用液相芯片技术定量测定人血清CEA、AFP和HBsAg

 【目的】采用液相芯片技术同时定量测定人血清中癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)和乙肝表面抗原(HBsAg),并对该方法进行评价。【方法】制备抗体交联微球及生物素标记抗体,用双抗体夹心法对临床血清标本进行测定。【结果】同时检测CEA、AFP和HBsAg时的线性范围分别为0.032～200ng/mL、0.022～55U/mL、0.26～1000ng/mL,最低检测限分别为8.90pg/mL、0.013U/mL、0.24ng/mL,批内变异系数(CV)<9%,批间CV<14%。检测CEA、AFP、HBsAg的灵敏度分别为96.4%、95.8%、92%,特异度分别为95.6%、94.2%、100%,准确度分别为96%、95%、96%。其检测结果与化学发光免疫分析法(CLIA)或时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)之间呈显著的等级相关关系。该方法仅需1!L标本,3h即可完成检测。【结论】液相芯片技术具有可联合检测多项指标、高通量、线性范围广、灵敏度高、重复性好、节省样品和时间等优点,具有临床应用潜力。     

3个肿瘤标志物联合检测液相芯片系统的建立

目的 探讨建立多个肿瘤标志物联合检测的luminex液相芯片检测方法.方法 应用配对好的AFP、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth facto,VEGF)、细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN/CD 147)3对单克隆抗体建立3个肿瘤标志物联合检测的luminex液相芯片检测体系并评估其敏感性,交叉反应并将其应用于血浆样本的检测.结果 3对抗体在luminex液相芯片系统中无交叉反应,敏感性分别为AFP 64 pg/ml、CD147 40 pg/ml、VEGF4 pg/ml.应用该体系检测了40例HCC患者,分别为AFP[6.5 (2.8,240.0)]ng/ml,CD147 (4.11 ±0.90) ng/ml,VEGF[40 (20,50)]pg/ml;40例健康对照组,分别为AFP [0.3 (0.1,1.0)]ng/ml,CD147(2.98±0.80)ng/ml,VEGF[10(0,10)]pg/ml.3个肿瘤标志物在肝癌患者外周血中的浓度显著高于正常对照组(P＜0.05).结论 成功建立高敏感性的3个肿瘤标志物联合检测的液相芯片检测体系.     

液相芯片技术定量检测人血清CEA、AFP和NSE

目的建立利用液相芯片技术定量检测人血清中癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）和神经原特异性烯醇化酶（NSE）的反应模式，并对该方法各项指标进行评价。方法制备抗体交联微球及生物素标记抗体，用双抗夹心法检测临床血清标本。结果同时检测CEA、AFP和NSE时的线性范围分别为0．078-200ng／ml、0．025-25U／ml、0．146．75ng／ml，最低检测限分别为39．1pg／ml、0．016U／ml、0．073ng／ml，分析内精密度〈10％，分析间精密度〈15％。检测CEA、AFP、NSE的灵敏度分别为97．2％、100％、93．5％，特异度分别为96．4％、97．7％、97．0％，准确度分别为96．9％、98．4％、95．3％。检测结果与化学发光免疫分析法（CLIA）呈显著的等级相关关系，而且仅需1μl标本，3h就可以完成检测。结论液相芯片技术具有可联合检测多项指标、高通量、线性范围宽、灵敏度高、重复性好和节省样品和时间等优点。具有极大的临床应用潜力。     

人甲胎蛋白时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制

目的研制人甲胎蛋白(hAFP)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒.方法采用双抗体夹心法建立AFP TRFIA 试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价.结果试剂盒的可测范围为l～1 000 U/ml,灵敏度为0.17 U/ml,精密度良好,批内和批间的精密度分别为3.3%～5.9%,3.7%～6.5%.与CEA、CA12-5、CA19-9、CA15-3、白蛋白无交叉反应.稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年,37℃稳定7 d.426份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0～12 U/ml.用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测60份血清标本,其相关系数为0.995.结论试剂盒各项指标(灵敏度、精密度、特异性、稳定性、准确度)均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒.     

