抗真菌药单用及联合体外抗皮炎外瓶霉生物膜效应

目的 检测抗真菌药单用及联合对皮炎外瓶霉生物膜的体外抗真菌活性。方法 96孔板构建皮炎外瓶霉生物膜,通过棋盘式微量液基稀释法,检测两性霉素B、伏立康唑、伊曲康唑及卡泊芬净单用或联合抗皮炎外瓶霉生物膜的活性。结果 伊曲康唑、伏立康唑及卡泊芬净对皮炎外瓶霉生物膜50%和80%最低抑菌浓度（SMIC50、SMIC80）均 > 32 mg/L,两性霉素B的SMIC50为1 ~ 2 mg/L,SMIC 80为4 ~ 8 mg/L。两性霉素B与伏立康唑联合抗皮炎外瓶霉生物膜有协同效应;两性霉素B与伊曲康唑或卡泊芬净联合,以及伏立康唑与卡泊芬净联合对皮炎外瓶霉生物膜均无协同作用;所有组合均未见拮抗效应。结论 两性霉素B具有较好的抗皮炎外瓶霉生物膜活性,与伏立康唑联合能够增强对皮炎外瓶霉生物膜的杀伤作用。     

皮炎外瓶霉临床和环境分离株对6种常用抗真菌药物的敏感性测定

目的 探讨临床分离的皮炎外瓶霉对6种常用抗真菌药物的敏感性。方法 参考美国临床实验室标准化研究所M27-A2方案测定特比萘芬（TRB）、伊曲康唑（ITC）、两性霉素B（AMB）、氟康唑（FLC）、伏立康唑（VRC）及卡泊芬净（CAS） 对16株皮炎外瓶霉的最低抑菌浓度（MIC）,同时以E-test法测定VRC、ITC和AMB对16株皮炎外瓶霉的MIC,并进一步测定每种药物的最低杀菌浓度（MFC）。在此基础上,观察TRB与ITC及VRC联合应用时对皮炎外瓶霉的抗菌作用。结果 微量液基稀释法测得TRB、VRC、ITC、AMB、FLC和CAS 对皮炎外瓶霉MIC范围分别为：0.125 ~ 0.25、0.25 ~ 0.5、2.0、2.0、16 ~ 32和16 ~ 64mg/L;TRB、VRC、ITC、AMB和FLC的MFC范围分别为：0.125 ~ 0.5、0.25 ~ 0.5、2.0 ~ 4.0、2.0 ~ 4.0和16 ~ 64 mg/L。E-test法测定VRC、ITC和AMB的MIC范围为：0.032 ~ 0.094、0.047 ~ 0.5和0.125 ~ 3.0 mg/L。TRB与ITC及VRC在体外联合应用对皮炎外瓶霉无协同效应。结论 皮炎外瓶霉在体外对TRB、ITC、AMB、VRC敏感,对FLC和CAS不敏感。     

伊曲康唑和特比萘芬体外联合药敏试验分析

目的　研究伊曲康唑和特比萘芬在酵母菌体外联合药敏试验中的相互作用 ,为临床用药提供参考依据。方法　参照美国国家临床试验标准化委员会 (NCCLS)提出的标准 (M 2 7 A方案 ) ,采用棋盘微量稀释法对 2 8株酵母菌 (隐球菌和念珠菌 )进行了伊曲康唑和特比萘芬的体外联合药敏试验。结果　发现联合用药时各药物的MIC几何均值比单用有显著降低 ,具有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;伊曲康唑和特比萘芬的协同相加作用较为明显 ,而且未发现有拮抗作用 ,部分抑菌浓度指数 (FICI)的平均值为 0 .72 7。结论　伊曲康唑和特比萘芬对致病酵母主要表现为协同相加作用。     

微量稀释法检测申克孢子丝菌酵母相体外抗真菌药物敏感性

目的用液基微量稀释法观察双相真菌申克孢子丝菌酵母相体外抗真菌药物敏感性。方法将54株申克孢子丝菌临床株于脑心浸液琼脂培养基连续传代获得酵母相,参考美国临床实验室标准化委员会(CLSI)的微量稀释法M27-A2检测菌株酵母相对碘化钾、氟康唑、伊曲康唑和特比萘芬的体外敏感性,并观察碘化钾对伊曲康唑和特比萘芬体外抑菌作用的影响。质控株为克柔念珠菌ATCC6258。结果碘化钾体外无抑菌作用;氟康唑最小抑菌浓度(MIC)几何均数大于64μg/mL;伊曲康唑和特比萘芬MIC几何均数分别为0.98μg/mL和0.17μg/mL。伊曲康唑及特比萘芬的MIC值分别高于伊曲康唑+碘化钾及特比萘芬+碘化钾(P均<0.05)。来源皮肤固定型的菌株与来源皮肤淋巴管型菌株相比MIC值差异无统计学意义(P>0.05)。结论改良的M27-A2方法适用于检测申克孢子丝菌酵母相体外敏感性;酵母相时碘化钾对伊曲康唑、特比萘芬体外抑菌作用有一定的加强效应。     

