基因表达谱芯片与中医寒证的7类相关基因

目的：用基因芯片的前沿方法筛选寒证服用热药有疗效者的基因表达谱，探索寒证所涉及的相关基因类别。方法：精选典型寒证病例，对其治疗有明显疗效者，在治疗前后分别采外周血，提取血液中的mRNA，再逆转录为cDNA以备检测。采用2035条人的靶基因cDNA制备成基因表达谱芯片。用Cy3和Cy5两种荧光物质分别标记治疗前与治疗后cDNA，用其制备成探针与表达谱芯片进行杂交，通过计算机扫描后获得分子生物学信息，并进行数据分析。结果：初步筛选出了差异表达基因59条，涉及到与能量代谢、糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢、核酸代谢、免疫和内分泌等7类基因，并举例说明。结论：以疗效为科研起点，可将基因芯片切人寒证的整体辨证研究。     

利血平脾虚证模型海马基因表达谱变化的研究

目的　应用基因芯片技术研究利血平脾虚证大鼠模型海马基因表达谱的变化。方法　雌性Wistar大鼠 3 0只 ,按体质量均衡随机分为实验组和对照组 ,实验组用利血平注射液背部皮下注射 ,造模第 1～ 9天 0 .15mg/ (kg·d) ,第 10～ 12天 0 .2 5mg/ (kg·d) ,第 13天 0 .5mg/(kg·d)。对照组同法注射同量注射用水。两组均第 14天处死 ,取海马 ,提取总RNA ,逆转录为cDNA ,用Cy3和Cy5两种荧光物质分别标记两组大鼠海马组织的cDNA ,制成探针以备检测。选用 2张BioDoorChip 40 96基因表达谱芯片 ,将探针与芯片杂交 ,计算机扫描后 ,用GenePixPro3 .0软件进行分析。结果　筛选出 2张芯片上 40 96条靶基因中 ,与脾虚证模型基因差异表达一致的基因 51条 ,占检测基因的 1.2 5% ,其中表达下调的基因 3 7条 ,已知基因 8条 ;表达上调的基因 14条 ,已知基因6条。模型大鼠海马的基因表达改变涉及免疫、炎症反应、蛋白聚糖、细胞骨架、离子通道、信号传导等多方面。结论脾虚证实质涉及海马的基因表达谱改变 ,但与大脑皮质比较基因表达改变少     

用基因芯片研究桃仁蛋白A对小鼠纤维肉瘤基因表达的影响

目的:本研究用基因表达谱芯片研究桃仁蛋白A(PSPA)对小鼠纤维肉瘤基因表达的影响.方法:将4096条小鼠cDNA用点样仪点在特制玻片上制备成表达谱芯片,利用实验组和对照组肿瘤组织的mRNA通过逆转录方法,将Cy3和Cy5两种荧光分别标记到两种组织的cDNA上,制成cDNA探针,并与表达谱芯片进行杂交及扫描,重复2次实验.结果:通过计算机数据处理,筛出差异表达的基因64条.结论:PSPA通过影响相关基因的表达发挥抗肿瘤作用.     

益气化瘀方调控颈椎间盘细胞基因表达谱的研究

目的：分析正常、退变SD大鼠颈椎间盘基因表达水平的变化，研究益气化瘀方对大鼠退变颈椎间盘基因表达谱的调节作用。方法：建立动、静力失衡性大鼠颈椎间盘退变模型，分别从正常、退变和益气化瘀方组大鼠颈椎间盘中抽提mRNA，经反转录后分别用Cy3、Cy5荧光标记，获得动物椎间盘cDNA的探针，再与512点cDNA基因表达谱芯片杂交，激光扫描仪扫描并进行图像分析、标准化处理、ratio值分析、聚类分析。结果：模型组与对照组比较，共筛选出18条表达有差异的基因，11条基因表达量明显下降(ratio＜0．4)，7条基因表达量明显上升(ratio＞2．5)。益气化瘀方与模型组比较，共筛选出22条表达有差异的基因，益气化瘀方上调18条基因(ratio＞2．5)，下调4条基因(ratio＜0．4)。其中在上述检测中表达最明显的是信号传导类基因，益气化瘀方能够上调多数细胞信号传导类基因(如PTK等)。结论：初步筛选出大鼠迟变椎间盘中相关基因，与已报道基因在颈椎间盘退变的表达模式类似，说明大鼠椎间盘退变受到各种基因的调控，初步阐明了颈椎病在基因水平上的发病机理。益气化瘀方参与了椎间盘细胞内相关基因的调控，参与椎间盘细胞内外的信号传导过程，从基因表达角度解释了中药治疗颈椎病的药效机理，丰富了中医气血理论。     

