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1.
目的建立针对人类血小板抗原HPA-1a抗体的血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定定量检测(MAIPA)的标准体系。方法用MAIPA方法检测不同稀释度的标准HPA-1a抗血清,优化该方法的最佳实验条件,绘制线性标准曲线,并对该方法的敏感度、特异性、准确度和精密度进行了分析。结果经优化,确定MAIPA定量检测方法的最佳实验条件如下:铺板抗体羊抗鼠Ig G单抗:3μg/m L,血小板每孔2×107个,检测抗体小鼠抗人CD61单抗:20μg/m L,酶标羊抗人Ig G:稀释度1:10 000。该方法的线性检测范围是0-4 IU。该方法最低检测限至少为0.3 IU,批内变异系数为1.3%-3.6%,批间变异系数为4.0%-5.6%。特异性检测:用抗-A、抗-B、抗-H、抗-I、抗-P1、抗-Lewisa等试剂以及含其他抗体的抗血清进行试验,均无明显阳性。结论本研究建立的针对HPA-1a抗体的MAIPA定量检测的标准方法具有较高的敏感度、特异性、准确度和精密度,对于临床相关疾病的诊断和血小板安全输注具有重要的应用价值。  相似文献   

2.
目的 探讨抗血小板特异性抗原(HPA)-3a抗体所致新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜(NAITP)的诊断和治疗.方法 采用多重PCR及基因测序技术检测1例出血伴血小板减少新生儿及其父母HPA-1~21bw系统基因型,采用流式细胞术(FCM)和血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术(MAIPA)检测患儿及其母亲血清血小板特异性抗体并进行特异性鉴定.结果 患儿出生后2 h出现全身多发皮下出血点、血尿及咖啡色呕吐物.基因分型显示患儿为HPA-3ab、母亲为HPA-3bb、父亲为HPA-3aa;患儿及母亲血清中均含与患儿父亲血小板反应的特异性抗体,经MAIPA技术鉴定为抗HPA-3a抗体.结论 发现1例抗HPA-3a抗体所致NAITP患者,通过临床特征分析为该病的诊断和治疗提供借鉴与参考.  相似文献   

3.
目的:建立针对人类血小板抗原(HPA)-1a抗体的表面等离子体共振(SPR)技术定量检测方法。方法:以氨基偶联法在芯片表面偶联重组蛋白,采用SPR方法检测不同浓度的标准抗血浆样本,优化实验条件,在检测范围内绘制标准曲线,并分析其敏感性、特异性、准确性和精密度。结果:利用SPR技术建立针对HPA-1a抗体的定量检测方法,检测范围为0-20 IU,准确性(回收率)为97.75%-103.08%,批内精密度[变异系数(CV)]为3.53%-4.29%;批间精密度(CV)为2.08%-4.40%。特异性实验中,以不同的血小板膜蛋白单抗和含相应抗体的参比血浆进行检测,均未见明显阳性结果。结论:建立的针对HPA-1a抗体的SPR技术定量检测方法具有较高的敏感性、特异性、准确性和精密度,且操作简便快速,这为科研和临床相关抗体的检测提供了一种新的参考方法。  相似文献   

4.
本研究旨在探讨抗HPA-5b抗体引发的新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜(NAITP)的实验检测及临床诊断。临床监测患儿血小板计数及其他临床表现;多重PCR及DNA测序检测患儿及其父母HPA-1—21bw系统基因型;流式细胞术(FCM)和血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术(MAIPA)检测及鉴定患儿及其母亲血清中的血小板特异性抗体。结果表明:患儿临床症状较轻,基因分析显示患儿为HPA-5ab,父亲为HPA-5ab,母亲为HPA-5aa;患儿母亲血清中含与父亲血小板反应的血小板特异性抗体为抗HPA-5b抗体。结论:该病例为抗HPA-5b抗体引起的新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜。  相似文献   

