大黄三七散改善急性脑出血大鼠神经功能缺损的研究

研究中药大黄三七散对急性脑出血(ICH)大鼠的神经功能缺损改善的影响并探讨其分子机制。以肝素胶原酶Ⅳ法制作大鼠脑出血模型,考察了施药前后ICH大鼠神经功能评分、脑系数及脑含水量、脑匀浆中自由基释放量及抗氧化酶活力的变化及病理切片观察。结果表明,大黄三七散可明显改善ICH大鼠神经功能缺失症状,显著降低脑系数并减少脑含水量,施加大黄三七散后ICH大鼠脑组织自由基含量明显降低,而机体SOD及CAT抗氧化酶活力提高。改善效果明显呈剂量依赖效应。病理切片观察表明,与模型组相比,大黄三七治疗3个剂量治疗组ICH大鼠的脑组织病变、脑水肿及炎症细胞浸润情况均明显改观,神经细胞损伤亦显著减轻。大黄三七散的解毒、通络及抗氧化功效是改善急性ICH大鼠神经功能缺损的重要分子机制。     

川芎赤芍对脑缺血再灌注大鼠模型GFAP、VEGF及Notch1表达的影响

目的：本研究主要观察川芎赤芍对大鼠脑梗死再灌注后外周血胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、血管内皮生长因子（VEGF）和脑内Notch1表达的影响。方法：采用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型,将健康SD大鼠按随机数字表法随机分为空白组、模型组、川芎赤芍低剂量组、川芎赤芍高剂量组、银杏叶片组。采用ELISA法测定大鼠外周血GFAP、VEGF含量,采用real-time PCR法检测缺血脑组织Notch1 mRNA表达。结果：与模型组相比,川芎赤芍能够提高外周血GFAP、VEGF水平,上调脑组织Notch1 mRNA 的表达。结论：川芎赤芍可升高缺血再灌注大鼠外周血GFAP、VEGF的水平及缺血脑组织Notch1 mRNA的表达。     

葛根素注射液对蛛网膜下腔出血大鼠脑水肿及cAMP/PKA/AQP4通路的影响

目的:研究葛根素注射液对蛛网膜下腔出血(SAH)模型大鼠环腺苷酸(cAMP)/蛋白激酶A (PKA)/水通道蛋白4(AQP4)通路和脑部积水的影响。方法:将78只雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、葛根素注射液低、中、高剂量组(低、中、高剂量组)和阳性药组。除假手术组外,向其余各组大鼠枕大池注射股动脉血2次进行沉积,构建大鼠SAH模型,模型制备成功后假手术组和模型组腹腔注射生理盐水2 mL,低、中、高剂量组分别按50、100、200 mg/(kg·d)的剂量注射葛根素注射液,阳性药组按0.5 mg/(kg·d)的剂量注射地塞米松磷酸钠注射液。对大鼠进行神经功能评分、测定脑含水量、Elisa检测脑脊液中cAMP与PKA水平、RT-PCR与Western blot检测脑组织中PKA与AQP4 mRNA及蛋白水平。结果:与假手术组比较,模型组神经功能评分、脑含水量、脑脊液cAMP与PKA含量、脑组织PKA与AQP4 mRNA与蛋白水平均显著升高(P0.05)。与模型组比较,阳性药组、中、高剂量组神经功能评分、脑含水量、脑脊液cAMP与PKA含量、脑组织PKA与AQP4 mRNA及蛋白水平,低剂量组脑含水量、脑组织中PKA与AQP4 mRNA及蛋白水平均显著降低(P0.05)。与阳性药组比较,低、中剂量组神经功能评分、脑脊液cAMP与PKA含量、脑组织AQP4 mRNA及蛋白水平,低剂量组脑含水量、PKA mRNA及蛋白水平均显著升高(P0.05)。与低剂量组比较,中、高剂量组神经功能评分,高剂量组脑含水量、脑脊液PKA含量、脑组织PKA与AQP4mRNA及蛋白水平均显著降低(P0.05)。与中剂量组比较,高剂量组神经功能评分、脑组织中AQP4蛋白水平均显著降低(P0.05)。结论:葛根素可能通过调节cAMP/PKA/AQP4通路,降低AQP4的水通道作用,从而减少蛛网膜下腔积水,缓解SAH。     

