DEAE-磁性纳米粒子提纯质粒的研究

目的应用纳米磁性粒子纯化质粒.方法将葡聚糖-DEAE通过共沉淀法包裹在纳米磁性粒子表面,利用带正电荷的DEAE与带负电荷的核酸之间的电荷吸附作用,通过离子交换,在细菌裂解上清液中提纯质粒.结果可以提纯出高纯度的质粒.结论在纳米磁性粒子外包裹上DEAE基团,可以提纯出高纯度的质粒.     

磁性纳米粒子与链霉亲和素的连接及初步应用

目的在磁性纳米粒子表面偶联上链霉亲和素,用于VEGF质粒的提纯.方法用缩合反应将链霉亲和素偶联在磁性纳米粒子上, NBT/BCIP显色法和放射性核素标记法测定链霉亲和素的连接;利用生物素和链霉亲和素的高亲和力将生物素连接的探针连接在磁性纳米粒子上,制备成三链螺旋磁性纳米粒子;修饰好的粒子从含有VEGF质粒的细菌裂解上清液中提纯质粒.结果显色反应证实链霉亲和素连接在磁性纳米粒子表面,核素标记法显示其结合率在室温时为2.5 μg/100 μg,65 ℃时为22.28 μg/100 μg;三链螺旋磁性纳米粒子可以提纯出质粒,且纯度较高.结论通过一定修饰的磁性纳米粒子可以从含有质粒的细菌裂解上清液中提纯质粒.     

磁性纳米粒子与链霉亲和素的连接及初步应用

目的在磁性纳米粒子表面偶联上链霉亲和素,用于VEGF质粒的提纯.方法用缩合反应将链霉亲和素偶联在磁性纳米粒子上, NBT/BCIP显色法和放射性核素标记法测定链霉亲和素的连接;利用生物素和链霉亲和素的高亲和力将生物素连接的探针连接在磁性纳米粒子上,制备成三链螺旋磁性纳米粒子;修饰好的粒子从含有VEGF质粒的细菌裂解上清液中提纯质粒.结果显色反应证实链霉亲和素连接在磁性纳米粒子表面,核素标记法显示其结合率在室温时为2.5 μg/100 μg,65 ℃时为22.28 μg/100 μg;三链螺旋磁性纳米粒子可以提纯出质粒,且纯度较高.结论通过一定修饰的磁性纳米粒子可以从含有质粒的细菌裂解上清液中提纯质粒.     

磁性纳米粒子的表面修饰及实际应用的研究进展

磁性纳米粒子具有表面积大、饱和度高、毒性低和磁化强度好等优点,在很多个领域都有很高的应用价值,近些年磁性纳米粒子的发展非常迅速。但磁性纳米粒子在应用过程中也有缺点,比如磁性纳米粒子的表面效应较高,在溶液之中,很有可能会出现聚集反应等,使其应用受到限制。通过适当修饰的磁性纳米粒子可以提高粒子的物理化学性质,不仅提高了其稳定性、可降解性,并且生物相容性也明显改善,提高了其应用的价值。该文主要从磁性纳米粒子的表面修饰功能着手,探讨这一粒子在环境分离以及生物分离等多个领域的应用,展望未来磁性纳米粒子的发展前景。     

靶向治疗用Fe_3O_4 及其白蛋白包被磁性纳米粒子的制备

目的制备用于肿瘤靶向治疗的Fe3O4及其白蛋白包被的磁性纳米粒子.方法采用部分还原法制备Fe3O4纳米粒子,通过微乳化方法制备了白蛋白包被的Fe3O4磁性纳米颗粒.结果Fe3O4粒径为10nm左右,X-射线粉末衍射分析显示Fe3O4纳米磁性微粒是典型的尖晶石构型;白蛋白包被的磁性纳米粒子直径在200nm左右.结论Fe3O4及其白蛋白包被的磁性纳米粒子适于用于肿瘤靶向治疗的进一步研究.     

