体外压力刺激对大鼠筋膜组织成纤维细胞形态和MMP-1、MMP-3合成释放影响的研究

目的:通过体外实验探讨压力刺激对大鼠筋膜组织成纤维细胞形态和MMP-1、MMP-3合成释放变化的影响,为推拿基本力学刺激"舒筋散结"的治疗作用提供细胞生物学方面的实验依据。方法:体外培养大鼠筋膜组织成纤维细胞,对细胞实施100KPa和200KPa压力刺激后,观察细胞形态的变化和检测细胞MMP-1、MMP-3合成释放的变化。结果:筋膜组织成纤维细胞接受压力作用后,100KPa压力组细胞发生回缩,细胞间隙加大,200KPa压力组出现回缩成圆形并漂浮的细胞,细胞形态缩小;100KPa和200KPa压力组MMP-1合成释放呈增加趋势,但均无显著性差异(P>0.05;P>0.05);MMP-3合成释放减少,差异均有统计学意义(P<0.01;P<0.05)。结论:压力刺激对筋膜组织成纤维细胞MMP-1、MMP-3合成释放的影响和对细胞形态的影响,可能是推拿良性发挥"舒筋散结"作用的细胞生物力学原理之一。     

体外压力刺激对大鼠“足三里”穴筋膜组织细胞合成释放肿瘤坏死因子-α和干扰素-β影响的研究

目的通过体外实验探讨压力刺激对大鼠"足三里"穴筋膜组织细胞合成释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-β(INF-β)的影响,为腧穴"扶助正气"的治疗作用提供细胞生物力学方面的实验依据。方法体外培养大鼠"足三里"穴筋膜组织细胞,对细胞实施免疫组织化学鉴定后,实施100 kPa和200 kPa压力刺激,检测细胞外培养液INF-β和TNF-α含量的变化。结果 "足三里"穴筋膜组织细胞Keratin染色阴性,Vimnetin染色阳性,200 kPa压力刺激后,培养液中TNF-α含量增加,INF-β含量降低,差异均有统计学意义。结论 "足三里"穴筋膜组织细胞主要是成纤维细胞,压力刺激对筋膜组织成纤维细胞TNF-α和INF-β合成释放的调节,可能是腧穴接受针灸推拿治疗后特异性发挥"扶助正气"作用的细胞生物力学原理之一。     

润喉开音颗粒对体外培养人声带小结成纤维细胞细胞周期的影响

目的:观察润喉开音颗粒对体外培养人声带小结成纤维细胞细胞周期的影响,探讨润喉开音颗粒治疗声带小结的作用机制。方法:采用组织块贴壁法对临床摘取人声带小结标本进行体外培养,有成纤维细胞游出并顺利传代者视为培养成功,将成纤维细胞传至第3代后用于正式实验。体外培养人声带小结成纤维细胞随即分为润喉开音颗粒组、金嗓散结丸组及空白对照组,流式细胞仪检测各组细胞细胞周期。结果:润喉开音颗粒各浓度组细胞处于G0/G1期及G2/M期细胞比例均较空白对照组升高,处于S期细胞比例较空白对照组明显降低。结论:润喉开音颗粒可以将人声带小结成纤维细胞阻滞于G0/G1期及G2/M期,使DNA合成受阻,阻抑细胞的有丝分裂。     

静态压力刺激对大鼠"足三里"穴区及穴旁区域成纤维细胞PGE2和IL-6释放影响的比较研究

目的：通过探讨机械刺激对大鼠“足三里”穴筋膜组织成纤维细胞的压力信号生物转换作用,为腧穴“感受刺激,防治疾病”的现代医学生物学机制提供理论与实验依据。方法：体外培养大鼠“足三里”穴及穴旁区域的筋膜组织细胞,对细胞进行形态学鉴定后,实施压力刺激并检测细胞外培养液中前列腺素E2（PGE2）争白细胞介素-6（IL-6）含量的变化。结果：“足三里”穴及穴旁区域的筋膜组织细胞主要都是成纤维细胞,压力刺激均能够促进细胞PGE。和IL-6合成释放的增加,差异有统计学意义。结论：腧穴与非穴的筋膜组织成纤维细胞皆能直接感受刺激,从而将机械信号转换为生物信号。     