大黄改善急性脑出血大鼠血脑屏障损伤的水通道蛋白-4机理研究

目的探讨大黄改善急性脑出血血脑屏障损伤的水通道蛋白-4（aquaporin-4,AQP-4）机理。方法采用立体定向注射自体无肝素动脉血制作大鼠脑出血模型,对神经功能缺损、脑含水量进行观察,伊文思蓝染色观察血脑屏障紧密连接（blood-brain barrier tight junction,BBBTJ）的损害,电镜观察不同时间点BBB和神经星形胶质细胞足突改变,用RT-PCR和Western blot检测AQP-4InRNA和蛋白表达。结果脑出血后,与模型组比较,大黄可明显减轻脑水肿;伊文思蓝染色结果显示血脑屏障从12h开始明显损害;电镜结果提示出血后12h血脑屏障紧密连接被破坏,而且神经星形胶质细胞足突肿胀;大黄可有效使血脑屏障紧密连接的破坏减少、神经星形胶质细胞足突肿胀减轻。脑出血模型组大鼠AQP-4表达出现增高（P〈0．05）;脑出血后1天AQP-4mRNA和AQP-4蛋白表达增强,第3天达峰值,其后逐渐有所下降。大黄可抑制AQP-4基因特录和翻译。结论大黄可通过改善血脑屏障损伤减轻脑水肿;大黄改善血脑屏障破坏的作用可能是通过抑制AQP-4基因转录和翻译实现的。     

冰黄五苓散对大脑中动脉闭塞模型大鼠的干预作用

目的：观察冰黄五苓散直肠滴注对于大脑中动脉闭塞(MCAO)模型大鼠的血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S100β蛋白、脑组织水孔蛋白4(AQP4)的影响。方法：将90只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、冰黄五苓散组。对各组大鼠不同时间点的神经功能缺损进行评分,采用干-湿重法测定脑组织含水量,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清NSE、S100β蛋白水平,采用免疫组织化学法检测脑组织AQP4表达。结果：冰黄五苓散组神经功能缺损评分、脑组织含水量明显低于模型组(P<0.05);冰黄五苓散组血清NSE、S100β蛋白、脑组织AQP4明显低于模型组(P<0.05)。结论：冰黄五苓散能够改善MCAO模型大鼠脑水肿情况,起到保护神经功能的作用。     

中西医结合对急性脑出血大鼠脑组织NSE、S100表达的研究

目的:观察急性脑出血大鼠的局部脑组织NSE、S100蛋白表达的变化,判断中风1号联合西药的疗效.方法:大鼠造模,中风1号联合西药进行干预,测定实验大鼠NSE、S100 mRNA水平的变化.结果:实验组与模型组比较,可明显降低NSE及S100蛋白水平(P＜0.05).结论:中风1号汤剂可明显的改善局部脑组织NSE、S100,同时具有保护神经组织,改善患者预后的作用,中西医药物联合治疗急性脑出血,效果肯定.     

基于生大黄、酒大黄对ICH大鼠的脑保护作用探讨“酒制升提”理论

目的:研究生大黄、酒大黄提取液对脑出血(ICH)模型大鼠脑保护作用的差异,探讨大黄"酒制升提"理论的内涵。方法:Wistar雄性大鼠建立ICH模型,用生大黄、酒大黄提取液进行干预,并随机分成6组(空白组、假手术组、模型组、生大黄组、酒大黄组、安宫牛黄丸组);脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)检测海马组织神经细胞凋亡的情况,免疫组化法检测出血侧脑组织紧密连接附着蛋白-1(ZO-1)和血管内皮钙黏蛋白-2(VE-cadherin-2)蛋白表达情况,蛋白免疫印迹试验(Western blot)检测出血侧脑组织还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶2(NOX2)和肿瘤坏死因子-α刺激基因6(TSG-6)蛋白的表达,全自动酶标仪检测ICH大鼠血清中还原型谷胱甘肽(GSH)含量;研究生大黄、酒大黄对ICH大鼠脑保护作用的差异。结果:与假手术组比较,模型组大鼠海马组织神经细胞凋亡指数显著增加(P 0. 01),ZO-1表达量显著下降(P 0. 01),NOX2蛋白表达量显著升高(P 0. 01),TSG-6蛋白表达量显著下降(P 0. 01),GSH的含量显著下降(P 0. 01);同模型组比较,酒大黄、生大黄均能显著降低ICH大鼠海马组织的神经细胞凋亡指数(P 0. 01),均显著升高ZO-1蛋白表达(P 0. 01),升高VE-cadherin-2蛋白表达(P 0. 05),显著降低NOX2蛋白的表达(P 0. 01,P 0. 05),显著升高TSG-6蛋白的表达(P 0. 05),显著升高GSH含量(P 0. 01)。结论:生大黄、酒大黄对ICH大鼠模型均具有脑保护作用,但酒大黄的脑保护作用略优于生大黄,为探讨大黄"酒制升提"理论提供了实验依据。     

