bFGF对瘢痕成纤维细胞影响的实验研究

目的 探讨bFGF对瘢痕成纤维细胞生物学行为和病理学的影响及其对瘢痕的作用机制[1],为临床整形美容外科预防和治疗瘢痕提供分子及病理学水平的理论依据.方法 对瘢痕及正常皮肤成纤维细胞进行体外培养采用倒置显微镜、MTT测定、流式细胞术进行观察、分析,以研究细胞因子bFGF对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响[2].结果 体外培养瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞倒置显微镜、流式细胞术以及MTT测定结果显示,与相应的对照组相比,加入细胞因子bFGF后,显示均对细胞起明显的促增殖作用.结论 细胞因子bFGF对成纤维细胞的生长趋势与增殖活性有明显的促进作用,刺激了胶原纤维的合成、增生和沉积[3],这在创伤愈合的早期起到积极的作用,但过量的应用bFGF可导致病理性瘢痕的形成[4].     

瘢痕疙瘩组织中内皮素－1及碱性成纤维细胞生长因子mRNA的表达

目的 了解内皮素-1和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)在瘢痕疙瘩组织的表达情况。 方法 组织活检标本分为 3组,瘢痕疙瘩、萎缩性瘢痕和正常皮肤。用地高辛标记的 cDNA探针,采取冰冻切片原位杂交的方法检测内皮素-1和 bFGF mRNA的表达。结果 瘢痕疙瘩真皮组织内内皮素-1 mRNA的表达明显强于萎缩性瘢痕和对照组。阳性染色主要位于真皮浅层血管和部分真皮成纤维细胞。瘢痕疙瘩组 6/8例真皮成纤维细胞内皮素-1 mRNA阳性,且呈弥漫性分布;萎缩性瘢痕和正常皮肤真皮成纤维细胞内皮素-1 mRNA无阳性着色。结论 内皮素-1和 bFGF mRNA在瘢痕疙瘩组织中的过度表达提示内皮素-1和 bFGF可能在瘢痕疙瘩的形成中起一定作用。     

几丁糖对瘢痕疙瘩成纤维细胞形态及增殖的作用

目的：探讨几丁糖对瘢痕疙瘩成纤维细胞形态及生长增殖的作用，为临床应用几丁糖治疗瘢痕疙瘩提供理论基础：方法：用组织块法进行瘢痕疙瘩、正常皮肤成纤维细胞的体外培养；用光学显微镜和电子显做镜观察细胞的形态结构；用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪检测不同浓度几丁糖对不同来源的成纤维细胞生长增殖和细胞周期的影响．结果：随着几丁糖浓度的增高，瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞细胞器萎缩，4值减小，C0 G1期的细胞百分比增多，S期G2 M期的细胞百分比减少．结论：几丁糖对正常皮肤和瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞的生长增殖均有抑制作用，几丁糖可能在瘢痕疙瘩的防治中有一定的作用．     

UVA1对人体皮肤成纤维细胞的影响及临床应用

UVA1作用于皮肤成纤维细胞,使其凋亡增加、酶活性及细胞因子的分泌改变,造成真皮层损伤,还可促进伤口愈合,被用于治疗某些与皮肤成纤维细胞增生相关的皮肤病,如硬皮病、瘢痕疙瘩及增生性瘢痕等。本文就UVA1对皮肤成纤维细胞的影响及其在皮肤病治疗中的应用作以综述。     

