郁可舒胶囊对脑卒中后抑郁模型大鼠脑内单胺类递质的影响

目的探讨郁可舒胶囊对脑卒中后抑郁（PSD）模型大鼠脑内单胺类递质的影响及中医药治疗PSD的机理。方法大鼠随机分为正常对照组、模型组、假手术组、百优解组、郁可舒胶囊高、中、低剂量组,采用颈内动脉线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型并予以行为限制制备PSD大鼠模型,在造模29d后采用荧光检测法测定大鼠左、右侧额顶皮层和脑干区单胺类递质的变化。结果复合造模处理可引起大鼠脑内5-羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）显著降低,百优解和郁可舒胶囊均能显著增加PSD大鼠脑内5-HT、NE、DA水平。结论郁可舒胶囊可以通过提高PSD大鼠的脑内单胺类递质水平而起到治疗作用。     

醒脑解郁胶囊对PSD大鼠单胺类神经递质含量的影响

为阐明醒脑解郁胶囊治疗卒中后抑郁症的机理。通过实验研究,探讨醒脑解郁胶囊对PSD大鼠脑内单胺类神经递质含量的影响,实验结果表明能明显升高单胺类神经递质含量。因此,醒脑解郁胶囊治疗PSD是通过提高单胺类神经递质含量来改善抑郁症状,恢复神经功能缺损,提高治愈率。     

血府逐瘀口服液干预应激抑郁模型大鼠的实验研究

目的 观察血府逐瘀口服液对抑郁模型大鼠大脑行为学和5-羟色胺（5-HT）及脑源性神经营养因子（BDNF）含量的影响。方法 将雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、血府逐瘀组、黛力新组,每组12只。以慢性轻度不可预见性的应激法建立抑郁大鼠模型,血府逐瘀组和黛力新组大鼠分别给予血府逐瘀口服液、黛力新片灌胃干预21天。采用旷野实验和蔗糖水消耗实验观察大鼠行为学改变,并检测5-HT和BDNF含量。结果 实验大鼠经过慢性应激性刺激后,可出现行为异常改变,模型组5-HT含量降低,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.01）。经血府逐瘀口服液和黛力新片干预后,应激大鼠行为学未发现明显改变,5-HT含量降低不明显（P>0.05）,且血府逐瘀组5-HT含量高于黛力新组（P<0.05）。但模型组大鼠BDNF含量与对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）,而血府逐瘀组和黛力新组大鼠BDNF含量低于模型组（P<0.01）。结论 应激可以导致大鼠行为学改变和5-HT含量降低而出现抑郁倾向。血府逐瘀口服液干预可对抗抑郁引起的行为学改变,增加5-HT含量;但对大鼠BDNF含量影响并不明显,考虑其可能不通过BDNF途径起效。     

针刺百会、印堂对脑卒中抑郁大鼠神经递质释放及miRNA-219/CaMKⅡγ通路的影响

摘要：目的：探讨针刺百会、印堂对脑卒中抑郁(PSD)大鼠神经递质释放及miRNA-219/钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱγ(CaMKⅡγ)通路的影响。方法：SD大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组、非经非穴组、文拉法辛组,每组12只,除假手术组外,其余各组建立PSD大鼠模型,分组处理后,各组大鼠进行神经功能缺损评分；以蔗糖水消耗实验及敞箱实验检测各组大鼠抑郁症状；以高效液相色谱法检测各组大鼠脑组织中神经递质去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)和多巴胺(DA)的含量；以实时荧光定量(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹法检测各组大鼠脑组织miRNA-219、CaMKⅡγ信号表达情况。结果：与假手术组相比,模型组大鼠神经功能缺损评分、CaMKⅡγ mRNA及蛋白表达明显升高(P＜0.05),蔗糖水消耗量、水平运动与垂直运动次数、神经递质NE及5-HT、DA含量、脑组织miRNA-219表达明显降低(P＜0.05)。与模型组相比,文拉法辛组、针刺组大鼠神经功能缺损评分、CaMKⅡγ mRNA及蛋白表达降低(P＜0.05),蔗糖水消耗量、水平运动与垂直运动次数、神经递质NE及5-HT、DA含量、脑组织miRNA-219表达升高(P＜0.05)；非经非穴组大鼠各指标差异无统计学意义(P＞0.05)。针刺组与文拉法辛组比较,大鼠各指标差异无统计学意义(P＞0.05)。结论：针刺百会、印堂可上调miRNA-219表达,下调CaMKⅡγ表达,修复PSD大鼠神经功能,促进神经递质释放,改善大鼠抑郁症状。     

