药品微生物经典分析方法的验证探讨

本文通过研读分析药品、食品和环境微生物分析方法验证的相关规范性文件,结合药品微生物分析实践,对药品微生物经典分析方法的验证进行了研究,总结了微生物分析方法验证的考察指标,包括专属性、灵敏度、精密度、检测限和定量限、线性、范围、耐用性及方法适用性等,并阐述了各指标在药品微生物分析中的含义、测量方法、影响因素和可接受标准。为规范经典微生物分析方法的验证,获得可靠的微生物检验结果及建立相关指导原则,提供了参考依据。     

荧光染色计数法在制药用水微生物限度检查替代方法可行性探讨

摘要 目的：考察荧光染色法在测定制药用水中微生物的方法适用性，评价荧光染色法在制药用水进行微生物限度检查的可行性。方法：按药品微生物检验替代方法验证指导原则的要求，从准确度、精密度、线性、定量限、范围等方面来进行定量检验的替代方法验证,并取实验室不同取样点纯化水样进行测试比较。结果：荧光染色法的各项验证参数均与药典方法相当，且不同取样点纯化水样的两种方法检测结果无显著差异。结论：本文的试验为荧光染色计数法后续在制药用水微生物检测中实际应用提供了参考。     

GC法检测羟乙基哌嗪中哌嗪含量方法验证

目的验证GC法检测羟乙基哌嗪中哌嗪含量方法,该法采用外标法计算哌嗪含量。方法验证项有系统适用性,检测限与定量限,线性与范围,进样精密度,重复性,准确度及耐用性。结果现有条件经过验证,系统适用性良好,各峰分离度均不低于1.5;哌嗪检测限浓度为2μg/ml,定量限浓度为5μg/ml;方法线性良好,在0.005~0.250 mg/ml范围内,哌嗪线性方程为Y=663969X-6097.7,R=0.999;仪器进样精密度RSD%值为0.95;方法重复性良好,RSD%值为5.46;哌嗪回收率及RSD%分别为102.0、2.4;方法对于进样口温度、柱流量、升温速率、分流比耐用性良好。结论方法验证数据结果表明,该法检测羟乙基哌嗪中哌嗪杂质含量具有良好的专属性、灵敏度、线性与范围、精密度、准确度和耐用性。     

二氧化碳信号检测的快速微生物方法应用于细胞制品无菌检查的评估

目的:评价基于二氧化碳检测原理的BacT/ALERT 3D Dual-T?快速微生物检测系统作为药典无菌检查法的替代用于创新生物制品的可行性。方法:以细胞制品作为应用对象,参考各国药典及国外指导原则,研究快速方法在专属性、检测限、非劣效性方面是否可替代药典方法。结果:评价结果表明快速方法在专属性和检测限参数上达到了药典方法性能相当,大部分情况下可比药典方法更快地报告阳性结果,快速方法对产品质量的决策不劣于药典方法,且在数据完整性方面具备优势。结论:在风险管理的前提下,经验证的快速方法可作为药典无菌检查的替代方法用于创新生物制品的快速放行。     

基于激光诱导荧光技术原理的微生物实时监测技术在USP<1223>标准下的替代验证及其在PIVAS洁净室的应用研究

目的 为实现给静脉用药集中调配中心（pharmacy intravenous admixture services，PIVAS）对浮游菌及尘埃粒子的实时监测及预警提供技术支持，依据美国药典（USP）微生物替代方法验证的要求，对微生物实时监测技术进行微生物替代方法可行性验证，并研究该技术与传统浮游菌及尘埃粒子测试方法的效果差异。方法 通过对激光诱导荧光技术的生物气溶胶实时监测系统（biological aerosol real-time monitoring system，BAMS）与浮游菌采样器在线性相关性、准确度、精密度、专属性、定量限、重现性和耐用性等关键参数的数据比对，验证替代方案的可行性。在PIVAS洁净室分别对BAMS、浮游菌采样器及尘埃粒子检测仪的实际应用效果进行比较评估。结果 BAMS相较于传统的浮游菌采样器具有显著的灵敏度优势，回收率、精密度、专属性、线性、重现性及耐用性等验证指标均符合USP<1223>项下的相关要求，BAMS在PIVAS洁净区的尘埃粒子检测效率与传统方法无明显差异。结论 BAMS与传统洁净区环境监测方法无差异，且比传统的浮游菌采样器具备更高的检测灵敏度及时效性，可应用于医院PIVAS洁净室环境微生物污染状况的实时监测。     