利血平脾虚证模型大脑皮层基因表达谱变化的初步研究

目的：应用基因芯片技术研究利血平脾虚证大鼠模型大脑皮层基因表达谱的变化。方法：雌性Wistar大鼠30只，按体重均衡随机分为模型组和对照组，模型组用利血平注射液背部皮下注射。造模第1～9天：0．15mg／kgbw／天，第10～12天：0．25mg／kgbw／天，第13天：0．5mg／kgbw／天。对照组同法注射同量注射用水。第14天处死，取大脑皮层，提取mRNA，作逆转录为cDNA，制成探针以备检测。选用两张BioDoor Chip4096基因表达谱芯片，将探针与芯片杂交，计算机扫描后，用GenePixPro3．0软件进行分析。结果：筛选出两张芯片上4096条靶基因中，脾虚证模型基因差异表迭一致的基因145条，占检测基因的3．54％，其中已知基因表达上调的有27条，表达下调的有20条。并进行初步分析。模型大鼠大脑皮层的基因表达改变涉及免疫、细胞骨架运动、能量代谢、蛋白合成和细胞内信号转导等多个方面。结论：脾虚证实质涉及大脑皮层的基因表达谱改变。     

栀子苷对局灶性脑缺血大鼠脑组织基因表达谱的影响

目的 研究栀子苷对局灶性脑缺血大鼠脑组织基因表达谱的影响,探索栀子苷治疗脑缺血的药理作用机制．方法 分别从局灶性脑缺血组、栀子苷治疗组SD大鼠的脑组织中抽提总RNA,Cy3、Cy5荧光标记,反转录分别合成cDNA探针后,与含有4096条大鼠基因的BioStar基因表达谱芯片杂交,Axon Genepix 4000B扫描仪扫描,GenePixPro 3．0软件分析表达信号。结果 栀子苷治疗后差异表达的基因有70条,其中有68条基因上调,2条基因下调．结论 栀子苷对局灶性脑缺血大鼠脑组织基因表达具有调控作用,从分子水平阐释了中药清开灵注射液成分栀子苷的药理作用机制。     

芪莲茅根汤含药血清对大鼠肾小球系膜细胞凋亡相关基因表达谱的影响

目的利用cDNA基因表达谱芯片观察芪茅莲根汤含药血清干预后的大鼠肾小球系膜细胞基因表达水平的变化,通过诱导肾小球系膜细胞凋亡相关基因的表达谱变化,探讨其在凋亡信号转导途径中的机制。方法建立大鼠肾小球系膜细胞培养体系,用Trizol一步法、抽提法分别从正常对照组、含药血清组的大鼠肾小球系膜细胞中抽提mRNA,经逆转录后合成荧光分子(Cy3/Cy5)标记的cDNA探针,与含有11260个cDNA基因的大鼠12K基因表达谱芯片杂交,将图像导入分析软件Imagene进行图像分析,数据导入分析软件Genespring进行标准化处理,计算ratio值(两种荧光Cy3、Cy5的比值)。分析正常对照组、含药血清组之间差异表达的基因,对所获得的基因进行生物信息学分析。结果含药血清组与正常对照组中差异表达上调的基因147条、下调的168条;涉及参与细胞凋亡发生以及能量代谢、蛋白合成、信号转导和激活因子。与细胞凋亡相关的差异表达基因37条,占芯片基因总数的0.3286%,其中表达上调的21条(平均Ratio值为3.975),下调的16条(平均Ratio值为0.402);生物信息学分析表明,Bcl-2、Bak1、Caspase9、Timp1、Cdk5、Pdgfra、Igfbp5、Irf1等在芪莲茅根汤含药血清诱导大鼠肾脏系膜细胞凋亡的调控中发挥了重要作用。结论芪茅莲根汤含药血清诱导肾小球系膜细胞调亡涉及多个基因,通过细胞内、外信号传导途径共同调节完成,从而调控肾小球系膜细胞的增殖。     