Luminex液相芯片同时检测tPSA和fPSA方法的建立与评价

 目的 建立用Luminex液相芯片技术同时测定前列腺特异性抗原（total prostate specific antigen,tPSA）和游离前列腺特异性抗原（free prostate specific antigen,fPSA）的方法,并对该方法进行评价。方法 制备抗体交联微球及藻红蛋白标记二抗,用双抗体夹心法对临床血清标本进行测定,并与ELISA方法进行比较。结果 Luminex液相芯片技术同时测定tPSA、fPSA与ELISA测定结果高度相关。Luninex方法测定tPSA的灵敏度为0.03 ng/L,批内精密度为4.38%~5.86%,批间精密度为3.40%~6.73%;测定fPSA的灵敏度为0.013 ng/L,批内精密度为5.08%~7.94%,批间精密度为3.77%~5.74%。结论 Luminex方法同时测定tPSA、fPSA具有灵敏度高、重复性好、系统误差小等优点,具有广泛的临床应用前景。     

液相芯片技术定量检测人血清PSA反应模式的建立

目的 建立利用液相芯片技术定量检测人血清中前列腺特异性抗原的反应模式,并对该方法进行评价.方法 应用液相芯片技术检测50例前列腺增生患者血清中的前列腺特异性抗原(PSA),评价该方法的线性范围、最低检测限、精密度等指标,并将结果与化学发光免疫分析法(CLLA)进行相关性分析.结果 液相芯片技术检测PSA标准曲线的线性范围为0.022～129.6ng/mL,PSA的最低检测限为0.018ng/mL,检测PSA的批内CV为2.18%～2.28%,批间CV为1.61%～4.18%.用液相芯片技术和化学发光法分别对受检血清标本进行PSA定量分析,结果表明两法差异无显著性(P>0.05),r=0.9984,相关性良好.结论 液相芯片技术具有线性范围广、灵敏度高、重复性好、节省样品和时间等优点,具有临床应用潜力.     

人甲胎蛋白时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制

目的 研制人甲胎蛋白(hAFP)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒。方法 采用双抗体夹心法建立AFP TRFIA试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果 试剂盒的可测范围为1~1 000U/ml, 灵敏度为0.17U/ml,精密度良好,批内和批间的精密度分别为3.3%~5.9%,3.7%~ 6.5%。与CEA、CA12-5、CA19-9、CA15-3、白蛋白无交叉反应。稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年,37℃稳定7d。426份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0~12U/ml。用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测60份血清标本,其相关系数为0.995。结论 试剂盒各项指标(灵敏度、精密度、特异性、稳定性、准确度)均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

用液相芯片技术定量测定人血清CEA、AFP和HBsAg

【目的】采用液相芯片技术同时定量测定人血清中癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）和乙肝表面抗原（HBsAg），并对该方法进行评价。【方法】制备抗体交联微球及生物素标记抗体，用双抗体夹心法对临床血清标本进行测定。[结果]同时检测CEA、AFP和HBsAg时的线性范围分别为0．032-200ng／mL、0．022-55U／mL、0．26—1000ng／mL，最低检测限分别为8．90pg／mL、0．013U／mL、0．24ng／mL，批内变异系数（cv）〈9％，批间CV〈14％。检测CEA、AFP、HBsAg的灵敏度分别为96．4％、95．8％、92％，特异度分别为95．6％、94．2％、100％，准确度分别为96％、95％、96％。其检测结果与化学发光免疫分析法（CLIA）或时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）之间呈显著的等级相关关系。该方法仅需1μL标本，3h即可完成检测。【结论】液相芯片技术具有可联合检测多项指标、高通量、线性范围广、灵敏度高、重复性好、节省样品和时间等优点，具有临床应用潜力。     