51株甲真菌病白念珠菌体外药物敏感性试验

参照美国国家临床实验室标准化委员会M27-A棋盘微量稀释法,检测了分离自2005年1月至2007年10月,于北京大学第三医院第二门诊部就诊的甲真菌病患者的51株白念珠菌对伊曲康唑、特比萘芬和氟康唑3种抗真菌药物的体外敏感性.伊曲康唑、特比萘芬、氟康唑对51株甲源性白念珠菌的平均最小抑菌浓度(MIC)分别为:0.23 μg/mL、3.84 μg/mL、6.52 μg/mL.伊曲康唑在体外对白念珠菌敏感性高于特比萘芬和氟康唑.     

体外观察特比萘芬联合伊曲康唑对须癣毛癣菌甲侵袭的抑制作用

目的：体外观察特比萘芬联合伊曲康唑对须癣毛癣菌甲侵袭的抑制作用。为临床联合用药提供参考依据。方法：用浸泡过不同浓度的特比萘芬、伊曲康唑及两者混合药液的健康甲片，接种须癣毛癣菌作为甲模型，27℃孵育观察不同时间甲模型真菌生长抑制现象及超微结构变化，确定各药的MIC。结果：特比萘芬和伊曲康唑联合药液MIC较伊曲康唑为低；联合用药部分抑菌浓度指数（FICI）〉1但〈2。结论：特比萘芬联合伊曲康唑对须癣毛癣菌有一定抑制相加作用。     

阿莫罗芬与特比萘芬和伊曲康唑联合对甲真菌病致病菌的体外药敏试验

目的探讨阿莫罗芬与特比萘芬、伊曲康唑联合对80株甲真菌病病原菌的体外相互作用。方法应用美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)的M27-A和M38-P方案,各药单独和联合应用时的MIC值均为与对照孔相比超过80%生长抑制的最低药物浓度;药物间相互作用用分数抑菌浓度(FIC值)表示:FIC<1认为有协同作用,1≤FIC<2认为有相加作用,FIC≥2认为有拮抗作用。结果阿莫罗芬、特比萘芬、伊曲康唑单独应用时对皮肤癣菌抑菌质量浓度的几何均数分别为0.0396、0.012和0.309μg/mL,阿莫罗芬与特比萘芬和阿莫罗芬与伊曲康唑联合应用对所有受试菌协同作用的百分比分别为67.12%和66.67%,两者间差异无显著性(P>0.05)。其中对皮肤癣菌为75%和65%,两者差异无显著性(P>0.05);而对酵母菌和其他霉菌差异有显著性(P<0.05);未发现有拮抗作用。结论阿莫罗芬与特比萘芬、伊曲康唑联合应用对甲真菌病致病菌具有有效的体外协同抑菌作用。     

氟康唑、特比萘芬和伊曲康唑对白念珠菌的体外敏感性试验

目的比较氟康唑、特比萘芬及伊曲康唑对白念珠菌的体外敏感性。方法采用NCCLS公布的M27-A方案微量稀释法测定氟康唑、特比萘芬及伊曲康唑对22株临床分离的白念珠菌的体外敏感性。结果22株白念珠菌对氟康唑耐药9株,敏感12株;对伊曲康唑耐药7株,敏感8株;对特比萘芬耐药12株,敏感3株。结论3种药物中氟康唑的敏感性相对较高,但仍有耐药现象,氟康唑与伊曲康唑存在交叉耐药。     