黄芩苷对局灶性脑缺血大鼠脑组织基因表达谱的影响

目的 :研究黄芩苷对局灶性脑缺血大鼠脑组织基因表达谱的影响 ,探索黄芩苷治疗脑缺血的药理作用机制。方法 :分别从假手术组、局灶性脑缺血组、黄芩苷治疗组SD大鼠的脑组织中抽提总RNA ,Cy3 ,Cy5荧光标记 ,反转录分别合成cDNA探针后 ,与含有 4096条大鼠基因的BioStar基因表达谱芯片杂交 ,AxonGenepix 40 0 0B扫描仪扫描 ,GenePixPro 3 .0软件分析表达信号。结果 :大鼠局灶性脑缺血组差异表达的基因有 211条 ,其中 12条基因上调 ,199条基因下调。黄芩苷治疗后差异表达的基因有 177条 ,其中有 89条基因上调 ,而 88条基因下调。进一步分析发现 ,1个在模型组下调的基因经黄芩苷治疗后上调 ,3个在模型组上调的基因经黄芩苷治疗后下调 ,3个在模型组上调的基因经黄芩苷治疗后表达进一步增强。结论 :在基因组水平上黄芩苷可能通过多基因 ,多途径调节大鼠脑缺血基因表达谱而发挥药理作用。     

利血平脾虚证模型大脑皮层基因表达谱变化的初步研究

目的 :应用基因芯片技术研究利血平脾虚证大鼠模型大脑皮层基因表达谱的变化。方法 :雌性Wis tar大鼠 30只 ,按体重均衡随机分为模型组和对照组 ,模型组用利血平注射液背部皮下注射。造模第 1～ 9天 :0 .15mg/kgbw/天 ,第 10～ 12天 :0 .2 5mg/kgbw/天 ,第 13天 :0 .5mg/kgbw/天。对照组同法注射同量注射用水。第 14天处死 ,取大脑皮层 ,提取mRNA ,作逆转录为cDNA ,制成探针以备检测。选用两张BioDoorChip4 0 96基因表达谱芯片 ,将探针与芯片杂交 ,计算机扫描后 ,用GenePixPro 3.0软件进行分析。结果 :筛选出两张芯片上4 0 96条靶基因中 ,脾虚证模型基因差异表达一致的基因 14 5条 ,占检测基因的 3.5 4 % ,其中已知基因表达上调的有 2 7条 ,表达下调的有 2 0条。并进行初步分析。模型大鼠大脑皮层的基因表达改变涉及免疫、细胞骨架运动、能量代谢、蛋白合成和细胞内信号转导等多个方面。结论 :脾虚证实质涉及大脑皮层的基因表达谱改变。     

乙醇肝损伤小鼠肝脏的基因表达谱研究

 目的研究乙醇肝损伤小鼠肝组织的基因表达谱,筛选乙醇肝损伤相关基因,并探讨其肝损伤机制。方法①将实验小鼠分为正常对照组与乙醇肝损伤组,分别提取2组小鼠肝脏mRNA,经反转录后分别用Cy3,Cy5荧光标记,获得2组动物来源的cDNA探针;②cDNA探针与联合基因公司BiostarM-141S小鼠基因表达谱芯片杂交,结果由扫描仪扫描并用统计软件进行分析。结果与正常对照组相比,乙醇肝损伤组有117条基因发生差异性表达(0.83%),其中46条基因表达上调,另外71条基因表达下调。结论利用表达谱芯片结合实验动物模型能大规模、高通量地研究乙醇肝损伤相关基因,对进一步阐明乙醇对肝脏的损伤机制具有重要的意义。     

