乌司他丁对缺血诱导的大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的 研究乌司他丁是否能够抑制缺血诱导的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)凋亡。 方法 采用25只SPF级C57BL/6J雄性大鼠为研究对象,将大鼠随机平均分为正常对照组、缺血模型组、乌司他丁组、乌司他丁+AKT通路抑制剂组、乌司他丁+ERK通路抑制剂组,其中正常对照组不进行任何前处理;缺血模型组仅进行缺血处理;乌司他丁组、乌司他丁+AKT通路抑制剂(LY294002)组、乌司他丁+ERK通路抑制剂(PD98059)组,每组大鼠在缺血处理BMSC前,分别加入乌司他丁、乌司他丁+LY294002、乌司他丁+PD98059预处理1 h,然后在药物作用下再进行缺血处理。乌司他丁浓度为500 U/ml。 结果 培养6 h后,细胞凋亡比例显著高于培养3 h时,其余相邻时间点之间无显著差异。正常对照组凋亡率与缺血模型组凋亡率之间差异具有统计学意义,缺血模型组大鼠caspase-3显著高于正常对照组。乌司他丁+AKT通路抑制剂组与乌司他丁+ERK通路抑制剂组大鼠caspase-3水平均显著高于乌司他丁组,且乌司他丁+AKT通路抑制剂组大鼠caspase-3水平显著低于乌司他丁+ERK通路抑制剂组大鼠(t=3.289,P=0.046)。 结论 培养6 h效率最高,较适宜作为最佳缺血时间。乌司他丁能够有效抑制大鼠BMSC凋亡。乌司他丁通过ERK抑制通路发挥作用更优于AKT通路。      

甘草查尔酮A减轻顺铂诱导的人肾小管上皮细胞HK-2损伤的实验研究

目的 考察甘草查尔酮A对顺铂致人肾小管上皮细胞HK-2损伤的影响。方法 将点板的HK-2细胞分为对照组(不含药的培养基)、顺铂组(顺铂20μM)、合用组(顺铂20μM和甘草查尔酮A 4μM)、甘草查尔酮A组(甘草查尔酮A 4μM);采用CCK8法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,q RT-PCR检测HK-2中caspase-3、caspase-8、caspase-9的m RNA水平。结果 与对照组比较,甘草查尔酮A组各项指标比较差异均无统计学意义(P> 0.05),顺铂组则细胞活力降低,凋亡率增高,caspase-3、caspase-8、caspase-9的m RNA水平增高(P <0.05);与顺铂组相比,合用组使HK-2细胞活力由(40.52±5.65)%上升到(69.42±5.54)%(P <0.05);凋亡细胞比例由(20.33±1.81)%下降到(7.77±1.98)%(P <0.05);顺铂诱导的caspase-3、caspase-8、caspase-9的m RNA水平显著降低(P <0.05)。结论 甘草查尔酮A对顺铂致伤的肾小管上皮细胞...     

乌司他丁对胰腺缺血-再灌注损伤大鼠血清炎性因子TNF-α和IL-1β的影响

目的探讨乌司他丁是否能抑制胰腺缺血再灌注损伤大鼠炎性因子的释放.方法SD大鼠72只随机分为假手术组、缺血再灌注组和乌司他丁组.分别检测胰腺缺血再灌注0、6、12h及24h血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）的变化.结果缺血再灌注组的各时点TNF-α含量明显高于假手术组和乌司他丁组（P〈0.05）;缺血再灌注组和乌司他丁组的IL-1β含量在6h、12h、24h较假手术组明显增加（P〈0.05）,但乌司他丁组增高水平明显低于缺血再灌注组（P〈0.05）.结论乌司他丁可以抑制胰腺缺血再灌注损伤大鼠炎性因子的释放,对大鼠胰腺缺血再灌注损伤有保护作用.     

乌司他丁对内镜逆行胰胆管造影术后高淀粉酶血症及急性胰腺炎的预防作用

目的探讨乌司他丁对内镜逆行胰胆管造影(ERCP)术后高淀粉酶血症及急性胰腺炎的预防作用。方法将40例患者随机分为乌司他丁组和对照组。乌司他丁组造影前1h静滴乌司他丁2×105U,对照组静滴生理盐水250mL,观察术前和术后6h及24h血清淀粉酶的变化。结果乌司他丁组有3例和对照组有10例发生高淀粉酶血症,两组差异有统计学意义(P<0.05);乌司他丁组没有发生急性胰腺炎病例,对照组有2例发生急性胰腺炎,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论乌司他丁能有效地预防ERCP术后因胰管造影所致的高淀粉酶血症及急性胰腺炎。     

