新型聚乳酸复合纳米羟基磷灰石人工骨的细胞相容性

目的前期试验证实,当纳米羟基磷灰石含量为20%时的聚乳酸复合纳米羟基磷灰石人工骨材料能满足人体骨缺损修复的生物力学要求,尚需进一步的观察其细胞相容性,为临床应用提供参考数据。方法制备纳米羟基磷灰石含量为20%时的聚乳酸复合纳米羟基磷灰石人工骨材料,并提取浸提液。设立阴性对照组(含10%胎牛血清的DMEM完全培养基)、实验组(浸提液)、阳性对照组(质量浓度为0.64%的苯酚),用兔骨髓间充质干细胞与材料浸提液共培养的方式进行。观察兔骨髓间充质干细胞在培养3,5,7 d各时相点的细胞形态学变化,运用MTT比色法,测定上述各组兔骨髓间充质干细胞细胞培养3,5,7 d的相对增殖度,判断材料对细胞的毒性程度。结果随着时间的延长,3组细胞的吸光度值均明显增加(P<0.01)。实验组兔骨髓间充质干细胞相对增殖度在第3,5,7天分别为95.3%,96.8%和97.6%,参照国家标准聚乳酸复合纳米羟基磷灰石人工骨材料的细胞毒性为1级;实验组与阴性对照组比较差异不显著(P>0.05),阳性对照组与其他两组比较差异显著(P<0.05)。实验组细胞形态正常,呈梭形,贴壁生长良好。结论聚乳酸复合纳米羟基磷灰石人工骨材料细胞相容性良好,细胞毒性为1级,参照GB/T16886.5.2003标准属于安全范围。     

动脉栓塞热疗用羰基铁粉磁热效应和细胞毒性研究

目的探讨将羰基铁粉应用于磁感应动脉栓塞加温治疗肿瘤,测定其在交变磁场下升温状况和细胞毒性,初步评价其磁热性和安全性。方法分别改变混悬液浓度（10mg／ml羰基铁粉100％浸提液、10mg／ml羰基铁粉50％浸提液、64g／L苯酚溶液）和磁场电流强度（49．9、79．9、110．2 Oe）,测定因浓度和磁场电流强度的变化对羰基铁粉升温的影响。将羰基铁粉浸提液对小鼠L-929成纤维细胞培养2、4、7d,显微镜下观察细胞形态变化,MTT法检测计算细胞相对增殖度,用6级毒性分类法评级。结果羰基铁粉-碘化油混悬液的温度随浓度的升高、磁场强度的增加而升高。浓度为60mg／ml的羰基铁粉-碘化油混悬液在110．2Oe下可以达到理想的治疗温度。细胞毒性检测,小鼠成纤维细胞L-929在10mg／ml羰基铁粉100％浸提液、10mg／ml羰基铁粉50％浸提液培养期（培养2、4、7d）细胞贴壁生长,形态良好,细胞毒级为0～1级。结论羰基铁粉在交变磁场下有较好的升温效果,无细胞毒性。     

海藻酸钙敷料的细胞毒性体外检测结果分析

目的:探讨海藻酸钙敷料对体外培养的成纤维细胞相对增殖率的影响,初步评价该材料的细胞毒性作用并探讨对细胞增殖影响最低的条件。方法:第一步:采用四唑盐(MTT)比色法检测不同浓度(0、50%和100%)敷料浸提液的吸光度,分别计算各浓度下成纤维细胞的相对增殖率,初步评价其细胞毒性。第二步:根据上述结果,继续采用MTT法检测细分浓度(0、10%、20%、30%、40%和50%)敷料浸提液对成纤维细胞增长率影响,测出对细胞增殖无影响的材料溶液浓度。结果:各浓度浸提液均出现较高相对细胞增殖率,其细胞毒性均为0或1级,无毒性。精检MTT结果提示,相对浸提液浓度低于10%海藻酸盐敷料浸提液对成纤维细胞的生长无任何影响,浓度高于20%的浸提液对成纤维细胞的生长开始产生影响,但仍未到毒性标准。结论:海藻酸钙敷料无细胞毒性,具有良好细胞相容性,满足人体植入材料体外细胞毒性实验要求,可作为安全的伤口敷料使用。     