癌性发热的中医治疗

癌性发热的机理十分复杂,临床上常分为虚证和实证。治疗可分为肝气郁滞、阳明腑实、痰湿郁热、血瘀血热、阴虚发热、气虚发热、阳虚发热等证型辨治。但临床辨证不一定是某一个证型,可能是多个证型的叠加,必须辨明虚实,合理用药。     

推拿治疗颈椎病伴颈性心痛

笔者在临床实践中发现 ,由颈椎病引起的心前区疼痛 ,即颈椎心痛不为少见 ,尤以青壮年居多。近年来以治脊整复理筋手法治疗该病 5 0例 ,收到满意疗效 ,现报道如下。1　临床资料共治疗 5 0例 ,其中男 2 8例 ,女 2 2例 ;年龄最大者5 0岁 ,最小者 2 4岁 ,平均年龄为 31岁 ;病程最长者 16年 ,最短者 15d ;职业以从事会计、秘书、文职人员为多见 ;所有患者均有心前区疼痛 ,伴颈肩麻木疼痛 2 9例 ,头晕 13例 ,上肢无力 9例 ,高血压 16例 ,低血压 9例 ,多汗 11例。颈椎体棘突移位部位 :C3 移位 4例占8% ,C4移位 6例占 12 % ,C5移位 11例占 2 2 % ,…     

HPLC法测定解酒灵冲剂中葛根素的含量

应用ＨＰＬＣ法测定解酒灵冲剂中葛根素的含量，该方法简便、准确、重现性好，可作为该制剂控制质量标准的含量测定方法     

血府逐瘀汤治疗缺血性脑卒中

目的探讨血府逐瘀汤治疗缺血性脑卒中的临床疗效。方法选取160例缺血性脑卒中患者,按随机数字表分为治疗组与对照组,每组80例。对照组患者给予依拉达奉注射剂常规治疗,并加用脱水降颅压、减轻脑水肿、抗血小板、脑细胞保护、神经营养及维持水电解质平衡等;治疗组在对照组基础上加用血府逐瘀汤(当归、生地黄、桃仁、红花、枳壳、赤芍、柴胡、甘草、桔梗、牛膝、川芎等)进行治疗,比较2组患者在治疗后的临床疗效,NIHSS评分、Barthel指数以及中医证候积分等。结果治疗组总有效率为96.25%,明显高于对照组(77.50%),差异有统计学意义(χ2=13.438,P0.01);治疗组与对照组患者治疗后的临床疗效、NIHSS评分、Barthel指数以及中医证候积分与治疗前相比均显著降低,差异有统计学意义(P0.01);治疗组的NIHSS评分、Barthel指数以及中医证候积分均明显优于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。结论血府逐瘀汤治疗缺血性脑卒中能明显改善患者的症状,阻止脑缺血进一步发作,提高疗效,缩短疗程。     

中医分阶段治疗慢性胃炎HP阳性的临床观察

为观察中医分阶段治疗慢性胃炎幽门螺杆菌阳性患者的疗效。设治疗组４３例,对照组３７例。结果：临床症关均明显改善,治疗组优于对照组：ＨＰ转阴率,治疗组５８．１％,对照组４８．６％,组间比较无显著差异;治疗组对消退炎症,治疗前后比较有显著差异,对照组治疗前后比较则无明显改善;观察两组例对腺体萎缩、肠上皮化生、异型生方面,虽有改善作用但无明显疗效。提示分阶段治疗慢性胃炎ＨＰ阳性患者,能明显改善临床症状、减     

重症急性胰腺炎的中医药分期论治概况

根据重症急性胰腺炎病情演变的特点，应用中医理论进行分期论治，把整个病程分为初期、进展期、恢复期，按照各期的特点通过通腑泻下、清热解毒、活血化瘀、补益滋阴等方法，采用多种治疗手段，取得了很好的效果。     

