芦荟大黄素联用顺铂对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨芦荟大黄素(AE)单用或联用顺铂(CP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。方法:以MDA-MB-231细胞为研究对象,用5,10,20,30,40,50μmol·L-1AE,2,4,8,12,24,36μmol·L-1CP,或不同浓度AE联用CP处理乳腺癌MDA-MB-231细胞48 h,另设空白组,MTT法检测细胞增殖;Annexin V FITC/PI双染和流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期;Western blot分析Bcl-2相关X蛋白(Bax),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-x L蛋白表达的变化。结果:与空白组比较,AE单用显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖,半数抑制浓度(IC50)为22.21μmol·L-1,与CP联用时IC50为9.51μmol·L-1。联用指数CI501,表明两药物有协同作用;AE单用使细胞周期阻滞在G1期,并诱导细胞凋亡,联用CP则增强阻滞,凋亡率明显增加;两药联用显著抑制Bcl-2和Bcl-x L的表达,并上调Bax的表达,与空白组比较均具有明显的统计学差异(P0.05,P0.01)。结论:芦荟大黄素抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,使细胞周期阻滞在G1期,并通过上调促凋亡蛋白和下调抗凋亡蛋白,诱导凋亡。与顺铂联用能增强其促凋亡作用,两药存在协同作用。     

塔斯品碱衍生物TasD1-6对肝癌Hep3B细胞生长的抑制作用研究

目的考察塔斯品碱衍生物Tas D1-6对肝癌细胞株Hep3B、Hep G2和BEL7402的生长抑制作用及其作用机制。方法应用MTT法和实时细胞分析(RTCA)技术检测Tas D1-6对Hep3B、Hep G2和BEL7402细胞增殖的影响,筛选敏感株后采用结晶紫染色进行细胞形态学观察,根据Annexin V FITC/PI双染法和Hoechst 33258染色法考察Tas D1-6对细胞凋亡的影响,采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 MTT法和RTCA结果均表明Tas D1-6能明显抑制Hep3B细胞的增殖,MTT检测其半数抑制浓度(IC50)值为(11.3±1.6)μmol/L,确定后续给药浓度分别为3、6、12μmol/L;形态学观察结果表明Tas D1-6高浓度下能明显抑制Hep3B细胞增殖,且细胞皱缩,形态发生明显变化;Annexin V FITC/PI双染法和Hoechst 33258染色法均表明Tas D1-6可诱导细胞发生凋亡,且呈剂量依赖性;Western blotting结果表明Tas D1-6可上调p53和促凋亡蛋白Bax表达,并下调抑凋亡蛋白Mcl-1表达;流式细胞仪检测细胞周期表明Tas D1-6可将Hep3B细胞阻滞于G1期。结论 Tas D1-6可抑制肝癌细胞增殖,其对Hep3B细胞作用最为显著,其作用机制可能为通过上调p53和促凋亡蛋白Bax,下调抑凋亡蛋白Mcl-1诱导细胞凋亡的产生,同时将细胞周期阻滞于G_1期,抑制细胞增殖。     

迷迭香酸对人结肠癌HCT-8细胞增殖和凋亡的影响及分子机制研究

目的研究迷迭香酸对人结肠癌HCT-8细胞增殖和凋亡的影响,并探究相关机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度迷迭香酸作用不同时间后HCT-8细胞的增殖情况;根据CCK-8法结果确定迷迭香酸15、45、75μmol/L作用72 h,考察HCT-8细胞的凋亡和相关基因及蛋白的表达;通过流式细胞术检测HCT-8细胞的凋亡率;采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)法检测p53、Bax和Puma基因的m RNA表达;通过Western blotting法检测p53、Bax、Puma和active Caspase-9的蛋白表达水平。结果迷迭香酸能够抑制HCT-8细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性。15、45μmol/L的迷迭香酸主要诱导HCT-8细胞早期凋亡(P0.01),75μmol/L的迷迭香酸主要诱导HCT-8细胞晚期凋亡(P0.01)。迷迭香酸可以使Puma的m RNA表达上调,并呈浓度依赖性;45、75μmol/L的迷迭香酸可以使p53和Bax的m RNA表达升高(P0.05)。迷迭香酸可以上调Puma、Bax和active Caspase-9的蛋白表达水平,并呈浓度依赖性;75μmol/L的迷迭香酸可以使p53的蛋白表达明显升高(P0.05)。结论迷迭香酸对HCT-8细胞具有明显的增殖抑制作用,并且是通过诱导凋亡实现的,促凋亡蛋白p53、Puma、Bax和active Caspase-9诱导了凋亡的发生。     