补肾舒脊颗粒对强直性脊柱炎关节液成纤维细胞周期的影响

目的:观察补肾舒脊颗粒对强直性脊柱炎(AS)患者关节液成纤维细胞周期的影响。方法:运用血清药理学方法共同孵育,选择不同浓度的含药血清与AS患者膝关节液体外培养成纤维细胞,并与空白血清,SSZ血清组作对照。结果:AS成纤维细胞周期中G1、G2期细胞比值均较正常对照组成纤维细胞显著减低,统计学有差异显著(P0.05);AS成纤维细胞周期中S期细胞比值均较正常对照组成纤维细胞显著升高,统计学有差异显著(P0.01)。与空白血清组相比,中药高、中、低剂量组成纤维细胞的S期比例均明显减少,G1、G2期细胞均明显比例增加,统计学均有差异显著(P0.01)。结论:补肾舒脊颗粒可以改变成纤维细胞各期细胞所占百分比,调控成纤维细胞DNA的合成,抑制成纤维细胞的增殖,从而发挥抗炎抗纤维化的作用。     

十全大补汤调整肉桂剂量对氧化损伤大鼠真皮成纤维细胞增殖的影响

目的从细胞分裂周期变化角度探讨十全大补汤调整肉桂剂量促进创面修复及皮肤修复的机理。方法采用体外培养成纤维细胞,造成氧化损伤成纤维细胞模型。以血清药理学方法获取大鼠血清,用以对成纤维细胞模型的干预。并运用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MMT法）及流式细胞仪检测成纤维细胞增殖及分裂周期的变化。结果MMT法结果显示2倍肉桂组和4倍肉桂组对氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞具有促进增殖的作用,与模型组比较差异显著（P〈0.01）;流式细胞术结果显示经500 μmol／L的H2O2刺激30分钟的大鼠真皮成纤维细胞中GO／G1期细胞比例显著增高,S期和G2／M期细胞比例显著降低。在药物干预24小时后,四个用药组均可降低G0／G1期细胞比例,S期和G2／M期细胞比例升高;在药物干预48小时后,除了去肉桂组以外,其余三个用药组均能使G0／G1期细胞比例降低,S期和G2／M期细胞比例升高,与模型组相比差异具有统计学意义（P〈0.05）,而去肉桂组对细胞周期的影响与模型组相比无明显差异。结论十全大补汤对氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞具有调控成纤维细胞周期、促进增殖的作用,而适当增加肉桂剂量可以起到增效的作用。     

常通口服液对大鼠正常及粘连腹膜成纤维细胞周期的影响

目的:探讨常通口服液(CTOL)对体外培养的正常腹膜成纤维细胞(NF)及粘连腹膜成纤维细胞(AF)周期的影响。方法:雄性SD大鼠15只,随机分为正常血清组、CTOL中、高剂量组。大鼠灌服相应剂量的药物7d后采血,分离药物血清;采用组织块贴壁培养法进行成纤维细胞培养,本实验所用细胞为第3-8代;取对数生长期的NF及AF,分别加入正常对照血清,CTOL中、高剂量含药血清,培养12、24、48h后,流式细胞仪检测分析成纤维细胞周期。结果:与正常血清组比较,CTOL中剂量作用12、24、48h对NF的DNA合成前期(G1期)细胞比例无显著影响,而高剂量含药血清组的NF的G1期细胞比例显著增加(P<0.001);CTOL中、高剂量含药血清组的AF在12、24、48h的G1期细胞比例均显著升高(P<0.01)。而S期及G2期细胞比例呈下降趋势,但各组间无显著性差异。结论:CTOL可以抑制体外培养的NF和AF增殖,调整细胞周期。CTOL对成纤维细胞增殖的抑制率之间存在剂量依赖关系,而且,药物血清对AF作用更敏感。     