乌司他丁对瓣膜置换手术患者体外循环脑组织白细胞介素-6含量的影响

目的观察不同剂量乌司他丁对瓣膜置换手术患者体外循环脑组织白细胞介素-6(IL-6)含量的影响。方法选取瓣膜置换手术患者30例,按入院顺序分为大剂量组12例、小剂量组11例和对照组7例,3组分别在体外循环中加入乌司他丁2.4×104U.kg-1、1.6×104U.kg-1和生理盐水1 mL.kg-1;观察各组体外循环前后各时点颈静脉球和桡动脉IL-6检测差值(△IL-6)变化。结果体外循环前各组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);体外循环开始30 m in时大剂量组与对照组和小剂量组比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),小剂量组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);复温至33℃时3组比较差异均有统计学意义(P<0.05);体外循环结束后3组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论乌司他丁具有降低体外循环前后脑IL-6含量的作用。     

他克莫司对大鼠肾缺血再灌注保护作用的研究

目的探讨他克莫司对大鼠肾缺血再灌注的保护作用。方法选用Wistar雄性大鼠60只,采用抽签法随机分为3组(每组20只):假手术组、对照组、实验组。到达设定的不同灌注时间点取血和肾脏标本,测定血清肌酐(creatinine,Cr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α);检测肾组织B细胞淋巴瘤(B cell lymphoma,Bcl-2)及病理情况。结果在缺血45 min后再灌注2、6和24 h时,实验组的Cr、BUN水平显著低于对照组(P<0.05),而Bcl-2免疫反应强度显著高于对照组(P<0.05)。在再灌注的各时间点,实验组的血清TNF-α含量水平均显著低于对照组(P<0.05)。HE染色光镜下对照组的肾小管及肾小管上皮细胞病变程度重;实验组的肾小管及肾小管上皮细胞病变程度明显减轻;假手术组肾小管及肾小管上皮细胞未见明显改变。结论他克莫司对大鼠肾缺血再灌注的保护作用可能是通过降低血清TNF-α表达水平和增加肾脏Bcl-2蛋白的表达,从而改善大鼠肾缺血再灌注损伤。     

乌司他丁在成人重症心脏瓣膜置换术中的应用

目的:探讨乌司他丁在成人重症心脏瓣膜置换术中的作用。方法:46例重症心脏瓣膜病患者随机分为试验组(n=23)和对照组(n=23),试验组在麻醉诱导后开始恒速静脉输注乌司他丁6 000 U/kg(30 min内输完),然后以1000 U/kg·h的速率持续静脉输注至手术结束,术后连续三天使用乌司他丁6 000 U/kg;对照组则不使用乌司他丁。分别于麻醉诱导前(T1)、体外循环开始后1 h(T2)、体外循环停止后1 h(T3)、体外循环停止后24 h(T4)、体外循环停止后72 h(T5)抽取动脉血,测定血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)浓度,并对两组术后早期临床资料进行对比研究。结果:和体外循环前相比,两组患者的血浆TNF-α、IL-6浓度在T2~T5各点增加具有显著性,差异有统计学意义(P<0.05);在T2~T4各点试验组患者的血浆TNF-α、IL-6浓度较对照组患者低,具有显著差异性(P<0.01);试验组术后出血及库血使用均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:乌司他丁在成人重症心脏瓣膜置换术中使用可明显降低血清中炎症介质,减轻渗出,减少库血使用。     

乌司他丁对大鼠胰腺缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨乌司他丁对大鼠胰腺缺血再灌注损伤的保护作用。方法SD大鼠72只随机分为假手术组、缺血再灌注组和乌司他丁组。分别检测胰腺缺血再灌注0h、6h、12h及24h血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）的变化。结果缺血再灌注组的各时点上TNF-α含量明显高于假手术组和乌司他丁组（P〈0．05）；缺血再灌注组和乌司他丁组在6h、12h、24h的IL-1β含量较假手术组明显增加（P〈0．05），但乌司他丁组增高水平明显低于缺血再灌注组（P〈0．05）。结论乌司他丁可以抑制大鼠胰腺缺血再灌注损伤所致的急性炎性反应，对大鼠胰腺缺血再灌注损伤有保护作用。     