针刺对实验性大鼠脑出血后灶周组织NF-kBp65表达和脑水含量的影响及其相关性分析

目的 探讨针刺对急性脑出血(Intracerebral hemorrage,ICH)后核转录因子-kB( NF-kBp65)动态表达及脑水含量变化的影响,并探讨两者的相关性.方法 实验选用Wistar健康雄性大鼠96只,随机将其中90只分为模型组、针刺组、西药组(茴拉西坦组).每组又分为6h、1天、2天、3天和7天5个时间点,每个时间点随机分配6只大鼠,另设6只大鼠做空白对照.制备ICH大鼠模型,采用蛋白免疫印迹技术观察针刺在不同时间点对ICH大鼠脑组织中NF-kBp65蛋白表达及脑水含量的影响,并对两者做相关性分析.结果 针刺组大鼠脑内NF-kBp65蛋白表达在不同时间点均有显著下调,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05),相关性分析提示,脑水肿与NF-kBp65表达呈正相关.结论 ICH后NFkBp65阳性表达是加重脑水肿的一个重要因素,针刺可下调ICH后血肿周围脑组织内NF-kBp65蛋白表达,减轻脑水肿程度,防治ICH后继发性脑损伤.     

MBP促进出血性卒中大鼠康复的作用机制研究

目的研究髓鞘碱性蛋白(MBP)对实验性脑出血大鼠神经保护作用机制。方法选择SD大鼠60只,脑出血造模成功后随机分为MBP组、磷酸盐缓冲盐水(PBS)组、卵白蛋白(OVA)组,每组30只。每天应用Longa五级评分法进行神经功能缺损评分,不同亚组按相应时间点取材,分别测定出血周围脑组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和脑源性神经营养因子(BDNF)的免疫组化评分。取脾组织制作匀浆,反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定Foxp3与β-actin的相对密度值。结果 MBP组在对应时间点神经功能缺损评分及GFAP和BDNF的表达均明显高于OVA组和PBS组(P0.05或0.01);OVA组与PBS组比较均无显著性差异。Foxp3mRNA在大鼠脾脏中的表达MBP组均明显低于OVA组和PBS组(P均0.01),OVA组与PBS组比较无显著性差异。结论 MBP对实验性脑出血后大鼠的行为学缺损有治疗作用,可减轻症状,上调BDNF、GFAP蛋白表达水平,降低Foxp3 mRNA的表达;对血肿周边神经元产生保护作用,促进中枢神经系统损伤的恢复。     

三七皂苷血清外泌体对脑出血大鼠炎症损伤干预的研究

目的：研究三七皂苷血清外泌体对脑出血（ICH）大鼠脑组织病理形态学改变及炎症因子表达的影响。探讨对ICH大鼠脑组织炎症损伤的保护作用。方法：采用随机数字表法将30只造模成功大鼠分为三七皂苷血清外泌体组、三七皂苷组、模型组,分别予三七皂苷血清外泌体（20μg/day）、三七皂苷（100mg/kg）、等体积生理盐水进行尾静脉连续注射10天,同期设立正常对照组。实验结束后,比较4组大鼠脑组织病理损伤程度,采用RT-PCR检测脑出血损伤周围组织中炎症指标核转录因子κB(NF-κB)、炎症小体3(NLRP-3)、白介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达水平,利用ELISA法检测脑组织匀浆中NF-κB、IL-6及IL1β含量。结果：与模型组比较,三七皂苷血清外泌体组、三七皂苷组均有不同程度的脑血肿吸收、炎性浸润减轻,且三七皂苷血清外泌体组的效果优于三七皂苷组。三七皂苷血清外泌体组炎症指标NF-κB、NLRP-3、IL-6、TNF-α及IL1β表达水平较模型组明显下调,且低于三七皂苷组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：三七皂苷血清外泌体作为生物活性物质可有效...     

