人近端肾小管上皮细胞黏附分子CD146表达对细胞凋亡的影响

目的：探讨人近端肾小管上皮细胞（HK-2）黏附分子CD146表达与细胞凋亡的关系。方法：体外培养的HK-2N胞在不同浓度葡萄糖和不同浓度甘露醇刺激下分别作用24h、48h、72h，经流式细胞仪（FCM）检测各组HK-2细胞CD146的表达和凋亡率的变化。结果：正常糖浓度下HK2微弱表达CD146，且延长作用时间对表达无影响；随糖浓度升高，CD146表达上调，细胞凋亡率也增高，延长刺激时间可促进CD146表达和细胞凋亡（P〈0．05）；当糖浓度达到40mmol／L，刺激时间达到48h，CD,46表达显著升高（P〈0．05），HK-2细胞凋亡率也显著上升（P〈0．05）；甘露醇对HK-2细胞CD146表达和细胞凋亡的促进作用较葡萄糖的作用显著降低（P〈0．01）。结论：HK-2组成性表达CD146，高糖诱导CD146表达，甘露醇诱导作用较高糖弱；高糖诱导HK-2凋亡，其凋亡作用与CD146表达增高联系密切，提示黏附分子CD146对细胞生存有重要影响。     

高糖对人脐静脉内皮细胞表达的黏附分子CD_(146)的影响

目的:观察高糖刺激下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)上黏附分子CD_(146)的表达,初步探讨CD_(146)在早期糖尿病肾病发病中的作用。方法:体外培养的HUVECs根据培养液含D-glucose浓度不同分成以下几组:正常对照组NG组(5 mmol/L);高糖组(HG组):15 mM组(15 mmol/L),30 mM组(30 mmol/L),45 mM组(45 mmol/L),培养72 h后收集各组细胞,用反转录-聚合酶链反应方法(RT-PCR)检测CD_(146) mRNA的表达;western blot方法检测各组CD_(146)蛋白表达量。结果:RT-PCR检测到的NG组及HG(15 mM、30 mM、45 mM)组CD_(146) mRNA的表达量分别为(/β-actin):0.28±0.03,0.30±0.04,0.68±0.14,0.45±0.11;western blot检测到各组CD_(146)蛋白质表达的量分别为(/atublin):0.60±0.11,0.74±0.13,1.03±0.09,0.89±0.11。单因素方差分析提示HG30 mM组的CD_(146) mRNA及蛋白质表达最强,与NG组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:高糖可刺激体外培养的HUVECs高表达黏附分子CD_(146),可能成为糖尿病肾病早期内皮损伤的标志物。     

高晶体-高胶体渗透压混合液对脂多糖刺激的人血管内皮细胞ICAM-1 mRNA表达的影响

目的：探讨脂多糖（LPS）刺激的人血管内皮细胞（HUVECs)表面ICAM－1 mRNA表达的规律以及高晶体－高胶体渗透压混合液（HHS）对此过程的影响，方法：分离健康产妇脐静脉内皮细胞，进行原代培养，细胞长至单层时用逆转录酶－聚合酶链反应法分析其ICAM－1 mRNA的表达，结果：正常情况下HUVECs表面ICAM－1 mRNA表达微弱，LPS刺激1h后表达开始增加，至4h处达到峰值，0．25％，0．5％高晶体－高胶体渗透压混合液均可明显抑制LPS刺激的ICAM－1 mRNA表达（P＜0．05），但两者之间并无明显差异，且其作用时间对ICAM－1 mRNA表达也无明显影响，结论：LPS刺激的ICAM－1 mRNA表达是一个缓慢而持续的过程，HHS可明显抑制脂多糖诱导的ICAM－1 mRNA表达，且这种作用不受HHS浓度及作用时间的影响。     