UVA辐射前后成纤维细胞蛋白质组双向电泳图谱的差异分析

目的使用双向电泳(2-DE)比较UVA辐射前后成纤维细胞蛋白质的差异,从分子水平探索紫外线辐射所致皮肤细胞蛋白整体变化的规律。方法采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离UVA辐射前后人皮肤成纤维细胞的总蛋白质,凝胶经银染显色后,用Im agingM aster 2D图像分析软件进行比较分析,识别差异表达的蛋白质。结果①UVA辐射前后人皮肤成纤维细胞凝胶的平均蛋白质点数分别为676±21和693±28,平均匹配的点数分别为583.43±29.13和591.46±27.23,匹配率达86.22%和85.31%。②UVA辐射前后人皮肤成纤维细胞的平均匹配蛋白点数为5 6 3.4 7±19.33。差异表达蛋白点数为17个,其中1个点仅在UVA辐射前成纤维细胞中表达,另4个点仅在UVA辐射后成纤维细胞中表达;7个点在UVA辐射后成纤维细胞中高表达,5个点在UVA辐射后成纤维细胞中低表达。结论本研究建立了分辨率高且重复性较好的UVA辐射前后成纤维细胞的双向凝胶电泳图谱,发现两者间存在一些差异表达的蛋白质,以上差异点的发现为研究紫外线对皮肤作用的机理提供了有益的线索。     

EGF对瘢痕成纤维细胞影响的实验研究

目的 通过探讨细胞因子EGF对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响,研究EGF在瘢痕形成中的作用机制,为临床预防和治疗瘢痕提供分子学水平及病理学水平的理论依据.方法 采用倒置显微镜、MTT测定、流式细胞术,对瘢痕成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞进行体外培养,观察、分析细胞因子EGF对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响.结果 倒置显微镜、流式细胞术以及MTT对体外培养瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞的测定结果显示,与相应的对照组相比,加入细胞因子EGF后,体外培养的瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞均明显增殖,且凋亡水平降低,显示EGF对成纤维细胞起着明显的促增殖作用.结论 细胞因子EGF对成纤维细胞的生长趋势与增殖活性有明显的促进作用,刺激了胶原纤维的合成、增生和沉积.因此,EGF可促进创伤的早期修复,但EGF的过量应用有可能导致增生性瘢痕的形成.     

曲尼司特对人正常皮肤和瘢痕疙瘩成纤维细胞部分细胞因子表达的影响

目的 ：研究曲尼司特对正常皮肤和瘢痕疙瘩成纤维细胞转化生长因子-β1（TGF-β1）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和白介素-6（IL-6）表达的影响。方法：在体外无血清培养的人正常皮肤成纤维细胞和瘢痕疙瘩成纤维细胞中，分别加入0、10、25、50和250μg／mL曲尼司特孵育24、72、96h，用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ABC—ELISA）法测定其上清液中TGF-β1、bFGF和IL-6的表达水平。结果：与对照组相比。25、50和250μg／mL曲尼司特能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β1的表达；50μg／mL和250μg／mL曲尼司特能增加瘢痕疙瘩成纤维细胞bFGF的表达；10～250μg／mL曲尼司特可降低IL-6的表达，上述改变在一定时段差异有统计学意义（P〈0．05）。不同浓度曲尼司特对正常皮肤成纤维细胞的影响相似。结论：曲尼司特能降低瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β1的产生。增加bFGF的合成，减少IL-6的表达，这或许可解释其在抑制异常瘢痕形成中的作用。     

L929成纤维细胞在皮肤B16黑素瘤细胞成瘤中的作用

目的研究成纤维细胞在皮肤黑素瘤成瘤中的作用。方法以小鼠皮肤成纤维细胞系L929与小鼠皮肤黑素瘤细胞系B16为研究对象,细胞共培养体外诱导L929成纤维细胞分化为肌成纤维细胞,免疫细胞学检测a-SMA的表达,Western blot证实表型的变化;建立C57小鼠皮肤黑素瘤移植瘤动物模型,研究L929成纤维细胞对B16黑素瘤移植成瘤率的影响。结果B16黑素瘤细胞可以诱导部分L929成纤维细胞发生表型变化;L929成纤维细胞可提高B16黑素瘤细胞移植成瘤率。结论肿瘤细胞外基质中的成纤维细胞与皮肤黑素瘤细胞的成瘤性有关。     

