川黄连多指标成分定量及特征图谱建立研究＊

目的 测定川黄连（味连、雅连、凤尾连）中7个生物碱（小檗碱、黄连碱、巴马汀、药根碱、表小檗碱、非洲防己碱、格陵兰黄连碱）的含量并建立3种川黄连的特征图谱，构建川黄连科学的质量控制方法，以提升川黄连药材、饮片及其中成药制剂的质量控制水平，保障临床用药安全有效。方法 建立了同时测定7个黄连生物碱成分的HPLC含量测定方法，经方法学验证该方法准确性、重现性、精密度、稳定性、线性均符合要求。测定6批味连、6批雅连、3批凤尾连的7个生物碱的含量以及总生物碱的含量；建立了黄连药材HPLC特征图谱测定方法，经方法学验证，该方法精密度、重现性、稳定性均符合要求。结果 味连的总生物碱含量最高，7个生物碱在味连、雅连、凤尾连中含量各不相同，差异较大；通过对15批黄连的特征图谱相似度的分析，找出共有特征峰15个，与黄连生物碱对照品比对后，指认了8个峰，均为黄连生物碱成分。结论 川黄连多指标成分定量结合特征图谱，可以有效控制川黄连药材的质量，为2020年版《中华人民共和国药典》黄连药材质量标准的完善与提高提供参考。     

川黄连不同炮制品改善四氧嘧啶小鼠糖及脂代谢紊乱比较研究＊

目的 比较川黄连不同炮制品（味连、酒味连、姜味连、萸味连、雅连、酒雅连、姜雅连、萸雅连）对四氧嘧啶小鼠糖、脂代谢的药效差异。方法 采用四氧嘧啶小鼠糖尿病模型，测定小鼠的血糖指标和脂代谢相关指标。结果 在降糖方面，川黄连不同炮制品组与模型组比较，均有不同程度升高四氧嘧啶糖尿病小鼠空腹血清胰岛素（Ins）、降低空腹血糖（FBG）的作用，尤以萸雅连的疗效最佳；较之模型组，味连组、雅连组、姜味连组、萸雅连组糖化血清蛋白（GSP）降低显著，表明对小鼠糖代谢调节效果较好。在降脂方面，川黄连不同炮制品均可降低糖尿病小鼠血清中血清胆固醇（TG）、甘油三酯（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的含量，并增加高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的含量。就总体趋势而言，雅连及其炮制品降脂作用优于味连及其炮制品。结论 在降血糖方面，不同品种黄连、不同炮制品效果差异不大，以萸雅连降糖效果最为明显，在调节糖脂代谢紊乱和抗氧化方面，则雅连效果最佳。     

基于高分辨质谱数据库的黄连炮制前后生物碱变化规律

目的 构建黄连Coptis chinensis生物碱类成分的高分辨质谱数据库(HR-MS-Database),研究不同炮制方法炮制前后黄连生物碱类化学成分的变化。方法 采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用(UPLC/Q-TOF-MS)技术手段,借助SCIEX公司LibraryView数据库平台,建立黄连生物碱类成分高分辨质谱数据库,并对不同黄连炮制品中炮制前后的生物碱类成分含量进行测定和差异分析。结果 建立黄连生物碱类成分高分辨质谱数据库,包含黄连生物碱类成分31种;对姜黄连、酒黄连、萸黄连及黄连生品4种样品测定结果显示,黄连炮制前后生物碱成分差异明显。黄连经姜炙后,药根碱、表小檗碱、非洲防己碱含量略有上升,黄连碱、小檗碱含量略有下降,巴马汀含量未见改变;萸黄连中药根碱、表小檗碱、小檗碱含量下降,黄连碱、巴马汀及非洲防己碱含量未见变化;而酒黄连中所测定的6种生物碱含量均显著提高(P<0.05)。结论 建立了一种黄连炮制前后生物碱类成分变化规律的快速识别方法,并定量了在黄连炮制前后含量变化显著的6种生物碱,为黄连炮制品的药效物质基础与质量控制标准研究提供参考。     

国产山楂药材及炮制品饮片质量评价的研究

 目的 综合考察山楂药材及炮制品饮片质量。方法 用HPLC和滴定法分别测定15批山楂药材及炮制品饮片中金丝桃苷和有机酸含量,并考察样品中熊果酸TLC鉴别实验和水分、总灰分、醇溶性浸出物等药材常规理化实验项目。结果 各样品中均可检测出金丝桃苷色谱峰,且金丝桃苷是山楂饮片中黄酮类成分的主体;山楂药材及炮制品饮片中金丝桃苷含量、有机酸含量、熊果酸TLC鉴别和各常规理化实验项目测定结果表明,不同炮制加工法对药材中上述检测值有较大影响。结论 本实验为山楂药材及炮制品饮片综合质量评价体系的建立提供理论和实验依据。     