足按摩治疗痔瘘术后尿潴留100例

痔瘘术后引起的尿潴留为创伤性尿潴留 ,又属于功能性尿潴留 ,祖国医学称之“癃闭”。我肛肠专科痔瘘手术后所产生的10 0例尿潴留患者进行了足反射区经穴按摩和新斯的明常规处置两组进行了对比观察 ,现报道如下。1　临床资料1 1　病例选择　本文病例均为住院病人 ,包括内痔、外痔、混合痔、肛裂、肛瘘、肛周脓肿等手术后所产生的尿潴留。为区分尿潴留的程度 ,本文以轻、中、重程度表示。轻度尿潴留 :手术后6ｈ～ 8ｈ左右 ,膀胱轻度充盈 ,有便意 ,但自行排不出 ;中度尿潴留 :手术后 9ｈ～ 14ｈ左右 ,膀胱中度充盈 ,有较强便意 ,但自行排不出。…     

留兰香油主要成分香芹酮和柠檬烯的GC含量测定及薄层鉴别

目的:建立留兰香油中的主要有效成分的测定方法。方法:采用Aglient6890N气相色谱仪,HP-5弹性石英毛细管柱(30 m×0.323 mm×0.25μm),氢火焰离子化检测器,气化室温度250℃,检测室温度280℃,进样分流比为20∶1,程序升温。采用正十一烷为内标对照品溶液。采用薄层色谱法对其主要成分进行定性鉴别。结果:留兰香油中柠檬烯质量浓度在41.7¹042.5μg·mL-1(R=0.999)间,香芹酮质量浓度在102.81042.5μg·mL-1(R=0.999)间,香芹酮质量浓度在102.8²570μg·mL-1(R=0.999)间均呈良好的线性关系,平均回收率分别为101.7%,103.0%,RSD值为1.92%和1.59%。薄层色谱清晰,空白对照无干扰。结论:含量测定方法简便,准确,稳定性高,能有效测定留兰香油中有效成分的含量。薄层鉴别专属性强,可用于留兰香油的定性鉴别。     

拉曼光谱研究两面针活性成分诱导肝癌细胞的凋亡

运用拉曼光谱法对两面针活性成分诱导的肝癌细胞凋亡进行分析,肝癌细胞7404分别经10 mg·L~(-1)氯化两面针碱及3 g·L~(-1)两面针提取液处理后,收集经药液处理12,24,36,48 h的各组细胞的拉曼光谱后,通过Hochest33342/PI荧光染色法鉴定细胞并保留荧光染色阳性(发生凋亡活细胞)的光谱,并在Origin Pro8.0系统中比较各组平均光谱的差异。收集肝癌细胞的拉曼光谱依次进行背景扣除、平滑、归一化等方法处理。Hochest荧光染色后空白组细胞核染色均匀,而药物处理48 h后,核碎裂,拉曼光谱结果显示两面针提取液处理肝癌细胞12,24,36,48 h后,与核酸及蛋白质相关的峰均有降低,其中785,1 002,1 175,1 660 cm~(-1)峰强度随两面针药物作用时间的延长而降低,表明两面针活性成分能够诱导肝癌细胞凋亡,凋亡的肝癌细胞中核酸和蛋白质的含量均低于活细胞。两面针活性成分作用时间与药效呈一定的相关性。拉曼光谱能够反映中药两面针活性成分作用后的肝癌细胞内物质变化的信息,对实时监测细胞凋亡过程及药物的临床应用具有重要意义。     

灸法治疗排卵障碍性不孕症的研究进展

不孕症是女性常见病，排卵障碍是导致女性不孕的主要原因之一，约占不孕症患者的25％～30％。一直以来，对于本病的治疗多采用西药如克罗米酚、中药内服等，但西药副作用大，而中药的治疗周期长，也是一个不争的事实。《灵枢．官针》日：“针所不为，灸之所宜”。《医学入门》也有“药之不入．