(P<0.05),且明显促进了细胞的凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]特异性干扰KDR基因表达可抑制胃癌MGC-803细胞的增殖,并促进肿瘤细胞凋亡。KDR的siRNA序列可能成为治疗胃癌的有效靶点。     

胞外环境Ca~(2 )变化诱导人肿瘤细胞凋亡

目的 :观察胞外环境Ca2 变化对人肿瘤细胞的直接诱导凋亡作用。方法 :通过EGTA螯合胞外Ca2 或添加CaCl2 改变胞外环境Ca2 。用PI和Hoechst3334 2荧光双染观察细胞核形态 ,用流式细胞仪检测凋亡百分率。分别借助荧光探针Fluo 3和Rh12 3检测胞内Ca2 和线粒体膜电位 (ΔΨm)变化。用环孢菌素A(CsA)阻断PT孔 ,研究其在凋亡中的作用。结果 :胞外环境Ca2 升高或降低均诱导人胃癌MGC 80 3和喉癌Hep细胞凋亡 ,恢复胞外Ca2 阻断凋亡。随胞外Ca2 变化胞内Ca2 相应升高或降低 ,但线粒体ΔΨm均表现为急剧下降。CsA对MGC 80 3细胞凋亡无明显抑制作用 ,轻微促进Hep细胞凋亡。结论 :胞外环境Ca2 变化引起胞内Ca2 相应变化和线粒体ΔΨm下降并通过PT孔非依赖性途径诱导肿瘤细胞凋亡。