5.
目的:应用偶联血小板GPIIIa重组表达片段的Luminex xMAP荧光微球,检测血小板抗HPA-1a和-1b抗体。方法:以倍比稀释成12个浓度(原液~1/2048)的抗HPA-1a WHO国际标准品,比较MAIPA和Luminex xMAP技术检测抗HPA-1a的灵敏度。以8份抗HPA-1a/b阴、阳性对照,36份WHO血小板抗体质控盲样,评估流式荧光微球技术检测抗HPA-1a和-1b的特异性。结果:MAIPA检测抗HPA-1a的灵敏度为滴度1/64(抗体浓度1.56 IU/ml),流式荧光微球检测的灵敏度远高于滴度1/2048(抗体浓度0.049 IU/ml)。微球分析法能特异性鉴别抗HPA-1a和-1b阴、阳性对照。36份盲样中,有1份样本,在高浓度对偶抗体的影响下,产生抗HPA-1b假阳性结果。其余样本的微球分析结果与预期结果相符,能准确检出抗HPA-1a和-1b抗体,而且与HLA和ABO抗体以及其它的血小板抗体(包括抗HPA-3b、-5b、-15b、-GPIb/IX和非HPA-1特异性的抗-GPIIb/IIIa)未发生交叉反应。结论:基于重组偶联血小板GPIIIa的流式荧光微球技术可灵敏、特异性检测血小板HPA-1系统抗体,适合于临床免疫性血小板减少症患者的抗体特异性鉴定。  相似文献   

6.
目的观察1例第2胎抗HPA-3a抗体致新生儿同种免疫血小板减少症(NAIT)患儿的病情与治疗情况。方法观察患儿症状和体征,并记录血小板(PLT);筛查并鉴定患儿及其母亲血清中血小板特异性抗体;检测患儿及其父母HPA-1~21bw系统基因分型;监测患儿体内抗体效价波动情况并筛选配合性血小板给予输注治疗。结果患儿出生后15 min内出现瘀斑、皮下出血点,脑部B超提示左侧室管膜下出血。患儿及母亲血清中均含与患儿父亲血小板反应的特异性抗体,经鉴定为抗HPA-3a抗体。HPA-1~21bw系统基因分析显示患儿与其父母HPA-3不相容:母亲为HPA-3bb、父亲为HPA-3aa、患儿为HPA-3ab。患儿共输注了4次相容血小板(HPA-3bb),并给予静脉输注γ球蛋白及类固醇激素治疗,于出生后第29天PLT恢复正常后出院。结论第2胎抗HPA-3a抗体致NAIT患儿经对症治疗及输血治疗PLT恢复正常后出院,但临床表现及诊治过程较该产妇上一个患儿严重及复杂。  相似文献   

7.
目的探讨血小板输注无效(PTR)患者的血小板特异性糖蛋白抗体的表达及PTR与血小板特异性抗原的相关性。方法采用ELISA方法检测27名临床上确诊为PTR患者的血小板特异性糖蛋白抗体,应用PCR-SSP的方法检测其HPA-1~17基因分型。结果 27名PTR患者的HPA基因频率为HPA-1a(0.900),1b(0.100);HPA-2a(0.926),2b(0.074);HPA-3a(0.648),3b(0.352);HPA-4a(0.981),4b(0.019);HPA-5a(0.940),5b(0.060);HPA-6a(0.815),6b(0.185);HPA-7a~14a、16a、17a(1.000),7~14、16、17b(0.000);HPA-15a(0.463),15b(0.537);PTR患者的HPA抗原分布与健康献血者的基因频率无统计学差异(P>0.05)。血小板抗体阳性的27名PTR患者中,血小板特异性糖蛋白GPⅡb/Ⅲa抗体阳性表达者占78%(21/27)、GPⅠa/Ⅱa抗体阳性占70%(19/27)。对3名PTR患者作血小板特异性抗原分析发现:患者产生的血小板特异性糖蛋白抗体与HPA基因型密切相关,以抗-HPA-3b、-5b为常见。结论多次输注血小板无效的患者,应选择与其HPA基因型一致的血小板供者,以提高血小板输注疗效,避免血液资源的浪费。  相似文献   