中药特色临方炮制品种挖掘——胆黄连饮片的炮制工艺及质量标准研究

目的 优选胆黄连bile processed Coptidis Rhizoma的炮制工艺并建立胆黄连饮片的质量标准。方法 以5种生物碱类成分（盐酸小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱、药根碱）及醇浸出物的总评归一值（OD）为评价指标,运用Box-Behnken设计-响应面法试验考察胆汁用量、炒制温度、炒药时间对胆黄连炮制工艺的影响,建立OD值与各自变量的多元二次回归方程的数学模型,通过响应面法确定工艺参数。并通过对10批样品的水分、总灰分、醇浸出物及生物碱成分的分析建立了胆黄连的质量标准。结果 胆黄连最佳炮制工艺是黄连片加入9%胆汁拌匀,闷润至干,置炒制容器内,控制炒制温度为142℃,炒制22 min,取出晾凉。3次验证试验所得OD值分别为0.721 9、0.745 4、0.753 4,接近于预测值,RSD为2.23%,说明该炮制工艺稳定、可行。建议规定胆黄连饮片的水分不得过15.0%,总灰分不得过3.0%,醇浸出物不得少于12.0%,盐酸小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱、药根碱的质量分数分别不得少于6.0%、1.3%、1.6%、1.1%、0.34%。结论 采用响应面法优化的胆黄连炮制工艺简单可行,质量标准可控性强。     

吴茱萸制黄连的炮制工艺优选

目的 探讨吴茱萸汁制黄连的炮制工艺。方法 采用单因素试验与正交试验设计,以吴茱萸碱和盐酸小檗碱的含量为评价指标,考察炒制温度、炒制时间、烘制温度、烘制时间对吴茱萸汁制黄连炮制工艺的影响。结果 影响吴茱萸碱及盐酸小檗碱的因素排序依次为炒制温度>烘制温度>炒制时间。优选的最佳炮制工艺为取生黄连饮片,加入吴茱萸汁50 mL,浸泡24 h,不时翻动,直至汁尽药透,于90 ℃炒制6 min,取出,于70 ℃烘箱烘制24 h,即得。结论 为吴茱萸汁制黄连提供了一个切实可行的炮制工艺。     

正交设计优选微波法炮制萸黄连的最佳工艺

目的探讨微波法炮制萸黄连的最佳炮制工艺。方法采用薄层扫描法测定正交设计所得9个样品中小檗碱的含量,以小檗碱的含量高低来评价炮制方法的优劣。结果微波法炮制萸黄连的最佳工艺为A2B2C3,即润药90min,放2cm厚,用80%微波,加热3min。结论用微波法炮制萸黄连简单方便、条件易控制、易操作、易推广,炮制品质量好。     

黄连及其炮制品中5种生物碱含量测定

用薄层扫描法测定了黄连及其炮制品中５种生物碱含量，结果炮制前后差异不大。以小檗碱为例，黄连生品７．７９％；白酒连６．９１％；黄酒连７．４７％；姜黄连７．７０％；吴萸连６．１２％。     

萸连汤的定性“制剂质量标志物”筛选

目的 筛选萸连汤的定性“制剂质量标志物”，为指标成分的选择提供数据支撑，并建立指标成分与功效（泻火止痛）的直接联系，做到量效合一。方法 采用HPLC指纹图谱技术对萸连汤冻干粉制备工艺的稳定性进行考察，通过超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱法（UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS）技术对萸连汤中化学成分进行鉴定，通过查阅相关文献，将鉴定化合物的药理活性与萸连汤功效对应的药理作用进行比对，确定萸连汤定性“制剂质量标志物”的组成。结果 10批萸连汤冻干粉的HPLC指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均>0.9，说明萸连汤制备工艺稳定可行；从萸连汤中共鉴定出29个成分，其中23个生物碱类，3个苯丙素类，2个倍半萜内酯类和1个柠檬酸类；来源于黄连、吴茱萸及木香的成分分别有15，12，2个。得到萸连汤定性“制剂质量标志物”的组成为木兰花碱或10-羟基-2，3，9-三甲氧基小檗碱，黄柏碱，蝙蝠葛任碱，芬氏唐松草定碱，格兰地新，脱氢吴茱萸碱，黄连碱，药根碱，非洲防己碱，甲基黄连碱，黄连素，表小檗碱，黄藤素，吴茱萸碱，吴茱萸次碱，绿原酸，新绿原酸、隐绿原酸，柠檬苦素，木香烃内酯和去氢木香烃内酯。结论 研究筛选萸连汤定性“制剂质量标志物”的方法科学、合理、可行，可为萸连汤工艺研究中指标成分选择、质量标准中定性和定量指标的确定提供参考。     

