细胞因子及其组合对脐血基质细胞集落形成作用的比较

目的 观察细胞因子SCF、IL—3、BFGF及其不同组合对脐带血基质细胞集落形成的作用。方法 应用体外脐带血基质细胞贴壁培养的方法，分别加入不同的细胞因子，进行培养3周时的基质细胞集落计数和培养4周时贴壁细胞的增殖状态观察。结果 SCF BFGF、SCF BFGF IL—3对脐带血基质细胞的增殖具有明显的促进作用。结论 体外加入某些细胞生长因子对脐带血基质细胞具有明显的扩增作用，提示运用脐带血作为新的基质细胞来源在体外细胞因子组合的作用下扩增后进行回输，有望成为促进造血损伤修复的新措施。     

Sry监测体外扩增造血细胞植入效果的实验研究

目的：探讨Y染色体性别决定基因(Sry)作为评价和追踪造血细胞移植后植入状态检测指标的可行性。方法：根据Sry DNA序列设计引物及制备探针，然后进行PCR检测、斑点杂交和原位杂交．动态追踪经不同条件下体外扩增的纯系雄性小鼠BMMNC回输至雌性小鼠后的植入状态。结果：PCR结果显示在各移植组小鼠的骨髓有核细胞、脾细胞及外周血白细胞中均有Y染色体特异性序列的存在；斑点杂交结果显示在各回输组间并无明显差别，但用脾脏组织作原位杂交的结果则发现基质细胞支持扩增回输组的阳性颗粒数目与输注新鲜细胞组相似，但略少于雄性小鼠；而输注细胞因子扩增细胞实验组小鼠则明显少于雄性动物的阳性对照标本和基质细胞支持扩增回输组。结论：(1)经重复检测表明上述方法的重复性好，结果可信．可作为检测性别不同时造血干细胞移植效果的一种检测手段；(2)证实基质细胞支持下的体外扩增的造血细胞具有较好的植入能力。     

基质细胞对小鼠骨髓单个核细胞体外扩增的促进作用

目的 阐明基质细胞在造血细胞体外扩增中的作用。方法 采用骨髓基质细胞培养、骨髓单个核细胞（BMMNC）体外液体培养和各种造血相细胞集落培养技术,进行基质细胞支持条件下骨髓单个核细胞体外扩增的研究,并与单纯细胞因子支持下的细胞扩增进行比较。结果 在照射后细胞层存在的条件下,同时含有细胞因子组合的培养体系,对细胞总数和集落形成细胞数的扩增作用明显高于其它各组。结论 基质细胞对细胞因子作用下的造血细胞体外扩增有明显的促进作用。     

人骨髓基质干细胞克隆对脐血造血干细胞体外扩增作用的研究

目的：探讨人骨髓基质干细胞的克隆化培养及其对体外造血干细胞扩增的影响。方法：取正常肋骨分离骨髓，制备单个核细胞贴壁培养，约5d后取集落样生长的梭形细胞扩增培养，传代、将分选的脐血造血干／祖细胞接种到克隆培养的人骨髓基质干细胞及其他培养条件液上，比较不同培养条件及不同代次骨髓基质干细胞对造血干／祖细胞扩增能力及集落形成能力的影响。结果：人骨髓基质干细胞能扩增达20代以上，经流式细胞仪检测证实基质干细胞，单纯细胞因子组和细胞因子加基质干细胞组能有效扩增造血细胞，而后者有维持长期造血的作用。结论：该克隆培养方法能有效扩增骨髓基质干细胞，培养的细胞有体外支持长期造血的作用。     

体外培养人骨髓基质细胞的超微结构

体外培养人骨髓基质细胞的组成及功能与人体造血微环境相似，可作为研究人体造血微环境的良好模型。选择体外培养第４周的人骨髓基质细胞层，经固定、脱水、原位包埋、超薄切片染色后电镜观察。结果：可见基质层由３类基质细胞及ＥＣＭ组成。巨噬样细胞样基质细胞浆内可见ＣＩ；基质细胞表面ＥＣＭ包含胶原纤维；内皮细胞样基质细胞间可见细胞间连接，但这种连接未见于造血祖细胞及其他基质细胞间。结论：人骨髓体外培养基质细胞超微结构与人体及小鼠骨髓微环境既有相似也有不同处，其差异可能由于体内外不同生长条件所引起。     