乌司他丁预防老年患者术后早期认知功能障碍的研究

目的探讨乌司他丁对老年患者不同麻醉方式术后认知功能障碍的影响以及血清细胞因子差异。方法将60例接受腹腔镜胆囊切除术患者随机分成乌司他丁+全凭静脉麻醉组(I组),乌司他丁+全凭吸入麻醉组(II组),分别在术前1d拔管后1h、24h、4d、7d进行简易智力状态检查评分。结果两组患者简易智力状态检查评分均有不同程度的下降,拔管后1h最明显,与术前相比无统计学意义(P>0.05);I组与II组在所有时点两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者血清稳态氧化氮产物在所有时点两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论乌司他丁可降低老年患者术后POCD的发生率,并减轻其发病程度。     

地西他滨对小鼠肾缺血再灌注损伤作用的实验研究

目的:探讨DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨对小鼠肾缺血再灌注损伤的影响。方法:体外MTT法检测地西他滨对小鼠肾小管上皮细胞(HK-2)增殖的影响,流式细胞仪检测地西他滨是否可诱导HK-2细胞凋亡及对缺氧-复氧诱导的HK-2细胞凋亡的影响;地西他滨预处理C57BL/6小鼠4d,建立肾缺血再灌注损伤模型(IRI),地西他滨继续干预2d后检测肾功,采用HE染色观察肾组织病理变化,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)评估肾小管上皮细胞的凋亡、增殖细胞核抗原(PCNA)的免疫荧光染色检测小管细胞增值,免疫组化检测肾组织嗜中性粒细胞浸润、流式细胞仪分析肾组织调整性T细胞(Treg)、M2型巨噬细胞表达。结果:随浓度增加,地西他滨抑制HK-2细胞增殖及诱导其凋亡作用明显增强(P<0.01或0.05),低剂量地西他滨可抑制缺氧-复氧诱导的HK-2凋亡(P<0.01),改善肾IRI小鼠肾功(P<0.01)及病理损伤(P<0.05),抑制肾小管上皮细胞的凋亡(P<0.01),减少肾组织内炎性嗜中性粒细胞浸润(P<0.01),增加免疫调整性T淋巴细胞(Treg)及M2型巨噬细胞表达(P<0.01)。结论:地西他滨通过抑制肾小管上皮细胞凋亡、肾组织炎细胞浸润,对小鼠肾缺血再灌注损伤发挥保护作用,地西他滨可能成为干预肾IRI的新策略。     

重组人促红细胞生成素对人肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤的保护机制

目的:探讨重组人促红细胞生成素(rHuEPO)在人肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤保护机制。方法:体外培养HK-2细胞,随机分为5组:①正常对照组;②缺血再灌注损伤组;③预先给药组:缺血损伤30min前预先给予rHuEPO;④即时给药组:再灌注损伤5min前给予rHuEPO;⑤延迟给药组:再灌注损伤30min后给予rHuEPO。用AnnexinV/PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡;用RT-PCR及Western印迹法分别检测蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA及蛋白活性水平。结果:缺血再灌注诱导细胞损伤后,细胞内Akt(Ser473)、GSK-3β(Ser9)水平下降,Caspase-3基因及蛋白水平均上调,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),而Akt、GSK-3β基因水平不变(P>0.05);rHuEPO各干预组与缺血再灌注损伤组相比,细胞内Akt(Ser473)、GSK-3β(Ser9)表达水平上调,Caspase-3基因及蛋白水平均下调,预先给药组调节幅度最大,即时给药组次之,延迟给药组上调幅度最小,差异均有统计学意义(P<0.05);同时预先给药组(9.17%±0.35%)、即时给药组(12.47%±0.86%)和延迟给药组(15.63%±0.75%)细胞凋亡率明显低于缺血再灌注损伤模型组(17.97%±1.06%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:rHuEPO可能通过增强Akt活性,抑制其下游因子GSK-3β蛋白活性,从而抑制其下游凋亡蛋白酶Caspase-3活性的变化,减轻了抗霉素A诱导的人肾小管上皮细胞的缺血再灌注损伤。     

