含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽白细胞介素-24突变体蛋白对肝癌细胞抑制作用

目的 观察含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽模体的白细胞介素(IL)-24突变体蛋白(RGD-IL-24)对肝癌细胞的抑制作用.方法 肝癌HepG2细胞分别加入各10μl的RGD-IL-24(8 mg/L)、IL-24(8 mg/L)和磷酸盐缓冲液(PBS),噻唑蓝(MTT)比色法检测HepG2细胞生长抑制作用;DAPI染色检测HepG2细胞凋亡;免疫印迹法检测HepG2细胞bax、bcl-2及Caspase-3蛋白表达;黏附实验检测与HepG2细胞的靶向黏附.结果 RGD-IL-24、IL-24治疗4 d后HepG2细胞存活率分别为(0.219±0.015)、(0.397±0.009),与对照组(0.823±0.013)比较差异有统计学意义(P<0.01).RGD-IL-24、IL-24治疗组细胞凋亡率分别为(0.631±0.027)、(0.472±0.031),与对照组(0.082±0.013)比较差异有统计学意义(P<0.01).RGD-IL-24抑制HepG2细胞生长、诱导凋亡效果均比IL-24显著增强(P<0.05).与IL-24治疗组比较,RGD-IL-24治疗组HepG2细胞促凋亡蛋白bax增加、抗凋亡蛋白bcl-2减少、活化Caspase-3蛋白量增加.黏附实验证实RGD-IL-24与HepG2细胞的靶向结合作用增强.结论 含RGD肽模体的IL-24蛋白能通过与肝癌HepG2细胞的靶向结合增强其凋亡诱导作用.     

含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽白细胞介素-24突变体蛋白的表达及其生物活性

目的 获得含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽的白细胞介素(IL)-24突变体(RGD-IL-24)蛋白,研究其生物活性.方法 用重叠聚合酶链反应(PCR)技术在IL-24 cDNA序列中引入甘氨酸密码子GGC,构建RGD-IL-24 cDNA,将其克隆人质粒pET28a(+)获得pET28a/RGD-IL-24.pET28a/RGD-IL-24转化菌株BL21(DE3),采用亲合层析纯化蛋白,透析复性.SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定RGD-IL-24蛋白.酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测RGD-IL-24刺激外周血单核细胞(PBMC)产生IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α和干扰素(IFN)-γ的能力来测定RGD-IL-24免疫活性.细胞黏附实验检测RGD-IL-24与多种肿瘤细胞结合特性.结果 成功获得RGD-IL-24基因,并构建表达质粒pET28a/RGD-IL-24.表达的RGD-IL-24蛋白约占菌体总蛋白的30%,纯化后蛋白纯度超过90%.RGD-IL-24处理的人PBMC培养上清IL-6、TNF-α和IFN-γ浓度(ng/L)分别为(780.5 ±98.3、2399.1 ±113.2、2130.1 ±98.6),显著高于IL-24处理组(551.0±52.1、1982.5 ±138.2、1762.9 ±119.8).黏附实验证实RGD-IL-24能增强与肿瘤A549、HeLa和ACHN细胞靶向结合作用.结论 含RGD肽的RGD-IL-24蛋白免疫生物活性及与肿瘤细胞靶向结合能力较IL-24明显增强.     

pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP真核表达载体的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

目的 构建标记有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的人基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(hTIMP-1)真核表达质粒pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP,并通过转染大鼠血管平滑肌细胞(SMCs)验证hTIMP-1的表达.方法 将hTIMP-1及编码EGFP的互补脱氧核糖核酸(cDNA)序列通过扩增、酶切、插入pcDNA3.1质粒的多克隆位点,构建pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP真核表达质粒;应用脂质体介导的基因转染技术,将基因导入SMCs(pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP转染组).应用荧光显微镜观察EGFP的表达情况;流式细胞仪检测转染效率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blotting)等方法检测hTIMP-1的表达情况;明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9活性.用空质粒pcDNA3.1转染SMCs(空质粒pcDNA3.1转染组)和未转染质粒的SMCs(未转染组)作为对照.结果 pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP转染组重组质粒转染SMCs后,SMCs生长受到抑制;转染24 h后在荧光显微镜下可见强绿色荧光,流式细胞仪检测转染效率约为15%;RT-PCR检测结果显示,SMCs出现646 bp目的基因;Western blotting检测显示,在转染后的血管SMCs中有hTIMP-1表达;明胶酶谱法检测结果显示,MMP-2、MMP-9活性降低;与空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 TIMP-1真核表达质粒的构建和在血管SMCs中的表达,为TIMP-1基因治疗的研究奠定了基础.     