骨髓基质细胞支持CD34+细胞扩增的实验研究

目的体外模拟造血微环境，观察CD34^ 细胞在骨髓基质细胞支持下的扩增效应。方法将免疫磁珠阳性选择分选的骨髓CD34^ 细胞接种于构建的基质细胞层培养，通过骨髓基质细胞支持CD34^ 扩增的细胞总数及集落形成细胞数(Colonyforming Cell。CFC)的变化，评价骨髓基质细胞支持CD34^ 细胞扩增的功能。结果 扩增后细胞总数及CFC数分别增加，表示骨髓基质细胞能很好地支持CD34^ 细胞扩增。结论 体外证实了骨髓基质细胞在造血干细胞更新、增殖中具有重要作用。     

不同剂量全身照射的造血基质祖细胞对造血组织放射损伤修复的影响

造血基质细胞对造血再建有促进作用。我们最近发现,经照射的造血基质细胞作用更强。为了筛选最佳照射剂量并探索其有效机理,特将小鼠全身照射0—25Gy,将其造血基质体外培养富集后,回输给9Gy全身照射的受者后9天,观察到混输正常造血基质细胞组的造血再生明显强于单输骨髓细胞组;混输10Gy照射基质组又明显强于照射的正常基质细胞组。本结论为应用造血基质细胞治疗造血系统难治病开辟了广阔的前景。     

干细胞因子与FLT3配基协同促巨核细胞生成因子对脐血单个核细胞的扩增及造血重建功能的影响

脐血移植后常常伴随着造血延迟和感染等危险因素的增加。而细胞因子介导的体外扩增有望能解决这一问题，但体外扩增时要想能达到有效的扩增脐血造血细胞，又能使扩增后的脐血造血细胞维持或增加植入潜能，和扩增培养起始细胞的选择及细胞因子的组合密切相关。本实验探讨了不同细胞因子组合对脐血单个核细胞扩增的效果并利用非肥胖性糖尿病／重症联合免疫缺陷（nonobese diabetic-severe combined immunodeficient，NOD／SCID）小鼠评估扩增后的脐血细胞的植入和造血重建功能。     

肿瘤抗原脉冲致敏的树突状细胞疫苗抗肿瘤作用的实验研究

进一步研究体外肿瘤抗原脉冲致敏的骨髓树突状细胞瘤苗主动免疫诱导小鼠体内抗肿瘤免疫应答，并观察其抵抗野生性肿瘤攻南听免疫保护作用及对荷瘤小鼠模型的免疫应答。方法采用本室建立的骨髓树状细胞分离与细胞因子体外扩增培养方法，并在体外经灭活ＮＳ１骨髓瘤细胞及其裂解产物脉冲刺激后直接作为疫功苗。     

细胞因子组合对小鼠骨髓单核细胞的体外扩增作用

目的　了解细胞因子组合对小鼠骨髓单个核细胞的体外扩增作用。方法　采用SCF、IL 3、IL 6、GM CSF、G CSF和EPO等 6种细胞因子组合在体外扩增培养小鼠骨髓单个核细胞 5d后 ,收集培养细胞作体外半固体培养计数各不同阶段祖细胞数 ,并计数细胞总数 ,与未经扩增培养的细胞作比较以判断其扩增情况。结果　有核细胞总数扩增不显著 ,为 (1 .3 60± 0 .1 2 6)倍 ,但造血祖细胞却获得了明显扩增 ,其中CFU E达培养扩增前的 (7.0 4± 1 .2 6)倍 ,BFU E为 (4 .74± 1 .0 4)倍 ,CFU GM和CFU Cs则分别为 (1 .78± 0 .47)和 (1 .74± 0 .48)倍。由此可见 ,在此培养体系中以红系祖细胞的扩增最为显著。结论　小鼠骨髓单个核细胞在单纯细胞因子存在的扩增体系中具有一定的扩增其细胞总数和集落形成祖细胞数的能力 ,为进一步作体内实验判断其造血重建的功能奠定了理论基础。     

