缺氧共培养血管内皮细胞对绒毛外滋养细胞侵袭力的影响

目的 探讨在缺氧共培养条件下血管内皮细胞对绒毛外滋养细胞侵袭力的影响.方法 绒毛外滋养细胞在缺氧下单独培养作为对照组,绒毛外滋养细胞与血管内皮细胞用Transwell小室建立缺氧共培养作为观察组.应用荧光定量PCR、Western blot方法分别检测绒毛外滋养细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)/基质蛋白酶抑制剂1(TIMP1)mRNA及蛋白的表达;应用Transwell侵袭模型检测缺氧共培养下绒毛外滋养细胞侵袭力的变化.结果 与对照组比较,观察组的绒毛外滋养细胞MMP9 mRNA及蛋白的表达均明显降低(均P＜0.01),TIMP1 mRNA及蛋白的表达无明显变化(均P＞0.05);观察组的绒毛外滋养细胞侵袭力较对照组明显降低(P＜0.01).结论 缺氧共培养条件下,血管内皮细胞可下调绒毛外滋养细胞MMP9基因的表达并降低绒毛外滋养细胞侵袭力.     

DDR1促进胰腺癌细胞AsPC-1的迁移及侵袭能力

目的 探讨盘状结构域受体1 (DDR1)对胰腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响.方法 利用qRT-PCR检测DDR1在胰腺癌旁组织及癌组织中的表达水平.通过脂质体转染DDR1表达质粒至胰腺癌细胞AsPC-1中,应用Western blot验证其转染效果.通过划痕实验及Transwell法检测转染DDR1表达质粒后细胞迁移及侵袭能力的变化情况.Western blot检测转染后基质金属蛋白酶2 (MMP2)和基质金属蛋白酶9 (MMP9)的表达水平.结果 与癌旁组织比较,胰腺癌组织的DDR1 mRNA表达水平显著升高(P<0.05).转染质粒后,AsPC-1细胞DDR1蛋白表达量显著升高(P<0.05).应用划痕试验及Transwell试验结果显示,与对照组比较,AsPC-1/DDR1迁移力上调(51.11±11.51)%,侵袭力上调(77.25±10.64)%,差异均具有统计学意义(P<0.05).过表达DDR1后,AsPC-1细胞中MMP2和MMP9表达水平显著升高(P<0.05).结论 DDR1通过改变MMP2和MMP9的表达水平,促进胰腺癌细胞的迁移及侵袭,有望成为靶向治疗的新方向.     

HIF-1α siRNA对非小细胞肺癌A549细胞TIMP1、MMP1表达的影响

目的 探讨HIF-1α基因沉默对非小细胞肺癌(NSCLC) A549细胞基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase 1,MMP1)、基质金属蛋白酶抑制剂1(matrix metalloproteinase inhibitor,TIMP1)表达的影响。 方法 将siRNA-HIF-1α质粒载体稳定转染至A549细胞中,于缺氧环境下培养。应用MMT法和Transwell试验分别检测转染细胞的增殖、迁移和侵袭能力。应用qRT-PCR和蛋白免疫印迹分别检测转染细胞内TIMP1、MMP1 mRNA和蛋白表达水平。 结果 与Control组相比,A549组HIF-1α mRNA和蛋白表达显著增加(均P<0.05)。与Blank组和si-NC组相比,si-HIF-1α组HIF-1α mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与Blank组相比,si-HIF-1α组在转染24、48和72 h后细胞增殖率均显著降低(均P<0.05)。与Blank组相比,si-HIF-1α组A549细胞在转染24 h后的迁移和侵袭数量均显著降低(P<0.05)。与Blank组相比,si-HIF-1α组细胞内MMP1表达水平显著降低,而TIMP1表达水平显著增加(均P<0.05)。 结论 在缺氧状态下,HIF-1α siRNA靶向沉默HIF-1α在A549细胞内的表达,并可以通过下调MMP1表达和上调TIMP1的表达而抑制细胞的增殖、迁移和侵袭。      

血清限制对人滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞胰岛素样生长因子-1表达及细胞侵袭力的影响