盐酸小檗碱联合抗真菌药物对犬小孢子菌体外抗菌活性的研究

目的:比较盐酸小檗碱联合3种常用抗真菌药物伊曲康唑、特比萘芬和灰黄霉素对犬小孢子菌体外抗菌活性.方法:实验参照美国临床实验室标准化研究所(CLSI)颁布的M38-A2方案和相关文献对临床分离的30株犬小孢子菌进行体外药敏试验.其中盐酸小檗碱的最小抑菌浓度(MIC)值定义为与生长对照相比,肉眼观察出现100%生长抑制的最低药物浓度.采用分级抑制浓度指数(FICI)评定两药联合效果.FICI≤0.5,两药为协同作用,FICI＞4,两药为拮抗作用,0.5＜FICI≤4,两药为无关作用.结果:盐酸小檗碱和不同浓度灰黄霉素联合,以0.5 ng/L灰黄霉素和盐酸小檗碱联合 FICI值≤0.5所占比例最高,协同作用最强,P ＜ 0.05,差异有统计学意义.盐酸小檗碱和不同浓度伊曲康唑联合,以0.125 ng/L和0.250 ng/L伊曲康唑和盐酸小檗碱联合,FICI≤0.5所占比例最高,P ＜ 0.05,差异有统计学意义.盐酸小檗碱和不同浓度特比萘芬联合,以0.04 ng/L特比萘芬和盐酸小檗碱联合,FICI≤0.5所占比例最高,但P ＞ 0.05,差异无统计学意义.盐酸小檗碱分别与灰黄霉素、伊曲康唑、特比萘芬联合FICI值≤0.5所占比例分别为25.00%、40.38%和18.93%,3种联合方案以盐酸小檗碱和伊曲康唑联合协同作用最强,P ＜ 0.05,差异有统计学意义.结论:盐酸小檗碱联合应用灰黄霉素、特比萘芬、伊曲康唑在体外均有不同程度协同抗犬小孢子菌活性作用,以盐酸小檗碱联合伊曲康唑协同作用最强.     

61株甲源性近平滑念珠菌药敏试验报告

根据美国国家临床实验室标准化委员会M27-A微量稀释法对近平滑念珠菌作了伊曲康唑、特比萘芬和氟康唑3种抗真菌药物敏感性测定。结果:伊曲康唑、特比萘芬、氟康唑对61株近平滑念珠菌的平均MIC值分别为:3.20μg/mL、0.42μg/mL、2.33μg/mL。体外特比萘芬对近平滑念珠菌敏感性高于伊曲康唑和氟康唑。     

微量液基稀释法与琼脂稀释法测定马拉色菌体外抗真菌药物敏感性

目的 比较微量液基稀释法与琼脂稀释法检测马拉色菌体外对氟康唑、酮康唑及伊曲康唑敏感性的差异。方法 对临床分离的5种27株马拉色菌,分别用微量液基稀释法与琼脂稀释法测定氟康唑、酮康唑及伊曲康唑对这些马拉色菌的最低抑菌浓度（MIC）。结果 微量液基稀释法显示氟康唑MIC值范围0.25 ～ ≥ 64 mg/L,酮康唑≤0.03 ～ 0.5 mg/L,伊曲康唑≤0.03 ～ 0.125 mg/L;琼脂稀释法显示氟康唑MIC值范围2 ～ ≥ 64 mg/L,酮康唑≤0.03 ～ 0.5 mg/L,伊曲康唑≤0.03 ～ 0.25 mg/L。两种方法测定3种唑类抗真菌药对马拉色菌的活性由高到低为：伊曲康唑、酮康唑、氟康唑。两种方法测得氟康唑、酮康唑及伊曲康唑MIC值符合率分别为78.8%、85.2%、88.9%,组内相关系数分别为0.88、0.80、0.76。结论 氟康唑、酮康唑及伊曲康唑对马拉色菌均有较好的抗菌活性,以伊曲康唑对各菌种的抗菌活性最强。微量液基稀释法与琼脂稀释法相比具有良好的一致性,均适用于马拉色菌体外药敏试验。     

小檗碱体外对酵母相马尔尼菲篮状菌的抗菌活性检测

目的:体外检测小檗碱对酵母相马尔尼菲篮状菌（TM）的抗菌活性。方法:TM标准株（ATCC22019）1株,临床分离株10株,野生竹鼠分离株10株。TM以（1~5）× 10 3菌落形成单位/ml菌悬液接种于用微量稀释法制备的小檗碱、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B、卡泊芬净药敏板,在37 ℃下培养48 ...     

