用Streamline SP从大肠杆菌中初步分离纯化anti-HBsAg Fab最适吸附条件的选择及验证

目的 选择阳离子交换介质Streamline SP分离纯化anti-HBsAgFab的最适吸附条件。方法试管法分别测定平衡缓冲液在不同DH和不同离子强度下,阳离子交换介质Streamline SP对预分离纯化蛋白的吸附效果。用l mlSP预装柱及自装28 ml Streamline SP柱进行离子交换层析以验证吸附效果。结果NaAc-HAc作为平衡缓冲液在pH4．4、离子强度100-600mmlo/L可以使阳离子交换介质Streamline SP与蛋白吸附达到最佳效果。在该条件下用l ml SP预装柱及自装28ml SP柱进行离子交换层析,均验证了这一吸附效果。结论试管法选择的离子交换层析的最适吸附条件用于从大肠杆菌中初步分离纯化anti-HbsAg Fab切实可行。     

IEST诊断肺吸虫病的影响因素及诊断价值的进一步研究

以肺吸虫童虫、成虫冰冻切片抗原与１４例痰卵阳性血清作免疫酶染色试验（ＩＥＳＴ）因素的观察。其最适切片厚度为６μｍ，４℃、３０天抗原片的反应性下降不明显，－３０℃、１８０天抗原片的抗原反应性不减。血清量、血清孵育时间、酶结合物作用时间、试液离子强度及酸碱度均能影响试验结果。童虫、成虫冰冻切片抗原作ＩＥＳＴ诊断肺吸虫病，均呈现较高的敏感性、特异性及较低的交叉反应性，值得现场推广。     

一种检测巨噬细胞内NADPH氧化酶活性的新方法

目的 建立一种检测活细胞内ＮＡＤＰＨ氧化酶活性的新方法。方法 用超氧离子物荧光探针ＨＥ标记巨噬细胞后,在激光扫描共聚焦显微镜 最适发射波长为５３０ｎｍ的检测器１检测巨噬细胞内ＨＥ的荧光强度变化。结果 检测器１可检测单个和多个巨噬细胞内ＨＥ的荧光强度变化,ＰＭＡ刺激后巨噬细胞内ＨＥ荧光强度增强,ＮＡＤＰＨ氧化酶和 高,地塞米松使巨噬细胞内ＨＥ荧光强度减弱,ＮＡＤＦＰＨ氧化酶活性降低;经地塞米松处理０     

骨髓中核酸荧光测定方法的研究

在本实验条件下,EB与DNA及骨髓匀浆络合物的荧光光谱完全一致;标准DNA或RNA含量与荧光强度呈线性相关;DNA回收率为99.5％;方法灵敏度0.025μg/ml;最适pH范围5.5～7.7;离子强度范围0.073～0.292M;温度范围15～37℃。10只正常成年大鼠骨髓的DNA均值为15.2μg/mg骨髓,RNA为3.0μg/mg骨髓。此法亦可测定白细胞DNA含量。     

大鼠坐骨神经复合动作电位参数分析

用细胞外记录技术,记录了电刺激大鼠腓肠神经引起的坐骨神经复合动作电位,测量与分析了有关刺激参数与动作电位参数.结果表明,电刺激可依次引起 Aα、Aβ、Aγ、Aδ和 C 波。A 波最明显,C波最小并呈双相;A 波的(?)强度、最适强度、幅度和传导速度等参数与 C 波的相应参数之间具有极显著的差异;A 波各亚成分的传导速度之间亦具有极显著的差异;动作电位的幅度与传导速度、刺激参数的(?)强度与最适强度之间具有正变关系;(?)强度、最适强度与传导速度或幅度之间呈指数负相关.结果提示,复合动作电位各成分的传导速度是说明和区分纤维类别的基本依据,幅度、阈强度和最适强度等参数在说明和区分纤维类别上也具有一定的理论与实用价值.     

应用BL-310生物机能实验系统测定骨骼肌的绝对不应期

目的建立测定骨骼肌的绝对不应期的实验方法。方法单刺激法确定其腓肠肌最适刺激强度,在最适刺激强度下以双刺激法逐渐缩小波间隔(400ms开始),并记录肌肉收缩的幅度,直到双刺激下肌肉收缩的幅度与单刺激法的相同。结果该方法测定的骨骼肌绝对不应期接近0·8ms。结论该方法简单、直观,可用于本科生及本硕生的机能实验课教学。     

重组腺苷蛋氨酸合成酶酶促反应条件的研究

目的：对重组腺苷蛋氨酸合成酶催化L-蛋氨酸（Met）和三磷酸腺苷（ATP）合成腺苷蛋氨酸的反应条件进行研究。方法：将重组腺苷蛋氨酸合成酶制成粗酶液,对其酶促反应条件进行研究和优化,摸索反应的最适pH值、最适反应时间及最适酶量,解决产物抑制问题和产物分解问题。根据试验摸索的条件进行450L生物反应罐的中试放大。结果：重组腺苷蛋氨酸合成酶催化Met和ATP合成的反应最适pH值为7．0,反应时间为8h,选择硼酸钠-硫酸缓冲液作为反应的缓冲系统,确定了反应液中酶液的最佳比例为1：10,解决产物抑制问题的对甲苯磺酸钠的用量为9％。将镁离子和钾离子的盐酸盐形式改为硫酸盐形式,从而保证了最小限度的产物分解。中试放大结果：三批收率分别达到86．8％、87．1％和88．4％。结论：建立了重组腺苷蛋氨酸合成酶酶促反应的方法,为酶促法合成腺苷蛋氨酸大规模生产奠定了基础。     