目的 探讨血清限制对人滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达及细胞侵袭力的影响.方法 分别以1%、5%及10%胎牛血清(FBS)处理HTR-8/SVneo细胞48 h后,荧光定量PCR检测细胞的IGF-1及MMP-2 mRNA水平,细胞免疫荧光检测细胞IGF-1、MMP-2蛋白表达,MTT检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭力;进一步添加人重组IGF-1处理后,观察HTR-8/SVneo细胞MMP-2表达、细胞增殖及侵袭能力的改变.结果 随着血清浓度降低,细胞增殖能力明显下降(P<0.05);血清限制抑制细胞IGF-1、MMP-2的mRNA及蛋白表达(P<0.05),导致细胞侵袭力下降(P<0.05);补充人重组IGF-1能显著上调HTR-8/SVneo细胞MMP-2表达水平(P<0.05),促进HTR-8/SVneo细胞侵袭(P<0.05).结论 血清限制下调人滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞IGF-1表达,可能通过引起其MMP-2表达降低来介导细胞侵袭力下降;补充人重组IGF-1有助于促进HTR-8/SVneo细胞增殖及侵袭.     

MMP9、存活素在妊娠滋养细胞疾病中的表达及其临床意义

目的 通过研究基质金属蛋白酶9(MMP9)、存活素(survivin)在不同类型滋养细胞中的表达,探讨二者与滋养细胞疾病的关系.方法 应用免疫组化SP法对正常早孕(<12周)绒毛、葡萄胎(包括完全性和部分性)、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌组织中的MMP9、survivin 进行检测.结果 ①MMP9、survivin 在正常早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌组织中均有表达,且随着滋养细胞恶性程度的增加二者表达显著升高,差异具有显著性(P<0.05);②在不同类型滋养细胞中MMP9、survivin的表达呈正相关(P<0.05).结论 MMP9、survivin与滋养细胞的侵袭过程有关,二者可能共同参与了滋养细胞疾病的恶变与转移,对临床早期预测滋养细胞疾病的恶变与预防性化疗有一定的参考意义.     

骨桥蛋白在缺氧对滋养细胞侵袭力影响机制中的作用

目的研究不同氧浓度下滋养细胞骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达与相应氧浓度下滋养细胞侵袭力的相关性,探讨OPN在缺氧对滋养细胞侵袭力影响机制中的作用。方法利用气体混配缺氧装置(QT-MTX-3),模拟子痫前期胎盘缺氧的低氧环境,培养人胎盘绒毛膜癌滋养细胞系BeWo细胞。采用Western印迹和实时荧光定量PCR方法,检测不同氧浓度对BeWo细胞OPN表达的影响。采用Transwell侵袭模型,探讨缺氧对BeWo细胞侵袭力的影响。结果 Western blot检测结果显示,缺氧48h后,低氧组OPN蛋白的表达水平均明显下降,且2%O2组OPN蛋白下降更显著。实时荧光定量PCR检测结果表明,缺氧对滋养细胞OPN mRNA的表达影响呈现出浓度时间依赖性,随着氧浓度的降低和缺氧时间的延长,OPN mRNA的表达呈显著下降趋势。Transwell侵袭实验结果显示,与常氧对照组相比,低氧组细胞侵袭力明显降低,8%O2组和2%O2组的细胞浸润指数分别为0.298 8和0.091 7(P<0.01)。采用Spearman相关分析法,比较OPN表达水平与BeWo细胞侵袭力的相关性,结果显示,随着OPN表达的降低,滋养细胞的侵袭力进一步下降,OPN表达水平与侵袭指数成正相关(rs=0.944,P<0.01)。结论缺氧降低滋养细胞OPN的表达,表现为浓度和时间依赖性;随着OPN表达的降低,滋养细胞的侵袭力下降。OPN低表达可能是子痫前期滋养细胞侵袭力下降的分子机制之一。     

微电场对滋养细胞迁移／侵袭相关MMPs／TIMPs表达的影响

目的：探讨生理性微电场对体外培养的人胎盘滋养细胞迁移／侵袭相关分子金属基质蛋白酶（M M Ps ）／组织金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）表达的影响。方法用150 mV／mm的直流微电场刺激滋养细胞,测定其迁移情况并观察形态变化。实时荧光定量PCR和Western blot检测刺激前后MMP2、MMP9和TIMP1、TIMP2基因和蛋白表达水平。结果未加电刺激的滋养细胞,其运动缓慢,迁移方向随机;在含有10％小牛血清的培养基中,150 m V／m m电场刺激下滋养细胞向负极迁移,迁移速度和距离明显增加（P＜0．01）,胞体拉长,垂直于电场方向排列。电场刺激后,胞内 MMP2 mRNA 和蛋白表达水平明显升高（P＜0．05）,MMP9、TIMP1和TIMP2表达水平无明显变化。结论生理性直流微电场可介导滋养细胞定向迁移和排列,MMP2表达水平的上调可能与微电场促进滋养细胞迁移／侵袭功能有关。     