8.
目的分析乌鲁木齐地区哈萨克族献血人群血小板特异性抗原HPA-15基因多态性,为临床血小板输注提供依据。方法采用聚合酶链-序列特异性引物技术(PCR-SSP)对乌鲁木齐地区100名无血缘关系的哈萨克族献血者的HPA-15系统进行基因分型,计算基因型频率和基因频率。结果哈萨克族献血人群HPA-15a/15a、HPA-15a/15b、HPA-15b/15b基因型频率分别为0.21、0.53、0.26。HPA-15a、HPA-15b的基因频率分别为0.475和0.525。HPA-15a、HPA-15b抗原不配合率分别为0.1997和0.1747。结论乌鲁木齐地区哈萨克族HPA-15抗原不配合概率高,可能导致产生同种免疫性血小板抗体的概率增加,在临床血小板输注中的作用值得重视。  相似文献   

9.
人类血小板抗原—1(HPA-1)同种抗原是由于GPⅢa上第33位氨基酸的替换而形成,。HPA-1a对于HPA-b纯合子,且DRB3*0101阳性的病人是强免疫原。1/365的妊娠可产生抗-HPA-1a抗体,1/1100的新生儿可产生严重的血小板减少症。用人类重组抗-HPA-1a单链抗体片断的V基因,作者研制了2个抗体分子(完全IgG1和双体物质),用于简单快速的检测HPA-1a表现型。异硫氰酸荧光素(FITC)标记的IgG1用于间接流式细胞仪试验,检测50份全血标本只需孵育20分钟,用中等强度荧光能清楚的鉴别HPA-1a阳性和阴性血小板。为检测血浆中溶解的HPA-1a,研究了一种简单的2步血凝试验,这种试验拥有抗-Dx和抗-HPA-1a双特异性物质。对1002份随机血浆标本进行检测,22个为HPA-1a阴性(2.2%)。这个基于双性物质的试验,最适合对供者或孕妇的筛选。同时流式细胞仪可用于紧急标本表现型的快速检测或用于确定血液成分的HPA-1a状态。  相似文献   

10.
背景 HPA系统携带β3整合素,HPA—1a(Zw(a),P1(A1))是HPA1b纯合子(HPA-1b1b)的免疫个体的免疫原。调查的365名妊娠妇女中,有1例形成抗-HPA-1a,该抗体引起严重的新生儿血小板减少的发病率为1/1000。需要建立可靠的、低成本的自动化检测方法,检测女性产生HPA-1a抗体的风险和筛查供者以获得HPA-1a阴性血小板。研究设计与方法针对第一个抗HPA-1a片段的基因密码,建立具有HPA-1a×D和IgG1抗HPA-1a双特异性的试验,采用这些试剂,检测两种互补的HPA-1a表型。结果运用简单的凝集反应技术检测EDTA抗凝血浆中可溶性糖蛋白Ⅱb/Ⅲa水平上的HPA-1a  相似文献   

11.
胎儿血小板可能被母亲的抗血小板(-HPA)-1a同种抗体(NAITP)破坏。这种抗体在纯合子的妇女体内的应答反应受主要组织相容性复合物(MHC)限制(DRB3*0101),因此其T细胞在体外会对GPⅢa分子序列的亮氨酸33(HPA-1a)反应。作者研究T细胞在体外对HPA-1a和HPA-1b多肽(aa 20-39和aa 24-45)的反应T细胞的HPA-1a同种免疫的妇女的外周血单个核细胞(PBMC)。将多肽和对照抗原加入PBMC中,T细胞增殖反应以对3H胸腺嘧啶的摄取量进行分析。作者测试了来自10名妇女的17个样本:5名妇女的7个样本对HPA-1a多肽反应呈弱阳性,2份原发性血小板减少性紫癜(ITP)妇女的样本也对HPA-1b(20-39)多肽呈弱阳性。其它10个样本的  相似文献   

12.
背景HPA-5b是最常见的妊娠诱导的血小板特异性抗体。由抗HPA-5b所导致的新生儿同种免疫性血小板减少症很少引起婴儿发生严重的出血,但对受影响的儿童所引发的后遗症则可能非常严重。因此,有必要鉴别新生儿同种免疫性血小板减少症是否有危险发生。研究设计与方法 用血小板抗原的单克隆特异性抗体固相试验检测妊娠诱导的HPA-5b抗体的IgG效价、亚类及轻链成分。血清取自12名母亲,她们的16次妊娠出现了HPA-5b不合胎儿(HPA-5b阳性)。8名母亲产有血小板计数正常的婴儿。有3份母体血清是在分娩出患严重血小板减少症婴儿后所取得的。3名同种免疫的妇女  相似文献   