f/tPSA比值和cPSA值在血清PSA水平中度升高时对前列腺癌的诊断作用

目的探讨血清前列腺特异性抗原(PSA)水平中度升高时(4.0～10.0 ng/ml),游离PSA(PSSA)与总PSA(tPSA)比值(f/tPSA)和结合PSA(cPSA)在前列腺癌(PCa)诊断中的作用及区分PCa和前列腺增生(BPH)的能力.方法采用酶联免疫荧光分析方法,在28例PCa患者和33例BPH患者中,选择tPSA值在4.0～10.0 ng/ml范围的血清标本,分别检测、计算fPSA和cPSA,分析tPSA、f/tPSA、cPSA的临床意义.结果当血清tPSA在4.0～10.0 ng/ml时,f/tPSA比值在PCa和BPH两组患者中有非常显著性差异(P＜0.01),明显地提高了PCa诊断的特异性;而cPSA在PCa和BPH两组患者中无显著差别(P＞0.05).结论当血清tPSA在4.0～10.0 ng/ml时,在区分、诊断PCa和BPH上,f/tPSA比值明显优于tPSA,而cPSA并不优于tPSA.     

AFP电化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种快速、特异、灵敏的检测人甲胎蛋白(AFP)的电化学发光免疫分析法。方法用链霉亲和素包被的磁性微粒、生物素标记的抗AFP单克隆抗体、钌复合物标记配对的抗AFP单克隆抗体组成AFP电化学发光免疫分析法试剂,在电化学发光免疫分析仪上对其准确性、灵敏度、特异性等效能进行方法学评价,同时用所建方法与进口的同类电化学发光免疫分析法试剂(Roche)对80例肝癌患者血清AFP检测结果进行相关性分析。对218名健康志愿者血清AFP进行了正常值调查。结果自建电化学发光免疫分析法检测AFP的批内精密度在2.8%～4.5%之间,批间精密度在3.2%～9.8%之间,分析灵敏度为0.605ng/ml。与进口同类试剂比较,直线回归方程为y=0.9936x-0.4566(r=0.9877,P<0.05)。分析测量范围为0.605～1452.0ng/ml,自建试剂与CEA和CA199无交叉反应。自建电化学发光免疫分析法检测AFP的正常参考值为<6.7ng/ml。结论自建AFP电化学发光免疫分析法特异性高,灵敏度好,与进口同类试剂检测结果相关性达0.9877。确定的实验室正常参考范围接近进口同类试剂,具备产业化的潜能。     

鼻咽癌组织中的癌胚抗原

应用未标记免疫酶技术(PAP法)显示94例鼻咽癌和52例慢性鼻咽炎组织切片中的癌胚抗原(CEA)。鼻咽癌的CEA阳性率为28.7％,分化差的腺癌CEA阳性率(53.8％)显著高于分化差的鳞癌(17.6％),未分化癌失去产生CEA的能力。CEA含量与癌瘤分化程度有关。分化好的鳞癌角化区域和慢性鼻咽炎中正常鳞状上皮CEA阳性反应可能是抗CEA血清与角质或前角质物质交叉反应的结果。鼻咽假复层纤毛柱状上皮CEA阳性率为35.7％(15/42),似与鼻咽的粘膜炎症轻重有关,本组轻度炎症者仅10例CEA均为阴性。本文还对鼻咽癌组织中CEA出现的生物学意义作了初步分析。     

癌胚抗原和糖类抗原测定在胸水诊断中的价值

目的:探讨测定血清和胸水中糖类抗原(CA153、CA199、CA125)、癌胚抗原(CEA)对鉴别良恶性胸水的价值。方法:采用放射免疫分析法,测定良恶性胸水患者的血清和胸水CA153、CA199、CA125、CEA进行比较。结果:恶性胸水患者的血清和胸水中CA153、CA199、CEA均高于良性胸水[差异有极显著性(P<0.01)],血清CA125在良性组和恶性组差异无显著性,而胸水CA125在两组中差异有极显著性(P<0.01)。结论:联合检测CEA和糖类抗原有助于提高良恶性胸水的鉴别诊断。     