冻干甲型肝炎减毒活疫苗三氯甲烷残留量检测方法的建立及验证

目的  建立准确可靠检测冻干甲型肝炎减毒活疫苗中三氯甲烷残留量的方法。方法  采用顶空气相色谱进行三氯甲烷残留量检测,用外标法计算三氯甲烷含量。对方法的专属性、线性、范围、准确度、精密度、定量限和耐用性进行验证。结果  三氯甲烷峰5次进样峰面积的相对标准偏差小于5%,且与其他峰分离度大于1.5。阳性对照溶液在相应保留时间处可见三氯甲烷峰,阴性对照溶液无三氯甲烷峰。三氯甲烷的浓度在10~1 000 ng/ml范围内与峰面积成线性关系。浓度为600 ng/ml的供试品溶液回收率在91.3%~99.0%之间,含量相对标准偏差均小于4%。定量限浓度为0.022 g/ml。结论  建立的三氯甲烷残留量检测方法具有良好的专属性、线性、范围、准确度、精密度和耐用性,符合定量检测的需求。     

呼吸信号检测的快速微生物方法应用于细胞制品无菌检查的研究

目的 评价基于呼吸信号检测原理的VersaTrek^?快速微生物检测系统作为药典替代方法用于细胞制品无菌检查的可行性。方法 以CAR-T细胞为应用对象,参考中国药典2015年版通则<9201>和其他国外指导原则,研究快速方法在专属性、检测限、重复性和耐用性方面是否可替代药典方法。结果 各参数的验证结果表明快速方法不劣于药典方法。 结论在经验证的前提下,VersaTrek^?系统可作为药典无菌检查的替代方法用于特定细胞产品的快速放行。     

动态浊度法定量检测冻干甲型肝炎减毒活疫苗中细菌内毒素含量方法的验证

目的   对定量检测冻干甲型肝炎减毒活疫苗中细菌内毒素含量的动态浊度法进行验证。方法   采用动态浊度法定量检测冻干甲型肝炎减毒活疫苗中细菌内毒素含量，并对分析方法的线性、专属性、准确度、重复性、中间精密度和耐用性进行验证。结果  动态浊度法的线性相关系数绝对值为0.996；最大有效稀释倍数下专属性回收率为68.81%~73.80%；准确度回收率为53.50%~77.77%；3名实验人员重复性相对标准偏差分别为2.0%、3.6%、2.0%；中间精密度相对标准偏差为7.6%；耐用性回收率为66.49%~108.34%。 结论   动态浊度法检测冻干甲型肝炎中的细菌内毒素含量的方法具有良好的专属性、准确度、线性、重复性、中间精密度和耐用性，符合定量检测和数据完整性的要求。     

BacTALERT®3D微生物检测系统作为无菌检查替代方法可行性的探讨

目的评价Bac TALERT3D微生物检测系统在特定注射剂产品中作为替代方法开展无菌检查的可行性。方法收集3种不同类型的无菌制剂,参照中国药典2010年版附录药品微生物检验替代方法验证指导原则的有关内容,考察在专属性、检测限、重复性以及耐用性这4个方面与现行版中国药典无菌检查法是否存在差异。结果对于单一品种门冬氨酸钾镁注射液,Bac TALERT3D微生物检测系统与药典方法基本相当,而专属性试验结果表明该检测系统不适用于其余2种无菌制剂的无菌检查。结论 Bac TALERT3D微生物检测系统在逐一验证的前提下,对特定注射剂产品可用于生产过程的无菌质量控制。     

HPLC法测定降脂胶囊中靛蓝的含量

目的建立以高效液相色谱法测定降脂胶囊中靛蓝含量的方法。方法采用高效液相色谱法,分别对系统适应性、准确度、重复性、专属性、线性范围、耐用性进行了研究。结果 本方法的系统适用性、准确度、重复性、专属性、线性范围、耐用性均符合要求。结论本方法科学、合理、可行;能够用于降脂胶囊中靛蓝的测定,符合现行药典简便、快捷、准确的要求。     

HPLC测定瑞替加滨原料药有关物质方法学研究(英文)