13.
自身免疫性血小板减少性紫癜相关抗体的研究   总被引:7,自引:2,他引:7  
目的 探索对自身免疫性血小板减少性紫癜 (AITP)诊断特异和敏感的实验方法。方法 采用单克隆抗体特异性俘获血小板抗原技术 (MAIPA技术 )并加以改进 ,对比检测血小板洗脱液和血浆中血小板膜糖蛋白特异性抗体。结果 AITP患者血浆游离抗血小板膜糖蛋白 (GPⅡb Ⅲa、GPⅠb Ⅸ )抗体总阳性率为 38.89%(5 4例中 2 1例 ) ,洗脱血小板表面抗血小板膜糖蛋白 (GPⅡb Ⅲa、GPⅠb Ⅸ )抗体总阳性率为 6 8.5 2 %(5 4例中 37例 ) ,两者差异有显著性 (校正 χ2 =19.39,P <0 .0 0 5 )。原发AITP组血浆游离及洗脱血小板表面抗血小板糖蛋白 (GPⅡb Ⅲa、GPⅠb Ⅸ )特异性抗体总阳性率与继发性AITP组比较差异无显著性。AITP患者血小板数量与自身抗体滴度呈明显负相关。结论 MAIPA法检测血小板洗脱液中抗血小板糖蛋白抗体在AITP的诊断和治疗中具有高度特异性 ,且敏感性较血浆抗体检测显著提高。  相似文献   

14.
目的 评价单克隆抗体俘获血小板抗原技术(MAIPA)对免疫性血小板减少症(ITP)的诊断价值,以及对免疫性和非免疫性血小板减少的鉴别诊断价值.方法 以来自14家医院的321例血小板减少患者为研究对象,男118例,女203例,应用改良MAIPA试验双盲法检测患者血小板膜糖蛋白特异性自身抗体(抗-GPⅡb/Ⅲa和抗-GP Ⅰ b/Ⅸ),客观评价该试验在ITP诊断中的敏感性和特异性,了解ITP患者血小板特异性抗体浓度与血小板数量的相关性以及地塞米松治疗后抗体浓度的变化.结果 抗-GPⅡb/Ⅲa、抗-GP Ⅰ b/Ⅸ、抗-GPⅡb/Ⅲa联合抗-GP Ⅰ b/Ⅸ诊断ITP的敏感性分别为39.75%、32.64%、55.23%,特异性分别为97.56%、93.94%、92.68%,阳性预测值分别为97.94%、93.98%、95.65%,阴性预测值分别为35.71%、32.35%、41.53%,总有效率分别为54.51%、48.29%、64.80%;ITP患者血小板特异性抗体阳性率显著高于非免疫性血小板减少患者;抗体阳性患者的血小板数量显著低于阴性患者,ITP患者血小板特异性抗体水平[吸光度(A)值]与血小板数量呈负相关;激素治疗有效的ITP患者抗-GPⅡb/Ⅲa或(和)抗-GP Ⅰ b/Ⅸ转阴或抗体水平降低.结论 MAIPA试验对ITP具有较高的诊断价值,对ITP患者的疗效也具有指导意义,可作为IFP和非免疫性血小板减少的鉴别诊断依据.  相似文献   