肾癌增殖细胞核抗原的研究

为探讨肾癌的生物学行为及预后，采用免疫组化ＡＢＣ法对５３例肾癌组织中ＰＣＮＡ进行检测，取６例肾错构瘤及正常肾组织作为对照。结果发现：肾错构瘤中未见ＰＣＮＡ着色，在正常肾组织中仅见少许细胞着色，而肾癌所有切片均呈阳性反应。肾癌组织的ＰＣＮＡ表达与肿瘤分期、分级均相关，ＰＣＮＡ高表达组（３～４级）术后５年生存率显著较ＰＣＮＡ低表达组（１～２级）短。ＰＣＮＡ可定量地判断肿瘤分化程度及恶性度，可作为肾癌预后判断的独立指标     

增殖细胞核抗原和脑缺血损伤

增殖细胞核抗原(PCNA)是真核生物复制复合体的核心成分,为DNA合成所必需。此外它与多种蛋白结合,参与了DNA修复、DNA甲基化、染色体重塑、细胞周期调控和凋亡等许多细胞重要事件。脑缺血后出现神经元细胞DNA修复、胶质细胞增生以及细胞凋亡等,PCNA在其中发挥了重要作用,因此受到人们的广泛关注。兹将PCNA的分子生物学特点、功能及其在脑缺血损伤中的作用简要综述。     

支气管肺泡灌洗液中癌胚抗原检测对肺癌诊断的意义

本文用放射免疫法(RIA)检测了33例原发性肺癌患者,28例肺良性疾病对照者支气管肺泡灌洗液(BALF)中癌胚抗原(CEA)含量(对10例肺癌及6例炎症者同时灌洗了对侧健肺),另外测定了13例肺癌患者血清CEA水平。结果显示肺癌患者BALF中CEA明显高于良性疾病对照者,同一癌症病人患肺明显高于健肺(P<0.01,P<0.001);以对照组中P_(95)为界值时,BALF中CEA的敏感性是66.67％,特异性为95.24％,对肺癌诊断正确率为82.67％。13例肺癌病人BALF及血清CEA阳性率分别为69.23％和30.77％,前者明显高于后者(P<0.05)。检测BALF中CEA对肺癌早期诊断较血清检测更有意义。     

组织多肽特异性抗原细胞角蛋白19和癌胚抗原联合检测在肺癌诊断中的临床意义

目的评价组织多肽特异性抗原(TPS)、CYFRA21-1和癌胚抗原(CEA)在各种病理类型肺癌中诊断的应用价值,通过联检观察它们在肺癌诊断中的敏感性和有效性.方法收集血清标本127例,其中肺鳞癌22例,腺癌19例,小细胞肺癌16例,不能分型肺癌组13例,肺部良性疾病组27例和正常对照30例.采用酶联免疫吸附试验进行检测.结果TPS、CYFRA21-1和CEA在肺癌各病理类型组的血清水平与正常对照组有差异(P＜0.05),TPS和CEA在肺癌各病理类型组的血清水平高于良性病变组(P＜0.05),CYFRA21-1在肺癌各病理类型组的血清含量与肺癌良性疾病组无差异(P＞0.05).TPS在肺癌组的灵敏度最高,为85.7%,在肺部良性病变组的灵敏度为29.6%,TPS在肺癌各病理类型组的灵敏度无差异(P＞0.05),其特异性为78.9%.CYFRA21-1和CEA在肺癌的灵敏度分别为27.1%和22.8%,CYFRA21-1在肺鳞癌中灵敏度最高36.4%,CEA在肺腺癌中最高为31.6%.TPS、NSE,CYFRA21-1和CEA三项联检,可明显提高肺癌诊断的灵敏度,但同时特异性有所下降.结论TPS在肺癌诊断上灵敏度较高,但特异性较差,不宜单独用于肺癌诊断.CYFRA21-1和CEA在肺癌诊断上灵敏度较低,但特异性强,在肺癌诊断上有一定的参考价值,上述3项标志物联检可提高肺癌的检出率,有一定的临床价值.     