RhoC基因对肝癌细胞促血管生长因子表达的影响

目的:观察RhoC基因对肝癌HepG2细胞表达促血管生长因子（VEGF，bFGF）的影响。 方法:将pcDNA3.1-RhoC重组质粒和空载体pcDNA3.1转染HepG2细胞，用RT-PCR及免疫组化检测HepG2细胞的RhoC mRNA及RhoC蛋白表达情况;RT-PCR及免疫组化检测HepG2细胞VEGF和bFGFmRNA及蛋白的表达。将转染pcDNA3.1-RhoC重组质粒和空载体pcDNA3.1的HepG2细胞接种裸鼠，观察肿瘤的成瘤率。结果:与转染空载体pcDNA3.1的HepG2细胞相比，转染pcDNA3.1-RhoC重组质粒的细胞表达RhoC mRNA及RhoC 蛋白增强，其表达VEGF和bFGFmRNA及蛋白明显增强（P＜0.01）;重组质粒转染组成瘤率高于空载体组。结论:RhoC表达可促进HepG2细胞表达血管内皮生成因子。RhoC可促进肝癌细胞分泌促血管生长因子，可能是促进肝癌侵袭、转移的机制之一。     

MAGE-A3基因过量表达对人肝癌细胞株SMMC7721的作用

目的 观察MAGE-A3基因过量表达对人肝癌细胞株增殖及侵袭能力的影响.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从肝癌组织中制备出含NheI和KpnI酶切位点的MAGE-A3目的 基因,克隆到pcDNA3.1(-)真核表达载体,并通过酶切鉴定、测序验证.经脂质体法正义瞬时转染肝癌细胞株SMMC7721,通过RT-PCR、Western blot分别检测MAGE-A3 mRNA和蛋白表达产量.以噻唑蓝(MTT)比色法、Boy-den小室实验观察MAGE-A3基因过量表达对人肝癌细胞增殖及侵袭的影响.结果成功扩增出目的 基因;得到重组质粒pcDNA3.1-MAGE-A3,经过酶切鉴定与测序,结果正确;RT-PCR和Western blot检测显示,MAGE-A3基因mRNA及蛋白产物的表达水平明显高于未转染组和空载体组(3组MAGE-A3 mRNA量分别为7838、2847、1557,蛋白量分别为30938、24 088、29 654);转染组细胞数量增多,穿透Matrigel膜的细胞数显著增加,与未转染组和空载体组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 成功构建pcDNA3.1-MAGE-A3真核表达载体,转染人肝癌细胞株SMMC7721后可促进细胞增殖和侵袭能力,提示MAGE-A3基因在肝癌复发和转移中起到重要作用.     

bcl-2高表达提高肾小管上皮细胞抗凋亡能力的研究

目的 观察凋亡相关基因bcl-2高表达抑制过氧化氢诱导肾小管上皮细胞凋亡的作用.方法 构建含有人bcl-2 cDNA的逆转录病毒真核表达载体PLXSN,脂质体法将重组质粒转染PA317细胞,G418筛选阳性克隆,鉴定后浓缩收集病毒上清,浓缩病毒液,感染人肾小管上皮细胞株HK-2,Western blot检测bcl-2 mRNA表达.5 mmol/L过氧化氢(HO2)诱导细胞凋亡后,流式细胞仪检测细胞凋亡发生变化.结果 流式细胞仪分析显示5 mmol/L H2O2:成功诱导肾小管上皮细胞凋亡,bel-2逆转录病毒感染肾小管上皮细胞后,bcl-2蛋白水平呈高表达,HK bcl-2组细胞凋亡数量(12.41±3.46)较HK-2组(19.62±4.20)显著减少(P<0.05).而转染空载体的对照组无明显变化(19.62±4.20,P<0.05).结论 bel-2蛋白高表达显著抑制氧化剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡.     