基于AHP-熵权法优选黑顺片炮制工艺及生物碱类成分动态变化研究

目的 采用主观评价层次分析法（analytic hierarchy process，AHP）-熵权法优选黑顺片炮制工艺，探究炮制过程中生物碱类成分动态变化规律。方法 采用外观性状、水溶性浸出物、苯甲酰新乌头原碱含量、苯甲酰乌头原碱含量、苯甲酰次乌头原碱含量、双酯型生物碱总量作为评价指标，基于单因素考察结果，以煮制时间、水漂次数、蒸制时间、干燥温度为主要因素建立正交实验，通过AHP-熵权法优选黑顺片最佳炮制工艺参数。采用HPLC法对各炮制环节的附子进行含量测定，分析比较6种酯型生物碱的含量变化。结果 在质量分数20%以上的胆巴溶液中浸泡能达到防腐的目的，且浸泡20d以上附子的质量相对稳定。黑顺片炮制的最佳工艺条件为煮制时间8min，水漂次数4次，蒸制时间3h，干燥温度60℃；炮制过程中双酯型生物碱总量逐渐降低，泡胆和漂洗过程单酯型生物碱含量降低，煮制和蒸制过程单酯型生物碱含量升高。结论 实验优化所得的黑顺片炮制工艺合理、稳定、可行，炮制过程中各环节对酯型生物碱类成分均有不同程度的影响，可为进一步探讨黑顺片的现代炮制方法提供参考。     

藏族药小檗皮不同药用部位中4种生物碱成分的HPLC含量测定

目的:建立同时测定藏族药小檗皮药材中木兰花碱、药根碱、巴马汀、小檗碱含量的方法,并比较茎内皮、茎木、茎栓皮、根内皮、根木和根栓皮中4种成分的差异。方法:采用HPLC法,应用Inert Sustain C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.2%磷酸溶液,检测波长270 nm。结果:小檗皮不同部位之间的生物碱成分含量有明显的差异,根内皮及茎内皮中4种成分的含量明显高于茎木、茎栓皮、根木和根栓皮。此外,茎内皮比根内皮含有更多的木兰花碱,但小檗碱的含量明显低于根内皮,而两药用部位之间的总生物碱含量没有显著性差异。结论:该方法简便、准确、重复性好,可用于小檗皮药材的质量评控。从环境保护和可持续利用角度考虑,建议小檗皮药材取消根内皮而只以茎内皮入药。     

草乌及其炮制品中6种生物碱类成分的含量测定

目的: 测定不同产地草乌及草乌炮制品中6种生物碱的含量,综合评价其安全性和有效性。 方法: 采用HPLC同时测定6种生物碱含量,比较草乌炮制前后有效成分含量变化。 结果: 草乌生品中单酯型生物碱含量0.408 1～1.718 2 mg·g^-1,双酯型生物碱含量0.660 4～8.653 2 mg·g^-1;炮制后双酯型生物碱大大减少,而单酯型生物碱则明显增加。 结论: 不同产地草乌中6种生物碱的含量差异较大,常压蒸、煮法具有一定科学性,炮制后双酯型生物碱<0.04%,而单酯型生物碱常超出限量要求。     

制川乌炮制废水中生物碱含量的探讨＊

目的 建立HPLC同时测定制川乌炮制废水中6种毒性生物碱成分含量和UC测定总生物碱含量的方法，总结炮制废水中生物碱含量的变化规律。方法 采用HPLC同时测定6种生物碱成分；采用UV法测定总生物碱含量。结果 HPLC法和UV法在研究的线性范围内线性关系均良好，制川乌炮制废水中6种毒性生物碱成分随着炮制时间的推移有所降低。结论 建立的6种生物碱成分含量和总生物碱含量测定方法均简便、稳定、准确，可以为该废水的减毒处理提供检测手段。     