刚地弓形虫低毒DX-STAg对鼠小胶质细胞的影响

目的:初步探讨刚地弓形虫低毒(T.gondii)DX株-速殖体可溶性抗原(STAg)对小胶质细胞的影响。方法:采用流式细胞术,对不同处理组小鼠小胶质细胞及神经元细胞的凋亡情况进行了分析。并应用原位TUNEL法检测了不同处理组小鼠的小胶质细胞凋亡情况。结果:Tp、TpTi(颅内注入T.gondii)鼠小胶质细胞凋亡数均值约为4个/hpf,高于正常鼠。Tp鼠,凋亡神经元占66%。Tp、TpTi鼠小胶质细胞无NO阻断剂(1-NAME)处理:神经元凋亡分别占60%和71%;而Tp、TpTi小胶质细胞有NO阻断剂(1-NAME)处理:神经元凋亡分别占20%和23%。结论:T.gondii低毒DX-STAg刺激后,所产生的小胶质细胞具有神经毒性。且NO抑制剂能显著性阻断Tp、TpTi鼠小胶质细胞对神经元的凋亡效果。     

卫氏肺吸虫重组抗原的制备及初步应用研究

目的：纯化重组细菌Pw-1／pRSET B／BL21的表达产物肺吸虫重组抗原，复性后以ELISA法检测肺吸虫病患者、其他寄生虫病患者和正常人血清，评价其敏感性、特异性和应用前景。方法：通过分步洗涤及透析对细菌重组蛋白进行初步纯化．进一步做快速液相层析纯化，比较前后两法的纯化效果。初步纯化产物经氧化／还原型谷胱苷肽复性后即为重组蛋白抗原(以下简称重组抗原)。用该重组抗原，以ELISA法检测肺吸虫、血吸虫、肝吸虫、囊虫和包虫病患者以及正常人血清中相应抗体，并与卫氏肺吸虫粗抗原做比较。结果：经分步洗涤及透析纯化后的重组抗原纯度已较高，快速液相层析进一步纯化效果不明显。以初步纯化后经复性的重组抗原进行ELISA法检测肺吸虫病患者血清，敏感性为91．07％，与其他寄生虫病患者和正常人血清均无交叉反应；粗抗原检测肺吸虫病患者血清敏感性虽为100％，但与其他寄生虫病患者和正常人血清交叉反应率分别为：血吸虫病11．43％，肝吸虫病4．84％，囊虫病3．22％，包虫病5．88％，正常人为2．5％。结论：研究制备的重组抗原应用于肺吸虫病的免疫诊断特异性较高。     

胃癌增生细胞核抗原（PCNA）指数的研究

对２０例胃癌的石蜡包埋组织作了增生细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的单克隆抗体ＰＣ１０的免疫组织化学染色，并计算ＰＣＮＡ指数，结果表明：分化好的腺癌的ＰＣＮＡ指数高于分化差的腺癌，其差别有非常显著性意义（Ｐ＜０．０１），而有转移组与无转移组胃癌的ＰＣＮＡ指数差别无显著性意义（Ｐ＞０．０５）．提示ＰＣＮＡ指数不能作为评价胃癌恶性程度和生物学行为的指标。     

HCV抗体阳性样品核酸及核心抗原检测分析

目的 对90份临床检测为丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)阳性样品检测其核心抗原(HCV-cAg)、荧光定量PCR,观察3者间的相关性.方法 采集临床诊断为HCV-Ab阳性样品90份,分别用市售的HCV-cAg检测试剂盒、荧光定量PCR 检测试剂盒、HCV-Ab检测试剂盒进行3种指标的检测复核.结果 90份临床HCV-Ab阳性样品,检出HCV-cAg阳性 25份(27.8%),荧光定量PCR检出67份阳性(74.4%),抗体复核阳性的75份(83.33%);检出率HCV-Ab(83.33%)>荧光定量(74.4%)>HCV-cAg(27.8%).结论 丙肝的3种标志物之间存在一定的联系,但不同试剂的检测结果间存在明显差异.