镁钙合金的细胞毒性研究

目的观察镁钙合金对体外细胞生长的影响,对镁钙合金的生物相容性进行评价。方法根据ISO10993-5:1999及GB/T16886.5-2003标准,将不同浓度镁钙合金浸提液与L-929细胞接触培养,进行细胞的形态学观察及四甲基偶氮唑盐(MTT)比色,评价镁钙合金的细胞毒性。结果细胞形态学观察显示,阳性对照组细胞脱落、死亡,其余各组细胞贴壁生长,形态正常。MTT显示镁钙合金浸提液对细胞的毒性0级,无明显细胞毒性。结论镁钙合金的细胞毒性为0级,符合临床应用的要求。     

无定形磷酸钙负载rhBMP-2纳米缓释体的制备及细胞毒性实验

[目的]制备无定形磷酸钙（ACP）负载重组人骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2／ACP）纳米缓释体并观察其细胞毒性，为进一步体内植入提供实验依据。[方法]采用湿化学法合成rhBMP-2／ACP纳米缓释体；兔间充质干细胞（BMSCs）与rhBMP-2／ACP纳米缓释体进行体外复合培养，观察细胞在材料表面的黏附、增殖及功能表达，检测材料的细胞毒性。[结果]材料浸提液对兔BMSCs的生长无影响，其细胞相对增殖率在100．2％～102．5％之间，细胞毒性评级为0级；BMSCs于复合材料表面的黏附、生长速度、形态与对照组无明显差别。[结论]rhBMP-2／ACP纳米缓释体无细胞毒性，复合培养不影响BMSCs的正常生理功能，细胞相容性良好。     

Mg-6Zn合金对大鼠肠上皮细胞紧密连接蛋白表达的影响

目的:研究不同浓度Mg-6Zn合金浸提液对大鼠肠上皮细胞(IEC-6细胞)紧密连接蛋白表达的影响。方法:将Mg-6Zn合金制成20%和40%两个浓度的浸提液,以含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基作为阴性对照体外培养IEC-6细胞。通过噻唑蓝(MTT)法计算细胞相对增殖率评价不同浓度Mg-6Zn合金浸提液对IEC-6细胞的毒性作用;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测不同浓度Mg-6Zn合金浸提液对IEC-6细胞紧密连接相关基因ZO-1、Occludin、Claudins mRNA表达的影响。结果:20%和40%浓度Mg-6Zn合金浸提液在体外培养IEC-6细胞第7天时,细胞毒性分级分别为0级和1级,属于无毒性。20%和40%浓度Mg-6Zn合金浸提液中,IEC-6细胞紧密连接相关基因ZO-1、Occludin、Claudins mRNA的表达相对于对照组增高,差异有统计学意义(P0.05);40%浓度组中,IEC-6细胞紧密连接相关基因相对于20%浓度组增高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:Mg-6Zn合金浸提液在一定浓度范围内对IEC-6细胞无毒性,对细胞紧密连接相关基因的表达有促进作用,且随浓度升高影响越大。     