蜕膜细胞条件培养液对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响

目的　探讨蜕膜细胞条件培养液（DCM）对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响。方法　用体外培养早孕、晚孕蜕膜细胞的方法制备DCM,然后将其处理体外培养的早孕滋养细胞。用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析早孕滋养细胞侵袭调节基因表达的变化。结果　正常培养的早孕滋养细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、基质金属蛋白酶抑制物（TIMP-1）、尿激酶型纤溶酶原激活因子（u-PA）mRNA均有表达;而TIMP-2、纤溶酶原激活因子抑制因子（PAI-1）mRNA未见表达。早孕和晚孕DCM均能下调滋养细胞MMP-2、MMP-9、u-PAmRNA的表达,而上调TIMP-1mRNA的表达。早孕、晚孕DCM均能诱导滋养细胞PAI-1mRNA的表达,但对TIMP-2mRNA的表达未见有影响。结论　蜕膜细胞可能通过调节滋养细胞中MMP-2、MMP-9与TIMP-1之间的平衡以及u-PA与PAI-1之间的平衡,而影响滋养细胞的侵袭能力。     

喉鳞状细胞癌中MMP1和TIMP3表达的相关性分析

目的 探讨喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)中基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase 1,MMP1)和基质金属蛋白酶抑制因子 3(tissue inhibitor of metalloproteinase 3,TIMP3)mRNA和蛋白的表达,探讨MMP1和TIMP3在LSCC发展和监测中的意义.方法 分别应用逆转录-聚合酶链反应及免疫组织化学SP法,检测LSCC组织中MMP1和TIMP3 mRNA及蛋白表达情况.结果 MMP1 mRNA在LSCC组织中的表达0.66±0.26高于癌旁组织0.49±0.23(P﹤0.05),TIMP3 mRNA在LSCC组织中的表达0.34±0.21低于癌旁组织0.49±0.24(P﹤0.05);MMP1在LSCC组织和癌旁组织中的蛋白表达阳性率分别为82.4%和18.2%,两者比较差异有统计学意义(P﹤0.05);TIMP3在LSCC组织和癌旁组织中的蛋白表达阳性率分别为80.4%和100%,两者比较差异有统计学意义(P﹤0.05);MMP1和 TIMP3 mRNA及蛋白表达与组织病理学分级﹑淋巴结转移相关(P﹤0.05),而与年龄无关(P﹥0.05);LSCC组织中MMP1和TIMP3 mRNA及蛋白表达未检测到相关性(P﹥0.05).结论 MMP1和TIMP3表达与LSCC的发生发展﹑浸润及转移有关,检测LSCC组织中的MMP1和TIMP3的基因及蛋白表达情况,有助于判断LSCC的转移、TNM分期及预后情况.     

蜕膜细胞条件培养液对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响

目的 探讨蜕膜细胞条件培养液（DCM）对洋养细胞侵袭调节基因表达的影响。方法 用体外培养早孕，早孕蜕膜细胞的方法制备DCM，然后将其处理体外培养的早孕滋养细胞，用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析早孕滋养细胞侵袭调节基因表达的变化。结果 正常培养的早孕滋养细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-2，MMP-9，基质金属蛋白酶抑制物（TIMP-1），尿激酶型纤溶酶原激活因子（u-PA)mRNA均有表达；而TIMP-2，纤溶酶原激活因子抑制因子（PAI-1)mRNA未见表达，早孕和晚孕DCM均能下调滋养细胞MMP-2，MMP-9，uPAmRNA的表达，而上调TIMP-1mRNA的表达。早孕，晚孕DCM均能诱导滋养细胞PAI-1mRNA的表达，但对TIMP-2mRNA的表达未见有影响。结论 蜕膜细胞可能通过调节滋养细胞中MMP-2，MMP-9与TIMP-1之间的平衡以及u-PA与PAI-1之间的平衡，而影响滋养细胞的侵袭能力。     