“通督调神”针刺对脑卒中后抑郁大鼠海马CREB/BDNF/TrkB信号通路的影响

目的：观察“通督调神”针刺对脑卒中后抑郁（PSD）大鼠抑郁样行为以及海马环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）/脑源性神经营养因子（BDNF）/酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)通路的调节作用,探讨其改善PSD的可能机制。方法：将36只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、通督调神组,每组12只。模型组、通督调神组大鼠采用Zea Longa线栓法和慢性不可预知性温和应激（CUMS）法复合制备PSD模型。通督调神组大鼠于造模结束后第4天予针刺“大椎”“水沟”“百会”“神庭”,每次干预40 min,每天1次,每周6次,连续干预4周。分别于PSD模型造模结束后第2天和干预4周后进行大鼠Zea Longa神经行为学评分、蔗糖水消耗实验和敞箱实验;生化法检测大鼠海马CA1区超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）含量;ELISA法检测大鼠血清BDNF含量;实时荧光定量PCR法检测大鼠海马CA1区BDNF、Trk B、CREB mRNA表达;Western blot法检测大鼠海马CA1区BDNF、Trk B、CREB,p-CREB蛋白表达。结果：与假手术组比较,造模后、干预...     

血府逐瘀胶囊对脑缺血再灌注大鼠一氧化氮合酶亚型表达的影响

目的:探讨血府逐瘀胶囊在大鼠的缺血再灌注模型中对神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法:采用随机分组的方法,将165只SPF级健康大鼠分为假手术组、模型组、血府逐瘀胶囊低、中、高剂量组。血府逐瘀胶囊低、中、高剂量组大鼠,在手术前1周依次灌胃0.1 g/(kg·d)、0.2 g/(kg·d)、0.5 g/(kg·d)的血府逐瘀胶囊混悬液,同时假手术组及模型组大鼠给予等量的生理盐水;免疫组织化学染色法在不同时间点检测各组大鼠脑组织切片中各一氧化氮合酶(NOS)亚型(nNOS、eNOS和iNOS)的表达。结果:假手术组大鼠未出现神经功能缺失症状,脑组织未检测到iNOS阳性表达。与假手术组比较,模型组大鼠在24 h后出现明显的神经功能缺失症状;脑组织切片中各时间点eNOS阳性细胞数均显著增加;各时间点nNOS阳性细胞数均显著减少;在脑缺血再灌注后10 h时达到最大值,差异均有统计学意义(P 0.05)。与模型组比较,低、中、高剂量组大鼠脑组织eNOS的阳性表达均显著升高;nNOS及iNOS的阳性表达均显著下降,差异均有统计学意义(P 0.05);其中在高剂量组大鼠eNOS阳性表达最高;nNOS及iNOS的阳性表达最低。与低剂量组比较,中、高剂量组大鼠的神经行为评分显著降低(P 0.05)。结论:NOS参与了脑缺血再灌注损伤过程,nNOS和eNOS从损伤早期开始表达,而后逐渐降低;iNOS则主要在损伤后期表达。使用血府逐瘀胶囊对脑缺血再灌注模型大鼠进行预处理,可促进eNOS表达,抑制nNOS和iNOS表达,说明血府逐瘀胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护功能可能和NOS不同亚型的表达有关。     

乌丹丸对寒凝血瘀子宫内膜异位大鼠PI3K/Akt/m TOR自噬信号轴及相关分子表达的影响

目的 探讨乌丹丸对寒凝血瘀型子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）大鼠自噬信号轴磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,PKB又称Akt）/雷帕霉素靶分子（mammalian target of rapamycin,mTOR）及相关分子表达的影响。方法 随机将49只雌性SD大鼠分为假手术组、模型组、乌丹丸高、中、低剂量组、散结镇痛胶囊组、地诺孕素组,每组7只,采用冰水浴联合自体子宫内膜移植法建立寒凝血瘀EMs大鼠模型。假手术组及模型组每天给予10 m L/kg生理盐水灌胃,乌丹丸高、中、低剂量组分别给予2.4 g/kg、1.2 g/kg、0.6 g/kg灌胃,散结镇痛胶囊组每天给予0.48 g/kg灌胃,地诺孕素组每天给予0.2 mg/kg灌胃,各组持续用药28日。应用蛋白免疫印迹法和免疫组化法检测异位内膜组织自噬信号轴PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白以及相关自噬分子LC3、Beclin-1蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠异位内膜组织PI3K/Akt/m T...     