体外压力刺激对大鼠筋膜组织细胞合成释放NO和IL-1β影响的研究

目的:通过探讨压力刺激对大鼠筋膜组织细胞合成释放一氧化氮(NO)和白细胞介素-1 β(IL-1 β)的影响,为按摩治病机制提供细胞生物力学方面的实验依据。方法:体外培养大鼠筋膜组织细胞,对细胞进行形态学鉴定后,实施50kPa压力刺激,检测细胞外培养液中NO和IL-1 β含量的变化。结果:筋膜组织细胞主要是成纤维细胞,压力作用后,细胞外培养液中NO和IL-1 β的含量都增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:筋膜组织细胞可以感受机械刺激,并将物理性质的力学信号转换为生物性质的化学信号;其在力学刺激作用下的反应,可能是按摩发挥治病作用的细胞生物力学原理之一。     

补肾强脊颗粒对细胞因子诱导下强直性脊柱炎成纤维细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的探讨补肾强脊颗粒对强直性脊柱炎(AS)的作用机制。方法以体外培养的AS髋关节囊组织的成纤维细胞为实验对象,分正常组,AS对照组,AS诱导组,兔空白血清组,补肾强脊颗粒小、中、大剂量组和SASP对照组。在细胞因子骨形态发生蛋白(BMP)与转化生长因子-β(TGF-β)的诱导刺激下,观察补肾强脊颗粒对细胞因子诱导后的AS成纤维细胞增殖(样本5个,采用酸性磷酸酶法)、细胞周期(样本3个,采用PI法流式细胞术)及细胞凋亡率(样本3个,采用Annexin V法流式细胞术)的影响。结果补肾强脊颗粒含药血清作用后,对细胞因子诱导下的AS成纤维细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.01);使细胞因子诱导下的AS成纤维细胞G0/G1期细胞比例显著增加(P<0.05),S期的细胞比例降低(P<0.01);促使细胞因子诱导下的AS成纤维细胞早期凋亡率、晚期凋亡率均有不同程度的增加(P<0.01)。结论补肾强脊颗粒可以通过抑制细胞因子对成纤维细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响而达到抑制成纤维细胞进一步向成骨型的分化。     

护肾固精方对大鼠系膜细胞增殖周期的影响

目的探讨中药复方护肾固精方对大鼠系膜细胞(MC)生物学行为的影响。方法采用体外培养大鼠MC和血清药理学方法,分为护肾固精方血清组、脂多糖(LPS)病理组及正常对照组,将不同浓度的作用物加入MC共同培养,培养后的MC制成单细胞悬液,经流式细胞仪检测后,计算出细胞周期中的G0/G1期、S期、G2/M期各时期的百分比及S期抑制百分比、细胞PI。结果不同浓度的作用物对MC增殖周期有不同影响。LPS血清能明显刺激MC增殖,表现为G0/G1期细胞百分比减以及S期细胞增加;细胞的S期抑制百分比明显下降,而细胞的PI则显著增高;中、高浓度的中药血清明显抑制MC增殖,表现为G0/G1期细胞百分比增加及S期细胞减以,细胞的S期抑制百分比明显增加,而细胞的PI则显著降低。并且使大量MC阻滞在G0/G1期,能诱导MC发生凋亡。结论护肾固精方治疗系膜增殖性肾炎等肾小球疾病的作用机理之一,可能与抑制MC增殖和促其细胞凋亡有关。     

健骨颗粒含药血清对成骨细胞增殖的影响

目的：探讨健骨颗粒含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响。方法：采用酶消化法培养SD大鼠成骨细胞,健骨颗粒含药血清干预,以生理盐水大鼠血清为对照,运用MTT法、流式细胞术检测成骨细胞增殖情况及细胞周期分布。结果：与同浓度生理盐水血清相比,20%健骨颗粒含药血清能明显促进体外培养成骨细胞增殖（P〈0.05）,明显降低G0/G1期细胞分数（P〈0.01或P〈0.05）,提高S期、G2/M期细胞分数和增殖指数（P〈0.01或P〈0.05）。结论：健骨颗粒含药血清能推进体外培养成骨细胞细胞周期,从而促进成骨细胞增殖。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌细胞株抑制作用的体外研究