基质金属蛋白酶及其抑制物与子宫内膜异位症关系的研究

目的研究基质金属蛋白酶-2、3（MMP-2，3）、金属蛋白酶组织抑制物-2（TIMP-2）蛋白及其mRNA在正常子宫内膜、子宫内膜异位症（EMS）妇女正位及异位内膜的表达。方法采用免疫组织化学法半定量分析MMP-2、MMP-3、TIMP-2在正常子宫内膜、EMS妇女正位内膜及异位内膜的表达，使用实时荧光PCR法进行MMP-2、MMP-3、TIMP-2的mRNA的定量分析。结果MMP-2、MMP-3在EMS妇女异位内膜组阳性表达高于正常对照（P〈0．05），TIMP-2在EMS妇女异位内膜组织阳性表达低于正常对照（P〈0．05），而且MMP-2、MMP-3在异位内膜标本阳性染色范围有向间质浸润的趋势。在不同的组织学周期，MMP-2、MMP-3、TIMP-2的表达情况相似，差异不具有统计学意义。EMS妇女异位内膜的MMP-2、MMP-3、TIMP-2mRNA含量均高于正常对照（P〈0．05）。在不同的组织学周期，正常妇女子宫内膜组的MMP-2mRNA含量、EMS妇女正位内膜组的MMP-3mRNA含量的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论EMS妇女的异位内膜具有更高的侵袭性可能与异位内膜MMP-2、MMP-3的过高表达及TIMP-2的低表达有关。     

同型半胱氨酸对基质金属蛋白酶的影响

目的观察高同型半胱氨酸血症（HHcy）大鼠基质金属蛋白酶-2,基质金属蛋白酶-9（MMP-2、MMP-9）的变化,探讨HHcy致动脉粥样硬化（As）的机制。方法30只Wistar雄性大鼠随机分为对照组,蛋氨酸组及干预组。对照组给予普通饲料,蛋氨酸组普通饲料中添加2%蛋氨酸喂养,干预组普通饲料中添加2%蛋氨酸喂养同时每日给予叶酸0.5mg,维生素B12（VitB12 ）25μg灌胃,实验期为8周。检测血清Hcy、MMP-2和MMP-9。用HE染色法对颈总动脉进行病理学检查。结果干预组和蛋氨酸组血清Hcy、MMP-2、MMP-9浓度均高于对照组（P＜0.05）,干预组血清Hcy、MMP-2、MMP-9浓度均低于蛋氨酸组（P＜0.05）;蛋氨酸组MMP-2和MMP-9与Hcy呈正相关。镜下观蛋氨酸组颈总动脉内膜平滑肌细胞增生排列紊乱,弹力纤维融合。结论HHcy诱导MMP-2和MMP-9表达增加,可能是HHcy致As的机制。可以通过补充维生素B12和叶酸来预防HHcy,从而防止As的发生。     

基质金属蛋白酶及金属蛋白酶组织抑制剂与脑膜瘤侵袭性的研究近况

原位杂交法及免疫组化法实验研究显示,基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9在脑膜瘤组织中的表达异常,提示其与脑膜瘤侵袭性有关,金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)和TIMP-2可特异性地抑制MMPs的活性,证明MMPs和TIMPs之间的平衡是影响脑膜瘤侵袭性的重要因素。深入研究MMPs和TIMPs在脑膜瘤中的表达及其调节机制,以及如何通过阻断MMPs的活性来抑制脑膜瘤的侵袭性,有望成为治疗脑膜瘤的新途径。     

小鼠单疱病毒角膜炎行羊膜移植MMPs及TIMPs表达的变化

目的:探讨羊膜移植对BalB/c小鼠感染单纯疱疹病毒-1(HSV-1)后基质金属蛋白酶-2,-8,-9及组织金属蛋白酶抑制剂TIMP-1,TIMP-2表达变化及其在单疱病毒角膜炎(HSK)病程中所起的作用。方法:将40只小鼠随机分为实验组和对照组,将5μl(105PFU)HSV-1感染小鼠单侧右眼角膜,建立单疱病毒角膜炎的动物模型。对实验组小鼠右眼角膜行羊膜移植术。分别在HSV-1感染后的第2,7,14 d处死小鼠,用免疫组化方法对小鼠感染HSV-1后MMP-2、MMP-9、MMP-8、TIMP-1、TIMP-2的表达变化进行研究,探讨它们在单疱病毒性角膜炎发展过程中所起的作用。结果:在对照组,角膜中MMP-2、MMP-8、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2在第2天出现表达且表达主要位于浅表基质层及上皮下的炎性细胞中。感染后第14天可见坏死性角膜炎及角膜溃疡形成,同时角膜基质和浸润的炎性细胞中尤其溃疡处,可见MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2表达显著增加。溃疡区域有大量MMP-8阳性染色的中性粒细胞。实验组各时间点MMP-2,-9,-8活性均低于对照组,TIMPS表达高于对照组。结论:行羊膜移植可抑制角膜细胞和浸润的炎性细胞分泌产生MMPs,促进TIMPS表达,可能对上皮性角膜炎与溃疡形成过程起重要的抑制作用。     