体外扩增造血细胞重建小鼠造血功能的实验研究

目的 探讨体外扩增造血祖儿定向诱导功能血红细胞生成的条件及扩增细胞重建长期造血能力的维持。方法 应用免疫磁珠法（ＭＡＣＳ）分离纯化脐带血ＣＤ３４＾＋造血干或祖细胞,在体外液体培养体系中经不同细胞因子的组合进行扩增和定向诱导,并将扩增细胞移植经亚致死剂量照射的ＳＣＩＤ小鼠。结果 ＦＬ、干细胞因子血小板生成素（ＴＰＯ）等细胞因子的不同组合可分别扩增细胞总数、粒系及巨核系造血祖细胞、ＣＤ３４＾＋ＣＤ３８     

Expansive effects of aorta-gonad-mesonephros-derived stromal cells on hematopoietic stem cells from embryonic stem cells

Background Hematopoietic stem cells (HSCs) give rise to all blood and immune cells and are used in clinical transplantation protocols to treat a wide variety of refractory diseases, but the amplification of HSCs has been difficult to achieve in vitro. In the present study, the expansive effects of aorta-gonad-mesonephros (AGM) region derived stromal cells on HSCs were explored, attempting to improve the efficiency of HSC transplantation in clinical practice.Methods The murine stromal cells were isolated from the AGM region of 12 days postcoitum (dpc) murine embryos and bone marrow（BM）of 6 weeks old mice, respectively. After identification with flow cytometry and immunocytochemistry, the stromal cells were co-cultured with ESCs-derived, cytokines-induced HSCs. The maintenance and expansion of ESCs-derived HSCs were evaluated by detecting the population of CD34+ and CD34+Sca-1+cells with flow cytometry and the blast colony-forming cells (BL-CFCs), high proliferative potential colony-forming cells (HPP-CFCs) by using semi-solid medium colonial culture. Finally, the homing and hematopoietic reconstruction abilities of HSCs were evaluated using a murine model of HSC transplantation in vivo.Results AGM and BM-derived stromal cells were morphologically and phenotypically similar, and had the features of stromal cells. When co-cultured with AGM or BM stromal cells, more primitive progenitor cells (HPP-CFCs ) could be detected in ESCs derived hematopoietic precursor cells, but BL-CFC’s expansion could be detected only when co-cultured with AGM-derived stromal cells. The population of CD34+ hematopoietic stem/progenitor cells were expanded 3 times,but no significant expansion in the population of CD34+Sca-1+ cells was noted when co-cultured with BM stromal cells. While both CD34+ hematopoietic stem/progenitor cells and CD34+Sca-1+ cells were expanded 4 to 5 times respectively when co-cultured with AGM stromal cells. AGM region-derived stromal cells, like BM-derived stromal cells, could promote hematopoietic reconstruction and HSCs’ homing to BM in vivo.Conclusions AGM-derived stromal cells in comparison with the BM-derived stromal cells could not only support the expansion of HSCs but also maintain the self-renewal and multi-lineage differentiation more effectively. They are promising in HSC transplantation. Chin Med J 2005; 118(23):1979-1986     

巴桑母酥油丸对放射线-化学复合损伤小鼠骨髓造血组织面积和基质细胞粘附力的影响

目的：研究藏药巴桑母酥油丸对放射线．化学复合损伤小鼠骨髓造血组织面积和基质细胞粘附能力的影响,探究桑母酥油丸促进其外周血像恢复的机制。方法：放射线一化学复合损伤小鼠灌胃巴桑母酥油丸14d后,制股骨切片,用图像分析软件测其骨髓造血组织面积百分比;进行骨髓基质细胞培养,测其对骨髓细胞黏附能力。结果：巴桑母酥油丸组的骨髓造血组织面积百分比显著高于空白组和生理盐水组;骨髓基质细胞培养第7、14、20d后对骨髓细胞的黏附力亦均显著高于空白组与生理盐水组。结论：促进骨髓造血组织恢复、提高基质细胞对造血细胞粘附力可能是巴桑母酥油丸经干预骨髓造血微环境进而促进放射线一化学复合损伤小鼠外周血像恢复的途径之一。,     

