问：如何准确检测耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌？

答：检测mecA基因和其表达的青霉素结合蛋白（PBP2a）是预测葡萄球菌对苯唑西林耐药的最准确方法。罕见非mecA基因介导的苯唑西林耐药机制，纸片法测定苯唑西林为中介或耐药，应加测苯唑西林的MIC，如果MIC≥4ug／ml，即使mecA基因和PBP2a检测阴性，苯唑西林也应报告耐药。在凝固酶阴性葡萄球菌（CONS）中头孢西丁纸片扩散法的结果与检测mecA／PBP2a的一致性好于苯唑西林纸片，     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌的评价

目的评价头孢西丁（FOX）纸片扩散法（K-B）检测耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的临床应用价值。方法用头孢西丁纸片扩散法检测临床分离的139株凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）,并与苯唑西林（OXA）纸片扩散法、mecA基因检测进行比较。结果mecA基因阳性的109株CNS对FOX显示耐药,而对OXA则只有97株显示耐药。结论头孢西丁纸片扩散法与mecA基因检测高度一致,苯唑西林纸片扩散法则存在一定的差异,临床实验室应用FOX取代OXA来检测MRCNS。     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌的评价

目的评价头孢西丁（FOX）纸片扩散法（K-B）检测耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的临床应用价值。方法用头孢西丁纸片扩散法检测临床分离的139株凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）,并与苯唑西林（OXA）纸片扩散法、mecA基因检测进行比较。结果mecA基因阳性的109株CNS对FOX显示耐药,而对OXA则只有97株显示耐药。结论头孢西丁纸片扩散法与mecA基因检测高度一致,苯唑西林纸片扩散法则存在一定的差异,临床实验室应用FOX取代OXA来检测MRCNS。     

纸片法头孢西丁敏感的青霉素耐药葡萄球菌分析

目的 评估不同检测方法 对纸片法头孢西丁敏感,苯唑西林耐药葡萄球菌耐药性状的检测能力,并对非mecA基因介导苯唑西林耐药的匍萄球菌进行药敏谱分析.方法 收集2007年1月至2009年5月间复旦大学附属华山医院就诊患者呼吸道、尿、分泌物和无菌体液标本中分离得到的255株金黄色葡萄球菌,采用苯唑西林纸片法、苯唑西林MIC法、头孢西丁纸片法、头孢西丁MIC法枪测金黄色葡萄球菌对苯唑西林的敏感性:用苯唑西林MIC法和头孢西丁纸片法检测75株凝固酶阴性萄萄球菌对苯唑西林的敏感性:将所有葡萄球菌进行mecA基因检测,结合试验结果 分析葡萄球菌苯唑西林耐药原因,并对非mecA基因介导的苯唑西林耐药葡萄球菌用MIC法进行抗菌药敏谱分析.结果 255株纸片法头孢西丁敏感、青霉素耐药的金黄色葡萄球菌苯唑西林纸片法检测出6株中介,4株耐药;头孢西丁纸片法、头孢西丁MIC法、苯唑西林MIC法全敏感、mecA基因检测全阴性.75株纸片法头孢西丁敏感、青霉素耐药的凝固酶阴性葡萄球菌,苯唑西林MIC法59株敏感,16株耐药;mecA基因阴性为71株,阳性为4株.12株非mecA基因介导苯唑西林耐药的葡萄球菌庆大霉素敏感为10株,克林霉素8株、环丙沙星11株、红霉素6株、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑11株,头孢菌素类、替考拉宁、万古霉素、哌拉西林/他唑巴坦、四环素12株.结论 金黄色葡萄球菌用头孢西丁检测mecA基因介导的苯唑西林耐药,具有很好的可靠性.凝固酶阴性葡萄球菌最好同时使用头孢西丁纸片法和苯唑西林MIC法检测mecA基因介导的苯唑西林耐药,以提高检出率.非mecA基因介导的苯唑西林耐药,临床可依据实际药物敏感实验结果 选择性使用β内酰胺酶稳定的青霉素、β内酰胺酶抑制剂复合药、头孢类和碳青霉烯类药物治疗.     

如何准确检测耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌?