大黄素对脂多糖诱导的内皮细胞骨架损伤及通透性影响的实验研究

目的：观察大黄素对脂多糖（ lipopolysaccharide,LPS）诱导损伤的人脐静脉血管内皮细胞（ human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）的干预作用,探讨其对内皮细胞细胞骨架及通透性的影响。方法：以0．2μg/ml LPS作用于HUVECs 24 h,造成血管内皮损伤模型。Y27632（ ROCK特异性抑制剂）和缬沙坦（西药对照,AngⅡ受体1拮抗剂,Rho/ROCK信号通路的间接抑制剂）作为阳性对照药物。观察了大黄素对LPS诱导的内皮损伤后的HUVECs的变化：流式细胞仪An-nexin V-FITC/PI染色观察凋亡率,transwell迁移实验观察细胞迁移能力,10 mg/ml波连蛋白预包被/无包被96孔板观察细胞黏附能力,硝酸还原酶法检测细胞培养上清中的cNOS、iNOS和NO浓度,免疫荧光法观察细胞骨架和黏着斑蛋白的结构和分布。结果：（1）LPS成功诱导构建了HUVECs细胞骨架损伤模型。HUVECs细胞增殖减弱、凋亡增加,细胞骨架肌动蛋白皱缩、黏着斑蛋白聚集,LPS活化内皮、诱导肌球蛋白收缩,导致细胞间隙开放、内皮通透性增加、细胞迁移能力和黏附能力下降。LPS作用24 h后,cNOS减低,tNOS、iNOS、NO升高,呈现内皮损伤和炎症状态。（2）大黄素诱导HUVECs细胞凋亡、提高细胞迁移能力和黏附能力、cNOS升高、iNOS减低,对细胞骨架和黏着斑蛋白形态无明显影响。结论：LPS诱导了HUVECs细胞骨架损伤,大黄素通过调节细胞的凋亡率、调节细胞合成和利用NO的能力、改变细胞迁移和黏附能力,而调节血管内皮通透性、改善内皮屏障功能。同时大黄素促进HUVECs凋亡,抑制内皮细胞的过度增殖,对内皮细胞有一定的保护作用。     

肾癌中CD133＋细胞和CD133-细胞生物学特性差异的研究

目的：研究人肾癌细胞系786-O和OS-RC-2中CD133＋细胞和CD133-细胞的生物学特性差异。方法：应用流式细胞仪检测肾癌细胞系786-O和OS-RC-2中CD133的膜表达状况;以免疫磁珠法将CD133＋细胞和CD133-细胞分离纯化,比较两者在光镜下的形态、生长特点、体外增殖能力、长期分化能力及体外克隆形成率的差异;流式细胞术分析两者细胞周期分布的变化,采用MTT法分析两者对化疗药物顺铂（DDP）（10、20、50、80／Lg／ml）敏感性的差别。结果：786-O和0S-RC-2均有CD133的少量表达,表达率为（8．12±0．86）％、（6．83±0．20）％,CD133＋细胞和CD133-细胞相比具有较强的体外增殖、克隆形成及长期分化能力;细胞耐药性实验表明CD133＋细胞、CD133-细胞对50bcg／m1DDP敏感性差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：肾癌细胞系中CD133＋细胞具有肾癌干细胞的部分特征,能否作为肾癌干细胞的表面标志还需要进一步的实验加以明确。     

MG-132对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化与凋亡的影响

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对体外培养的人近端肾小管上皮细胞（HK-2）转分化和凋亡的影响及其机制。方法：体外培养HK-2细胞,随机分组：对照组,TGF-β1刺激组（5ug／L）,MG-132组（2．5μmol／L）,MG-132＋TGF-融组（MG-132 2.5μmol／L孵育30min后再加TGF-β1 5μg／L）。培养24h后收集细胞,RT-PCR法检测Smurf1、Smurf2和Smad7 mRNA的表达;Western免疫印迹检测Smurf1、Smurf2、Smad7和P-IκB-α和IκB-α蛋白表达;免疫组织化学检测胞浆中Fn和α-SMA的表达;Hoechst 33258染色免疫荧光检测细胞凋亡形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：TGF-β1刺激组HK-2 Smurf1、Smurf2 mRNA及蛋白表达水平较对照组高（P〈0．05）,但Smad7 mRNA及蛋白表达水平较对照组低（P〈0．05）,且胞浆中FN和α-SMA水平较对照组高（P〈0．05）。MG-132＋TGF-β1组与TGF-β1刺激组比较,Smurf1、Smurf2 mRNA表达降低（P〈0．05）,Smad7 mRNA略升高（P〉0．05）,而Srnad7蛋白明显升高（P〈0．05）,胞浆中Fn和α-SMA表达减少。MG-132组、MG-132＋TGF-β1组分别与对照组及TGF-β1组比较,P-IκB-α和IκB-α蛋白浓度升高,细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：MG-132可抑制TGF-132诱导的HK-2 Smurf1、Smurf2的表达,促进Smad7表达,抑制其降解,减轻FN和α-SMA的表达,从而抑制HK-2转分化;另-方面,MG132可能通过抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞NF-κB活化促进HK-2细胞凋亡。     