磁性纳米粒的药代动力学特性及其在肿瘤诊断治疗中的应用

磁性纳米粒子是结合了纳米科技和电磁技术的高新材料，在生物、医药领域有很好的应用前景。本文通过概述载药磁性纳米粒的药代动力学研究，对磁性纳米粒在癌症诊断和治疗中的应用进行了探讨。     

聚集和表面分子吸附对磁性纳米粒子交流磁化率的影响

目的:研究聚集和表面分子吸附对磁性纳米粒子交流磁化率的影响,为发展基于磁性纳米粒子磁化率测量的生物传感方法提供依据。方法:用透射电子显微镜及振动样品磁强计分别对磁性纳米粒子的磁核粒径、磁性特征进行测量,利用实验室自建的交流磁化率测量装置,对在不同聚集状态和表面吸附抗原、抗体等生物分子后磁性纳米粒子的交流磁化率谱进行测量。结果:透射电子显微镜测量表明,实验所用氧化铁纳米粒子平均磁核直径10 nm,但是由于溶液中粒子之间的磁偶极相互作用而以聚集体的形式存在,表现出较大的水动力尺寸及其分布。振动样品磁强计测量表明,氧化铁纳米粒子的饱和磁化强度为61.43 emu.g-1。交流磁化率谱测量表明,随着氧化铁纳米粒子在溶液中水动力尺寸的增加,即聚集体尺寸的增加,磁化率谱中对应的磁动力学特征频率减小,与理论预示一致。当缓冲溶液中磁性纳米粒子表面吸附IgG以及进一步结合羊抗人IgG后,磁动力学特征频率逐渐降低,这与表面吸附导致的水动力尺寸逐渐增加的结果是一致的。结论:溶液中磁性纳米粒子的聚集状态和生物分子吸附对其交流磁化率谱有较大的影响,主要表现为粒子的水动力尺寸增加所导致的磁动力特征频率发生移动。基于磁性纳米粒子的磁动力特...     

超顺磁性Fe2O3纳米粒子对RAW264.7细胞吞噬功能的影响

目的 观察磁性纳米粒子对巨噬细胞的吞噬功能有无抑制作用.方法 利用透射电子显微镜观察RAW264.7细胞对磁性纳米粒子(二巯基丁二酸修饰的γ-三氧化二铁纳米粒子,DMSA-γ-Fe2O3)的摄入情况,流式细胞术检测磁性纳米粒子预处理的RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌(E.coli)的吞噬能力.结果 Fe2O3磁性纳米粒子能够被RAW264.7细胞摄入,并且随孵育时间延长进入细胞内的磁性纳米粒子增多;与正常RAW264.7细胞相比,磁性纳米粒子预处理的RAW264.7细胞参与吞噬活动的细胞百分比差异无统计学意义(P＞0.05)(均约为80%细胞有吞噬活动),但磁性纳米粒子预处理的RAW264.7细胞吞噬荧光标记的E.coli的数量显著减少(P＜0.05),而磁性纳米粒子预处理不同时间的RAW264.7细胞其吞噬功能差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Fe2O3磁性纳米粒子抑制了RAW264.7细胞的吞噬能力.     

氯化锂用于质粒DNA的提纯

在分子生物学实验中常常涉及到小量质粒 DNA的提取和纯化。用质粒 DNA提纯试剂盒 ,虽然能得到高纯度的质粒DNA,但成本过高 ,不适合大量使用。用常规的苯酚氯仿提纯法 ,步骤繁琐 ,而且得到的产物中常残留有苯酚或其它杂质而影响后续的酶切分析等工作。再者 ,苯酚有害人体健康 ,而且废弃的苯酚又可造成环境污染。在本实验中 ,已摸索出一种可用于替代苯酚氯仿提纯质粒 DNA的氯化锂质粒 DNA提纯法。该方法简便易行 ,安全经济 ,所获结果稳定性好。1　材料与方法1.1　材料1.1.1　菌株　 p BR32 2 / C6 0 0 ,RP4/ 1485为本室保存的菌株 ;p …     