答:检测mecA基因和其表达的青霉素结合蛋白(PBP2a)是预测葡萄球菌对苯唑西林耐药的最准确方法。罕见非mecA基因介导的苯唑西林耐药机制,纸片法测定苯唑西林为中介或耐药,应加测苯唑西林的MIC,如果MIC≥4μg/ml,即使mecA基因和PBP2a检测阴性,苯唑西林也应报告耐药。在凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)中头孢西丁纸片扩散法的结果与检测mecA/PBP2a的一致性好于苯唑西林纸片,可以减少在非表皮葡萄球菌的CoNS中苯唑西林纸片的假阳性问题,所以应该首选头孢西丁纸片。对金黄色葡萄球菌两种纸片的结果相近,但头孢西丁纸片更容易读取结果。如何准…     

表型和基因扩增方法在耐甲氧西林葡萄球菌检测中的应用

目的比较研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的试验检测特性。方法按临床和实验室标准协会的标准分别测定和判断1μg苯唑西林纸片和30μg头孢西丁纸片在30℃和35℃时对金黄色葡萄球菌（138株）和凝固酶阴性葡萄球菌（128株）的抑菌环直径。苯唑西林盐平板采用点种法，mecA基因的检测采用PCR。结果苯唑西林和头孢西丁纸片在30℃孵育时对MRSA检测的敏感性均可达到100％，而在35℃孵育时，头孢西丁纸片对MRSA检出敏感性（94．7％）略高于苯唑西林纸片（93．3％）。苯唑西林和头孢西丁纸片在30℃和35℃对MRCNS检测的敏感性为100％。苯唑西林盐平板法对MRSA检测的敏感性和特异性与苯唑西林和头孢西丁纸片在30℃检测的敏感性和特异性相同，但对MRCNS检测的敏感性低于纸片法。结论利用头孢西丁纸片可提高对耐甲氧西林葡萄球菌的检测。     

头孢西丁纸片评价耐甲氧西林葡萄球菌的探讨

目的 评价头孢西丁纸片法检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的特异性和灵敏度。方法 收集临床分离金黄色葡萄球菌100株、凝固酶阴性葡萄球菌（CoNS）52株，分别进行头孢西丁纸片法、添加4oANaCl的头孢西丁纸片法、添加2％NaCl的苯唑西林纸片法以及苯唑西林-盐琼脂法检测，以苯唑西林-盐琼脂法作为MRS检测标准，按CLSI2006版标准判读结果。结果 头孢西丁纸片、添加4oANaCl的头孢西丁纸片、添加2oANaCl的苯唑西林纸片检测MRS特异性均达100．0％；对于金黄色葡萄球菌3种纸片法的灵敏度分别为82．7％、79．3％、72．4％；对于凝固酶阴性葡萄球菌，3种纸片法的灵敏度分别为97．9％、95．8oA、95．8％。加盐与不加盐头孢西丁纸片法检测MRS的差异无显著性（P〉0．06），耐药株抑菌圈直径（mm）分别为10．68士6．42、13．36士7．37（P〈0．01）。结论 加盐与不加盐头孢西丁纸片法均能可靠检测MRS，前者对耐药株结果更易判读。     

医院内不同标本分离耐甲氧西林葡萄球菌的耐药性分析

目的 了解医院耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)流行状况及其耐药性相关分析.方法 收集西安医学院附属医院临床标本中分离的132株金黄色葡萄球菌(SA)和100株凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)与同期医院环境及医务人员手中分离的5株SA和40株CNS,用苯唑西林和头孢西丁(K-B法)筛选MRS,再用PBP2a胶乳凝集法检测mecA基因,MIC法检测MRS对19种抗生素的耐药性;资料用NDST统计软件Fisher确切概率法进行组间分析.结果 137株SA中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)83株,占60.58%(83/137),140株CNS中凝固酶阴性耐甲氧西林葡萄球菌(MRCNS)74株,占52.86%(74/140);其中临床分离株和环境分离株MRSA检出率分别为62.12%(82/132)和20.00%(1/5),MRCNS检出率分别为70.00%(70/100),10.00%(4/40),并对157株MRS耐药菌株检测mecA基因,阳性率96.82%(152/157),对19种抗生素耐药性检测结果显示,MRS对利奈唑胺、万古霉素和新内吉耐药性0.00%,MRS对其他抗菌药物呈多重耐药.结论 MRS在医院内有较高的流行性,应引起医院预防感染部门的重视.     