APOBEC3G基因对HepG2.2.15细胞生物学行为的影响

目的 观察HepG2.2.15细胞在高表达APOBEC3G后,APOBEC3G对细胞生长迁移能力、细胞周期和凋亡现象等生物学行为的影响.方法 将真核表达载体pcDNA3.1-APOBEC3G转染入HepG2.2.15细胞中,应用有限稀释法筛选高表达APOBEC3G的HepG2.2.15细胞,并通过Western blot鉴定.应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞株生长能力;应用划痕法观察细胞迁徙运动能力.结果 HepG2.2.15-APOBEC3G细胞(pcDNA3.1-APOBEC3G转染)和HepG2.2.15-pcDNA3.1细胞(空载体转染),与HepG2.2.15细胞(空白对照)比较,细胞周期无明显变化[各期细胞所占比例分别为:G0/G1:(64.27±1.26)%比(64.18±1.24)%比(64.09±1.30)%,P＞0.05;S:(23.16±1.38)%比(22.67±1.41)%比(23.27±1.43)%,P＞0.05;G2/M:(11.36±1.26)%比(11.84±1.31)%比(11.37±1.22)%,P＞0.05],未见细胞凋亡现象,细胞的生长增殖无明显变化(P＞0.05),细胞迁徙运动能力无明显变化[24h及48 h细胞迁移抑制率分别为:(7.5±3.7)%比(10.2±5.5)%,P＞0.05;(13.4±6.5)%比(17.8±9.2)%,P＞0.05].结论 高表达APOBEC3G对HepG2.2.15细胞生物学行为无明显影响.     

热休克蛋白70-2基因沉默诱导大鼠精原细胞凋亡及其机制

目的 探讨热休克蛋白(HSP)70-2基因沉默对精原细胞的影响及其机制.方法 构建HSP70-2特异的短发夹RNA(shRNA)质粒载体,并转染大鼠精原细胞;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HSP70-2 mRNA表达,Western blot检测HSP70-2、Cyclin DI、bcl-2和box蛋白表达,应用流式细胞术分析细胞周期和凋亡.结果 HSP70-2基因沉默组的HSP70-2蛋白表达量为0.93±0.13,明显低于阴性对照组1.31±0.10(P<0.01);流式细胞术检测结果显示,与转染Scrambled的阴性对照组比较,转染pGenesil-1-HSP70-2重组质粒组的PC3细胞在G1期出现明显细胞周期阻滞和细胞凋亡,G1期阻滞细胞比例为(80.09±2.37)%,凋亡率为(7.44±2.41)%,而阴性对照组分别为(61.85±2.31)%和(1.09±0.57)%(P<0.05).与阴性对照组比较,转染后细胞bcl-2、Cyclin D1表达水平显著降低,而bax表达水平升高.结论 HSP70-2基因沉默能诱导精原细胞凋亡,其机制可能是通过Cyclin D1蛋白调节细胞周期并通过上调box蛋白表达促进细胞凋亡.     

外源性CC10基因表达对肝癌细胞增殖、 凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探究外源性Clara细胞分泌蛋白10（CC10）的基因表达对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移和 侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用RT-qPCR和Western blotting检测人正常肝细胞LO2和 肝癌细胞HepG2、Hep3B中CC10的内源表达水平;将HepG2细胞系分为pcDNA 3.1组和pcDNA 3.1-CC10 组,用LipofectionTM分别转染pcDNA 3.1空载体质粒和重组质粒pcDNA 3.1-CC10。用CCK-8法、TUNEL 法和Transwell小室实验分别检测两组细胞增殖、凋亡情况及迁移、侵袭能力。采用RT-qPCR和Western blotting检测两组细胞中CC10和细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）的表达水平。结果 与正常肝细胞LO2相 比,CC10在肝癌细胞HepG2、Hep3B中呈明显低表达（P<0.05）;转染 pcDNA 3.1-CC10后的HepG2细胞内 CC10 mRNA和蛋白水平均显著增高（P<0.05）。与 pcDNA 3.1组相比,pcDNA 3.1-CC10组细胞活力受到抑 制,细胞活力以时间依赖性方式降低（P<0.05）,细胞迁移和侵袭实验中的过膜细胞数均低于pcDNA 3.1组 （P<0.05）,细胞凋亡率高于pcDNA 3.1组（P<0.05）。同时,Cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低 （P<0.05）。 结论? 外源性CC10基因表达可抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,其机制可能与 下调Cyclin D1表达有关。     

