促红细胞生成素对缺血海马CA1区神经元Bcl-xl和细胞色素C作用的相关性研究

目的探讨促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)的神经保护机制.方法采用4-vO法制作大鼠全脑缺血模型.将SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水对照组、EPO预处理组.全脑缺血前3 h,EPO组大鼠脑室立体定向注射重组人促红细胞生成素(rHu-EPO),生理盐水组则给予生理盐水,假手术组只进行假手术处理.观察缺血后24 h各组海马CA1区bcl-xl和细胞色素C(Cytochrome C,CytC)表达是否有相关性.结果bcl-xl和CytC预处理可以抑制缺血后大鼠海马CA1区神经元CytC从线粒体释放入胞浆,这种作用可能与促进bcl-xl表达相关.     

促红细胞生成素对全脑缺血后大鼠海马CA1区神经元凋亡和学习记忆能力的影响

目的探讨促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）进行预处理对全脑缺血大鼠学习记忆能力的影响。方法采用4-VO法制作全脑缺血模型，将SD大鼠分为假手术组、生理盐水组和EPO组。生理盐水组和EPO组于术前3h，分别脑室立体定向注射生理盐水和重组人促红细胞生成素（rHu—EPo），假手术组只进行假手术处理。观察缺血后72h海马细胞凋亡和缺血后4周大鼠学习和记忆力的变化。结果缺血后72h，EPO组海马CA1区较生理盐水处理组有较少的凋亡细胞（P〈0．01），并且缺血4周后，EPO组学习记忆能力明显高于生理盐水组（P〈0．01）。结论EPO预处理可以抑制缺血海马神经元凋亡及减轻全脑缺血造成大鼠学习和记忆力的损害。     

促红细胞生成素对缺血海马CA1区神经元Bcl—x1和细胞色素C作用的相关性研究

目的探讨促红细胞生成素（Erythropoietin，EPO）的神经保护机制。方法采用4-VO法制作大鼠全脑缺血模型。将SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水对照组、EPO预处理组。全脑缺血前3h，EPO组大鼠脑室立体定向注射重组人促红细胞生成素（rHu—EPO），生理盐水组则给予生理盐水，假手术组只进行假手术处理。观察缺血后24h各组海马CAl区bcl-x和细胞色素c（cytochmmeC，CytC）表达是否有相关性。结果bcl—x1和CytC预处理可以抑制缺血后大鼠海马CAl区神经元CytC从线粒体释放入胞浆，这种作用可能与促进bcl-x1表达相关。     

促红细胞生成素对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力损害的改善及对海马CA1区Bcl-xl蛋白表达的影响

目的 探讨促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)大鼠学习记忆的影响及机制.方法 通过SD大鼠海马CA1区注射β淀粉样蛋白制作AD模型.大鼠随机分为假手术组、生理盐水对照组及EPO处理组.Aβ1-40大鼠海马CA1区注射造模,然后在生理盐水对照组大鼠行脑室立体定向注射生理盐水,EPO处理组则行脑室立体定向注射重组人促红细胞生成素(rHu-EPO).观察药物干预后24h大鼠海马CA1区抗凋亡蛋白Bcl-xl表达变化,以及药物干预后4周大鼠学习和记忆力的改变.结果 药物干预后24h,EPO处理组和生理盐水对照组大鼠海马CA1区Bcl-xl蛋白表达较假手术对照组减少,但是EPO处理组Bcl-xl蛋白表达阳性细胞数(100.42±12.43/视野)高于生理盐水对照组(82.06±19.68/视野)(P＜0.05).药物干预后4周,EPO处理组大鼠学习能力[(20.38±5.88)次]明显优于生理盐水对照组[(25.50±3.25)次,(P＜0.05)],并且EPO处理组大鼠记忆能力[(4.75±1.75)次]明显优于生理盐水对照组[(2.88±1.55)次,(P＜0.05)].结论 EPO可以抑制Aβ1-40诱导海马CA1区Bcl-xl蛋白表达下降,保护AD大鼠学习记忆功能.     