艾灸温通温补效应的作用机制及其规律研究

本研究以灸法973项目的课题＂艾灸的温通温补效应规律及其原理研究＂为依托,围绕＂艾灸的温热刺激能产生温通温补效应＂这一假说,以脾胃虚寒型胃脘痛为疾病载体,遵循其＂脾胃虚寒、中阳不运＂的病机特点,拟定其＂健脾益胃、温通补虚＂的治疗原则,探讨艾灸温通与温补效应的作用机制,两种效应之间的关系以及效应规律的特点。研究结论：证实艾灸温通温补效应的作用机制为艾灸激活穴位（局部始动）,推动气血运行,调节神经-内分泌-免疫网络（调节通路）,调节脏腑功能（效应器官响应）。阐明艾灸温通、温补效应之间的关系为＂以温促通、以温达补,以通促补、以补促通,通中有补、补中有通、通补互用＂。初步揭示其效应规律的特点是通补性、特殊性、条件性、程度性、差异性和持续性。     

防风对大鼠和小鼠胃肠运动的抑制作用及机制研究

目的观察防风(RS)对大小鼠胃肠运动的抑制作用并探讨其机制。方法采用苯酚红测定法观察RS对小鼠胃肠运动的影响;制备大鼠结肠平滑肌肌条并放置在浴槽中,滴加RS及其他试剂并记录肌条的收缩曲线加以分析;分离并培养大鼠结肠平滑肌细胞,探针孵育后,不同缓冲液条件下测定NS及RS处理前后细胞的荧光值并加以分析。结果 RS各组对小鼠小肠推进和胃排空均有抑制作用;RS各组均抑制离体大鼠结肠平滑肌肌条收缩,抑制Ach引起的肌条收缩。RS剂量与峰高和同线下面积有量效关系。不同缓冲液对RS处理后的荧光值和抑制率有显著性差异。结论防风可抑制小鼠小肠推进及胃排空,抑制离体大鼠结肠平滑肌收缩,机制与肾上腺素能α受体及M胆碱受体有关,与阿片受体和β受体无关;防风可降低细胞内游离钙离子浓度,其机制与抑制细胞外钙离子内流有关,与抑制细胞内钙离子释放无关。     

黄芩苷的解热作用及对细胞因子的影响

目的:观察黄芩苷对酵母性发热大鼠的解热作用及对致热性细胞因子的影响,以探讨其对酵母性发热大鼠解热的可能机制.方法:sc酵母(2 g·kg~(-1))复制酵母性大鼠发热模型;大鼠随机分为对照组、模型组、黄芩苷高、中、低剂量组,观察药后各组体温变化;采用双抗体夹心ELSIA法测定发热高峰大鼠血浆、下丘脑及脑脊液中白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量.并将黄芩苷3个剂量组的温度变化率与IL-6,IL-1β,TNF-α含量变化率分别作相关性分析.结果:黄芩苷高剂量组较其他组能明显降低发热大鼠的体温,并且能降低大鼠血清、下丘脑、脑脊液中的IL-6,IL-1β,TNF-α含量.相关分析表明黄芩苷对大鼠的体温变化率与IL-1β在血清、下丘脑、脑脊液的变化率呈正相关(r=0.873,P＜0.05),与TNF-α的含量变化率也呈正相关(r=0.862,P＜0.01).结论:黄芩苷有明显的解热作用,其作用机制可能主要与减少TNF-α和IL-1β的含量有关.     

基于体质人格的经前期综合征发病与干预探析

特定体质人格与对应病邪间存在特殊的亲和能力,契合"同气相求"之论。随着生物医学模式向生物-心理-社会医学模式的转变,群体医学向着个体医学转变,因而群体中的个体差异性正受到越来越多的关注。作为生命科学的重要部分,中医体质学不仅注重调节人体整体机能,更加注重个体之间的差异性-体质。而体质作为人类生命活动的一种重要表现形式,实为特定躯体素质与一定心理素质的综合体。源自《黄帝内经》人格、体质相关描述,基于中医"形神合一"理念,中医体质人格论为疾病防治开辟出崭新视角。而现今女性高发病—经前期综合征,严重困扰患者生活各方面。而育龄女性的特殊体质早已把该病的研究点引至体质人格领域。本文力图对体质人格与经前期综合征的关系作出简要梳理,以期立足体质人格角度提供防治措施,改善个人体质,达到阴阳平衡的健康状态,贯彻"未病先防,已病防变"的"治未病"思想。     

《诸病源候论》对皮肤病学的贡献

对《诸病源候论》在皮肤病方面的成就进行了较为系统的整理总结 ,该书着重讨论了皮肤病的命名、分类、病因病机 ,并阐发了《内经》“邪之所凑 ,其气必虚”理论和预防为主的思想。     