松油烯-4-醇通过线粒体途径诱导宫颈癌Siha细胞凋亡的机制研究

目的 探讨松油烯-4-醇对宫颈癌Siha细胞凋亡的影响以及其可能的机制。方法 采用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养Siha细胞,并将其分为对照组、顺铂组(10μmol/L)和5、7.5、10μmol/L松油烯-4-醇组。MTT法检测不同浓度松油烯-4-醇对Siha细胞增殖的影响,TUNEL荧光染色法和Annexin V-FITC/PI法检测Siha细胞凋亡情况,JC-1染色检测线粒体膜电位变化,RT-qPCR法检测Siha细胞Bax、cytochrome c、caspase9、HPV E6/E7 mRNA表达,Western blot法检测Siha细胞Bax、Bcl-2、cytochrome c、cleaved-caspase9蛋白表达。结果 松油烯-4-醇(5、7.5、10μmol/L)处理Siha细胞24 h后,细胞增殖能力减弱(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),线粒体膜电位降低(P<0.05),细胞Bax、cytochrome c、cleaved-caspase9蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),...     

川芎嗪抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的研究川芎嗪对大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖和凋亡的影响。方法采用改良组织块和胰酶消化联合培养原代ASMCs,以血小板源生长因子(PDGF)诱导ASMCs增殖建立模型。采用MTT法检测不同浓度川芎嗪作用不同时间对ASMCs增殖的抑制,Hoechst33342染色检测细胞凋亡,Western blot检测ERK1/2蛋白表达情况。结果 MTT检测川芎嗪处理(6,12,24,36和48 h)后,与对照组比较,12.5μmol/L组、25μmol/L组、50μmol/L组和100μmol/L组的细胞平均抑制率均显著增加(P均<0.05)。Hoechst 33342染色观察到50μmol/L组、100μmol/L组和200μmol/L组川芎嗪中强荧光细胞比例随川芎嗪剂量增大而增多,细胞核内多个不均一蓝染现象。川芎嗪(200μmol/L组)和PDGF(20 pg/L)共同处理后,随作用时间增加,ERK1/2蛋白表达水平显著降低。结论川芎嗪对ASMCs增殖有抑制作用,同时高浓度的川芎嗪可促进ASMCs凋亡,可能与下调ERK1/2的表达有关。     

辣椒素对胰腺癌SW1990细胞作用的研究

目的:探讨辣椒素对胰腺癌细胞株SW1990细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法:不同浓度的辣椒素(0,100,150,200,250,300μmol·L-1)作用胰腺癌SW1990细胞12,24,48 h后,CCK-8法检测胰腺癌细胞株SW1990细胞的增殖作用;辣椒素(0,150,200,250μmol·L-1)作用胰腺癌SW1990细胞24 h后,采用流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡细胞的比率,分光光度法检测Caspase-3(半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3)酶活性,Western blot方法检测SW1990细胞中p38和p53蛋白水平表达。结果:辣椒素对胰腺癌细胞SW1990具有明显的生长抑制作用,并呈现时间、剂量依赖性;流式细胞仪检测结果显示,细胞周期被阻滞在G1/G0期,细胞凋亡率随药物浓度的增加而增加;磷酸化的p38,p53蛋白的表达量增加。结论:辣椒素可通过阻滞G1/G0细胞周期和诱导凋亡抑制胰腺癌细胞SW1990的生长,其分子机制可能是通过上调p38及其下游p53的表达,并进一步激活Caspase-3,从而促进SW1990细胞发生凋亡。     

川芎嗪上调MMP-2、MMP-9表达促进骨髓间充质干细胞迁移

目的体外研究川芎嗪(Ligustrazine)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)迁移及基质金属蛋白酶-2、9(matrix metalloproteinase-2,9,MMP-2、9)表达的影响。方法采用全骨髓贴壁法培养BMSCs,采用流式细胞仪检测BMSCs阳性抗原(CD29和CD90)及阴性抗原(CD34和CD45),鉴定BMSCs纯度;将BMSCs分成对照组,川芎嗪25、50、100μmol/L组和GM6001组(100μmol/L川芎嗪加MMPs抑制剂GM6001);川芎嗪处理24 h,采用Transwell细胞迁移实验和细胞划痕实验检测细胞迁移速度;Western blot检测BMSCs的MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果第3代BMSCs生长良好、形态均一,BMSCs阳性抗原CD29、CD90表达率分别为96.9%、97.3%,阴性抗原CD34、CD45表达率分别为0.2%、3.0%。与对照组比较,川芎嗪各剂量组迁移的细胞数量、细胞侵袭相对距离增加,BMSCs的MMP-2和MMP-9蛋白表达升高(P0.05,P0.01)。与川芎嗪100μmol/L组比较,川芎嗪25、50μmol/L组和GM6001组迁移的细胞数量、细胞侵袭相对距离减少(P0.01);川芎嗪25、50μmol/L组MMP-2蛋白表达降低(P0.01)。结论川芎嗪能在体外促进BMSCs的迁移,作用机制与其上调MMP-2、MMP-9蛋白表达有关。     