燧心胶囊对心力衰竭大鼠心肌纤维化的保护作用

目的：探讨燧心胶囊对心力衰竭(HF)大鼠心肌纤维化的保护作用及对AMP活化蛋白激酶（AMPK）,核转录因子红系2相关因子2（Nrf2）通路的影响。方法：采用腹腔注射阿霉素法制备大鼠HF模型,造模成功后,燧心胶囊低、中、高剂量组依次灌胃给予燧心胶囊（1.3 mg/kg、2.6 mg/kg、5.2 mg/kg）,缬沙坦组灌胃给予缬沙坦（13.35 mg/kg）,1次/d,假手术组和模型对照组给予等量生理盐水,连续8周后测定大鼠心功能,对大鼠心脏组织进行Masson染色,同时检测心脏组织中超氧化物歧化酶（ROS）、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）、AMPK、Nrf2和血红素加氧酶-1（HO-1)水平。结果：对照组大鼠心肌未见显著肌纤维,模型组大鼠心肌细胞间出现大量的纤维组织,各燧心胶囊剂量组和缬沙坦组大鼠心肌细胞间伴有不同程度的纤维组织增生,较模型组明显减轻,其中缬沙坦组大鼠改善最为显著。与对照组比较,模型组大鼠左心室射血分数（LVEF）、左室缩短分数（LVFS）、GSH、SOD、AMPK、Nrf2和HO-1水平降低,左室收缩期末内径（LVSD）、左室舒张末内径（LVEDD）和ROS水平升高（P<0.05）;与模型组比较,各燧心胶囊组和缬沙坦组大鼠LVEF、LVFS、GSH、SOD、AMPK、Nrf2和HO-1水平升高LVSD、LVEDD和ROS水平降低,各燧心胶囊组大鼠各指标随燧心胶囊剂量增加而变化,但缬沙坦组作用最显著（P<0.05）。结论：燧心胶囊能抑制HF大鼠心肌纤维化,其机制可能与AMPK/Nrf2通路激活有关。     

血府逐瘀胶囊对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响

目的:观察血府逐瘀胶囊对自发性高血压左心室肥厚大鼠心肌纤维化的影响。方法:32只14周龄雄性SHR随机分为4组,每组8只,分为模型对照组、血府逐瘀胶囊8g/kg、4g/kg及洛汀新组2mg/kg,同时选同周龄的雄性Wistar-Kyoto大鼠(WKY)8只作为正常对照组。每两周测量一次血压,给药14周后,测量左心室质量指数、左心室功能;采用H.E.、Masson染色法观察大鼠心肌组织病理形态学变化;电镜观察各组大鼠心肌超微结构。结果:与正常对照组相比,模型对照组血压和左心室质量指数明显增加(P<0.05),心功能明显降低(P<0.05)。病理学检查显示,模型对照组心肌细胞肥大,水肿变性明显,排列紊乱,血管周围见增厚的纤维组织,心肌间质间见大量增生的纤维,肌原纤维、肌节变性坏死。与模型对照组比较,血府逐瘀胶囊8g/kg、4g/kg能明显降低左心室质量指数(P<0.05),增加左心室舒缩功能(P<0.05),改善心肌组织血管周围与间质胶原纤维增生。结论:血府逐瘀胶囊具有抑制高血压左心室肥厚大鼠心肌纤维化的作用。     

