人发角蛋白植入大鼠损伤脊髓部位的电镜观察

目的:脊髓外伤后的继发性病理改变,是影响脊髓神经组织再生修复的重要因素。采用人发角蛋白(humanhairkeratin,HHK)植入脊髓损伤(spinalcordinjury,SCI)部位,以期达到减轻继发性损害,诱导和促进损伤脊髓组织的再生。方法:采用改制Ⅱ型纽约大学(NewYorkUniversity,NYU)装置,在建立大鼠脊髓损伤模型基础上,将经过特殊处理后能在体内降解的HHK植入大鼠损伤脊髓部位,对植入后1,4,12,26周的损伤脊髓组织进行电镜观察。结果:第1周为急性炎症时期,HHK周围结构紊乱,集聚大量的炎症细胞,灰质出现坏死;第4周时,炎症细胞减少,巨噬细胞吞噬髓鞘,胶质细胞增生;第12周时,多核巨噬细胞出现在HHK周围,HHK开始崩解,崩解物被多核巨细胞所吞噬;第26周时,神经轴突沿HHK间隙排列生长,灰质中神经元数量增加,HHK周边细胞有序生长。结论:植入的人发角蛋白具有诱导神经胶质细胞增生,阻止脊髓空洞的形成,从而减轻了脊髓损伤组织的继发性伤害的程度,改善了神经元再生的外环境,并可以桥接诱导神经轴突定向再生的作用。     

生长分化因子5基因原核表达质粒构建和表达及其体内成软骨的诱导活性

背景:生长分化因子5在软骨、四肢和关节的发育、形成中起着重要作用,是目前最常应用的研究早期关节发育的标志分子.克隆人生长分化因子5基因可为软骨、关节缺损的修复奠定研究基础.目的:利用基因工程技术在大肠杆菌中表达人生长分化因子5成熟肽,探讨重组蛋白的体内诱导活性.设计、时间及地点:基因水平观察实验,于2006-01,06在南方医科大学分析测试中心完成.材料:人流产胚胎膝关节区软骨组织取自解放军广州军区总医院妇产科,标本获取征得家属同意.10只KM小鼠购自南方医科大学实验动物中心,雌雄各半,体质量18-22 g,6～8周龄.方法:通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从人胚胎软骨组织克隆生长分化因子5完整成熟肽基因,将所得基因片段插入pET22b(+)载体构建重组原核表达载体pET22b(+)-GDF5,重组质粒转化大肠杆菌BL-21进行IPTG诱导表达.凝胶介质镍离子螯合法纯化目的蛋白,植入小鼠后肢股部肌袋内常规苏木精-伊红染色进行生物学活性鉴定.主要观察指标:琼脂糖凝胶电泳观察目的基因表达条带,测序观察目的基因序列,SDD-PAGE电泳观察目的蛋白表达条带,组织学观察生长分化因子5诱导活性.结果:RT-PCR产物长约350 bp,阳性克隆质粒经双酶切可切出约350 bp的片段,测序表明与Genbank中的序列完全一致.SDS-PAGE电泳显示重组子转化菌在相对分子质量14 100位置处出现特异外源蛋白表达带,和成熟肽相对分子质量13 600接近.纯化后体内植入实验组织切片显示,大量的间充质干细胞聚集和增生,并分化成为成软骨细胞,分泌软骨基质并埋入其中变为软骨细胞.结论:通过RT-PCR法从人胚胎软骨组织中成功克隆出人生长分化因子5完整成熟肽基因,可在大肠杆菌中得到高效表达,经纯化后在动物体内具有成软骨诱导活性.     

人发角蛋白对冲击性大鼠脊髓损伤后神经髓鞘的影响

目的：探讨人发角蛋白对脊髓外伤性损伤后脊髓组织神经再生修复的影响。方法：本研究采用经过特殊处理后能在体内组织中降解的人发角蛋白(human hair keratin，HHK)作为植入脊髓损伤部位的桥接物，应用改制NYUⅡ型脊髓模型损伤装置，在建立大鼠脊髓冲击性损伤模型的基础上，将HHK植入损伤部位，用透射电镜进行观察植入HHK后4，12，26，52周的脊髓损伤组织。     

外源重组基因表达产物亚细胞定位的研究现状

目的：将外源基因通过重组然后在宿主细胞中表达,以研究其功能.资料来源：应用计算机检索Medlinel997-01/2004-12与外源基因重组表达产物亚细胞定位的相关文献,检索词“foreign recombined gene,subcellure location”等分别进行检索提炼,限定文献语种为English.资料选择：就检索到的500余篇资料进行初审,纳入标准：①有关外源基因重组策略.②与表达产物定位检测方法相关.排除标准：文献中重复研究、综述、Meta分析类文章.未排除文章中资料是否应用了随机、对照和盲法.资料提炼：共收集到80余篇关于外源基因重组表达后定位相关的文章.其中研究内容相似的,以近5年内发表在较权威杂志者优先.对符合标准的38篇文献进行分析.资料综合：外源重组基因在宿主细胞中表达后,可以通过多种方法进行亚细胞定位,如报告基因,免疫电镜,免疫荧光技术等,且大规模的外源重组基因亚细胞定位具有重要的意义.结论：因为外源重组基因表达产物的功能与其在宿主细胞中的定位有重要的关系,所以研究其在宿主细胞中的亚细胞定位,对研究外源重组基因表达产物的功能或未知新基因的功能来说有很重要的意义.     