磁性纳米复合物PEG-APTES-MNP介导的磁热作用可有效抑制肝癌的生长

目的观察磁性纳米复合物PEG-APTES-MNP介导的磁热对肝癌的影响。方法合成磁性纳米粒子复合物,并将与肝癌细 胞HepG2共同孵育,并将其分为纳米粒磁热治疗组、纳米粒治疗组和对照组。普鲁氏蓝染色法检测HepG2细胞对磁性纳米粒 子的摄取效率;MTT法检及流式细胞术测磁性纳米粒子对HepG2的抑制效果;激光共聚焦检测磁性纳米粒子在细胞内产生活 性氧自由基（ROS）水平;将裸鼠植瘤,并将其分为PEG-APTES-MNP组（只注射磁性纳米复合物）、PEG-APTES-MNP（Heat）组 （注射磁性纳米复合物并进行磁热治疗）和对照组（注射等体积PBS）,每组5只,分别进行治疗并检测其在动物水平对肿瘤的抑 制作用。结果合成的磁性纳米复物表征准确;血细胞凝集实验表明其不会引起血细胞的聚集,具有良好的理化性质和生物相 容性;在肿瘤细胞HepG2内可以产生大量活性氧自由基,在体外实验中协同磁热对其增殖产生了更强的抑制效果（P<0.05）,并 促进细胞凋亡;在体内实验中,其介导磁热的作用下可以有效抑制肝癌动物模型肿瘤生长（P<0.05）。结论磁性纳米复合物 PEG-APTES-MNP具有良好的理化性质和生物相容性,其介导的磁热作用可有效抑制HepG2细胞及肝癌动物模型肿瘤生长, 可以作为肝癌的潜在纳米药物。     

人心肌特异性肌钙蛋白的提取与鉴定

目的从人心肌组织中提取和纯化心肌特异性肌钙蛋白,为建立心肌梗塞病人免疫诊断试剂准备抗原。方法取新鲜人心室肌组织经捣碎离心提取,ＤＥＡＥ５２柱层析纯化,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳鉴定。结果１００ｇ心室肌可提取３７ｍｇ纯品肌钙蛋白。结论本次提取的心肌特异性肌钙蛋白纯度较高,能作抗原使用。     

应用淋巴细胞分离液纯化大鼠胰岛的实验研究

目的：建立一种简便、易行和高效的胰岛分离纯化方法，以减少对胰岛细胞的损伤，获得高质量的胰岛组织。方法：选用SD大鼠经胆总管原位灌注胶原酶液，分离消化胰腺组织，用淋巴细胞分离液(histopaque-1077)纯化胰岛细胞。结果：可收获大量的高纯度胰岛，纯度达95％以上，体外葡萄糖刺激实验表明胰岛对刺激反应良好，将胰岛移植于糖尿病小鼠体内可短期纠正其高血糖状态。结论：应用单一密度淋巴细胞分离液纯化大鼠胰岛的方法是一种操作简单、价格低廉、重复性好的大鼠胰岛纯化方法。     

小鼠肺腺癌热休克蛋白70-抗原肽复合物的纯化

目的　探索肿瘤热休克蛋白 70抗原肽复合物 (HCA70 )分离、纯化的方法。方法　采用低渗、反复冻融匀浆、ADP -Agarose亲和层析结合DEAE离子交换层析 ,从体外培养的小鼠肺腺癌细胞 (LA - 795)中纯化HAC70 ;通过SDS -PAGE电泳、Westernblot检测、小鼠移植瘤动物实验证实所获得蛋白是否为HAC70。结果　获得蛋白分子量为 70kD左右 ,与抗HSP70特异单抗结合 ,用此蛋白主动免疫的小鼠可抵抗LA795细胞的攻击 ,获得了高纯度的HAC70。结论　采用ADP -Agarose亲和层析结合DEAE离子交换层析可获得高纯度的HAC70。     

重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的纯化及生物学活性鉴定

目的：纯化rLTB并对其生物学功能进行初步研究。方法：重组基因工程菌发酵后，以包涵体形式表达的rLTB经过洗涤、变性溶解后，分别采用Q　Sepharose^TM High Performance阴离子交换层析和Phenyl FF(high sub）疏水层析对其进行纯化并透析复性，然后采用SDS－PAGE和HPLC检测纯度，并选用ELISA、动物实验和Western-blotting实验对纯化蛋白的生物学活性进行鉴定。结果：得到纯度达97．85％的rLTB,复性的rLTB经检测具有良好的生物学活性。结论：得到纯度较高、生物学活性较好的rLTB，可用于进一步的研究。     