雷公藤多甙片对皮肤瘢痕成纤维细胞生长及胶原合成影响的研究

目的探讨雷公藤多甙片对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长及胶原合成的影响。方法体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞,分别加入不同浓度的雷公藤多甙,通过倒置显微镜观察、MTT法测定细胞活力、流式细胞仪检测细胞周期改变、羟脯氨酸含量测量、乳酸脱氢酶检测等方法观测雷公藤多甙对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长及胶原合成的影响。结果与空白对照组相比,加入雷公藤多甙5μg/mL后成纤维细胞数量明显减少;A值降低,最大抑制率为59.60%;羟脯氨酸含量降低(P<0.05);细胞处于G2-M期比例增加(P<0.05);当药物浓度低于500μg/mL时乳酸脱氢酶含量与空白对照组相比没有明显差异(P>0.05)。结论有效浓度下,雷公藤多甙能抑制皮肤瘢痕成纤维细胞生长及胶原合成。     

紫外线对人皮肤成纤维细胞的影响

紫外线辐射可造成皮肤损伤,引起皮肤出现红斑、光老化等。紫外线作用于成纤维细胞,引起细胞因子分泌及基因表达的改变,不仅能造成真皮层的损伤,还可被用来治疗某些疾病,如局限性硬皮病。从紫外线对皮肤成纤维细胞的损伤、成纤维细胞对紫外线的防御反应及紫外线的应用等方面阐述了紫外线对成纤维细胞的影响。     

自噬对水痘-带状疱疹病毒感染豚鼠背根神经节模型中病毒结构及功能蛋白表达的影响

【摘要】 目的 探讨自噬诱导剂雷帕霉素及抑制剂3-甲基腺嘌呤对水痘-带状疱疹病毒（VZV）感染豚鼠背根神经节模型中病毒结构及功能蛋白生物合成的影响及机制。方法 在人胚肺成纤维细胞（HELF）中培养扩增VZV,同时分离提取豚鼠外周血单个核细胞（PBMC）,VZV-HELF与PBMC共培养18 ~ 20 h,离心收集VZV-PBMC。32只豚鼠随机平均分为4组,每组8只：空白对照组于内眦静脉丛注射自体PBMC;自噬抑制组、自噬诱导组、VZV感染组分别先腹腔注射3 mg/kg 3-甲基腺嘌呤溶液、0.5 mg/kg雷帕霉素溶液、相同体积的0.9% NaCl溶液,2 h后均于内眦静脉丛注射VZV-PBMC 50 μl。14 d后,处死各组豚鼠,取背根神经节组织,透射电镜观察病毒颗粒形态及自噬囊泡形态及数目,Western印迹检测VZV核衣壳蛋白（NCP）和立即早期蛋白62（IE62）及自噬相关蛋白Beclin-1和p62的表达,免疫组化检测VZV感染的背根神经节中抗VZV抗体的表达。统计分析采用两独立样本t检验、单因素方差分析、LSD-t检验或Kruskal-Wallis H检验。结果 透射电镜下,VZV感染组背根神经节中可见核衣壳病毒粒子及散在的自噬体结构。空白对照组、VZV感染组、自噬诱导组及自噬抑制组自噬囊泡数量［M（Q1,Q3）］分别为0、5（4,6）、7（5,9）、0个,差异有统计学意义（H = 135.60,P＜0.01）,VZV感染组显著高于空白对照组及自噬抑制组（均P＜0.05）,但与自噬诱导组差异无统计学意义（P＞0.05）,而自噬诱导组显著高于自噬抑制组（P＜0.05）。Western印迹显示,VZV感染组IE62蛋白表达水平（1.49 ± 0.06）显著高于空白对照组（0.50 ± 0.09）,t = 9.17,P＜0.05;自噬抑制组抗VZV抗体表达显著低于自噬诱导组和VZV感染组（t值分别为9.24、7.78,均P < 0.01）,而自噬诱导组与VZV感染组抗VZV抗体表达差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 VZV感染豚鼠背根神经节后发生了自噬;通过抑制自噬,豚鼠背根神经节中部分VZV结构及功能蛋白的表达水平下降。     