GC/MS大口径柱快速测定毒鼠强质谱指纹图谱研究

目的:建立毒鼠强的选择性离子检测的质谱指纹方法,提高气相色谱联用法(GL/MS)测定毒鼠强的灵敏度,保证了质谱定性,定量的准确性。方法:通过对色谱柱分离的试验比较,通过标准试验,溶剂试验,不同样品基质试验等,借鉴国际残留监控技术,根据保留时间毒鼠强裂解的特征离子碎片及比例,建立较大口径毛细管柱快速测定毒鼠强的选择离子检测的质谱指纹方法色谱-质谱技术。结果:色谱保留时间为3.66min,特征鉴定离子为212、240、132、92、121,定性方法依据离子丰度比例及质控措施。结论:灵敏度比普通气质联机高约1000倍,附加的质控措施在保证“高灵敏度”的同时也保证了质谱定量的准确性。     

一种检测巨噬细胞内NADPH氧化酶活性的新方法

目的建立一种检测活细胞内ＮＡＤＰＨ氧化酶活性的新方法。方法用超氧离子物荧光探针ＨＥ标记巨噬细胞后,在激光扫描共聚焦显微镜下,用最适发射波长为５３０ｍｍ的检测器１检测巨噬细胞内ＨＥ的荧光强度变化。结果检测器１可检测单个和多个巨噬细胞内ＨＥ的荧光强度变化,ＰＭＡ刺激后巨噬细胞内ＨＦ荧光强度增强,ＮＡＤＰＨ氧化酶活性升高;地塞米松使巨噬细胞内ＨＥ荧光强度减弱,ＮＡＤＰＨ氧化酶活性降低：经地塞米松处理０．５ ｈ, ＰＭＡ刺激引起的巨噬细胞内 ＨＥ荧光强度增强幅度减小, ＮＡＤＰＨ氧化酶活性变化减小。结论激光扫描共聚焦显微术结合荧光标记技术可原位实时观察活细胞内ＮＡＤＰＨ氧化酶活性的变化。     

凝聚胺交叉配血试验

凝聚胺试验应用于血库作业上,进行血型鉴定、交叉配血、完全抗体与不完全抗体的筛选,其灵敏度、特异性远高于其他介质1倍～250倍,方法简单快速,因此,陆续取代了盐水,木瓜酶试验.其原理是利用低离子溶液降低离子强度,加速分子运动,减弱红细胞静电斥力,缩短红细胞间距,促进红细胞抗原和血清(血浆)中抗体结合发生非特异凝集,当附加假凝集清除液后非特异凝集立即散开,而由抗原抗体反应引起的特异性凝聚将依然存在.由此,检出完全抗体或不完全性抗体.     

人类DNA高重复顺序复性产物某些特性的研究

本文对正常人淋巴细胞DNA的高重复顺序某些特性进行了研究。应用复性动力学方法分离了重复顺序并观察了复性后顺序的稳定性。经热复性处理后形成的高重复顺序极易交织成网状结构。这些网状结构在高离子强度溶液(0.4M磷酸盐缓冲液)中通常是稳定的,但若离子强度降低,特别是以透析法除去磷酸根离子,能使网状结构拆开;而镁离子对这些网     

凝聚胺交叉配血试验体会

1实验原理 凝聚胺试验应用于血库作业上，进行血型鉴定、交叉配血、完全抗体与不完全抗体的筛选，其灵敏度、特异性远高于其他介质1倍-250倍，方法简单快速，因此，陆续取代了盐水、木瓜酶试验。其原理是利用低离子溶液降低离子强度，加速分子运动，减弱红细胞静电斥力，缩短红细胞间距，促进红细胞抗原和血清（血浆）中抗体结合发生非特异凝集，当附加假凝集清除液后非特异凝集立即散开，而由抗原抗体反应引起的特异性凝聚将依然存在。由此，检出完全抗体或不完全性抗体。     

凝聚胺试验在交叉配血中的应用

目的 通过临床使用凝聚胺试验,总结其优点和不足及影响配血的原因。促进医院输血工作的开展,使临床输血更加安全。方法 利用凝聚胺降低介质离子强度,减少红细胞周围的阳离子,促进抗原抗体结合。结果 通过临床使用和其它试验比较,凝聚胺试验法灵敏度较高。结论 凝聚胺试验相对更加敏感,快捷,了解其特点,才能使交叉配血更加准确。     