目的探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对结肠癌细胞株(LoVo细胞、SW480细胞、HT29细胞、HCT-8细胞)增殖的抑制作用及对细胞凋亡和细胞周期的影响,研究其对结肠癌的抑癌机制。方法体外培养结肠癌细胞株,采用不同浓度的EGCG(10,20,35μg/ml)对其进行干预,MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株增殖的抑制作用;用流式细胞仪检测EGCG对结肠癌细胞株凋亡和细胞周期的影响。结果 MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株的抑制作用均具有浓度依赖性,且HT29细胞株尚具有时间依赖性。流式细胞仪检测EGCG能增强结肠癌细胞株的凋亡率,且剂量与凋亡率呈正相关。EGCG能将SW480细胞和LoVo细胞细胞周期阻滞在G0/G1期,阻碍其向S期转换,将HCT-8细胞阻滞在G2/M期,阻碍其向M期转换,将HT29细胞阻滞在S期,阻碍其向G2期转换,抑制结肠癌细胞株的增殖。结论EGCG对体外培养的结肠癌细胞株的增殖有明显抑制作用,其作用机制与增强细胞凋亡和影响细胞周期有关,具体作用机制有待进一步研究。     

消斑通脉合剂对PDGF-BB诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

[目的]观察中药复方消斑通脉合剂药物血清对体外培养的VSMCs细胞周期的作用。[方法]体外培养VSMCs,取对数生长期细胞用作实验,MTT法检测不同浓度药物血清对体外培养的VSMCs增殖活力;应用流式细胞仪分析各组细胞周期分布。[结果] MTT法显示药物血清呈剂量依赖性抑制VSMCs增值,高剂量与低剂量比较有统计学差异(P<0.05),流式细胞仪显示药物血清可明显阻滞VSMCs细胞进程,高剂量与低剂量比较有统计学差异(P<0.01)。[结论]中药复方消斑通脉合剂药物血清可以阻滞VSMCs的细胞周期进程,达到抑制VSMCs增殖的作用。     

雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响及作用机制。方法　体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞 ,通过3 H -TdR掺入试验 ,观察雷公藤内酯醇对血清诱导的细胞增殖的影响 ;采用流式细胞技术 ,观察该药对细胞增殖周期的影响。结果　雷公藤内酯醇在 (0 .5～ 4 )× 10 -5g/L的浓度范围内 ,以一种剂量依赖性的方式抑制了血清诱导的VSMC增殖 ;雷公藤内酯醇可显著增加细胞周期中G0 /G1期细胞百分含量 ,减少S期细胞的百分含量 ,阻断细胞由G0 /G1期向DNA合成的S期转化 ,作用呈剂量依赖性。结论　雷公藤内酯醇可能通过影响细胞周期的转化而抑制VSMC的增殖。     

细胞周期蛋白G_1参与孕激素对子宫内膜基质细胞增殖作用的研究

目的在体外培养条件下,研究孕激素(P)对子宫内膜基质细胞(ESC)的增殖作用和细胞周期分布的影响及细胞周期蛋白G1(cyclin G1)的表达情况。方法分离小鼠ESC进行原代培养,采用四甲基氨唑蓝法(MTT)检测P处理后ESC的增殖情况,用流式细胞仪检测细胞周期各时相的分布,用细胞免疫化学技术检测cyclin G1蛋白的表达情况。结果孕激素对ESC起增殖作用,在一定范围内呈时间依赖性。孕激素作用12 h后,S期细胞百分数明显上调。雌激素(E)、孕激素(P)、雌激素+孕激素(EP)联合分别刺激ESC 24 h,P组和EP组的ESC增殖,S期的细胞百分数升高,且cyclin G1蛋白表达阳性。E组与空白对照组(C组)的ESC增殖抑制,S期的细胞百分数维持低水平,且cyclin G1蛋白表达阴性。结论孕激素对ESC起增殖作用,引起细胞周期重新分布可能是孕激素促ESC增殖的机制之一。cyclin G1呈孕激素依赖性表达,可能参与孕激素对ESC的促增殖作用。     