紫杉醇联合大蒜素对胃癌细胞的增殖抑制及促凋亡作用

目的：探讨紫杉醇联合大蒜素对胃癌细胞MGC-803的增殖抑制和促凋亡作用及其分子机制。方法：分别及联合应用两药后以MTT法测定MGC-803细胞的增殖，用流式细胞仪检测细胞凋亡，用RT-PCR法观察基因bax和bcl-2 mRNA的表达，用Western blot观察其蛋白表达。 结果：15～60μg/mL大蒜素和4～32μg /mL紫杉醇单用24h对MGC-803细胞均有明显抑制作用，呈剂量依赖性。低剂量大蒜素（9μg /mL）联合紫杉醇（1～16μg/mL）比单用紫杉醇作用更强（P<0.05）。15μg/mL大蒜素,12μg /mL紫杉醇和两药联用24h凋亡率分别为10.7%，30.4%和84.7%（P<0.01 ）。单用大蒜素和紫杉醇对胃癌细胞bax和bcl-2表达无明显影响，两药联用bax基因mRNA和蛋白表达增加，而bcl-2mRNA和蛋白的表达减少。结论：大蒜素可增强紫杉醇对胃癌细胞的增殖抑制作用，两药联用可减少紫杉醇的剂量;其机制可能是通过增强MGC-803细胞的凋亡，后者与bax和bcl-2基因表达有关。     

缺氧诱导因子1α诱导人前列腺癌细胞上皮间质化改变的研究

目的:研究人前列腺癌细胞在缺氧诱导因子1α(HIF-1α)诱导下能否发生上皮细胞间质转化态(EMT)改变,进而致侵袭能力增强,并初步分析其分子机制。方法:应用RT-PCR技术检测LNCaP细胞及其亚细胞系C4、C4-2、C4-2B这4种EMT阴性的人前列腺癌细胞中波形蛋白(vimentin)mRNA表达情况,并凭此筛选出适合于进一步作转染诱导试验的细胞。用脂质体Lipofectamine2000包装重组真核表达载体pCDNA3.1(-)/HIF-1α和pCD-NA3.1(-)空质粒后,分别转染上步试验所挑选出的人前列腺癌细胞LNCaP,600μg/mLG418筛选抗性克隆。免疫荧光及Western印迹法鉴定HIF-1α表达,Western印迹法检测EMT标志蛋白——上皮型钙粘素(E-cadherin)和vimentin的表达,Transwell验证转染后LNCaP细胞侵袭能力的改变。结果:RT-PCR证实4种EMT阴性的细胞中,仅LNCaP表达有vimentin编码基因,适合作转染诱导试验。免疫荧光也观察到HIF-1α转染细胞胞质中荧光亮度较空质粒转染细胞和未转染细胞明显增强。Western印迹法证实HIF-1α转染细胞发生了EMT转化,其E-cad-herin表达缺失,而vimentin表达增加。同时,Transwell体外侵袭试验也发现,LNCaP/HIF1α细胞的体外侵袭能力显著高于LNCaP细胞和LNCaP/pCDNA3.1(-)细胞。结论:HIF-1α过表达可以通过调节两种EMT相关蛋白诱导人前列腺癌细胞LNCaP发生EMT改变并致其侵袭能力增强。     