外用联合靶向siRNA治疗生殖器疱疹豚鼠模型实验

目的: 评价联合靶向特异性小干扰RNA（HSV-2 UL27.2 和UL29.2 基因）对生殖器疱疹（GH）模型的疗效。方法:（1）病毒攻击实验：雌性豚鼠60只,随机分为治疗组和对照组,每组30只,治疗组小鼠外阴和阴道内外用联合靶向特异性小干扰RNA(CT-siRNA),对照组外用非靶向基因的RNA制剂（siN.C）,作用4小时后给予疱疹病毒2型（HSV-2）野生株接种,观察豚鼠发病情况并计算生存率。（2）选取接种HSV-2后具有初发GH反应的雌性豚鼠60只,分为治疗组和对照组,每组30只,分别外用CT-siRNA和siN.C制剂,每周1次至皮损愈合。2个月后腹腔内注射环磷酰胺并给予紫外线照射诱导复发,计算疱疹复发率及HSV-2培养阳性率。结果:病毒攻击感染后治疗组存活率（80.0%）高于对照组（23.3%）(P＜0.05)。治疗第10天治疗组皮损积分值（0.25±0.25）较对照组明显降低（1.0±1.25）(P＜0.05)。诱导复发后,治疗组复发率（16.7%）低于对照组（60.0%）(P＜0.05).结论: 外用CT-siRNA制剂能预防HSV-2的感染及GH复发。     

内皮素拮抗剂对中波紫外线诱导豚鼠色素沉着的观察

目的 探讨内皮素拮抗剂对紫外线诱导豚鼠色素沉着的治疗作用.方法 用中波紫外线(UVB)照射豚鼠皮肤制作色素沉着模型.模型制作成功后,模型动物分为空白对照组(生理氯化钠溶液)、内皮素拮抗剂组及熊果苷组(阳性对照).分别于中波紫外线(UVB)照射前、15 d后及30 d后,用Mexameter(R) MX 18检测豚鼠背部皮肤的黑素指数.连续治疗30 d后比较黑素指数、表皮内黑素细胞数目和黑素含量等指标.结果 UVB照射30 d时,豚鼠背部9块UVB照射区域的黑素指数显著高于照射前(P＜ 0.000 1).外涂1‰内皮素拮抗剂的照射区域30 d后的黑素指数值明显降低,和熊果苷组比较,差异有统计学意义(P＜ 0.000 1).内皮素拮抗组黑素含量指数1明显低于空白对照组(P＜0.05).而3组间黑素含量指数2差异无统计学意义(P＞ 0.05).结论 外涂内皮素拮抗剂对UVB照射诱导豚鼠的色素沉着有一定治疗作用.     

Prevalence of scars and “mini‐scars”, and their impact on quality of life in Japanese patients with acne

There have been very few studies on the prevalence and severity of acne scars in Japanese patients. The aim of the present study was to investigate the prevalence of acne scars and their impact on the quality of life (QOL) in Japanese acne patients. Acne scars were classified as mini‐scars (atrophic scars of ≥0.5 and <2 mm in diameter) atrophic scars (≥2 mm in diameter), and hypertrophic scars. The severity of acne and acne scars were evaluated. The background of patients and their QOL in relation to acne were assessed. Of 240 subjects, 218 (90.8%) had scars. All patients with scars had mini‐scars; 61.2% and 14.2% of 240 had atrophic scars and hypertrophic scars, respectively. Severe scarring was found in patients who had experienced severe acne symptoms, although 15.0% of patients with scars had experienced only mild acne symptoms. The total Dermatology Life Quality Index score was significantly higher in patients with scars than in patients without scars (5.9 ± 4.4 vs 4.2 ± 4.1). Almost all the patients had small atrophic scars with a diameter of 0.5 or more and less than 2 mm, which we have termed “mini‐scars”. Acne scars had a negative impact on patient QOL. Early initiation of treatment is recommended to avoid acne scars.     