5种小檗属药用植物总生物碱及小檗碱的含量测定

目的:对5种小檗属植物(拟豪猪刺、川鄂小檗、芒齿小檗、湖北小檗、汉源小檗,均为药材三颗针来源)根和茎中活性物质总生物碱和小檗碱进行研究,比较5种植物根和茎的总生物碱和小檗碱的含量,为三颗针药材的资源与质量评价提供参考。方法:分别通过酸性染料比色法和高效液相色谱法进行总生物碱及小檗碱含量测定研究。结果:5种植物根和茎的总生物碱含量范围分别为1.60%~4.72%和0.76%~2.70%,小檗碱的含量范围分别为0.70%~2.92%和0.23%~1.07%。湖北小檗、汉源小檗和拟豪猪刺根的总生物碱及小檗碱的含量均较高,是优质的三颗针药材来源,其茎中的总生物碱和小檗碱的含量也较高。结论:所建立的总生物碱和小檗碱的含量测定方法准确、可行,为该药材的质量评价提供了可靠方法。     

猪胆汁炮制对黄连中生物碱类成分溶出的影响

目的:比较黄连、胆黄连及其水煎液中生物碱类成分的含量,研究猪胆汁炮制对黄连中生物碱类成分溶出效果的影响,探讨胆黄连寒性增强的炮制机制。方法:采用紫外分光光度法(UV)测定黄连、胆黄连及其水煎液中总生物碱含量,检测波长345 nm。采用高效液相色谱法(HPLC)测定黄连、胆黄连及其水煎液中盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的含量,流动相乙腈(A)-磷酸三乙胺水溶液(B)梯度洗脱(0~15 min,25%~30%A;15~20 min,30%~55%A),流速1.0 m L·min~(-1),检测波长345 nm。结果:黄连水煎液、胆黄连水煎液中总生物碱的转移率分别为71.17%和78.50%;黄连水煎液中盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的转移率分别为73.93%,51.59%,56.16%;胆黄连水煎液中三者的转移率分别为80.42%,64.21%,64.79%。结论:黄连经猪胆汁炮制后能够增加黄连中生物碱类成分在水煎液中的溶出,可达到寒性增强的炮制目的。     

连参颗粒的提取工艺优选

目的:优选连参颗粒的提取工艺条件,为该制剂的开发提供参考。方法:以挥发油得率为指标,采用单因素试验考察提取时间、浸泡时间、加水量对当归、辛夷、肉桂中挥发油提取工艺的影响;采用UV测定总生物碱含量,检测波长350 nm;运用HPLC测定盐酸小檗碱含量,流动相乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(50∶50),检测波长345 nm。以总生物碱、盐酸小檗碱含量及干膏率的综合评分为指标,采用L9(34)正交试验考察加水量、提取时间、提取次数对连参颗粒水提取工艺的影响。结果:挥发油提取工艺为加8倍量水浸泡1.0 h,利用水蒸气蒸馏提取5.0 h;最佳水提工艺为加8倍量水提取3次,每次1.0h;干膏率、总生物碱及盐酸小檗碱提取量分别为25.91%,512.34 mg,130.81 mg。结论:该提取工艺稳定可行,适用于连参颗粒的工业化生产。     

野罂粟不同产地不同部位中生物碱类成分的比较研究

目的对不同居群野罂粟Papaver nudicaule的全草及不同部位(根、茎、叶、花、果)总生物碱及3种主要生物碱(野罂粟碱、黑龙辛甲醚、瑞芙热米定)进行测定,为野罂粟药材的科学利用与质量评价提供科学依据。方法采用HPLC-MS-IT-TOF法对野罂粟全草进行定性分析,分别采用溴甲酚绿酸性染料比色法和UPLC-MS法对野罂粟的总生物碱及3种主要生物碱进行定量测定。结果通过定性分析,初步得到13个生物碱成分,基本确定了其中6个主要生物碱成分;定量分析结果表明,各成分的量均表现出较大的变异性,其中以乌兰布统、黄岗梁和多伦地区的综合品质较好,其中乌兰布统的野罂粟品质最佳;并且其全草和花中所含有的生物碱类成分量最高。结论评价野罂粟品质特征时建议以总生物碱和野罂粟碱为主要参考指标;建议选择乌兰布统、黄岗梁和多伦开展野罂粟优良品种选育和药材质量标准制定及道地产地规划等研究,而最佳采收期应选在7月下旬至8月上旬为宜,采收部位应选择花和全草。