人参皂苷Rd抑制肝星状细胞活化作用与机制研究

目的:观察人参皂苷Rd对氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导肝星状细胞(HSCs)活化与分泌胶原作用的影响及其机制。方法:10μg/ml OX-LDL孵育诱导肝星状细胞活化建立体外肝纤维化模型,分别给予人参皂苷Rd(18.8mg/L或37.6mg/L)处理肝星状细胞48小时。MTT法检测肝星状细胞增殖,荧光定量PCR检测转化生长因子(TGF)-β1和CD36 m RNA表达;Western blot检测I型胶原及CD36、Smad2、Smad4表达。结果:与正常对照组相比,模型处理组的I型胶原蛋白表达与TGF-β1 m RNA表达均明显增加;与模型处理组相比,人参皂苷Rd(38.7mg/L)明显抑制肝星状细胞增殖,降低CD36、I型胶原和Smad4蛋白表达,同时,人参皂苷Rd对Smad2蛋白表达没有影响。结论:人参皂苷Rd可能通过降低CD36及Smad4蛋白表达减少细胞外胶原蛋白的合成,进而发挥抗纤维化作用。     

胡桃醌对类风湿关节炎关节成纤维样滑膜细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨胡桃醌对类风湿关节炎关节成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)增殖和凋亡的影响。方法不同浓度胡桃醌(0、5、10、20、30、40、50μmol/L)孵育RA-FLSs 24 h,胡桃醌(30μmol/L)分别和不同终质量浓度Akt激动剂SC79(0、0.1、0.5、0.8、1.0、1.5、1.8μg/mL)同时孵育RA-FLSs 24 h。BrdU和MTT法分别检测RA-FLSs的增殖能力和细胞活力,Annexin-V FITC/PI法和caspase-3活性检测试剂盒检测RA-FLSs凋亡,Western blot法检测Akt磷酸化和p21蛋白表达。结果与0μmol/L胡桃醌比较,胡桃醌(30、40、50μmol/L)显著抑制RA-FLSs细胞活力和增殖能力,促进其凋亡和caspase-3活性(P0.01);30μmol/L胡桃醌能显著抑制Akt磷酸化,促进p21蛋白表达(P0.01)。与30μmol/L胡桃醌比较,SC79(1.0μg/mL)与30μmol/L胡桃醌共同处理时,p21蛋白表达显著下降,并能促进RA-FLSs细胞凋亡,抑制其增殖(P0.01)。结论胡桃醌可通过调节Akt磷酸化来调控p21表达,进而调节RA-FLSs增殖和凋亡过程,为类风湿关节炎的治疗提供价值。     

白花丹醌对瘦素刺激的人肝星状细胞周期及其相关蛋白表达的影响

目的 研究白花丹醌对瘦素刺激的体外培养人肝星状细胞(HSC-LX2)细胞周期及周期相关蛋白表达的影响,探讨白花丹醌抗肝纤维化的作用机制.方法 ELISA法检测HSC-LX2细胞培养上清液中自分泌瘦素水平.将HSC-LX2细胞分成对照组,瘦素组,白花丹醌2、8 μmol/L组,秋水仙碱6.25 μg/mL阳性对照组.除对照组外,其余各组细胞用瘦素100 μg/mL刺激24 h、再与药物共同培养24 h后,流式细胞仪检测HSC-LX2细胞周期,Western blotting法检测细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclinE1、p21的表达.结果 HSC-LX2细胞自分泌瘦素的浓度先随着培养时间的延长而递减,24h达到低谷值,48h后又升至6h水平,每个时间点分泌的瘦素量无显著差异(P＞0.05).与对照组相比,瘦素组HSC-LX2细胞增殖能力显著增强,S期和G2/M期细胞比例显著增加;白花丹醌2、8μmol/L干预HSC-LX2细胞后,G0/G1期细胞的比例明显提高,而S期和G2/M期细胞比例明显降低,且呈明显的浓度相关性.与对照组比较,瘦素组HSC-LX2细胞经瘦素刺激后细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin E1的量显著增加,p21蛋白的表达受到抑制;白花丹醌2、8μmol/L和秋水仙碱明显降低cyclin Dl、cyclin E1蛋白水平,增强p21蛋白表达.结论 白花丹醌可明显抑制瘦素诱导的HSC-LX2细胞增殖,该作用主要是通过抑制细胞由G0/G1期向S期转变而产生的,作用机制可能与其降低cyclin D1、cyclin E1蛋白水平,增加p21蛋白表达相关.     