15.
Xia WJ  Ye X  Deng J  Chen YK  Xu XZ  Ding HQ  Luo GP  Fu YS 《中华血液学杂志》2010,31(9):594-598
目的 探讨血小板输注无效与血小板同种抗原或血小板特异性抗原的相关性.方法 选择65例临床确诊血小板输注无效患者作为研究对象,应用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测血清、血小板洗脱液中血小板特异性抗体;应用HLA抗体特异性检测试剂盒,对组合反应性抗体(PRA)阳性的患者进行HLA抗体特异性分析;用HPA分型试剂盒检测8个血小板同种抗原系统HPA-1、2、3、4、5、6、9、15;用HLA分型试剂盒对HLA-A/B抗原进行基因分型.结果 65例患者HLA-A/B抗原,HPA-1、2、4、5、6、9、15抗原的基因频率分布与健康献血员比较差异无统计学意义.HPA-3a、3b抗原频率分别为0.65、0.35,与健康献血员比较差异有统计学意义(P<0.05).65例患者中HLA抗体单独阳性24例(36.9%),HLA抗体和血小板特异性糖蛋白抗体共同阳性14例(21.5%);HLA抗体和血小板洗脱液特异性糖蛋白抗体共同阳性6例(9.2%),血小板洗脱液特异性糖蛋白抗体阳性13例(20%),HLA抗体、血小板特异性糖蛋白抗体及血小板洗脱液特异性糖蛋白抗体共同阳性4例(6.2%);HLA-A/B特异性抗体中,HLA-A*9抗体占全部抗体的46.2%,HLA-B*40抗体占33.6%.血清血小板特异性抗体以GPⅡb/Ⅲa为主(26.2%),其次为GP Ⅰa/Ⅱa(21.5%),血小板洗脱液中,血小板特异性抗体以GPⅡb/Ⅲa和GP Ⅰb/Ⅸ为主(41.5%).对2例患者进行了遗传学调查,发现产生的血小板特异性糖蛋白抗体和HLA抗体与父母血小板抗原及HLA抗原不相合呈密切相关.结论 血小板输注无效患者中,HLA抗体占主要地位,其次为血小板特异性糖蛋白抗体.  相似文献   

16.
目的分析中国汉族人群HPA-1~6、15系统的基因多态性,研究中国南、北方汉族人群HPA-1~6、15的基因分布。方法采用Luminex结合序列特异性寡核苷酸探针(flow-sequence specific oligonucleotide probes,FLOW-SSO)方法对2 458名深圳巿机采血小板无偿捐献者(其中南方人群1 554人,北方人群904人)进行HPA-1~6,15系统基因分型。采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-sequence specific primer,PCR-SSP)方法对有疑问的标本及罕见抗原(如HPA-1b/1b、2b/2b、5b/5b等)做进一步确认。结果中国汉族人群中HPA-1~6、15基因频率分别为,HPA-1a 0.991 7,HPA-1b 0.008 3,HPA-2a 0.955 2,HPA-2b 0.044 8,HPA-3a 0.558 6,HPA-3b 0.441 4,HPA-4a0.998 0,HPA-4b 0.002 0,HPA-5a 0.986 2,HPA-5b 0.013 8,HPA-6a 0.985 6,HPA-6b 0.014 4,HPA-15a 0.545 2,HPA-15b 0.454 8。南、北方汉族人群HPA-1~6、15比较,在HPA-1和HPA-3系统(χ2=15.032 0、5.418 8,P0.05);基因频率分布差异有统计学意义。经χ2检验,符合Hardy-Weinbery遗传定律。结论中国汉族人群中HPA-3和HPA-15杂合程度最高,在中国南北方汉族人群中HPA-1和HPA-3系统基因多态性分布存在明显的地域差异。为了给免疫性血小板减少症患者提供相合血小板输注,在中国建立血小板供者资料库是必要的。  相似文献   

17.
由HPA-1a引起的严重新生儿同种免疫性血小板减少症,需输注HPA-1a阴性的血小板来快速纠正血小板数。建立HPA-1a阴性的供者队伍需要简单可靠的HPA-1a定型方法。现在多数应用多克隆抗体技术,这种技术耗时,从而影响血小板分离。作者用抗-HPA-1a的重组IgG1研制了一种基于ELISA技术的定型试验,这种试验克服了过去的技术存在的问题。这个试验用孵育单克隆RFGP56可以从20ul的全血中检出GPⅡb/GPⅢa,连接辣根过氧化物酶(HRP)IgG1重组抗体可以检测HPA-1a抗原。在1小时内能对96份标本进行HPA-1a定型。在一次试验中,检测了782份随机供者的标本,鉴定出19汾HPA-1a阴性标本(2.4%)。HPA-1a阴性标本的平均OD值为0.097(平均值 3sd=0.278),而阳性标本的平均OD值为1.42(平均值-3sd=0.6)。所有HPA-1a阴性的标本用以下方法确认:通过流式细胞仪用异硫氰酸荧光素(FITC)-标记的抗—HPA—1a的重组IgG1对全血进行检测;通过流式细胞仪用多克隆抗HPA-1a对提纯的血小板进行检测和应用PCR-序列特异性引物(SSP)方法。总结,用重组抗-HPA-1a连接HRP,我们研究了一种只用20ul的全血快速定型技术,这种技术适用于半自动化检测。  相似文献   