骨形态发生蛋白-2/胶原/掺锶羟基磷灰石材料修复颅骨缺损

目的 制备骨形态发生蛋白-2( BMP-2)/胶原/掺锶羟基磷灰石材料并探讨其修复大鼠颅骨缺损的可行性和有效性.方法 扫描电镜观察Ⅰ型胶原制备单纯胶原、胶原/羟基磷灰石、胶原/掺锶羟基磷灰石、BMP-2/胶原/掺锶羟基磷灰石4组骨修复材料表面结构.用BMP-2/胶原/掺锶羟基磷灰石材料浸提液进行细胞毒性试验和体外溶血试验评价其生物相容性.在大鼠头颅制备颅骨极限骨缺损模型,分别植入4种骨修复材料.术后12周CT扫描观察骨缺损修复影像学.苏木素-伊红(HE)和Masson染色观察骨缺损组织学变化,并在骨缺损及其周围新生骨部位行骨桥蛋白( OPN)和β-连环蛋白(β-catenin)免疫组织化学染色.结果 在扫描电镜下观察发现单纯的胶原材料为交织样物质结构,胶原/羟基磷灰石材料为交织晶体板状结构胶原/掺锶羟基磷灰石和BMP-2/胶原/掺锶羟基磷灰石材料晶体结构为单晶体交织状.BMP-2/胶原/掺锶羟基磷灰石材料浸提液对细胞相对增殖率(RGR)无显著影响(P＞0.05),材料的细胞毒性为1级.骨缺损CT扫描平均CT值分别为(98.5±10.2)、(208.4±19.5)、(418.4±27.1)、(476.8±30.5)hu,BMP-2/胶原/掺锶羟基磷灰石材料缺损部位CT值最高.HE和Masson染色见BMP-2/胶原/掺锶羟基磷灰石组骨质愈合完全,原骨缺损处多为红色成熟骨.胶原/掺锶羟基磷灰石组植入区内蓝色的新生骨较多.胶原/羟基磷灰石材料组,植入区在植入材料边缘新生骨形成,界限仍然清晰.单纯胶原组骨质未愈合,骨缺损处为淡蓝色条索状结构,中间未见骨形成.对比其他3组,BMP-2/胶原/掺锶羟基磷灰石组存在大量棕色的OPN和β-catenin染色阳性新生骨组织,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 BMP-2/胶原/掺锶羟基磷灰石材料促进骨修复能力强于单纯胶原、胶原/羟基磷灰石、胶原/掺锶羟基磷灰石材料.     

煅烧异种骨的生物相容性研究

目的探讨煅烧异种骨材料的生物相容性,为其应用于临床提供实验依据。方法取健康成年牛松质骨,采用脱蛋白、高温煅烧方法制备煅烧异种骨。将煅烧异种骨材料浸提液与L929细胞体外共同培养,于第2、4、7天评价其细胞毒性。L929细胞接种至煅烧异种骨,培养4 d后扫描电镜观察细胞在材料表面贴附及增殖情况,评价其细胞相容性。于10只新西兰大白兔双侧后肢胫骨钻孔,左侧孔内植入煅烧异种骨(实验组),右侧植入羟基磷灰石生物陶瓷(对照组);术后4、26周取材行大体观察及组织学观察,评价煅烧异种骨生物相容性。结果细胞毒性实验显示,煅烧异种骨浸提液细胞毒性为0~1级。细胞相容性实验显示,L929细胞在煅烧异种骨表面贴附良好,并向孔隙内部生长。体内植入实验显示4周时两组均有轻度或中度炎性反应,可见新骨形成;26周时两组均无炎性反应且有不同程度新骨形成。结论煅烧异种骨具有良好生物相容性,有望用于临床骨缺损修复。     

多巴胺处理聚四氟乙烯人工血管对体外种植内皮细胞的影响

目的:探讨经多巴胺预处理聚四氟乙烯人工血管对体外种植内皮细胞相对增值率影响,并评价其对内皮细胞的细胞相容性。方法:将内皮细胞与经多巴胺预处理后的人工血管片共培养48 h,观察细胞生长情况。并采用四唑盐比色法(MTT)测定不同浓度组材料浸提液(0、50%和100%)吸光度,并计算各组内皮细胞的相对增殖率和毒性分级。结果:经多巴胺预处理聚四氟乙烯人工血管对内皮细胞的贴壁和增殖无明显影响,且其培养上清液对内皮细胞毒性为0和1级。结论:经多巴胺处理后的聚四氟乙烯人工血管对内皮细胞无毒性,具有良好细胞相容性。     

锌修饰硅酸钙生物陶瓷涂层的体外生物相容性研究

目的 研究锌修饰硅酸钙生物陶瓷涂层的体外生物相容性,为该涂层临床应用的可行性提供实验依据。方法检测该涂层的物理表征;检测该涂层浸提液的离子浓度;用不同稀释比例的浸提液培养MC3T3-E1细胞,观察细胞形态,MTT法检测细胞相对增殖率,并检测细胞凋亡水平;测定溶血率。结果 该涂层浸泡72 h后,浸提液中钙、硅、锌离子浓度均明显升高;用不同稀释比例的浸提液培养的MC3T3-E1细胞都表现出正常的细胞形态,其中3.125%、6.25%组细胞量较多,相对增殖率高于阳性对照组,且细胞凋亡率低于阳性对照组(完全培养基);随浸提液浓度增加,可对细胞增殖产生轻度抑制作用,凋亡率逐渐升高;溶血试验结果显示,该涂层浸提液的溶血率为0.5%。结论 锌修饰硅酸钙生物陶瓷涂层没有细胞毒性、生物相容性好,具有作为骨植入体及其他生物材料表面改性的生物学基础。     