促红细胞生成素对脑缺血大鼠学习记忆的保护作用及其机制

目的 探讨促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)对大鼠脑缺血后学习记忆能力的保护机制.方法 采用4-VO法制作短暂性全脑缺血模型,阻断大鼠全脑供血15 min.将SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水组、EPO组.全脑缺血前3 h,EPO组大鼠脑室立体定向注射重组人促红细胞生成素(rHuEPO)10U(5μl),生理盐水组则给予等量生理盐水,假手术组只进行假手术处理.观察缺血后24h海马CA1区细胞色素C(CytC)变化,缺血后4周利用Y型电迷宫进行大鼠学习和记忆能力测试,选用电压40V.结果 EPO组大鼠学习记忆能力[(19.13±2.53)次,(5.88±1.25)次]明显高于生理盐水组[(26.88±2.85)次,(3.63±1.30)次](P＜O.01),其海马CA1区CytC分布较生理盐水组明显增强(P＜0.01).结论 EPO预处理可以促进全脑缺血后大鼠学习记忆恢复,可能与抑制CytC从线粒体向胞浆释放有关.     

促红细胞生成素对大鼠全脑缺血再灌注后海马 CA1区神经元的保护作用

目的　观察促红细胞生成素 (EPO)对短暂性全脑缺血再灌注后海马神经元凋亡的影响 ,探讨其对缺血脑组织的保护作用。方法　应用四动脉血流阻断法制作大鼠短暂性全脑缺血再灌注模型 ;于再灌注开始时经腹腔注入EPO(3 0 0 0U/Kg) ;48h后灌注取脑。H -E染色观察细胞死亡情况。应用末端脱氧核苷酸转移酶缺口标记 (TUNEL)法检测海马CA1区神经元凋亡情况。结果　全脑短暂缺血 15min再灌注后 48h ,H -E染色海马CA1区存活神经元细胞数正常组为 2 11.2 8± 7.95,假手术组为 2 0 9.2 8± 11.3 4 ,EPO治疗组为 170 .2 8± 8.12 ,缺血组为14 6.84± 8.3 5。EPO治疗组与缺血组比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。TUNEL法凋亡细胞测定 ,正常组无阳性细胞 ,假手术组单位面积内阳性细胞为 152 .48± 18.52 ,EPO治疗组阳性细胞为 1797.51± 151.3 5,缺血组阳性细胞为2 2 50 .41± 180 .0 6,后两者比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　EPO可减少大鼠短暂性全脑缺血脑组织神经元的死亡和凋亡 ,对缺血神经元具有保护作用     

促红细胞生成素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的脑保护研究

目的:探讨促红细胞生成素(EPO)对新生缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠的神经保护作用。方法:40只7 d龄新生大鼠随机分为HIBD模型组、EPO干预组、生理盐水对照组、假手术组,每组各10例。在建立HIBD模型后,EPO干预组立即一次性腹腔注射5 000 U/kg剂量的人基因重组促红细胞生成素(rhEPO),生理盐水对照组注射等量生理盐水;于处置24 h后用原位缺口末端标记(TUNEL)法和流式细胞计(FCM)检测受损局部神经元细胞的凋亡情况,用RT-PCR检测神经元细胞凋亡相关信号分子的改变。结果:与假手术组比较,HIBD模型组在术后24 h神经元出现Bcl-2/Bax比值倒置,神经元凋亡增加;与HIBD模型组比较,EPO干预组神经元Bcl-2表达相对增加,而Bax表达相对受抑制,Bcl-2/Bax比值升高,神经元凋亡明显减少并且增殖增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:EPO可以通过提高Bcl-2/Bax比值,抑制细胞凋亡而起到神经保护作用。     

促红细胞生成素预处理对锂-匹罗卡品诱导的癫痫持续状态大鼠海马神经元凋亡的影响

目的:探讨重组人促红细胞生成素(rhEpo)预处理对癫痫持续状态(SE)大鼠海马神经元凋亡的影响。方法:应用免疫组化法观察Epo预处理后SE大鼠海马caspase-3的表达情况。结果:rhEpo处理组大鼠CA1/CA3区、齿状回(DG)的caspase-3免疫阳性细胞的表达分别比癫痫组减少18%和26%,二者有显著性差异(P<0.05)。结论:腹腔注射Epo可减少SE大鼠海马神经元caspase-3表达,表明Epo对SE大鼠海马可经抗凋亡通路发挥神经保护作用。     