成纤维细胞生长因子10单克隆抗体对豚鼠银屑病样模型的作用研究

目的 探讨成纤维细胞生长因子（FGF10）单克隆抗体局部外用对银屑病豚鼠模型的治疗作用。方法 应用5%盐酸普萘洛尔搽剂外涂豚鼠耳背部皮肤,诱导银屑病样动物模型。分别设置空白组、模型组、丁酸氢化可的松治疗组、FGF10抗体高（0.188 g/L）、中（0.094 g/L）、低（0.063 g/L）剂量治疗组。治疗2周后观察银屑病样模型的病理变化。采用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,Baker评分比较应用秩和检验,单一核细胞计数及表皮厚度比较应用方差分析（ANOVA）,多个样本均数的两两比较应用最少显著差法（LSD）。 结果 各治疗组上述各项检测指标均低于模型组（均P < 0.05）。FGF10抗体高剂量组炎细胞计数与空白组差异无统计学意义（t = 0.77,P > 0.05）,其余各治疗组炎细胞计数高于空白组及FGF10抗体高剂量组（均P < 0.05）。FGF10抗体各治疗组表皮厚度均高于丁酸氢化可的松治疗组,差异均有统计学意义（均P < 0.05）。FGF10抗体各治疗组组间表皮厚度比较,差异无统计学意义（均P > 0.05）。结论 FGF10单克隆抗体对银屑病样豚鼠模型中异常病理改变有显著调节作用,能影响角质形成细胞增殖分裂,还能显著抑制银屑病模型中炎症反应。     

Dermal fibroblast from superficial layers of pig skin exhibits more proliferative capacity than that from deep layers

ObjectiveTo further examine the feasibility of using pigs as an animal model for the study of dermal fibroblast heterogeneity and to explore the proliferative capacity of dermal fibroblasts from different layers of pig skin in vitro and in vivo.Material and methodsCultured superficial and deep dermal fibroblasts were subjected to cell growth assay, cell cycle analysis, immunocytochemical staining and western blotting for proliferating cell nuclear antigens. Moreover, skin samples autografted with superficial/deep dermal fibroblasts were subjected to immunohistochemical staining and western blotting for proliferating cell nuclear antigen.ResultsThe cell growth assay showed that the growth curve of the superficial dermal fibroblast was progressively higher than that of the deep layer. The cell cycle analysis showed that the (G2+S) percentage of the superficial dermal fibroblasts was significantly higher than that of the deep layer fibroblasts. The immunocytochemical staining and western blotting showed that the expression of proliferating cell nuclear antigen in the cultured superficial dermal fibroblast was significantly higher than that of the deep layer cells. The immunohistochemical staining showed that the positive rate of proliferating cell nuclear antigen in the skin samples autografted with the superficial dermal fibroblast was significantly higher than that of the deep layer.ConclusionsThis study has demonstrated that similar to human dermal fibroblasts, dermal fibroblasts from different layers of pig skin exhibit distinct proliferative capacity, which increases the feasibility of using pigs as an animal model for future studies on the heterogeneity of dermal fibroblasts.     