本研究目的是建立可靠的高效液相色谱法测定瑞替加滨及其有关物质。经过色谱条件的优化,采用C18色谱柱(型号:4.6 mm×150 mm,5μm),以0.1%三乙胺溶液(用磷酸调节p H至2.5)为流动相A,乙腈为流动相B,进行梯度洗脱,检测波长为220 nm。参照中国药典药物质量标准分析方法验证指导原则,对该方法进行验证,包括专属性、检测限、定量限、线性、准确性、精密度和耐用性等。结果表明在该色谱条件下,杂质检测限范围在0.0092%–0.0103%之间,灵敏度良好;瑞替加滨及其强降解杂质可以达到有效分离,专属性良好;线性试验中瑞替加滨及其杂质的相关系数均大于0.999;准确度试验中回收率在96.49%与118.35%之间;重复性和中间精密度的相对标准偏差均小于1.0%,重复性和中间精密度良好。由此得出结论,该色谱条件灵敏高、重现性好、结果准确可靠,可用于瑞替加滨原料药有关物质的分析检测。     

生物分析的液相色谱方法认证

生物分析方法在用于生物利用度、生物等效性和药代动力学研究之前必须进行认证,以证明该方法适合于研究需要,本文讨论了在生物分析色谱方法认证中应考虑的参灵敏,这些参数是：（1）专属性和选择性;（2）检测限和定量下限;（3）线性范围;（4）准确度;（5）精密度;（6）回收率;（7）稳定性;（8）严密性和耐用性。     

NMM抗肿瘤DNA疫苗原液大肠杆菌菌体蛋白质残留量检测方法的建立与验证

目的 建立并验证检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白质残留量的双抗体夹心ELISA试验方法。方法 使用双抗体夹心ELISA试验方法检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白残留量,采用四参数logstic曲线进行回归分析,并对该方法的专属性、检测限、定量限、线性与范围、精密度、准确度、耐用性等进行验证,验证通过对5批样品进行检测。结果 采用双抗体夹心ELISA试验方法进行大肠杆菌蛋白质残留量检测时,DNA疫苗原液无需进行稀释。NMM抗肿瘤DNA疫苗原液对大肠杆菌菌体蛋白质的检测无干扰及抑制作用,方法的专属性良好;本法检测限为0.41 ng/ml;定量限为0.98 ng/ml;该方法测定宿主菌蛋白质残留量在0～100 ng/ml范围内线性良好,R2≥0.9999;本方法重复性试验中宿主菌蛋白质含量RSD值均低于15%,中间精密度实验中样品吸光值RSD值低于10%,精密度结果良好。在检测线性范围内加入高、中、低3种浓度的大肠杆菌菌体蛋白,回收率均值为100.35%(n=9,RSD=3.58%);本方法检测实验条件发生微小变动时（不同人员、不同批次试剂盒）,对测定结果的影响...     

清洁验证中的分析方法验证

目的:论述如何验证清洁验证中所采用的分析方法.方法:制定验证方案,对方法的专属性、线性和范围、准确度、精密度、定量限等一一进行验证.结果:通过方法验证,确认可适用于清洁验证的分析方法.结论:采用经过验证的分析方法,是保证分析结果真实可靠的前提条件.清洁验证所采用的分析方法,同样也不能忽略方法验证.     

枸橼酸托法替布片的含量测定及方法学研究

目的:采用高效液相色谱法对3批枸橼酸托法替布片进行含量测定,建立枸橼酸托法替布片的含量测定方法,并进行方法学验证。方法:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以0.03 mol·L^-1磷酸二氢钾-乙腈(75∶25)为流动相;流速为1.0 mL·min^-1;柱温为30℃;检测波长为287 nm。结果:该检验方法的专属性、检测限与定量限、线性与范围、准确度与精密度等参数符合法规要求。结论:该方法可用于测定枸橼酸托法替布片的含量,操作简便,结果准确,专属性强,稳定性高,具有良好的应用前景。     

β-丙内酯残留量检测分析方法的建立及验证

目的  建立准确快速检测灭活疫苗中β-丙内酯（β-propiolactone , BPL）含量的分析方法。方法  采用气相色谱法进行BPL含量检测，用外标法计算BPL含量。对分析方法的专属性、系统适应性、线性和范围、准确度、精密度、检测限、定量限、耐用性进行验证。结果  BPL溶液和供试品溶液在相应保留时间内可见BPL峰，阴性对照溶液未出峰。BPL峰5次进样峰面积相对标准偏差小于2%且与其他峰分离度大于1.5。BPL的浓度在1.11~35.52 μg/ml范围内与峰面积成线性关系。浓度分别为2.22、4.44和8.88 μg/ml的供试品溶液回收率在97.3%~106.9%之间，相对标准偏差均小于3%。检测限为0.30 μg/ml，定量限为0.49 μg/ml。结论  建立的BPL检测方法具有良好的专属性、系统适应性、线性和范围、准确度、精密度、耐用性，符合定量检测的需求。     