长春新碱对人胃癌BGC细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的通过体内外水平研究长春新碱对人胃癌BGC细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法采用MTS法检测人胃癌BGC细胞的增殖情况;采用Hoechst荧光染色法、流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期的情况;通过Western blotting法检测BGC细胞内增殖、周期和凋亡相关蛋白表达情况;荷瘤裸鼠实验检测长春新碱抑制胃癌生长情况。结果长春新碱明显抑制BGC细胞的生长,其抑制率与药物浓度呈剂量和时间相关性,将细胞周期阻滞于G1期,并促进其凋亡,下调了细胞增殖和周期相关蛋白p-FAK、FAK、E2F1、Cylin E2、Cyclin D2、CDK2、CDK6的表达,并激活了凋亡相关蛋白Caspase-3。荷瘤裸鼠实验显示长春新碱能明显抑制胃癌生长。结论长春新碱通过下调细胞增殖与周期相关蛋白的表达,使细胞周期在G1期阻滞,同时激活Caspase-3诱导细胞的凋亡。     

P-糖蛋白及多药耐药相关蛋白1抑制剂促进天麻素跨膜转运作用机制研究

目的体外细胞模型法及分子对接法研究P-糖蛋白(P-gp)及多药耐药相关蛋白1(MRP1)抑制剂促进天麻素跨膜转运的作用机制。方法 MTT法考察天麻素对多药耐药基因1(MDR1)基因转染马丁达比犬肾上皮细胞(MDCK-MDR1)细胞的毒性,采用分子对接法预测天麻素与P-gp、MRP1结合方式及作用能力的强弱,MDCK-MDR1细胞模型分析天麻素的跨膜转运,以及P-gp抑制剂维拉帕米、MRP1抑制剂丙磺舒对天麻素跨膜转运的影响。结果天麻素在100~1 000μg/m L的质量浓度内对细胞无毒性;天麻素与P-gp通过氢键及疏水作用形成稳定的复合物,与MRP1通过氢键、疏水作用及静电作用形成稳定的复合物,Lib Dock Score表明P-gp-维拉帕米、MRP1-丙磺舒复合物的稳定性强于P-gp-天麻素和MRP1-天麻素;天麻素基底侧(BL)→顶端侧(AP)的表观渗透系数(Papp BL→AP)大于Papp AP→BL,外排率(ER)为1.5左右,提示天麻素在MDCK-MDR1细胞为被动转运,且转运过程可能存在蛋白外排现象;天麻素配伍维拉帕米Papp显著增大(P0.05),ER值显著减小(P0.05),天麻素配伍丙磺舒后Papp有所增大,ER有所减小,但无显著性差异。结论天麻素为P-gp底物,天麻素是否是MRP1的底物有待进一步考证,但维拉帕米及丙磺舒可通过竞争性结合P-gp和MRP1不同程度促进天麻素跨膜转运。     

神经内分泌和穴位刺激调节免疫及炎症机制研究进展

神经系统、内分泌系统与免疫系统之间存在错综复杂的关系。神经内分泌信号对免疫细胞活性和免疫应答起重要的调节作用。促肾上腺皮质激素、内啡肽生长激素、催乳素对免疫细胞活性和免疫应答起刺激性或增强性调节作用,而生长抑素起抑制性调节作用。躯体感觉神经可将刺激信号传导到脑干,然后激活传出迷走神经,抑制炎症反应。肠道神经元通过反射性调节肠道巨噬细胞功能调节炎症反应。血脑屏障通过调节免疫细胞通透性调节自身免疫性疾病的进展。通过电针穴位刺激连接大脑与肾上腺的迷走神经可以减轻机体炎症。     

刺络拔罐为主治疗头颈部带状疱疹疗效观察

目的:对比刺络拔罐配合艾灸与西药治疗头颈部带状疱疹的临床疗效.方法:治疗组35例在大椎等穴以及出疱疹处运用梅花针刺络拔罐并配合艾灸等治疗;对照组35例采取静脉滴注阿昔洛韦及外用阿昔洛韦霜治疗.结果:7天后治疗组愈显率为85.7%,优于对照组的51.4%(P＜0.01),且治疗组治疗3天后重、中度疼痛缓解率也明显优于对照组(P＜0.01).结论:刺络拔罐疗法配合艾灸等治疗头颈部带状疱疹,止痛明显,疗效显著,见效快.     

斯达芬宁(风痛灵)镇痛作用的研究

斯达芬宁1ml/kg,0.5ml/kg用于急性损伤家兔(冲击挫伤模型),能缓解损伤家兔的疼痛,减少损伤局部中性白细胞数,主要参与机体应激反应和炎症调节.为了研究斯达芬宁在镇痛上作用和机制,我们观察了斯达芬宁对小鼠热痛反应的影响和扭体反应的影响,发现斯达芬宁2.5ml/kg、1.25ml/kg体重给小鼠外用,能明显提高小鼠痛阈(热板法),明显抑制小鼠醋酸所致扭体反应,有一定的镇痛效应.