丹槐银屑浓缩丸对豚鼠银屑病样模型组织VEGF、VEGFR含量的影响

目的通过丹槐银屑浓缩丸对豚鼠银屑病样模型耳部组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)及其受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)水平影响的实验研究,探讨丹槐银屑浓缩丸治疗银屑病的作用机制。方法用5%普萘洛尔乳剂外涂豚鼠耳背制备银屑病样病理改变模型,设置空白组、模型组、西药对照组、成药对照组及高、中、低剂量治疗组。采用双抗体夹心酶联免疫法测定组织VEGF,VEGFR含量,观察其与皮损表现的关系。结果丹槐银屑浓缩丸高、中、低剂量组VEGF水平下降不明显(P>0.05),VEGFR水平出现不同程度下降,特别是中剂量组与其它组差异显著(P<0.01或P<0.05)。结论丹槐银屑浓缩丸可使组织VEGFR水平显著降低,进而抑制血管内皮细胞增生,改善豚鼠银屑病样模型的皮损变化。     

Contact hypersensitivity reaction to ovalbumin in newborn guinea pigs from maternally sensitized animals.

An animal study was conducted to elucidate the role of ovalbumin (OA) in the development of eczematous lesions in intrauterine sensitized newborns. Four groups of pregnant guinea pigs were used: group A, immunized by oral administration of 1% OA in drinking water until parturition; group B, immunized by intradermal injection of OA with Freund's complete adjuvant; group C, immunized by both methods; and group D (control), not immunized. The newborn guinea pigs of each group were patch tested with 10% OA in white petrolatum. Positive reactions were seen in the newborns of groups B and C, but not in those in groups A and D. By enzyme-linked immunosorbent assay and passive cutaneous anaphylaxis, a high titre of OA-specific IgG was detected in the group B and C newborns. The number of positive patch test reactions decreased concomitantly with the decline of specific IgG. Histologically, eczematous changes were observed in the positive reaction sites. Many OA antigen-bearing Langerhans cells were found by the immuno-double labelling technique. Immuno-electron microscopic findings revealed the presence of OA antigens as well as IgG molecules on the cytoplasmic membranes of Langerhans cells. Our studies demonstrated that maternal sensitization with OA can induce an eczematous reaction in the newborns to OA patch testing under the presence of high levels of OA-specific IgG in the serum. From these findings it is suggested that IgG plays an essential role in the development of contact hypersensitivity reaction to OA.     

复方酮康唑喷膜对豚鼠湿疹模型的实验研究

目的　观察复方酮康唑喷膜对豚鼠湿疹模型的疗效。方法　选择健康雌性豚鼠25只,每只背部剃毛4处,应用卵清蛋白(OVA)为抗原,激发豚鼠皮肤变态反应制备湿疹模型。将制备的模型随机分为A,B,C,D和E五组(N=100,n=20)。激发后给药,其中A,B,C组给予含高、中、低浓度地塞米松的复方酮康唑喷膜,D组给予地塞米松止痒霜,E组空白对照。根据形态学和组织病理学观察进行疗效评估。结果　豚鼠皮肤显示湿疹样皮损特点,组织病理呈湿疹样改变。药效学结果显示治疗1周时,A,B,C,D四组红斑、水肿评分和总分均明显降低(P<0. 05),而E组无明显变化。复方酮康唑喷膜与地塞米松止痒霜疗效一致,但给药次数明显减少。四组抑制率均在50%左右,B组抑制率最高,表明该组处方比较优化。结论　复方酮康唑喷膜能快速地抑制真皮炎症反应和变态反应性湿疹形成。     

单纯疱疹病毒2型DNA疫苗对豚鼠抗病毒感染的研究

目的 探讨单纯疱疹病毒2型DNA疫苗的抗病毒感染效应.方法 重组DNA疫苗pcgD免疫雌性豚鼠,采用血清中和实验检测抗体,单纯疱疹病毒2型(HSV-2)sav株接种豚鼠,观察DNA疫苗保护动物抵抗HSV-2病毒感染的能力.结果 pc-gD免疫豚鼠产生的中和抗体效价远远高于对照组和生理盐水组,感染病毒后,表现出初发感染推迟,复发感染的严重程度下降.结论 DNA疫苗能有效地保护动物免受HSV-2病毒的攻击,延缓初发感染,减少复发感染.