病原生物学检验与临床

889份痰标本涂片与培养结果分析；分子水平快速诊断败血症致病菌的研究；头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；评价头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法测定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；基因多态性分析在凝固酶阴性葡萄球菌菌种鉴定中的应用；表皮葡萄球菌携带甲氧西林等五类抗生素耐药基因分析[编者按]     

头孢西丁琼脂筛选法检测耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌

耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）是导致医院感染和社区感染的重要病原菌之一。近年来，随着广谱抗菌药物的广泛应用，耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌的分离率逐渐增高、耐药性逐渐增强。Diekema等对分离自全球多个地区的凝固酶阴性葡萄球菌研究表明，该菌对苯唑西林的耐药率达70％以上。MRCNS对万古霉素耐药菌株的出现更使临床上对其感染的治疗成为十分棘手的问题。因此，快速、简便、准确检测MRCNS以指导临床合理用药对控制其感染显得尤为重要。2004年，美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）首次将头孢西丁纸片扩散法用于MRCNS的检测。本研究用不同培养周期和不同浓度的头孢西丁琼脂筛选平板检测了104株凝固酶阴性葡萄球菌并对该方法作了评价。     

聚合酶链反应检测mecA和mecI及其对葡萄球菌甲氧西林耐药的影响

目的了解葡萄球菌甲氧西林耐药基因mecA和调节基因mecR中的抑制基因mecI在葡萄球菌中的分布,探讨mecA、mecI和β-内酰胺酶对甲氧西林耐药性的影响。方法琼脂稀释法测定158株葡萄球菌苯唑西林MIC;聚合酶链反应检测mecA和mecI;用内切酶TrulⅠ进行mecI酶切分型。结果 158株葡萄球菌中,金黄色葡萄球菌(SA)66株,凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)92株,葡萄球菌对苯唑西林的总耐药率达44.3%(70/158)。158株葡萄球菌中,检出mecA阳性70株,其中SA 8株,CNS 62株。70株mecA阳性葡萄球菌中,检出mecI阳性12株,其中SA7株,CNS 5株;88株mecA阴性葡萄球菌中未检出mecI。对mecA阴性、苯唑西林MIC≥4μg/mL的菌株进行抑制实验后,再测定苯唑西林MIC,抑制后MIC下降8倍以上。结论耐甲氧西林葡萄球菌以mecA为其主要的甲氧西林耐药决定子;β-内酰胺酶和mecI基因对葡萄球菌甲氧西林耐药有一定的影响。     

前列腺液葡萄球菌耐药性检测

目的分析检测前列腺液葡萄球菌耐药性,为临床诊断治疗提供参考依据。方法临床标本分离葡萄球菌经API20 STAPH证实,再采用头孢西丁(FOX)纸片法、苯唑西林(OXA)纸片法、肉汤稀释(MIC)法GPS药敏卡对耐甲氧西林葡萄球菌检测比较,并进行耐药性分析。结果340株葡萄球菌中金黄色葡萄球菌(MRSA)占67.54%(129/191),耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)占65.10%(97/149),两者比较无明显差异(P>0.05)。FOX纸片法与OXA纸片法、MIC法检测MRSA的敏感性和特异性无明显差异(P>0.05)。检测MRCNS的特异性FOX纸片法明显优于OXA纸片法(69.23%)和MIC法(59.62%)(P<0.01),敏感性无明显差异(P>0.05)。耐甲氧西林葡萄球菌耐药率高于甲氧西林敏感葡萄球菌(P<0.01),并且多重耐药。对替考拉宁有11株中敏,但未发现替考拉宁和万古霉素耐药菌株。结论耐甲氧西林葡萄球菌检出率高而且耐药压力增大,检测MRSA和MRCNS应选择操作简单、敏感性和特异性高的FOX纸片法,治疗应根据药敏结果选择抗生素。     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌的临床应用评价