促红细胞生成素联合缺血预处理对肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的:评价促红细胞生成素(EPO)联合缺血预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响。方法:健康SD雄性大鼠30只,200-220g,随机分为5组(n=6):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血预处理组(IP组)、促红细胞生成素预处理组(EPO组)、缺血预处理联合促红细胞生成素预处理组(IP+EPO组)。各组于术后24h测定血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平;测定肾组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及髓过氧化物酶(MPO)活性;观察肾组织病理学结果;检测肾小管上皮细胞凋亡情况。结果:与I/R组比较,IP组、EPO组、IPC+EPO组血清中Cr和BUN浓度,组织MDA含量及MPO活性降低,组织SOD活性升高,细胞凋亡减少(P<0.05),病理损伤减轻。与IP组和EPO组比较,IP+EPO组血清Cr和BUN的浓度降低,肾组织SOD活性升高,MDA含量与凋亡指数降低(P<0.05),病理损伤减轻。对于MPO含量,IP+EPO组相比较IP组有统计学意义,而相比较EPO组无统计学意义(P>0.05)。结论:缺血预处理联合促红细胞生成素预处理可以进一步加强大鼠肾缺血再灌注损伤后肾功能的保护,其机制可能是联合处理在抗氧化损伤、抗细胞凋亡方面发挥了叠加效应。     

促红细胞生成素对慢性脑缺血大鼠空间学习记忆能力的影响

目的:观察大鼠慢性脑缺血所致的空间学习记忆功能损害及促红细胞生成素(EPO)对其认知功能的影响。方法:结扎大鼠双侧颈总动脉建立慢性脑缺血模型,治疗组术后给予EPO1000U/kg,持续5d。术后第8周时3组大鼠Morris水迷宫测试后断头取脑做组织学和流式细胞术检测。结果:缺血组水迷宫表现同假手术组和EPO治疗组相比有显著差异(P<0.05)。EPO能改善慢性脑缺血大鼠的空间学习记忆能力(P<0.05)。EPO组神经细胞病理改变较轻,海马细胞凋亡率较低(P<0.01)。结论:EPO可能通过减少海马CA1区神经元的损害以及抗凋亡作用改善慢性脑缺血大鼠空间学习记忆障碍。     

利用冰冻切片技术检测大鼠全脑缺血后海马CA1区线粒体细胞色素C变化

目的利用冰冻切片技术检测大鼠全脑缺血后海马CA1区神经元线粒体CytC的变化.方法采用4-VO法制作全脑缺血模型,将SD大鼠随机分为假手术对照组、全脑缺血组.观察缺血后24 h海马CA1区细胞色素C(Cytochrome C,CytC)变化.结果缺血后24 h,假手术组海马CA1区CytC呈阳性表达,并且呈现出特异性的点状分布,符合CytC线粒体分布的特征,全脑缺血组海马CA1区CytC表达明显降低.结论利用冰冻切片技术能方便、直观的检测脑缺血再灌注后神经元线粒体CytC的变化,再灌注24小时海马CA1区神经元线粒体CytC明显下降.     

红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注后神经元保护作用

目的 观察促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）对大鼠脑缺血再灌注后的梗死体积及神经功能缺损评分的影响。方法 线栓法复制大鼠左侧中动脉缺血再灌注模型，缺血2h，于再灌注开始时经腹腔注入重组人促红细胞生成素（3000U／kg），再灌注后2h，12h，24h，48h，72h，7d及10d测定大鼠神经功能缺损评分后，断头取脑，用2％氯化三苯基四氮唑（TTC）标记梗死体积。结果 对照组缺血再灌注后2h已经出现梗死灶，随着时间的延长，梗死灶体积逐渐增大，24h时梗死体积最大。EPO治疗组与相应时间点对照组相比，梗死灶体积明显缩小（P〈0．05），神经功能缺损评分明显减少（P〈0．05）。结论 24h时达最大，EPO能使梗死灶体积明显缩小、神经功能缺损评分明显减少，对损伤神经元有保护作用。     

促红细胞生成素对急性下肢缺血性疾病大鼠模型的治疗作用

目的探讨促红细胞生成素（EPO）对大鼠急性下肢缺血性疾病的保护作用。方法将急性下肢缺血性疾病大鼠模型分为生理盐水组和EPO组,按缺血时间不同分为6h、1d,2d,3d组,采用RT-PCR方法观察HIF-1α变化规律,免疫组化法检测MVD的计数情况。结果通过各时间点比较,EPO组HIF—1α均低于生理盐水组,而MVD均高于生理盐水组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论早期应用EPO能明显降低急性下肢缺血大鼠的HIF-1α、提高MVD。对治疗急性下肢缺血性疾病具有重要意义。     