醒脑解郁方对卒中后抑郁症模型大鼠行为学及海马区p-ERK1/2的影响

目的通过观察醒脑解郁方对卒中后抑郁症(post-stroke depression,PSD)大鼠大脑海马区pERK1/2含量及p-ERK1/2表达水平的影响,探讨醒脑解郁方治疗PSD的作用机制。方法健康成年SD大鼠90只,雌雄各半,随机分为6组(正常对照组、模型组、中药早期干预组、西药早期干预组、中药治疗组、西药治疗组),每组15只。在脑缺血模型的基础上采用孤养法及皮下注射利血平法(连续16天)制备PSD模型。中药早期干预组、西药早期干预组大鼠于脑缺血模型制备成功后次日开始干预,连续21天。PSD模型制备成功后中药治疗组、西药治疗组干预治疗,中药早期干预组、西药早期干预组治疗方案不变,连续16天。中药各组均给予醒脑解郁方0.412 5 g/kg溶2 mL蒸馏水灌胃,西药各组均给予氟西汀2.08 mg/kg、拜阿司匹林3.0 mg/kg溶于2 mL蒸馏水内灌胃。空白对照组、模型组给予生理盐水2.0 mL/只灌胃。于实验第2、15、37天观察各组大鼠的体重变化情况、糖水消耗量及旷野试验(包括水平运动和垂直运动)。采用免疫组化法及RT-PCR法检测PSD大鼠大脑海马区p-ERK1/2含量及p-ERK1/2表达水平。结果与正常对照组比较,模型组实验第15、37天体重、糖水消耗量、水平运动和垂直运动降低,p-ERK1/2阳性细胞数及pERK1/2 mRNA的相对表达量减少(P0.05,P0.01)。与模型组比较,实验第15、37天中药早期干预组、西药早期干预组体重、糖水消耗量、水平运动和垂直运动升高(P0.05,P0.01),实验第37天中药治疗组及西药治疗组大鼠体重、糖水消耗量、水平运动和垂直运动升高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,中药早期干预组、西药早期干预组、中药治疗组及西药治疗组大鼠海马区p-ERK1/2阳性细胞数及p-ERK1/2 mRNA的相对表达量增加(P0.05)。结论醒脑解郁方通过提高PSD大鼠模型海马组织内p-ERK1/2的含量并上调p-ERK1/2 mRNA的表达水平,可能是醒脑解郁方治疗PSD的作用机制之一。     

知母药材的HPLC/PDA/ELSD指纹图谱研究

[目的]建立知母药材的高效液相色谱仪-二极管阵列检测器-蒸发光散射检测器联用(HPLC/PDA/ELSD)指纹图谱。[方法]采用Waters Symmetry Shield TM RP C18(5μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1%冰醋酸,梯度洗脱流速1.0 m L/min,柱温30℃,检测波长258 nm,ELSD检测器载气气压30 Psi,漂移管温度80℃。[结果]建立了知母的HPLC/PDA/ELSD指纹图谱,在HPLC-PDA色谱图中标定了17个共有峰,HPLC-ELSD色谱图中标定了14个共有峰。[结论]该方法重复性好,可用于知母药材的全面质量控制。     

忍冬、山银花HPLC/UV/MS指纹图谱研究

目的 :采用HPLC/UV/MS法对忍冬和山银花药材进行指纹图谱的研究 ,并对其主要成分进行定性。方法 :采用AgilentZORBAXSB C18柱 ( 15 0mm× 4 .6mm ,5 μm) ,甲醇和 0 .1%甲酸为流动相梯度洗脱 ,流速 :1mL·min-1。结果 :得到分离度和重复性均较好的忍冬和山银花药材HPLC/UV及HPLC/MS指纹图谱 ,分别对忍冬指纹图谱中 8个色谱峰和山银花图谱中 5个色谱峰进行了初步定性 ,并比较了 2种药材指纹图谱的差异。结论 :本方法可用于忍冬和山银花药材指纹图谱的测定。     

基于UPLC/Q-TOF MS/MS的稳心颗粒主要成分分析及鉴定

[目的]采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF MS/MS)技术,对稳心颗粒中的化学成分进行初步分析。[方法]采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以乙腈-水(含体积比0.1%甲酸)为流动相梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,电喷雾电离源,正/负离子双模式检测,通过UPLC/Q-TOF MS/MS所得到的化合物分子量以及MS/MS碰撞解离碎片,结合文献报道,对稳心颗粒的主要化学成分进行分析鉴定。[结果]结合文献报道和一级MS、二级MS/MS高分辨质谱数据,对其中68个化合物进行了初步鉴定,结果显示,稳心颗粒成分以糖类、皂苷类、黄酮类为主,其中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1丰度较高。[结论] UPLC/Q-TOF MS/MS技术是鉴定中药复方成分的有效手段,本研究首次利用该技术对稳心颗粒的主要成分进行定性分析,为阐明该复方药效物质基础、探讨其作用机制及其质量控制提供了有效的科学依据。     

基于BDNF/TrkB/PI3K/Akt信号通路的滋肾醒脑汤对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的影响