盐酸椒苯酮胺对耳蜗缺血再灌注后白介素-1β、肿瘤坏死因子-α mRNA及Fas 蛋白表达的影响

目的探讨豚鼠耳蜗白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA、Fas蛋白表达与耳蜗缺血再灌注损伤关系及盐酸
椒苯酮胺（PPTA）对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤保护机制。方法豚鼠64只随机分为4组,每组16只,分别为正常组、空白对照组、
缺血再灌注对照组和缺血再灌注PPTA组,每组随机选6只用于RT-PCR检测,剩余10只用于免疫组化。微血管夹夹闭双侧椎
动脉及右侧颈总动脉1 h松开动脉夹以制造耳蜗缺血模型,缺血再灌注PPTA组于缺血1 h再灌注后立即经股静脉注射PPTA
（10 mg/kg）,缺血再灌注对照组注射等量生理盐水,24 h后取标本。用RT-PCR法检测IL-1β和TNF-α的mRNA的表达。结果
缺血再灌注对照组耳蜗组织IL-1β、TNF-α mRNA表达量显著高于正常组和空白对照组（P<0.001）;缺血再灌注PPTA组耳蜗组
织IL-1β mRNA、TNF-α mRNA表达量显著低于缺血再灌注对照组（P<0.001）;缺血再灌注组Corti器、螺旋神经节和血管纹Fas
表达阳性,积分光密度值（IOD）值较其它三组明显增高（P<0.05）,缺血再灌注PPTA干预组IOD值与正常组及空白对照组差异
无统计学意义（P>0.05）。结论PPTA可抑制缺血再灌注耳蜗各部位IL-1β、TNF-α mRNA、Fas蛋白表达;PPTA可能通过抑制炎
性反应及抑制细胞凋亡实现对耳蜗缺血再灌注损伤的拮抗作用。
     

兔脊髓缺血再灌注损伤后线粒体凋亡途径的变化及灯盏细辛预处理的干预作用

目的：探讨兔脊髓缺血再灌注损伤后线粒体凋亡途径机制及灯盏细辛（Herba Erigerontis Breviscapi）注射液预处理的干预作用。 方法：日本大耳白兔60只随机分为假手术组、缺血组、再灌注组（1、6、24、48 h）和灯盏细辛组（1、6、24、48 h）。采用腹主动脉阻断法复制兔脊髓缺血再灌注损伤模型,缺血组缺血50 min,再灌注组缺血50 min后分别再灌注1、6、24、48 h。灯盏细辛组在缺血前30 min应用灯盏细辛9 mg/kg。用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用酶联免疫吸附测定法检测脊髓神经细胞细胞质及血清的半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶9（caspase-9）和凋亡诱导因子（apoptosis-inducing factor,AIF）的含量。 结果：与假手术组和缺血组比较,再灌注组脊髓细胞凋亡率和细胞质中AIF和caspase-9含量增加,血清AIF和caspase-9含量于再灌注1 h和6 h下降,但于24 h和48 h升高。与缺血再灌注组比较,灯盏细辛可以降低脊髓细胞的凋亡率及血清和脊髓神经细胞细胞质中AIF与caspase-9的含量。 结论：脊髓缺血再灌注后神经细胞的凋亡与线粒体途径有关,灯盏细辛可通过此途径抑制脊髓神经细胞凋亡。     

乌司他丁对胃癌细胞c-met基因表达及增殖的影响研究

目的：观察乌司他丁对胃癌细胞c-met基因表达及增殖的影响，为乌司他丁用于胃癌的治疗提供理论依据。方法：取对数生长期人胃癌BGC-823细胞，随机分为空白组、对照组和乌司他丁组。空白组加入RPMI1640培养液3ml，对照组培养液中加入奥沙利铂（L-OHP）至终浓度为1mmol／L（对照1组）和0.5mmol／L（对照2组），乌司他丁组培养液中加入乌司他丁至终浓度为320U/ml（乌司他丁1组）和160U／ml（乌司他丁2组），分别置于培养箱中培养48h。采用RT-PCR检测胃癌细胞c-met mRNA的表达情况；ELISA检测细胞抑制率；活细胞计数计算细胞倍增时间，以评估乌司他丁对胃癌BGC-823细胞增殖的抑制情况。结果：乌司他丁组与空白组及对照组比较，c-met mRNA的表达均有显著性差异（P〈0．05或P〈0．01）；乌司他丁1组与2组间比较，差异有显著性（P〈0.05）。细胞倍增时间及细胞抑制率比较，乌司他丁组与空白组间均有显著性差异（P〈0．05或P〈0．01），与对照组亦有非常显著性差异（P〈0．01）；乌司他丁1组与2组间比较，也有显著性差异（P〈O．05）。结论：乌司他丁可以明显抑制人胃癌BGC-823细胞原癌基因c-met mRNA的表达；乌司他丁可以明显延长人胃癌细胞的倍增时间，对细胞增殖具有明显的抑制作用，剂量增加，抑制作用越明显。     