应用组织工程化肌腱修复兔跟腱缺损

目的:由于肌腱来源受限及人工代用品力学性能差等缺点限制了临床肌腱损伤的修复,为此探索组织工程化肌腱修复兔跟腱缺损的可行性,以期为肌腱修复提供实验依据。方法:实验于2000-08/2001-12在第一军医大学中心实验室完成。30只新西兰白兔分为2组:人发角蛋白(HHK)组:用HHK材料修复兔跟腱缺损;组织工程化肌腱组:骨髓间充质干细胞(MSCs)与HHK在模拟微重力条件下形成细胞-材料复合体,修复兔跟腱缺损。采用组织学和免疫组织化学方法观察术后3,6和12周损伤肌腱的修复情况。利用分子生物学手段检测新生肌腱Ⅰ型胶原mRNA表达。结果:扫描电镜下可见MSCs-HHK组织工程化肌腱上有大量梭形的MSCs贴附生长,细胞平行排列,细胞间有突起相连。与HHK组相比,组织工程化肌腱组新生肌腱组织Ⅰ型胶原mRNA呈较高表达,腱细胞增生活跃,胶原纤维更为成熟。结论:在模拟微重力条件下以MSCs为种子细胞,HHK为支架材料构建的组织工程化肌腱能够有效地修复兔跟腱缺损。     

脊髓损伤模型的建立及其评价标准

脊髓损伤 (ｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙ ,ＳＣＩ)是非常严重的疾病 ,多见于交通伤和战伤等。最新的统计数字表明 ,美国每年有2 5万人罹患不同程度的ＳＣＩ,年发生率为 2 8～ 5 0 /百万人。由于脊髓是许多神经功能的中介通路 ,ＳＣＩ及其继发性病理生理反应可直接导致神经功能损伤 ,从而引起组织、器官功能障碍 ,致残率与致死率非常高。目前 ,对ＳＣＩ的治疗效果仍不佳 ,预后难以预料 ,原因是ＳＣＩ后的病理生理机制非常复杂 ,人们对此认识还很不全面、深入。为了寻求新的、更有效的治疗药物或方案 ,更透彻地阐明ＳＣＩ所涉及的复杂机…     

糖原诱出小鼠腹腔巨噬细胞的形态学及细胞化学研究

本实验用电镜及定量细胞化学技术证明糖原诱出的小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)体积增大,皱折和伪足增多。细胞质中吞噬体和溶酶体增多。酸性磷酸酶(AcPase)、非特性酯酶(ANAE)、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性增强,而5核苷酸酶(5Nase)活性则与对照组无明显差别。     

‘814’外用避孕药对体外人类精子形态影响的扫描电镜观察

用扫描电镜观察了‘814’外用避孕药对体外人类精子形态的影响,结果表明,此药能使精液凝固,精子头部形成结节状隆起以及精子卷尾等三种主要形态学改变。     

地塞米松诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡过程中[Ca^2＋]i的变化

目的 研究地塞米松诱导调亡小鼠巨噬细胞[Ca^2 ]i的变化及其对调亡的影响以及信使分子对凋亡和[Ca^2 ]i变化的影响。方法 激光扫描共聚焦显微术、流式细胞术和荧光标记术。结果 1、凋亡巨噬细胞内fluo-3荧光强度逐渐增强,胞内钙库受体抑制剂,尤其是Ca^2 内流阴断剂抑制钠fluo-3荧光强度变化,同时使细胞凋亡率降低;2、staurosporine 和DFcAMP显著降低巨噬细胞凋亡率并明显抑制fluo-3荧光强度改变。genistein和亚甲蓝落降低巨噬细胞凋亡率,并降低fluo-3荧光强度升高幅度。结论 1、胞外Ca^2 内流和内源性Ca^2 释放,主要是胞外Ca^2 内流使[Ca^2 ]i逐渐升高并促进巨噬细胞凋亡;2、PKC促进[Ca^2 ]i升高和巨噬细胞凋亡。cAMP抑制[Ca^2 ]i升高和巨噬细胞凋亡。cGMP、TPK降低[Ca^2 ]i升高幅度并稍抑制巨噬细胞凋亡。结果提示,[Ca^2 ]i是信使分子调控巨噬细胞凋亡的主要靶点。     

原生殖细胞的研究进展

原生殖细胞是来源于胚胎原始生殖嵴的一种具有多向分化潜能的干细胞 ,原生殖细胞的形态、标志及体内外分化潜能都类似于胚胎干细胞 ,而且也具有其种系传递能力。研究表明 ,原生殖细胞在胚胎发生中有其相对固定的迁移途径 ,细胞的迁增殖和分化受许多细胞因子的调控 ,原生殖细胞可表达某些特异的抗原 ,据此可对其进行鉴定 ,目前许多种属的原生殖细胞已建系 ,这必将有助于原生殖细胞的深入研究。原生殖细胞作为一种多能干细胞 ,对于体外研究胚胎发育、基因研究、基因组学研究、药物筛选等有重要意义