18.
本研究旨在调查南京地区无关健康人群人类血小板抗原1-18(HPA-1-18)等位基因频率,为输血患者寻找相容性血小板提供可靠依据。使用PCR-SSP方法对300例南京地区非血缘健康志愿者血液样品进行人血小板抗原1-18(HPA-1-18)等位基因分型。结果表明,南京地区300例非血缘人群HPA等位基因频率分别为:HPA-2a 0.9183和-2b 0.0817;HPA-3a 0.6100和-3b 0.3900;HPA-5a 0.9733和-5b 0.0267;HPA-6a 0.9883和-6b 0.0117;HPA-15a 0.5250和-15b 0.4750。HPA-1a,-4a,-7a-14a和HPA-16a-18a均是纯合子。结论:HPA抗原等位基因频率存在种族和地域差异。南京地区HPA抗原等位基因频率显示具有自身特点。HPA-3和HPA-15是最常见的杂合子,因此必须关注HPA在血小板临床输血中的作用。  相似文献   

19.
目的主持国际输血学会第14届国际血小板免疫学研讨会和合作研究项目,对参加合作研究项目的全球42个血小板免疫学实验室的血小板抗体检测技术和质量状况进行测评。方法南宁输血医学研究所组织并向参加合作研究的各实验室提供9份含抗血小板特异性抗体的质控标本,各实验室以本室的技术或市场化的技术作检测,按所提供的记录表格对各质控标本的反应结果作报告。结果23个国家的36个实验室参加了本合作项目,35个实验室反馈了各自实验室的研究结果,9个质控标本抗体特异性鉴定的一致率为20%—97.14%,抗体特异性分别为抗-HPA-1a、抗-HPA-1b、抗-HPA-3a、抗-HPA-3a、抗-HPA-3b、抗-HPA-5b、抗-HPA-5a、抗-GPIV及抗-HPA-5b+15b,一致率最低为抗-HPA-3b,最高为抗-HPA-5b和抗-HPA-5a。各实验室采用的技术共计有10余种,血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术(MAIPA)是采用最多的技术。结论本合作项目成功地对35个国际血小板免疫诊断实验室的血小板特异性抗体的检测技术和质量进行了测评和分析报告。  相似文献   

20.
目的 了解血小板特异性抗原(HPA)-1~6、15基因多态性在拉萨藏族献血人群中的分布特征.方法 采用聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术对405名藏族无关献血者作HPA-1~6、15基因分型.结果 405名无关献血者HPA各等位基因的频率分别为:HPA-1a:0.9383,HPA-1b:0.061 7;HPA-2a:0.971 6,HPA-2b:0.028 4;HPA-3a:0.617 3,HPA-3b:0.382 7;HPA-4a:0.992 6,HPA-4b:0.007 4; HPA-5a:0.949 4,HPA-5b:0.050 6; HPA-6a:0.991 4,HPA-6b:0.008 6;HPA-15a:0.603 7,HPA-15b:0.396 3.人群资料比对结果显示,与南方汉族人群(n=1 554)相比,拉萨藏族献血人群HPA-1、HPA-2、HPA-3、HPA-4、HPA-5、HPA-15系统基因频率具有明显差异;与新疆柯尔克孜族人群(n =105)相比,仅HPA-2系统基因频率具有明显差异.拉萨藏族献血人群HPA-1b等位基因频率明显低于高加索人群(n=119),而与新疆柯尔克孜族人群(n =105)相近,但明显高于亚洲其他黄种人群.结论 拉萨藏族献血人群的HPA各位点基因频率显示出明显的民族和地域性特征.  相似文献   

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