硫化氢对大鼠肠缺血∕再灌注损伤中肠黏膜上皮细胞凋亡的影响

目的 研究外源性硫化氢(H₂S)对缺血/再灌注中肠黏膜上皮细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。 方法 分离肠系膜上动脉,用血管夹夹闭其根部1 h,随后松夹形成再灌注,建立在体肠缺血/再灌注损伤模型。实验设3个组:假手术对照组(C组)、缺血/再灌注组(I/R组)和缺血/再灌注硫化氢预处理组(NaHS组),24只健康清洁级SD大鼠随机分到以上各组,每组8只。再灌注2 h检测各组血清和小肠组织上清液超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及谷甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,HE染色光镜下观察小肠黏膜组织病理学改变,使用原位缺口末端标记(TUNEL)法进行细胞凋亡检测,Western blot法检测caspase-3蛋白的表达情况。 结果 与C组相比,I/R组和NaHS组的小肠黏膜和腺体损伤明显,血清及小肠组织SOD、GSH-Px水平明显降低,细胞凋亡指数(AI)和MDA水平明显升高,回肠组织caspase-3蛋白表达明显增加;而NaHS组和I/R组比较,损伤明显减轻,SOD和GSH-Px水平显著提高,细胞凋亡指数(AI)、MDA水平和caspase-3蛋白的表达水平均显著降低(P＜0.01)。 结论 H₂S在一定程度上保护了缺血/再灌注后的肠黏膜组织,减轻了肠黏膜上皮细胞的凋亡,该作用可能与减轻缺血/再灌注过程中的氧化应激反应有关。      

灵芝对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡率及线粒体跨膜电位的影响

目的探讨灵芝对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡率及线粒体跨膜电位的影响。方法采用线栓阻断大脑中动脉闭塞法（MCAO）建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。动物随机分为假手术组（Sham）、脑缺血再灌注组（IR）、灵芝组（GA）;于再灌注后3h、12h、24h、48h处死动物取材,流式细胞仪检测脑细胞凋亡率和线粒体跨膜电位。结果（1）IR组和GA组与Sham组比较,脑细胞凋亡率明显增高（P〈0．01）;再灌注3hGA组与IR组比较,脑细胞凋亡率没有明显差异（P〉0．05）;再灌注12h、24h、48hGA组与IR组比较,脑细胞凋亡率降低,有明显差异（P〈0．01）。（2）IR组脑细胞线粒体跨膜电位在再灌注3h、12h、48h较Sham组显著下降（P〈0．05）,其中3h值最低,其后逐渐升高,至48h又出现后续性降低;GA组细胞线粒体跨膜电位在再灌注3h较Sham显著下降（P〈0．01）;GA组线粒体跨膜电位在再灌注12h、48h较IR组显著升高（P〈0．05）。结论急性局灶性脑缺血再灌注后大鼠脑细胞凋亡率升高,线粒体跨膜电位显著降低,灵芝具有降低凋亡发生率、改善脑组织细胞线粒体跨膜电位水平的作用。     

Regulatory Effect of Bcl-2 Family Proteins in CPB-induced Cardiomyocyte Apoptosis in Dog Hearts

Recent studies showed that apoptosis was in-volved in the pathophysiology of various heart dis-eases including congestive heart failure,ischemia-reperfusion injury,allograft,myocarditis,hypother-mic lung preservation and other cardiac pathologies.So far,there have no reports on the myocyte apopto-sis in human hearts following conventional hypother-mic cardiopulmonary bypass,and the mechanismsunderlying myocardiocyte apoptosis are still poorlyunderstood.The aim of the present study was to in-ve…     

亚低温对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡和caspase-3释放的影响

目的 从信号转导及细胞凋亡角度,研究亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤(I/R)的脑保护作用及机制。方法 72只雄性健康SD大鼠,随机分成假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、亚低温组(M组),每组24只;三组缺血10min后分别按再灌注12h、24h、48h,再分为3个亚组,各亚组动物均为8只。大鼠脑缺血再灌注损伤模型制作采用改良四血管阻滞法,免疫组化SP法动态观察各个时间点海马CA1区caspase-3蛋白的变化;光镜和电镜分别观察再灌注48h亚组海马CA1区神经细胞形态和线粒体超微结构的改变。结果(1) 大鼠脑缺血再灌注损伤后12h海马CA1区caspase-3即有明显表达,24h达高峰,48h后仍有较高表达;(2) IR组和M组各时间点caspase-3表达水平比S组明显升高(P<0.05);24h亚组线粒体超微结构和神经细胞形态受损严重;(3) M组各个时间点caspase-3表达水平较IR组明显下降(P<0.05或P<0.01);24h亚组线粒体超微结构和神经元形态均有不同程度的改善。结论 亚低温对caspase-3依赖的线粒体凋亡通路有干预作用,通过维持线粒体膜稳定,抑制释放和激活caspase-3蛋白,保护线粒体的形态功能,从而减少神经细胞凋亡的发生,发挥脑保护作用。