筛选可注射型人工髓核材料的体外细胞毒性测试

 目的 经体外细胞毒性测试初步筛选一类新型的聚醚型聚氨酯作为可注射型人工髓核材料。方法设置5个实验组：即样品1、2、3组为加入不同配比催化剂合成的软硬段配比不同的聚醚型聚氨酯;样品4组是不加催化剂,在37℃下经缓慢聚合而成的聚醚型聚氨酯;样品5组为单体有毒基团完全反应的聚醚型聚氨酯。另设1个对照组为不含材料浸提液的培养基。称取每组实验材料各0.6mg,经消毒后分别制成浸提液,经稀释50%后培养小鼠成纤维细胞（L929细胞）,分别培养至第3天、4天、5天,使用3-（4,5-二甲基- 2-噻唑）-2,5-二苯基溴化四唑（MTT）比色法比较材料组与对照组间酶联免疫分析法测得的490nm处的O D值,计算细胞相对增殖率,来评价材料的细胞毒性。结果样品4组和样品5组与对照组相比,L929细胞相对增殖率没有显著性差异,细胞毒性分级属于0～1级;样品1～3组与对照组L 929细胞相对增殖率比较,差异有统计学意义,细胞毒性1～2级,但细胞形态正常。结论未加催化剂的体内聚合聚氨酯材料没有细胞毒性,具有作为髓核替代材料的应用潜力。加入催化剂后快速聚合的材料毒性有待进一步测试。     

载银珊瑚羟基磷灰石的抑菌活性与细胞毒性研究

目的 评价负载不同浓度银离子后的珊瑚羟基磷灰石(CHA)对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果与细胞毒性.方法 采用真空冷冻干燥法制备1×10-2～1×10-5 mol/L Ag+浓度的载银CHA(Ag-CHA),然后采用琼脂平板抑菌法评价Ag-CHA对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果,并测量24 h后的抑菌圈直径.采用甲基噻唑基四唑(MTT)法评价8×10-5mol/L的Ag-CHA在2、4、7d对L929小鼠成纤维细胞的毒性作用. 结果 载银浓度为1×10-2～8×10-5mol/L的Ag-CHA对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径均大于12 mm,有明显的抑菌作用;而载银浓度低于8×10-5mol/L的Ag-CHA无抑菌作用.载银浓度低于8×10-5mol/L的Ag-CHA对L929细胞无毒性作用;8×10-5mol/LAg-CHA浸提液作用细胞2、4、7 d后,细胞生长状态良好,相对增殖率均大于90%,毒性等级为0或1级.结论 最佳载银浓度为8×10-5mol/L,该条件下的Ag-CHA有良好的抑菌作用,且无细胞毒性.     

Toxicity of peritoneal dialysis fluids on cultured fibroblasts, L-929

Peritoneal dialysis (PD) fluids are known to suppress the reactions of inflammatory cells in vitro. PD-fluids have also been shown to have cytotoxic influence on mesothelial cells. The combinations of these factors may have a detrimental effect on the peritoneum or may impair cellular defence against bacterial peritonitis. Some authors have discussed the relevance of heat sterilization to both so-called peritoneal side-effects and to chemical decomposition of fluids. Four commercial PD-fluids and one laboratory-made PD-fluid were tested for cytotoxicity on a cultured fibroblast cell line, L-929. Cytotoxicity was determined as an inhibition of cell growth by quantification of total protein. The laboratory-made PD-fluid was sterilized either by filtration or by filtration and heat. The commercial and the heat-sterilized laboratory made PD-fluids caused significant inhibition of cell growth (53 to 76%) in contrast to saline and the filter-sterilized laboratory-made PD-fluid. Since the pH values of all the testsolutions were neutral, low pH was not the cause of toxicity. Our results regarding the L-929 cells indicate that the cytotoxicity of PD-fluids is of a general nature. Furthermore, the results indicate that the heat sterilization process might be partially responsible for causing toxicity in PD-fluids.     