目的用PCR法检测葡萄球菌的mecA基因为参比方法,评价头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的临床应用价值。方法临床分离的163株葡萄球菌,分别用头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法、PCR法检测mecA基因,以PCR扩增法检测mecA基因作为参比方法进行比较。结果163株临床分离的葡萄球菌经PCR法检测mecA基因,阳性率为81.0%,其中,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的发生率分别为74.1%和83.8%。头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法用于检测MRSA与PCR法检测mecA基因有很好的一致性,其敏感性和特异性均为100.0%,而对于凝固酶阴性葡萄球菌,头孢西丁纸片扩散法比苯唑西林纸片扩散法检测MRS的敏感性和特异性高,敏感性分别为100.0%和94.3%,特异性分别为96.0%和88.0%。结论头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌具有很高的灵敏度,但对于mecA基因阴性的凝固酶阴性葡萄球菌,用头孢西丁纸片法检测,约有5%菌株要误报为MRCNS。由于头孢西丁纸片扩散法操作简单,较苯唑西林纸片扩散法检出MRS的敏感度和特异性高,结果与PCR法检测mecA基因有很好的相关性,不需特殊仪器设备,可在临床微生物实验室常规开展。     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌

目的以PCR法检测葡萄球菌的mecA基因(mecA基因法)为标准，评价头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林盐平板法检测葡萄球菌中耐甲氧西林葡萄球菌的灵敏度和特异性。方法PCR扩增葡萄球菌的特异性mecA基因片段，头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林盐平板法检测葡萄球菌中耐甲氧西林葡萄球菌，药敏试验方法按标准K—B(Kirby-Bauer)法进行。结果在190株临床分离的葡萄球菌中金黄色葡萄球菌(金葡菌)138株，表皮葡萄球菌30株，溶血葡萄球菌22株，经。PCR法检测mecA基因，金葡菌中耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和凝固酶阴性葡萄球菌中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的发生率分别为81.2％(112／138)、96．1％(50／52)。头孢西丁纸片扩散法检测金葡菌中MRSA和CNS中MRCNS的发生率分别为81.2％(112／138)、94．2％(49／52)，与mecA基因法结果相比较，头孢西丁纸片扩散法检测葡萄球菌中MRS的灵敏度和特异度分别为99．4％(161／162)、100．0％(28／28)，两者符合率为99．5％(189／190)。2种方法所获得的结果经统计学处理，两者差异无显著性。结论头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌具有很高的灵敏度和特异度，适合在临床微生物实验室中进行推广。     

一种简单的筛选耐甲氧西林葡萄球菌方法

目的推荐美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)关于6ug／ml苯唑西林 4％NaCl盐平板(以下简称盐平板法)检测甲氧西林耐药葡萄球菌。方法使用NCCLS推荐的盐平板法检测华山医院临床分离的葡萄球菌共894株。结果(1)耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)苯唑西林纸片法的检出率为84．2％(538／639)，盐平板法的检出率为86．4％(552／639)，而耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的检出率2种方法分别为82．0(209／255)、90．6％(231／255)；(2)有14株纸片法测定为中介的金黄色葡萄球菌和22株纸片法检测为甲氧西林敏感(MS)的凝固酶阴性葡萄球菌，盐平板检测均为甲氧西林耐药(MR)，经聚合酶链反应(PCR)检测mecA基因结果均为阳性，显示PCR检测与盐平板检测结果一致；(3)随机取上述纸片法和盐平板2种方法检测均为MS者9株、MR者15株，同时进行mecA基因的PCR检测，结果显示全部与盐平板法和苯唑西林纸片法检测结果符合。结论在临床微生物实验室应该采用NCCLS推荐的6ug／ml苯唑西林 4％NaCl盐平板对MRSA和MRCNS进行检测，以供临床诊断和选用抗生素。     

头孢西丁诱导试验证实一株苯唑西林敏感的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的研究不同浓度的头孢西丁对1株苯唑西林敏感的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）体外抗菌活性的影响和青霉素结合蛋白（PBP）2a的诱导作用。方法利用不同浓度的头孢西丁诱导1株苯唑西林敏感的MRSA,测定诱导前后苯唑西林的药敏直径、最低抑菌浓度（MIC）和出现PBP2a阳性时的菌液浓度。结果在低浓度头孢西丁诱导前后苯唑西林的药敏直径和MIC变化不大,高浓度则出现较大变化,在诱导前后出现PBP2a凝集试验阳性的菌液浓度有明显变化。结论头孢西丁可诱导金黄色葡萄球菌产生PBP2a。     