In vitro susceptibility testing of ciclopirox,terbinafine, ketoconazole and itraconazole against dermatophytes and nondermatophytes,and in vitro evaluation of combination antifungal activity

BACKGROUND: With the development of newer antifungal agents with activity against both yeasts and filamentous fungi, there is an increased need to develop and standardize in vitro assays that will evaluate the activity of antimycotics against filamentous fungi. In vitro analysis of antifungal activity of these agents would also allow for the comparison between different antimycotics, which in turn may clarify the reasons for lack of clinical response or serve as an effective therapy for patients with chronic infection. OBJECTIVES: To determine the in vitro susceptibility of fungal organisms to ciclopirox, terbinafine, ketoconazole and itraconazole and to evaluate the in vitro activity and mode of interaction of ciclopirox in combination with either terbinafine or itraconazole. MATERIALS AND METHODS: In the minimum inhibitory concentration (MIC) study 133 strains were evaluated, including dermatophytes (110 strains; 98 from Trichophyton spp.), Candida spp. (14 strains) and nondermatophyte moulds (nine strains). In vitro susceptibility testing was conducted in microbroth dilutions based on the National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) M27-A proposed standard. The testing MIC ranges were 0.003-2 microg mL-1 for ciclopirox and terbinafine, and 0.06-32 microg mL-1 for itraconazole and ketoconazole. For inoculum preparation, dermatophytes were grown on Heinz oatmeal cereal agar slants. Inoculum suspensions of dermatophytes were diluted in RPMI 1640 (Sigma-Aldrich) with the desired final concentration being 2-5 x 103 c.f.u. mL-1. Once inoculated, the microdilution plates were set up according to the NCCLS M27-A method, incubated at 35 degrees C, and read visually following 7 days of incubation. For azole agents, the MIC was the lowest concentration showing 80% growth inhibition; for terbinafine and ciclopirox, the MIC was the lowest concentration showing 100% growth inhibition. In the synergy studies, 29 strains from nondermatophyte species were evaluated using a checkerboard microdilution method. The concentrations tested were: 0 and 0.06-32 microg mL-1 for itraconazole, and 0 and 0.003-4 microg mL-1 for both terbinafine and ciclopirox. Modes of interaction between drugs were classified as synergism, additivism, antagonism or indifference based on fractional inhibitory concentration index values (FIC index). Synergism was defined as an FIC index of < or = 0.50, additivity as an FIC index of < or = 1.0, and antagonism as an FIC index of > or = 2.0. The drug combination was interpreted as indifferent if neither of the drugs had any visible effect on the presence of the other drug. RESULTS: In the MIC study, the dermatophyte MIC values (microg mL-1) (mean +/- SEM) were: ciclopirox (0.04 +/- 0.02), terbinafine (0.04 +/- 0.23), itraconazole (2.28 +/- 7.42) and ketoconazole (0.83 +/- 1.99). The yeast MIC values (microg mL-1) (mean +/- SEM) were: ciclopirox (0.05 +/- 0.02), terbinafine (1.77 +/- 0.58), itraconazole (0.18 +/- 0.27) and ketoconazole (0.56 +/- 0.60). The non-dermatophyte fungi MIC values (microg mL-1) (mean +/- SEM) were: ciclopirox (1.04 +/- 2.62), terbinafine (1.04 +/- 0.95), itraconazole (17.87 +/- 16.75) and ketoconazole (10.69 +/- 13.09). In the synergy study, with ciclopirox in combination with terbinafine, mainly a synergistic or additive reaction was observed; there were no cases of antagonism. For ciclopirox in combination with itraconazole, there were some instances of additivism or synergism, with indifference in the majority of instances; there were no cases of antagonism. CONCLUSIONS: In vitro susceptibility testing indicates that ciclopirox may have a broad antimicrobial profile including dermatophytes, yeasts and other nondermatophytes. Terbinafine is extremely potent against dermatophytes. In vitro evaluation of activity of ciclopirox and terbinafine suggests many instances of synergy or additivism; for ciclopirox and itraconazole there may be indifference, synergy or additivism.     

盐酸小檗碱抗白念珠菌体外药敏实验研究

目的 探讨盐酸小檗碱( berberine,BBR)对白念珠菌的体外抗真菌活性。方法 采用美国临床实验室标准化委员会(现称美国临床实验室标准化研究所,CLSI)制订的M27 -A方案中的酵母菌微量稀释法,测定BBR、氟康唑、BBR联合氟康唑对30株临床分离白念珠菌的抗菌活性。结果 盐酸小檗碱对白念珠菌MIC值的几何均数(G)为248.18 mg/L。与320、160、80 mg/L BBR联合后,氟康唑MIC值的几何均数从2.64 mg/L降为0.03、0.35、1.35 mg/L。两药对26.7％的白念菌株有协同抗菌作用,其中包括3株耐氟康唑菌,对56.7％的菌株表现为相加作用,对16.7％的菌株为无关作用,未观察到拮抗作用。结论 BBR在体外对白念珠菌具有抗真菌作用并能增加其对氟康唑的敏感性。     