耳鸣(肾精亏损型)临床资料研究

[目的]对2007年11月至2008年11月就诊的主观性耳鸣患者246例,排除其他中医证型,主要研究肾精亏损型耳鸣患者耳鸣的临床特征,变化规律及耳鸣产生的影响等.[方法]选择肾精亏损型耳鸣患者,记录临床症状及体征,采用电测听及耳鸣匹配、听觉脑干诱发电位(ABR)等方法检查,并将资料进行统计分析.[结果]患者年龄以51～60岁最多见,其次为61～70岁.耳鸣响度的自我评分与响度匹配值之间无关联.大多数病例的耳鸣病程在一年之内.大部分患者受耳鸣困扰的程度在中度以下.ABR测试结果听力正常者占25%,右侧和左侧听神经传导至脑干功能障碍患者分别占13%和19%,双侧听神经传导功能障碍占16%.[结论]临床耳鸣患者多数为肾精亏损型,年龄以51～60岁最多见,男女比例相当,大部分患者听神经传导障碍和脑干功能障碍,高音调耳鸣患者居多.     

珍珠母超微粉蛋白及寡肽对小鼠镇静安眠作用比较

目的比较珍珠母超微粉蛋白、寡肽对小鼠镇静安眠作用。方法利用PCPA制造小鼠失眠模型,观察小鼠的自主活动情况,ELISA法测小鼠血中ATCH含量并计算脑及脑系数。结果阳性对照组、寡肽组小鼠的自主活动次数显著降低,小鼠血中ACTH的含量增加,但脑干系数无影响。结论超微粉寡肽类成分(MCP)镇静安眠活性最强,为镇静安眠主要活性部位,调节ACTH可能是其镇静安眠机制。     

《老老恒言》论老年养生

简要论述了《老老恒言》中有关老年养生的思想和方法 ,认为饮食以调理脾胃为要 ,应注意饮食有节、五味调和、清淡为补 ;起居以养静为要 ,应注意调顺四时、起居有常、静养与导引相结合 ;养性以安命为要 ,应注意清心寡欲、修心养性     

辨证与辨病相结合辨治乳腺增生病

探讨乳腺增生病中医辨证分型的客观依据,泌免疫变化与中医辨证分型的相关性进行了总结和研究,医药辨治乳腺增生病的新思路。对乳腺增生病的红外光扫描诊断、病理分类、内分以期能够使微观医学与宏观辨证相结合,以开拓中医药辨治乳腺增生病的新思路。     

中药产业竞争力提升战略研究

本文运用了竞争力理论与战略理论，分析了中药产业竞争力提升的环境与条件，提出了提升中药产业竞争力的三大战略目标、三大总体战略、四条战略举措及三个实施阶段与重点任务。     

往来寒热证58例辨证论治探讨

收集我院门诊自2000年10月至2003年9月接诊的往来寒热证患者58例,实验室检查排除疟疾(血涂片均未找见疟原虫),分别从少阳辨证论治33例,从膜原辨证论治25例,疗效满意。     

咳嗽六经辨治初探

六经皆有咳嗽,寒热皆可致咳,治疗上不可拘于一理一方,当穷究其机,辨证施治,方能事半功倍。以六经辨证为纲,分析《伤寒杂病论》对咳嗽的有关论述,以期提高咳嗽的临床疗效。     

中医“治未病”理论的研究

治未病是中医学重要的防治思想,即预防疾病的发生和发展,防惠于未然的预防学思想,即未病之前,防止疾病的发生;已病之后,防止疾病的传变,强调以“预防为主”。本文从治未病的渊源;治未病思想的实质内容;“治未病”理论的应用;“治未病”临床研究进展等几方面解释治未病。     

丁香苦苷不同给药途径的药物动力学研究

目的:研究并比较丁香苦苷单体两种给药途径在家兔体内的药物动力学过程,考察丁香苦苷单体口服后的绝对生物利用度。方法:家兔静脉注射丁香苦苷注射液和灌胃给予丁香苦苷水溶液,采集血样,固相萃取小柱活化方法处理血浆后高效液相色谱法测定丁香苦苷血浆浓度,采用药动学软件3P97进行数据处理,确定药动学参数。结果:丁香苦苷静脉给药后在体内符合二室模型分布,其主要药动学参数分别如下:T1/2α为2.41min,T1/2β为15.38min。灌胃给药后丁香苦苷的药动学行为符合一级吸收二室模型,Cmax为17.91min,T1/2(α)为9.642min,T1/2(β)31.748min。绝对生物利用度为35.9%。结论:丁香苦苷单体经口服和静脉两种给药途径给药后,吸收和消除均较快。     

老年股骨颈骨折术后的护理

股骨颈骨折是发生于老年人的常见骨科病，以女性多见。因老年人骨质疏松，有机质少，应变力差，所以只需较小扭转暴力就能引起骨折。骨折后，由于骨折部位血供差，骨折不愈合的可能性大，加之患者年老体弱、长期卧床，易发生危及生命的并发症，因此恰当的护理非常重要，现将护理体会介绍如下。