姜黄素对Raji细胞体外抗癌作用的实验研究

目的研究姜黄素对Raji细胞体外抗癌作用及其机制,对比研究其对RaIi细胞和人单个核细胞的细胞毒性。方法用MTT法检测姜黄素对Raji细胞及人单个核细胞增殖的影响,Annexin—V／PI双标流式术、缺口末端标记法检测姜黄素对Raji细胞及人单个核细胞凋亡的影响,PI单标流式细胞术测定姜黄素对Raji细胞DNA含量分布的影响。结果(1)姜黄素对Raji细胞具有明显的增殖抑制作用。(2)姜黄素可以时间和剂量依赖性方式诱导Raji细胞凋亡。(3)姜黄素组Raji细胞周期发生变化,细胞周期被阻滞于G0／G1和G2／M期,S期比例减少。(4)姜黄素对人单个核细胞无明显抑制增殖和诱导凋亡作用。结论姜黄素能够调控Raji细胞的细胞周期并诱导其凋亡,从而抑制Raji细胞增殖;姜黄素对人单个核细胞无明显细胞毒作用,而选择性作用于肿瘤细胞。     

丹参注射液抑制H2 O2诱导的平滑肌细胞增殖的作用机制

目的 :观察丹参对H2 O2 诱导的离体大鼠主动脉平滑肌细胞 (VSMC)、增殖细胞核抗原 (PCNA)、核转录因子 (NF κB)蛋白表达和细胞增殖周期时相的影响 ,以探讨其可能的作用机制。方法 :以H2 O2 作为外源性活性氧(ROS)刺激VSMC增殖 ,用免疫细胞化学法检测培养的VSMC中PCNA和NF κB的表达 ,同时用流式细胞术测定细胞周期。结果 :H2 O2 可使VSMC胞核内PCNA和NF κB蛋白表达呈强阳性 ,并明显增加S期细胞百分比 (与对照组相比 ,P <0 0 5或P <0 0 1) ,加入丹参干预后 ,PCNA和NF κB蛋白表达明显受抑制 ,G0 /G1期细胞百分比升高 ,S期细胞百分比下降。结论 :抑制PCNA和NF κB蛋白表达 ,阻止细胞进入有丝分裂期可能是丹参抑制H2 O2 诱导的VSMC增殖的重要机制之一。     

健骨二仙丸含药血清对人成骨细胞增殖及细胞周期的影响

目的：在临床研究和动物实验的基础上，进一步探讨健骨二仙丸对成骨细胞增殖和细胞周期的影响。方法：分离、培养人的原代成骨细胞，采用^3H-胸腺嘧啶掺入法和四氮唑蓝法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期。结果：健骨二仙丸中、高剂量组细胞增殖率、S期细胞比率和细胞增殖指数等均显著高于空白对照组（P＜0．01，P＜0．05），与此激素组比较差异无显著性。细胞凋亡率和G0－G1期细胞比率显著低于空白对照组（P＜0．01，P＜0．05）。结论：健骨二仙丸能有效促进成骨细胞的增殖、分化，防止成骨细胞的凋亡。     

扶正抑瘤颗粒对乳腺癌核转录因子-kB及细胞周期的影响

目的:研究扶正抑瘤颗粒(FYK)对乳腺癌肿瘤组织核转录因子-κB(NF-κB)和细胞周期的影响及其临床意义。方法:55例乳腺癌患者,随机分为治疗组和对照组,两组均用常规化疗,治疗组同时口服FYK,1个月后取肿瘤组织用流式细胞仪检测NF-κB的表达情况及肿瘤细胞周期各时相的比例。结果:治疗组与对照组比较,NF-κB的表达明显提高(P<0.01);G_(0/1)期细胞比例明显升高(P<0.01),S期细胞比例及细胞增殖指数(PI)明显下降(P<0.01)。结论:FYK可提高乳腺癌组织NF-κB表达水平;能升高G_(0/1)期细胞比例,降低S期细胞比例及PI值,对乳腺癌患者的预后起积极作用。