粉防己碱对酮康唑抗近平滑念珠菌复合体的体外增效活性研究

目的 探讨粉防己碱在体外对酮康唑抗近平滑念珠菌复合体有无增效作用.方法 参照美国临床和实验室标准协会(CLSI)推荐的M27-A3方案,采用棋盘式微量稀释法测定酮康唑单独及联合粉防己碱抗21株近平滑念珠菌复合体临床株抗真菌活性,结合部分抑制浓度指数(FICI)对结果进行评价;以甲基四氮盐(XTT)法分别测定不同时间点药物作用的效果,绘制时间杀菌曲线,动态观察药物体外抗近平滑念珠菌复合体活性.结果 粉防己碱与酮康唑单独作用于21株近平滑念珠菌复合体菌株的最低抑菌浓度分别是32～64 mg/L和0.031 25～2 mg/L,两药联合时最低抑菌浓度分别降至2 ～8 mg/L和0.008～0.25 mg/L,FICI值为0.09 ～ 0.5;时间杀菌曲线表明,与酮康唑单用组和粉防己碱单用组相比,酮康唑联合粉防己碱组真菌生长延迟明显.结论 粉防己碱在体外对酮康唑抗近平滑念珠菌复合体有明显的增效作用.     

28株酵母菌的体外联合药敏试验分析

目的 研究常用抗真菌药在酵母菌体外联合药敏试验中的相互作用,为临床用药提供参考依据.方法参照美国国家临床试验标准化委员会(NCCLS)提出的标准,采用棋盘微量稀释法对28株隐球菌和念珠菌进行了5种常用抗真菌药相互联合应用的体外联合药敏试验.结果联合用药时各药物的MIC几何均值比单用显著降低,差异有显著性(P＜0.05);两性霉素B加氟胞嘧啶、特比萘芬加氟康唑、特比萘芬加伊曲康唑三种联合的协同相加作用最为明显,而且未发现有拮抗作用.其他6组联合用药虽有少量菌株表现为拮抗作用,但其主要仍表现为相加作用.结论5种常用抗真菌药对致病酵母主要表现为协同相加作用。     

光动力疗法单用或联合抗真菌药物对游离态及形成生物膜的皮炎外瓶霉凋亡的影响

目的 探讨光动力疗法单用或联合抗真菌药物对游离态及形成生物膜的皮炎外瓶霉凋亡的作用。方法 制备皮炎外瓶霉游离态孢子悬液,用改良的96孔板法构建皮炎外瓶霉生物膜。将皮炎外瓶霉游离态孢子和生物膜分别分为单药组（只用抗真菌药物处理）、光动力组（只用光动力处理）和光动力联合药物组（先用光动力处理,再用抗真菌药物处理）,同时设立空白对照组（既不用抗真菌药物处理也不用光动力处理）,抗真菌药物包括两性霉素B、泊沙康唑、伏立康唑和伊曲康唑,药物浓度均为1 mg/L,处理时间均为2 h。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记（TUNEL）法进行凋亡检测。结果 抗真菌药及光动力疗法对游离态（均P < 0.001）及形成生物膜（均P < 0.05）的皮炎外瓶霉凋亡率均有影响。空白对照组和两性霉素B、泊沙康唑、伏立康唑、伊曲康唑单药组游离态皮炎外瓶霉凋亡率分别为11.67% ± 0.21%、13.30% ± 1.78%、14.30% ± 3.61%、14.51% ± 1.91%、36.17% ± 4.00%,其中伊曲康唑单药组凋亡率显著高于空白对照组（P < 0.05）,其他3个单药组与空白对照组差异均无统计学意义（均P > 0.05）。光动力组游离态孢子凋亡率（41.37% ± 7.80%）显著高于空白对照组（P < 0.05）。光动力联合两性霉素B、泊沙康唑、伏立康唑、伊曲康唑组的游离态孢子凋亡率分别为29.23% ± 6.71%、37.23% ± 10.86%、43.57% ± 6.42%、69.87% ± 3.53%）,其中联合伏立康唑、伊曲康唑组凋亡率显著高于相应单药组（均P < 0.05）。光动力组生物膜凋亡率（32.00% ± 0.43%）显著高于空白对照组（25.30% ± 1.31%,P < 0.05）,光动力联合两性霉素B组显著高于两性霉素B组（P < 0.05）。结论 光动力联合抗真菌药物能够明显促进游离态及形成生物膜的皮炎外瓶霉的凋亡。