两种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的K-B法应用评价

目的评价两种分别使用MH琼脂(头孢西丁)和高盐琼脂(苯唑西林)纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床应用价值。方法用头孢西丁纸片在MH琼脂平板上进行纸片扩散法(K-B法)检测临床分离的89株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,并与苯唑西林纸片扩散法(K-B法)、mecA基因检测进行比较。结果在MH琼脂使用头孢西丁纸片检测MRSA优于高盐琼脂苯唑西林纸片扩散法,并与PCR检测mecA基因的方法高度一致。结论头孢西丁纸片扩散法是筛选和确认耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)一种简单、可靠的实验方法。     

纸片法、ATB法与苯唑西林琼脂筛选法检测耐甲氧西林葡萄球菌的结果比较

目的 了解我院耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的感染情况及其寻找适合医院检测MRS最简易、准确的方法。方法 通过苯唑西林纸片法、半自动细菌分析系统（ATB）法、苯唑西林琼脂筛选法进行MRS检测以及比较其阳性检出率，并以苯唑西林琼脂筛选法为对照，分别比较纸片法、ATB法与它的符合率。结果 86株金黄色葡萄球菌（SA）中，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）占69.7%(60/86)，114株凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）中，耐甲氧西林菌株（MRSCoN)占78.1%(89/114)。结论 以苯唑西林琼脂筛选法为对照，纸片法符合率97．9％，ATB仪器检测符合率为91．2％，仪器检测不及纸片法。     

MRSA与MRCNS的临床感染特点及其耐药性分析

目的监测并分析本院耐苯唑西林金黄色葡萄球菌（MRSA）及凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的临床感染特点及其耐药性变化,为临床合理使用抗菌药物提供指导。方法对2005年1～12月从本院临床送检的各类标本中分离鉴定出的MRSA及MRCNS进行10种抗生素的药敏试验,对其药敏结果进行统计和分析,并探讨其临床感染与耐药特点。结果所分离的202株金黄色葡萄球菌中,MRSA有153株,占75．7％;81株凝固酶阴性葡萄球菌中,MRCNS有53株,占65．4％。MRSA的检出以ICU为最多（59／202）,其阳性率高至89．8％（53／59）,次为呼吸内科和神经内科（9／202和6／202）,其检出率也高达88．9％（8／9）和50．0oA（3／6）;而MRCNS的检出以烧伤科和心外科最高（10／81和9／81）,其阳性检出率达70．0％和55．6％（7／10和5／9）。MRSA和MRCNS株对大环内酯类、氨基糖甙类、氟喹诺酮类、磺胺类等抗菌药物呈多重耐药性。经头孢西丁纸片扩散法确证,所有耐苯唑西林葡萄球菌（MRS）对其均显示100％耐药。结论耐苯唑西林葡萄球菌（MRS）是造成医院感染的主要病原菌之一,也是医院感染防控的难点之一。及时了解本院MRSA、MRCNS感染的分布与特征,监测其耐药性,有助于及时采取合理的防治措施,控制感染及扩散。     

应用MRSA ID产色琼脂培养基等四种方法检测和鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的比较MRSAID产色琼脂培养基及其他3种方法检测和鉴定甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）。方法选择临床118株葡萄球菌用（118株葡萄球菌中金黄色葡萄球菌108株，凝固酶阴性葡萄球菌10株）细菌鉴定仪鉴定到种，用MRSAID琼脂筛选法、苯唑西林平板筛选法、头孢西丁纸片法比较MRSA的检测情况，同时检测金黄色葡萄球菌的mecA基因作为金标准，同时用大肠埃希菌ATCC25922，金黄色葡萄球菌ATCC25923，铜绿假单胞菌ATCC27853和粪肠球菌ATCC29212做干扰试验。结果金黄色葡萄球菌用PCR检测其meeA基因，共检测到80株阳性菌株；用MRSAID琼脂筛选法符合率为100％，苯唑西林平板筛选法符合率为97．5％，头孢西丁纸片法符合率为100％；有1株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）和1株凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）对MRSAID琼脂的显色有干扰，出现了浅绿色的细小菌落。用标准菌株做对照均没有生长。结论MRSAID琼脂平板可以对MRSA进行主动快速监测。