高效液相色谱法测定分析原料药氟胞嘧啶中有关物质的方法验证

建立测定氟胞嘧啶原料药中有关物质的质量控制方法,采用高效液相色谱法测定5-氟胞嘧啶原料药中的有关物质,并对此方法的专属性、精密度、准确度、线性范围、耐用性等进行了验证.在0.02～0.12μg/mL范围内,线性关系良好,相关系数r大于0.999,方法检出限为0.007 0μg/mL,定量限为0.02 μg/mL,平均回...     

毛细管电泳结合激光诱导荧光检测分析单抗N糖谱的方法学联合验证

目的:对毛细管电泳结合激光诱导荧光(CE-LIF)检测单抗N糖谱方法进行多家实验室的联合验证。方法:依据国际人用药品注册技术协调会(ICH)Q2_R1指导原则和2015年版《中华人民共和国药典》通则9101,开展方法学验证。评价指标包括专属性、线性、准确度、精密度、定量限、范围和耐用性。结果:验证数据表明,该方法具有良好的特异性、准确性、精密性和耐用性。蛋白量在100～400μg范围内具有良好的线性,R~2大于0.97,且回收率在81%～109%范围内。精密性评价结果显示,G0F、Man5、G1F(1,6)、G1F(1,3)和G2F的校正峰面积百分比和迁移时间的RSD值均小于10%。该方法的定量下限为0.016%,可对在0.016%～77.233%范围内的单个色谱峰进行准确定量分析。同时多个条件下的耐用性评价结果表明该方法具有耐用性,峰面积百分比的RSD小于9%,迁移时间的RSD小于0.1%。结论:组织开展了基于CE-LIF的检测单抗N糖谱的方法学联合验证,结果表明方法可行,可用于单抗N糖谱的检测。     

定量伤寒Vi多糖疫苗O-乙酰基含量的药典方法的改良及其验证

目的 通过应用低浓度对照品,对定量伤寒Vi多糖疫苗O-乙酰基含量的药典方法(O-乙酰基测定法)进行改良,并验证该法的可行性.方法 以含0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 μmol溴化乙酰胆碱的对照品溶液制作改良O-乙酰基测定法的标准曲线,并对该法的标准曲线线性、准确度、精密度、专属性和耐用性进行验证.结果 改良O-乙酰基测定法的标准曲线线性良好,决定系数＞0.998.该法的准确度、精密度和专属性良好,O-乙酰基回收率为99.8％～101.3％,实验间和实验内相对标准偏差均＜4％,O-乙酰基加样回收率均＞96％.该法测定O-乙酰基的定量限为0.070 mmol/L.结论 应用低浓度对照品的改良O-乙酰基测定法可用于定量伤寒Vi多糖疫苗O-乙酰基含量.     

NMM抗肿瘤治疗性DNA疫苗中卡那霉素残留量检测方法的建立与验证

建立并验证检测NMM抗肿瘤DNA疫苗中卡那霉素残留量的方法。采用间接竞争ELISA方法检测卡那霉素残留量,采用四参数Logstic曲线进行回归分析,并对本方法的专属性、检测限、定量限、线性与范围、精密度、准确度、耐用性等进行验证,验证方法有效后对多批次样品进行检测。使用该方法检测卡那霉素残留量时,样品无需稀释,辅料、质粒DNA对卡那霉素的检测无干扰;本方法检测限为0.15 ng/mL;定量限为0.5 ng/mL;在0.5～40.5 ng/mL范围内线性关系良好,且符合四参数方程式：y=D+(A-D)/[1+(x/C)^B],R²≥0.999;在检测线性范围内加入不同浓度的卡那霉素对照溶液,回收率均值在95%～115%之间(n=12,RSD=6.20%);本方法重复性试验中卡那霉素含量RSD值为4.22%(n=6),中间精密度试验中DNA疫苗中卡那霉素含量RSD值为10.95%。本方法检测实验条件发生微小变动时(不同人员、不同批次试剂盒、不同酶标仪),对测定结果的影响在可接受范围内。应用该方法对7批样品中卡那霉素残留量进行检测,结果表明,每个人用...