多种细胞因子对人骨髓基质细胞生长的影响

目的:探讨多种细胞因子对骨髓基质细胞生长的影响。方法:分离人骨髓单个核细胞,经培养获得骨髓基质细胞(BMSC),分别用不同的细胞因子组合作用于BMSC,MTT法测细胞增殖。采用Mini MACs系统阳性分离纯化脐血CD34+细胞,用BMSC结合不同的细胞因子组合培养14天后计数CFU-Mix集落数。结果r:hGM-CSF结合FL、SCFI﹑L-6对BMSC生长的增殖作用最明显;BMSC联合SCFI、L-3、FL、G-CSF、EPO对促进CD34+细胞体外集落形成的作用最明显。结论:细胞因子作用下的BMSC扩增有可能应用于造血损伤修复。     

体外扩增脐血与骨髓间充质干细胞共移植对NOD/SCID鼠造血重建的研究

目的 探讨体外扩增脐血与骨髓间充质干细胞（MSC）移植对NOD／SCID鼠早期造血重建的影响。方法 在无血清无基质培养基（SCF、FL、TPO、IL-3）中体外扩增7d,MSC培养传至第3代,移植物注射给亚致死量照射NOD／SCICD鼠,FCM分析移植后2周小鼠骨髓人CD45^＋细胞表达率。结果体外扩增脐血、MSC与未扩增脐血共移植后,小鼠骨髓CD45^＋细胞比率提高3．55倍,差异有显著性（P〈0．05）,部分小鼠血小板恢复照射前水平。结论 此3种移植物共移植可能促进NOD／SCICD小鼠早期造血重建和血小板恢复。     

胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子的协同造血支持作用

目的 :探讨胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子的协同造血支持作用。方法 :联合应用胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子如重组人干细胞因子 (rh SCF)、IL - 3、IL - 6、粒巨噬细胞集落刺激因子 (GM- CSF)、粒细胞集落刺激因子 (G- CSF)、促红细胞生成素 (EPO)等先后对成人骨髓单个核细胞及 CD34 + 富集细胞培养 5 d至 2周。结果 :胎儿骨髓基质细胞与上述细胞因子具有良好的协同作用 ,CD34 +富集细胞以胎儿骨髓基质细胞 +SCF+IL- 3+IL- 6 +G- CSF+EPO培养 2周 ,可使细胞总数、粒 -单系造血祖细胞 (CFU- GM)、早期红系造血祖细胞 (BFU- E)及 CD34 +细胞分别扩增 (119.6± 30 .9)倍、(5 4.6± 17.4)倍、(2 5 .2± 4.4)倍、(11.1± 4.2 )倍。结论 :胎儿骨髓基质细胞可协同上述外源性细胞因子支持成人骨髓造血祖细胞的有效扩增     

小鼠脾集落形成期基质细胞在体外扩增脐带血CD34^＋细胞中的作用

目的：研究来源于小鼠脾脏的基质细胞在体外扩增脐血CD34^ 细胞中的作用;方法：取γ射线照射后小鼠脾集落形成期的脾细胞经人重组单核细胞集落刺激因子（rhM-CSF)的激发培养,获得贴壁脾基质细胞,经丝裂霉素处理后作为滋养细胞,与多种造血细胞生长因子共同应用,体外扩增经免疫磁珠阳性选择法纯化的人脐血CD34^ 细胞,用体外集落形成及流式细胞仪分析扩增细胞的集落形成能力和表型。结果：1）rhM-CSF能有效地刺激小鼠脾基质细胞的生长;2）所获的小鼠脾基质细胞具有支持脐血CD34^ 细胞的集落形成能力,与多种造血细胞生长因子共同应用后,能有效地扩增CD34^ 细胞,扩增2周后的细胞数达100倍,且仍具有多向分化能力。结论：rhM－CSF能刺激小鼠脾集落形成期基质细胞的增殖,该类基质细胞具有有效支持人脐血CD34^ 细胞的体外扩增作用。