人心肌肌钙蛋白T的提取、纯化及鉴定研究

目的 :探究一种简便易行的人心肌肌钙蛋白T(cTnT)的提纯方法并进行鉴定。　方法 :采用匀浆、离心、70℃加热、冰浴、饱和硫酸铵盐析、透析、DEAE 纤维素层析等方法提纯cTnT ,并进行鉴定和免疫活性检测。　结果 :1 0 0g心肌组织中获得cTnT 2 1 .35 6mg ,纯度最高达 91 .7%。　结论 :建立的方法能成功提取纯度较高 ,且具有免疫活性的人心肌cTnT ,为建立适用于临床的cTnT检测方法奠定基础     

人甲状腺球蛋白的提取和纯化

目的：提取高纯度的甲状腺球蛋白（Ｔｇ）,为制备Ｔｇ抗血清及Ｔｇ单克隆抗体,建立Ｔｇ的检验方法及ＴｇＡｂ的测定方法做准备。方法：将手术切除的新鲜人甲状腺组织,加入生理盐水匀浆、过滤,把滤液浓缩,经二次ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱层析,再经ＤＥＡＥ纤维素离子交换层析。结果：获得较高纯度的人Ｔｇ,经ＳＤＳＰＡＧＥ鉴定,显示为１条区带,表明纯度较高,经免疫电泳鉴定,提纯的Ｔｇ有较好的免疫活性。结论：这种提     

单抗亲和层析生产高比活HCG方法的建立

本实验以健康孕妇尿为原料，利用苯甲酸沉淀，有机溶剂沉积，离子交换层析和凝胶过滤等方法得到ＨＣＧ纯品（１４０００ＩＵ／ｍｇ）。用该产品免疫小鼠。将产生的免疫鼠脾脏与ＮＳ─１骨髓瘤细胞用半固相法进行杂交细胞融合，筛选纯化出ＨＣＧ单抗克隆抗体（Ｋａ＝７．５×１０８ｍ１）。将ＨＣＧ单抗与Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制成免疫吸附亲和层析柱，可将ＨＣＧ粗品（２０００ＩＵ／ｍｇ）一次纯化得到ＨＣＧ纯品（１５０００ＩＵ／ｍｇ）。建立了一种简捷、快速、经济、产品活性高的提纯ＨＣＧ的新方法。     

电鳐乙酰胆碱受体的分离和纯化

[目的 ]分离和纯化具有活性的电鳐乙酰胆碱受体 .[方法 ]将电鳐电器官肌肉制成匀浆 ,细胞经裂解制备电鳐乙酰胆碱受体粗提液 .经眼镜蛇毒素偶联的Sepharose 4B层析柱亲和吸附 ,得到纯化的电鳐乙酰胆碱受体 .应用酶联免疫吸附试验检查纯化的电鳐乙酰胆碱受体与抗乙酰胆碱受体抗体的结合活性 .[结果 ]分离和纯化的电鳐乙酰胆碱受体能与抗乙酰胆碱受体抗体结合 ,且结合活性高 .[结论 ]从电鳐电器官中分离和纯化的乙酰胆碱受体活性高、特异性强 ,可作为抗原在酶联免疫吸附试验中用于检查抗乙酰胆碱受体抗体 .     

外周血T淋巴细胞纯化方法的研究

目的建立健康成人外周血T淋巴细胞分选纯化的方法 ,并对分选结果进行纯度鉴定。方法对10例健康成人外周血T淋巴细胞进行荧光抗体标记,采用流式细胞仪进行分选及纯度鉴定。结果流式细胞仪分选T淋巴细胞纯度为（94.40±3.3）%,最高纯度达98%,回收率约为95%。结论应用流式细胞术,可从外周血中快速分选出高纯度的CD3＋T淋巴细胞。     

加热法人心肌钙蛋白T的提取与纯化

目的以加热法从人左心室肌组织中提取并纯化心肌肌钙蛋白Ｔ（ＣＴｎＴ）。方法取新鲜人左心室肌经捣碎、淬取、加热、透析后提取ＣＴｎＴ,以ＤＥＡＥ５２柱层析纯化。结果经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳初步鉴定,每１００ｇ左心室肌经此法可得１１．７９ｍｇＣＴｎＴ纯品,纯化后的ｃＴｎＴ为单一条带,分子量为３７ＫＤ。结论本法提取ＣＴｎＴ步骤简单,纯度尚可,可做抗原使用。