胞苷二磷酸胆碱酶促合成的研究

研究了胞苷三磷酸和磷酸胆碱在啤酒酵母磷酸胆碱胞苷酰转移酶催化作用下,直接合成胞苷二磷酸胆碱的反应条件,包括最适pH,底物浓度、镁离子浓度及反应时间的选择。在最适反应条件下转化率可达58%。此外,还测得了胞苷三磷酸的表观米氏常数K_M2×10~(-2)M,对酶的分离也作了初步的探索。     

ELISA检测HBsAg的非特异反应因素分析

目的　探讨乙型肝炎病毒表面抗原酶联免疫吸附试验中非特异性反应的形成原因。方法　采用酶联免疫吸附测定法检测固相载体、封闭剂、包被抗体与酶标抗体配伍、洗液离子强度对测定结果的影响。结果　进口微孔板的吸附性好于国产板 ,但非特异吸附也高于国产板 ;国产BSA作封闭剂非特异性反应高于进口BSA ;合适的包被抗体与酶标抗体配伍可提高反应的特异性 ;NaCl浓度为 0 15mol/L的PBS Tween作洗液可满足本系统要求。结论　固相载体、封闭剂的选择 ,包被抗体与酶标抗体的配伍 ,洗液离子强度均与非特异性反应的产生有关     

不同理化因素对肌肉疲劳影响的探讨

目的：探讨不同镁离子浓度、不同温度、前负荷对肌肉疲劳的影响及其可能机制。方法：制备蛙腓肠肌标本,在持续通氧灌流任氏液条件下,采用最大刺激强度,连续单刺激经过不同方法处理的蛙腓肠肌,以最大张力下降50％所需时间作为观察肌肉疲劳指标。结果：镁离子浓度为1mmol/L、10mmol/L均可延长蛙腓肠肌达到疲劳的时间,但作用效果不显著,镁离子浓度为5mmol/L对延长最大张力下降50％所需时间具有显著性作用（P＝0．05）。与正常对照组比较,前负荷分别为10g和20g组最大张力下降50％所需时间明显延长（P＜0．05）,但两实验组差异无统计学意义（ P＞0．05）。温度为7℃蛙腓肠肌最大张力百分比下降速率相对减缓,温度为37℃下降速率相对增加。结论：随着镁离子浓度上升,抗肌疲劳时间延长,达最适浓度时,作用最强。适当增加前负荷可延长抗肌疲劳时间,高温比低温更容易诱发肌疲劳。     

镧系离子荧光光谱法测定外周血DNA在肿瘤早期诊断中的应用

目的：探讨镧系离子荧光光谱法测定外周血DNA在肿瘤早期诊断中的应用。方法：各提取50例恶性实体瘤、良性肿瘤、骨髓异常综合征、正常人外周血DNA,应用镧系离子荧光光谱分析法检测其荧光强度。结果：恶性实体瘤、MDS、良眭肿瘤、正常人外周血DNA荧光强度分别为：346±28,308±34,280±34,276±29。恶性疾病和良性疾病之间荧光强度有统计学差异（P〈0.01）,且恶性疾病外周血DNA荧光强度均明显高于正常人及良性肿瘤患者。荧光强度282作为诊断恶性肿瘤的临界值,则其检测灵敏度和特异度分别为80％和72％。结论：镧系离子荧光光谱法测定外周血DNA在良、恶性肿瘤早期诊断中具有重要价值,是一种安全、简便、经济的诊断方法,并且具有较高的灵敏度和特异性。     

中药制剂中的混料问题及计算机辅助设计

配方配料问题,是中药制剂研究中经常遇到的问题,例如某种剂型产品的配方研究,各种基质成分的配比研究等等。如何通过安排较少次数的试验,就获得精度较高且易于计算的回归方程,来描述配方组份的数量百分比与试验指标(如粘着力强度、有效期)间的关系,以利于分析最适组份配比?这涉及一类特殊的回归试验设计——混料回归设计。     

改良木瓜酶介质输血相容性试验及临床应用

本文介绍一种筛选免疫性抗体的改良木瓜酶介质输血相容性试验。此法与传统的木瓜酶试验及低离子强度抗球蛋白试验同时检测免疫性Ｒｈ抗体（抗－Ｄ，抗－Ｃ抗－Ｆ，抗－ｃ的凝集反应强度（平均效价积分值），其结果没有显著性差异（Ｐ均）０．２０）。本法灵敏、快速、简便，也不需特殊设备，能与盐水法输血相容性试验同步进行，常规开展十分方便，临床应用效果较好，有一定推广价值     

大球盖菇液体发酵培养基的研究

目的:以菌丝生物量为指标,探讨不同碳氮源及碳氮比对大球盖菇液体发酵的影响。方法:单因子试验和正交试验。结果:适合大球盖菇液体发酵的培养基为:蔗糖2.25%、牛肉膏0.80%、玉米粉2.25%、黄豆粉0.60%、磷酸二氢钾0.30%、硫酸镁0.10%。结论:大球盖菇液体发酵的最适碳源为玉米粉、蔗糖,最适氮源为黄豆粉、牛肉膏。