金属蛋白酶mTLL-1与心血管疾病

哺乳动物Tolloid样1(mTLL-1)属于金属肽链内切酶中虾红素家族的成员,由tll1基因编码。由于其与骨形态发生蛋白1(BMP-1)在结构和功能上具有高度的同源性,因而也属于BMP-1类分子。mTLL-1在心脏发育过程中起着关键作用,mTLL-1功能缺陷可能是导致心房间隔缺损的重要因素之一,近期研究发现心房间隔缺损的患者中存在mTLL-1基因突变。在此综述了mTLL-1在心脏中的表达、mTLL-1与心脏和主动脉形成及定位缺陷、mTLL-1与心脏分隔、mTLL-1基因突变与房间隔缺损以及mTLL-1与其他心脏畸形。     

基质金属蛋白酶与类风湿性关节炎的研究进展

基质金属蛋白酶(MMPs)是一组能降解所有细胞外基质的蛋白溶解酶家族,亦是致类风湿性关节炎(RA)不可逆关节损害的主要原因之一。而所有MMPs的活性均可被相应的组织金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)所抑制。下调MMPs和(或)上调TIMPs是治疗类风湿性关节炎的重要策略之一。     

基质金属蛋白酶9与高血压动脉重构

基质金属蛋白酶9(MMP-9)是基质金属蛋白酶家族中的重要一员,是锌离子依赖的细胞外基质(ECM)的降解酶。ECM的重塑通过影响细胞的结构和功能参与多种疾病的病理过程。MMP-9作为ECM的主要降解酶,通过调控基质胶原成分的合成和降解,直接影响血管平滑肌细胞形态和功能,并在高血压血管重构过程中发挥重要作用。同时,MMP-9也有望成为心脑血管疾病特别是高血压的潜在标志分子。     

基质金属蛋白酶-2在子宫内膜癌中的表达及意义

目的:检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在子宫内膜癌中的表达,分析其与临床病理特征间的关系,以探讨其在子宫内膜癌发生发展中的作用。方法:用免疫组化SP法检测45例子宫内膜癌中MMP-2的表达,另选12例增生子宫内膜和20例正常子宫内膜作为对照。结果:MMP-2蛋白在正常子宫内膜、增生子宫内膜中的表达无显著性差异(P>0.05)。子宫内膜癌组MMP-2表达高于对照组(P<0.05)。MMP-2在子宫内膜癌中、低分化组的表达高于高分化组(P<0.01)。在有肌层浸润标本中的表达高于无肌层浸润者(P<0.05)。结论:子宫内膜癌中MMP-2表达增强,与子宫内膜癌的发生、发展有关。     

基质金属蛋白酶9在骨肉瘤中的表达及其意义

目的 研究骨肉瘤组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达情况,探讨它与骨肉瘤的关系和临床意义.方法 对29例骨肉瘤和19例正常骨组织分别石蜡切片,免疫组化了解MMP-9在各组中的表达;提取两组总RNA行RT-PCR,观察各组MMP-9 mRNA转录改变,了解MMP-9 mRNA与骨肉瘤的关系.结果 骨肉瘤组织中MMP-9蛋白表达明显较正常组高,P＜0.05;正常骨组织中MMP-9 mRNA的表达与β-actin比值为0.39±0.12,在骨肉瘤组织中比值为0.78±0.04,两组间比较显示,骨肉瘤组织MMP-9 mRNA的表达明显升高,P＜0.05.结论 MMP-9在正常骨组织中呈低表达,而在骨肉瘤中的表达明显上调,MMP-9与骨肉瘤的发生发展密切相关.