重组腺相关病毒介导的MDA-7基因对人肝癌细胞的选择性凋亡诱导效应

目的 探讨PEG启动子调控腺相关病人毒介导的黑色素瘤分化相关基因MDA-7对肝癌细胞的选择性凋亡诱导效应.方法 以重组腺相关病人毒rAAV-PEG-MDA-7表达系统感染人肝癌细胞株HepG2细胞和正常人肝细胞株LO2细胞,Westerm Blot检测转染细胞内MDA-7蛋白,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞周期、Annexin-Ⅴ、线粒体跨膜电位(△Ψm),RT-PCR检测bcl-2基因mRNA.结果 重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA7可特异性转染HepG2细胞,MDA7蛋白在HepG2细胞中高效表达,并呈时间依赖性;重组腺相关病毒rAAV-PEC-MDA-7可抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,细胞周期分析处于G0/G1期细胞百分比明显增多,处于G2/M期的细胞减少,并且可见到较明显的凋亡峰的形成,从24 h开始Annexin-Ⅴ阳性细胞比例增多,△Ψm降低,抗凋亡基因bcl-2 mRNA表达降低.而重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7对LO2细胞无类似效应.结论 构建出的重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7表达系统可选择性抑制肝癌细胞增殖和诱导其凋亡,其诱导凋亡机制受到bcl-2家族经线粒体途径的调节.     

Increased expression of the pro-apoptotic ATP-sensitive P2X7 receptor in experimental and human glomerulonephritis.

BACKGROUND: The involvement of IL-1beta and other pro-inflammatory cytokines in most forms of glomerulonephritis is now well established. The P2X(7) receptor, an ATP-sensitive P2X receptor, functions not only as a non-selective cation channel, but it is also involved in the rapid processing and release of IL-1beta, apoptosis and necrotic cell death. Therefore, we wanted to investigate if expression of this receptor is altered in the glomeruli of rodent models of glomerulonephritis. METHODS: P2X(7) receptor protein expression was investigated using immunohistochemistry, and apoptosis was assessed using the TUNEL assay and caspase-3 immunostaining. Real-time PCR with gene-specific primers was used to detect P2X(7), IL-1beta, p53, bax and bcl-2 mRNA expression. RESULTS: Although the levels of the P2X(7) receptor protein in mouse kidney are normally very low, or undetectable, we detected an increase in glomerular expression of this receptor and an increase in glomerular apoptotic cells in a mouse model of accelerated nephrotoxic nephritis. We also observed increased glomerular and tubular expression of the P2X(7) receptor protein in renal biopsy tissue of patients with autoimmune-related glomerulonephritis. Furthermore, P2X(7) receptor mRNA increased in the kidneys of a rat model of proliferative glomerulonephritis and this coincided with the onset of proteinuria. We also observed increased mRNA expression of Il-1beta and the pro-apoptotic markers p53 and bax, but not of anti-apoptotic bcl-2. CONCLUSION: Although there is an association between expression of the pro-inflammatory and pro-apoptotic P2X(7) receptor and glomerulonephritis in these rodent models, and in at least one form of human glomerulonephritis, the underlying relationship and its functional significance remain to be explored.     

Bcl-2家族蛋白在Ad．mda-7介导HepG2细胞凋亡中的变化

目的 观察Bcl-2家族蛋白在Ad．mda-7介导HepG2细胞凋亡中的变化，初步探讨Ad．mda-7介导肝癌细胞的凋亡机制。方法将携带人MDA-7／IL-24基因的腺病毒转染HepG2和ID2，通过四甲基偶氮哩蓝染色法（MTr）及Hoechst染色观察MDA-7／IL-24对肝癌细胞HepG2和正常肝胚细胞ID2的生长抑制和杀伤作用。AnnexinV和PI双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Bcl-2家族蛋白的变化。结果Ad．mda-7能明显抑制肝癌细胞HepG2的生长，但对正常肝胚细胞ID2没有明显抑制增殖作用。Hoechst染色和流式细胞仪提示Ad．mda-7能明显诱导肝癌细胞HepG2细胞的凋亡，但对正常肝胚细胞ID2没有明显毒副作用。Westernblot说明抑制凋亡的蛋白Bcl-2和Bcl-xl的表达在HepG2明显下降，在ID2中则没有变化；而促凋亡蛋白Bax在HepG2和ID2都升高。结论Ad．mda-7转染HepG2后，促凋亡（Bax）与抑凋亡蛋白（Bcl-2和Bcl-xl）的比率发生改变，进而发生凋亡。     