rhBMP-2/壳聚糖/硫酸葡聚糖复合微球制备及生物安全性研究

目的：制备重组人骨形态发生蛋白/壳聚糖/硫酸葡聚糖（CS/DS/rhBMP-2）复合微球,评估其体外生物相容性。方法采用离子交联法制备CS/DS/rhBMP-2复合微球及CS/DS空白微球,电镜观察CS/DS/rhBMP-2复合微球的形态。采用MTT法检测CS/DS/rhBMP-2微球组、CS/DS空白微球组、rhBMP-2组、对照组各组对L929小鼠成纤维细胞的细胞毒性。结果成功制备CS/DS/rhBMP-2复合微球,电镜检查结果示微球成球满意,分散度好。体外实验结果提示复合微球与L929细胞共培养1、3、5、7 d,其光密度（OD）值与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;CS/DS/rhBMP-2微球组、CS/DS空白微球组、rhBMP-2组、对照组浸提液对L929细胞作用2 d后的细胞相对增殖率（RGR）分别为102.41%、102.85%、99.34%、100%,毒性分级分别为0、0、1、0级。结论成功制备的CS/DS/rhBMP-2复合微球体外生物相容性好,无细胞毒性,在骨组织工程领域具有潜在的应用价值。     

纳米氧化锆强韧化高孔隙率磷酸钙人工骨细胞支架生物学评价

目的：对自行研制的纳米氧化锆强韧化高孔隙率磷酸钙人工成骨细胞支架[hyper-porosity Ca3(PO4)：bone cells frame／NM ZrO2 reinforced以下简称支架]的体外生物相容性进行评价。方法：采用细胞毒性试验、溶血试验和急性全身中毒试验3种方法。结果：(1)培养的L929成骨细胞经支架浸提液处理后形态良好，增值旺盛，材料毒性评级为0级；(2)溶血率为2．23％(小于5％)，符合溶血试验标准要求；(3)无急性全身中毒反应。结论：支架复合物具有良好的生物相容性。     

A comparative study on the cellular viability and debridement efficiency of antimicrobial‐based wound dressings

A concentrated surfactant gel containing polyhexamethylene biguanide (CSG‐PHMB) (CSG: Plurogel) was evaluated for in vitro cell cytotoxicity using the direct contact, extraction, and cell insert assays, along with its ability to breakdown artificial wound eschar and slough, compared with other clinically available wound gels: a wound gel loaded with 0.13% benzalkonium chloride (BXG) and a highly viscous gel loaded with 0.1% polyhexamethylene biguanide (PXG). Following treatment with CSG‐PHMB, BXG, and PXG at day 1, the viability of L929 and HDFa cells sharply decreased to lower than 20% of the culture media control in the direct contact assay; however, cell viability of L929 was 128.65 ± 1.41%, 99.90 ± 2.84%*, and 64.08 ± 5.99%* respectively; HDFa was 84.58 ± 10.41%, 19.54 ± 3.06%**, and 96.28 ± 33.67%, respectively, in the extraction assay. In the cell insert model, cell viability of L929 cells were 95.25 ± 0.96%, 47.49 ± 5.37%**, and 48.63 ± 7.00%**, respectively; HDFa cell viability were 92.80 ± 1.29%, 38.86 ± 4.28%**, and 49.90 ± 2.55%** (*: P < .01; **P < .001 compared with CSG‐PHMB; cell viability of culture medium without treatment at day 1 was 100%). The cell extraction model on day 1 indicated that CSG‐PHMB had higher viability of L929 cells compared with BXG. In addition, the cellular viability results indicated that CSG‐PHMB gel exhibited lower cytotoxicity when compared with BXG and PXG in the cell insert model assay. Within the in vitro debridement model, CSG‐PHMB exhibited an ability to potentially increase the loosening of the collagen matrix. The reason for this may be because of the concentrated surfactant found within the CSG‐PHMB, which has the ability to lower the surface tension, aiding in the movements of fragments and debris in the fluorescent artificial wound eschar model (fAWE).     