目的基于BDNF/TrkB/PI3K/Akt信号通路观察滋肾醒脑汤对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力的影响,探讨其可能的作用机制。方法采用侧脑室注射β-淀粉样蛋白制备AD大鼠模型,假手术组注射等体积生理盐水,将成模大鼠随机分为模型组、中药组及阳性对照组,每组6只,中药组及阳性对照组分别予滋肾醒脑汤(16.74 g/kg)和盐酸多奈哌齐混悬液(0.45 mg/kg)灌胃,假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水,每日1次,连续4周。采用Morris水迷宫实验进行大鼠行为学检测,TUNEL染色检测海马组织神经细胞凋亡情况,Western blot检测海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)蛋白表达,免疫组化检测海马组织PI3K、Akt蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长,跨越平台次数减少,目标象限停留时间缩短(P<0.05,P<0.01),海马组织神经细胞凋亡率明显升高,BDNF、TrkB、PI3K、Akt蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,中药组及阳性对照组大鼠逃避潜伏期明显缩短,跨越平台次数增加,目标象限停留时间延长(P<0.01,P<0.05),海马组织神经细胞凋亡率明显降低,BDNF、TrkB、PI3K、Akt蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),中药组与阳性对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论滋肾醒脑汤可改善AD大鼠学习记忆能力,其机制可能与上调BDNF/TrkB/PI3K/Akt信号通路蛋白表达,减少神经细胞凋亡有关。     

《2004/24/欧盟指令》及其对中药国际化的影响

《2004/24/欧盟指令》虽然具有规范传统植物药市场准入条件,保护人类安全的作用,但在客观上它还具有限制进口、保护本国同类商品生产者利益的作用。该指令既不符合GATT1994第3条规定的国民待遇原则,也不符合GATT1994第20条规定的"一般例外"原则。我国完全可以通过WTO争端解决机制迫使欧盟废除或修改《2004/24/欧盟指令》。     

密花石斛的HPLC/UV/MS指纹图谱研究

目的 采用HPLC／UV／MS法对密花石斛进行指纹图谱研究。方法 采用Agilent Zorbax SB—C18柱；甲醇和水为流动相进行梯度洗脱；流速为1．0mL／min。结果 得到分离度较好的密花石斛HPLC／UV指纹图谱，标示了9个共有峰，并用HPLC／MS对其部分色谱峰进行了初步定性。结论 该方法可用于密花石斛指纹图谱的测定，并为其全面质量控制提供参考。     

LC／MS／MS法测定大鼠血浆中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯及药动学研究

目的：建立测定血浆中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的LC／MS／MS法，研究单体穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的药代动力学。方法：测定大鼠血浆中的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯时，血浆样品经沉淀蛋白处理后，以甲醇-水（85：15）为流动相，采用Lichrospher C18柱分离。选用电喷雾离子源，选择反应监测方式扫描，负离子方式检测。结果：穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯在该条件下分离良好，保留时间分别为3．57min和4．51min。穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的线性范围均为0．02～10μg·mL^-1。定量下限均为0．02μg·mL^-1，最低检出量为0．003ng。结论：该方法简便、灵敏、专属性强，适合于穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯在大鼠体内的药代动力学研究。     

LC/MS/MS法同时测定大鼠血浆中芒果苷和小檗碱浓度

目的 建立液相色谱-串联质谱(LC/MS/MS)法同时测定芒果苷和小檗碱在大鼠血浆中的浓度.方法 以对乙酰氨基酚为内标,血浆样品采用沉淀蛋白法处理.用电喷雾离子化和正离子多离子反应监测(MRM)方式检测芒果苷和小檗碱.结果 该方法 芒果苷和小檗碱的线性范围分别为3.01～300.60 ng·mL-1和2.66～266.20 ng·mL-1;定量下限(LLOQ)分别为3.01 ng·mL-1和2.66 ng·mL-1;方法 回收率分别在97.0%～103.2%和94.0%～101.1%;批内、批间变异系数均<12%.结论 该方法 准确、灵敏、特异、简便,适用于鼠血浆芒果苷和小檗碱浓度的同时测定.     

中医药治疗HIV/AIDS动物实验研究进展及探讨

研究HIV/AIDS动物适宜模型的建立及近年来中医药治疗HIV/AIDS在动物实验研究方面的进展,结合中药治疗艾滋病临床实践,HIV/AIDS的病种特性,中医基本理论特色,探讨中医药治疗HIV/AIDS动物模型建立及药效筛选研究的可行性和挑战,为开发治疗艾滋病中药新药的实验研究提供思路和尝试。     

牛膝的HPLC/UV/MS指纹图谱研究

目的：采用HPLC／UV／MS法构建牛膝药材的指纹图谱。方法：采用Agilent ZorbaxSB-C18柱；甲醇与0．1％甲酸进行梯度洗脱；流速为1．0ml／min。结果：得到分离度、重现性均较好的牛膝药材HPLC／UV指纹图谱，标示了4个共有峰，并借助HPLC／MS技术对其主要色谱峰进行了初步归属。结论：牛膝药材指纹图谱的构建，为控制其质量提供了依据。