硫利达嗪对胃癌细胞生长的抑制作用与机制研究

目的:探讨硫利达嗪对胃癌细胞体外生长的抑制作用及其机制。方法:不同浓度的硫利达嗪作用于胃癌SGC-7901细胞24 h后,分别用MTT法与流式细胞仪检测胃癌细胞的增殖与凋亡情况,以及用Western blot检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2、caspase-3的表达情况。结果:硫利达嗪作用后,SGC-7901细胞的增殖明显抑制,凋亡率明显增加,抗凋亡蛋白bcl-2表达下调、促凋亡蛋白bax表达上调、caspcase-3蛋白表达上调,且均呈浓度依赖性(均P0.05)。结论:硫利达嗪对人胃癌细胞体外的生长有明显抑制作用,该作用可能与其并活化caspase-3依赖的凋亡途径有关。     

蛋白酪氨酸激酶Pyk2在胃癌中的表达及作用机制

目的 观察蛋白酪氨酸激酶Pyk2在胃癌组织中的表达,探讨Pyk2在胃癌中的作用机制.方法 应用Western blot和荧光定量PCR方法检测正常胃黏膜组织和胃癌组织中Pyk2表达的差异.应用质粒转染的方法,将质粒PKH3-Pyk2和PKH3-PKM(PKM,dominant-negative Pyk2 mutant)转染胃癌细胞系BGC-803,观察凋亡相关蛋白bcl-2和bax的变化,探讨Pyk2在胃癌中作用机制.结果 Western blot结果显示Pyk2蛋白在28例正常胃黏膜组织中均有表达,在胃癌组织中表达水平很低或几乎无表达,差异有统计学意义(t=3.53,P＜0.05).荧光定量PCR结果显示:胃癌组织中Pyk2 mRNA表达水平明显低于正常胃黏膜组织,差异有统计学意义(t=8.02,P＜0.05).转染PKH3-Pyrk2质粒后,对凋亡抑制蛋白bcl-2影响不明显,而促凋亡蛋白bax的表达升高.结论 Pyk2在正常胃黏膜组织中高表达,在胃癌组织中低表达.Pylc2可能通过上调bax蛋白的表达而促进胃癌细胞凋亡.     

红细胞生成素对高糖诱导肾小管细胞凋亡的影响

目的 探讨红细胞生成素（EPO）是否可以抑制高糖诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞凋亡及其相关机制。 方法 传代培养大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK-52E）,分为正常对照组（NC组）、渗透浓度对照组（OC组）、高糖组（HG组）、高糖+EPO 50 U/ml组（E1组）和高糖+EPO 100 U/ml组（E2组）。免疫荧光检测NRK-52E细胞有无EPO受体（EPOR）表达。Western印迹检测高糖对EPOR表达的影响。流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡指数。荧光探针CM-H2DCFDA检测细胞内活性氧（ROS）的水平。RT-PCR检测bcl-2、bax、capases-3 mRNA的表达。 结果 （1）NRK-52E细胞表达EPOR,且高糖可刺激EPOR表达增加。（2）高糖可诱导NRK-52E细胞凋亡,与葡萄糖相同渗透浓度的甘露醇不能明显诱导细胞凋亡。E1、E2组细胞早、晚期凋亡率显著低于HG组（P < 0.05）。（3）高糖刺激 NRK-52E细胞后,细胞内ROS产生增多,bcl-2 mRNA的表达下调,bax、caspase-3 mRNA的表达上调。EPO可以抑制细胞内ROS的产生,上调bcl-2 mRNA 表达,下调bax、caspase-3 mRNA 表达。 结论 EPO可能通过EPOR的介导,缓解高糖诱导的氧化应激,上调bcl-2 mRNA表达,下调bax、caspase-3 mRNA表达,抑制NRK-52E细胞凋亡。