全脑缺血再灌注对大鼠空间学习记忆的影响

目的:探讨缺血性脑损伤对大鼠空间分辨学习和记忆能力的影响。方法:17只Wistar雄性大鼠随机分成两组,缺血组采用改良的Pulsinelli四血管闭塞法(4VO)建立大鼠全脑缺血模型,假手术组则只手术不缺血。缺血第8天开始利用Morris水迷宫测试来检测其空间分辨学习和记忆的能力。然后进行灌注固定,经石蜡切片和尼氏染色,最后在显微镜下观察海马CA1区神经元的存活情况,从而确定全脑缺血模型制作的成功与否。结果:缺血性脑损伤组大鼠CA1区约90%神经元死亡,未死亡的神经元散在分布,其形态与正常神经元形态稍异,而假手术组海马CA1区神经元排列整齐,并未发生死亡,说明模型制作成功;在Morris水迷宫测试前4天的训练中,缺血性脑损伤组大鼠平均找到平台时间明显多于假手术组大鼠所用时间,经统计分析两组间有显著性差异(P<0.05),而两组间的游泳速度未见显著性差异(P>0.05);第5天撤掉平台后,缺血性脑损伤组大鼠在原平台所在象限所走的路程占总路程的比例也明显比假手术组少(P<0.05)。说明与假手术组相比,缺血性脑损伤组大鼠的空间分辨学习与记忆能力明显降低。结论:缺血性脑损伤使大鼠的学习、记忆功能受到损害。     

促红细胞生成素对全脑缺血再灌注损伤大鼠血红素加氧酶-1表达的影响

目的探讨促红细胞生成素（EPO）对大鼠脑缺血再灌注后血红素加氧酶1（HO-1）表达的影响。方法随机将雄性SD大鼠分为缺血再灌注组、治疗组、假手术组。治疗组按照缺血再灌注后不同时间点给予EPO腹腔注射，假手术组不手术，于各时间点断头取脑，用逆转录-聚合酶链反应技术检测大鼠皮层HO-1 mRNA的表达。结果① 全脑缺血再灌注后HO-1 mRNA的表达发生动态变化，缺血后6h开始明显升高，24h达高峰，此后缓慢下降；② EPO能够显著上调全脑缺血后皮层HO-1 mRNA的表达,缺血再灌注后即注射EPO组与缺血再灌注组各时间点HO-1和β-actin吸光度的比值差异有统计学意义（P＜0.05 ）。结论EPO的神经保护作用可能部分通过上调HO-1的表达来实现。     

EPO对大鼠脑缺血再灌注后脑水肿及MMP-9的影响

目的观察促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对大鼠脑缺血再灌注后神经功能缺损评分、脑水肿及MMP-9影响。方法将健康SD大鼠150只分为假手术组、缺血组及EPO组,线栓法复制大鼠左侧大脑中动脉缺血再灌注模型,缺血2 h后,缺血组于再灌注开始前10 min经腹腔注入生理盐水2 ml,EPO组注射重组人红细胞生成素(3 000 U/kg)+生理盐水2 ml,再灌注后6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d及10 d,采用Zea Longa法测定大鼠神经功能缺损评分后,断头取脑,按Elliot公式计算脑组织含水量,免疫组织化学法测定相应时间点MMP-9免疫阳性细胞数。结果缺血组再灌注6 h出现神经功能障碍,48h最严重,72 h开始恢复;缺血组脑含水量在再灌注6 h轻度升高,24-48 h时达高峰;缺血组再灌注6 h有少量表达MMP-9的免疫阳性细胞,12 h开始增多,48 h达到高峰,72 h后有所下降,7 d、10 d明显降低。EPO治疗组与缺血组相比,神经功能缺损评分降低、脑含水量和MMP-9免疫阳性细胞数明显减少(P<0.05)。结论 EPO对大鼠脑缺血再灌注损伤有一定保护作用,其作用机制可能与降低MMP-9表达有关。     

EPO对大鼠脑缺血-再灌注后炎症损伤的保护作用

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对大鼠脑缺血-再灌注的保护作用。方法将216只雄性大鼠随机分为3组(n=72):假手术组,模型组,EPO干预组;每组再分为缺血-再灌注后3、6、12、24、48和72h6个亚组,每亚组大鼠各12只,采用线栓法制备一侧大脑中动脉缺血模型。模型组和EPO干预组缺血2h后再灌注,EPO干预组于缺血2h后腹腔注射EPO(3 000U/kg),假手术组和模型组于同一时间点注射等量生理盐水,然后分别于上述6个时间点断头取材,标本分别用于免疫组化、Westernblot分析海马组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)的表达。结果与假手术组比较,模型组ICAM-1和VCAM-1蛋白的表达明显增多(P<0.05);与模型组比较,EPO干预组ICAM-1和VCAM-1蛋白的表达明显减少(P<0.05)。结论 ICAM-1和VCAM-1蛋白在大鼠脑缺血-再灌注后的炎症反应中起重要作用,EPO对此过程具有抑制作用,从而发挥其神经保护作用。