二氧化锆梯度复合羟基磷灰石的生物相容性研究

目的评价自制的新型骨科生物复合材料--二氧化锆(Zirconia,ZrO2)梯度复合羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)的生物相容性和安全性.方法用化学沉淀法制备ZrO2超细粉和HA粉体后,采用干铺-烧结法制备ZrO2梯度复合HA的新型生物复合材料,分别行以下实验①小鼠急性毒性实验分2组(n=10),分别按50 g/kg注射材料浸提液和生理盐水,观察小鼠毒性表现、死亡数和体重变化.②建立L929细胞生长代谢标准曲线.③细胞毒性实验分3组材料组(材料浸提液)、阳性对照组(0.64%苯酚的培养液)和阴性对照组(RPMI-1640培养液),分别与细胞悬液培养,行细胞形态学观察和相对增殖率(relative proliferation rate,RGR)计算及毒性分级.④体外溶血实验分3组,分别取10 ml材料浸提液、灭菌蒸馏水(阳性对照组)和0.9%生理盐水(阴性对照组),各加入抗凝稀释新鲜兔血0.2 ml,测定溶血率.⑤骨和肌肉内植入实验分4组(n=3),分别于双侧臀部肌肉和股骨外髁处植入生物复合材料,于术后3、6、12和24周处死动物,分别作组织切片和电镜扫描.结果①全身急性毒性实验3周内小鼠无死亡;3 d内各组动物未见中毒症状或不良反应;材料组体重增长3.57±0.49 g,对照组为3.62±0.61 g,差异无统计学意义(P＞0.05).②L929细胞生长代谢标准曲线表明,L929细胞接种量与细胞的增殖代谢率在接种细胞数为1～8×103个/孔范围内呈正直线相关.③细胞毒性实验阳性对照组细胞体变小成圆形,核固缩,贴壁细胞聚集成团,毒性级为Ⅳ级;材料组和阴性对照组细胞形态正常,数量增多,毒性级分别为Ⅰ级和0级;MTT比色法检测,阳性对照组明显低于材料组和阴性对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);阴性对照组与材料组间差异无统计学意义(P＞0.05).④溶血实验阴性对照组的体外溶血率为0,阳性对照组体外溶血率为100%,而材料组的体外溶血率为1.66%,符合ISO规定的溶血率＜5%的标准.⑤兔肌肉和骨内植入实验植入体内后,无明显异物反应;材料与受体骨发生牢固的生物键合,具有良好的骨诱导作用.结论ZrO2梯度复合HA生物复合材料具有良好的生物相容性,适合作为生物骨科材料.     

医用聚丙烯酰胺水凝胶(奥美定)细胞毒性研究

目的　评价医用聚丙烯酰胺水凝胶 (奥美定 )中可滤出成分是否对细胞产生潜在的毒性。方法　采用细胞毒性试验中的琼脂覆盖法 ,通过直接放置样品和放置样品浸提液载片两种方法 ,对三批不同生产日期的奥美定进行测试研究。结果　直接放置样品组 ,测试样品下均出现部分细胞脱色 ,其余细胞微着色 ,未见细胞溶解R =0 .5 / 0 ,放置样品浸提液载片组与浸提介质对照组相同R =0 / 0。结论　奥美定无细胞毒性     

医用聚丙烯酰胺水凝胶（奥美定）细胞毒性研究

目的　评价医用聚丙烯酰胺水凝胶（奥美定）中可滤出成分是否对细胞产生潜在的毒性。方法　采用细胞毒性试验中的琼脂覆盖法,通过直接放置样品和放置样品浸提液载片两种方法,对三批不同生产日期的奥美定进行测试研究。结果　直接放置样品组,测试样品下均出现部分细胞脱色,其余细胞微着色,未见细胞溶解R=0.5/0,放置样品浸提液载片组与浸提介质对照组相同R=0/0。结论　奥美定无细胞毒性。