模拟CO2气腹对胃癌细胞黏附分子表达的影响

目的研究体外模拟不同压力CO2气腹环境对人胃癌MKN,45细胞表面黏附分子表达的影响。方法体外建立模拟CO2气腹环境,实验组分为3个亚组,气腹压力分别为1．2、1．6和2．0kPa,作用时间均为4h。实验组经气腹处理后第0、24、48、72和96h,对照组普通细胞培养4h,用流式细胞仪检测胃癌MKN-45细胞表面黏附分子CD44v6、细胞间黏附分子1（ICAM-1）和上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）表达。结果胃癌MKN-45细胞经1．2、1．6kPaCO2气腹作用后CD44v6和ICAM-1表达呈现先升高后回落,24h时与对照组的差异有统计学意义（P〈0．01）,48h时达到高峰,然后逐渐下降,72h时与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）,96h恢复至对照组水平：E-cadherin表达变化为先降低后回升,处理后即较对照组明显下降（P〈0．01）,然后开始回升,48h时与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）,96h恢复至对照组水平。2．0kPa组CD44v6、ICAM-1和E-cadherin表达变化均更为显著．CD44v6和ICAM-1在处理后即显著高于对照组（P〈0．05）．E-cadherin表达在48h仍然明显低于对照组（P〈0．05）。结论模拟临床常用的CO2气腹压力对胃癌MKN．45细胞表面黏附分子表达可产生一过性影响．但均能在较短时间内恢复。     

组织工程心脏瓣膜内皮细胞的整合素β1表达

目的体外构建组织工程心脏瓣膜（TEHV），初步探讨内皮细胞黏附生长的分子机制。方法猪主动脉瓣膜经胰酶-EDTA、表面活性剂、核酸酶处理，去除猪主动脉瓣叶的细胞成分，测定瓣叶脱细胞后的生物力学特性；将扩增的人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）种植在瓣叶上，体外静态构建TEHV，观察内皮细胞的生长状态。消化瓣膜内皮细胞，半定量RT-PCR检测内皮细胞整合素＆mRNA的表达，Western-Blot检测内皮细胞膜上整合素＆蛋白的表达。结果猪主动脉瓣膜中的细胞成分能完全去除，脱细胞瓣叶的生物力学特性同新鲜瓣叶相比无明显变化；种植的HUVECs在瓣叶表面生长状态良好，长成一层连续的细胞层。瓣膜内皮细胞可检测到整合素岛mRNA和蛋白的表达。结论脱细胞猪主动脉瓣膜作为支架，HUVECs做种子细胞可以成功构建TEHV，瓣膜内皮细胞可以表达整合素岛。     

犬骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞定向分化的研究

目的：研究犬骨髓间充质干细胞（MSCs）在体外定向诱导,向血管内皮细胞（ECs）方向分化,探讨其作为组织工程血管种子细胞的可行性。方法：获取犬骨髓单个核细胞,体外分离出MSCs。将分离的MSCs接种于含EBM-2完全培养液的培养瓶,向内皮样细胞定向诱导分化;LG-DMEM完全培养液培养的MSCs作为对照组。对MSCs表型进行流式细胞仪鉴定;诱导的内皮样细胞进行CD31、Ⅷ因子免疫细胞化学鉴定和摄取Dil-Ac-LDL、结合FITC-UEA的双染色功能鉴定。结果：流式细胞术检测培养的原代MSCs表面标志CD44表达呈阳性,而CD34表达则呈阴性;诱导分化的内皮样细胞具有内皮细胞形态特征,与成体内皮细胞相似;诱导的内皮样细胞Ⅷ因子染色和CD31免疫荧光染色均呈明显阳性,对照组细胞为阴性;诱导的内皮样细胞Dil-Ac-LDL摄取实验和FITC-UEA结合实验,细胞呈阳性表现。结论：在体外用骨髓MSCs能够成功诱导分化为血管内皮样细胞,为组织工程血管内皮化提供了一种可行的种子细胞来源。     

塞来昔布抑制人结肠癌细胞Caco-2细胞增生的分子机制

目的研究塞来昔布在体外对人结肠癌细胞Caco-2生长增生及其抗肿瘤的相关分子机制。方法体外培养人结肠癌细胞Caco-2,MTY法检测塞来昔布在相同浓度下,不同时间对于结肠癌细胞增生的影响,并计算Ic。值;RT—PCR法检验COX-2、Survivin的mRNA的表达影响。结果MTF结果显示：相同干预浓度塞来昔布抑制人结肠癌细胞增生,其24h,48h,72h的Ic。分别为：（99．519±10．355）μmol／L、（71．546±6．446）μmol／L、（59．622±15．999）μmol／L;RT-PCR结果显示：人结肠癌细胞Caco-2正常对照组及塞来昔布干预组COX-2mRNA灰度值分别为：0．808±0．021、0．101±0．002（t=19．037,P=0．000）;Survivin mRNA灰度值分别为：0．798±0．031、0．190±0．002（t=18．987,P=0．002）。结论塞来昔布抑制结肠癌细胞增生,塞来昔布抗肿瘤机制可能是通过抑制COX-2及Survivin的mRNA的表达来实现的。     

洛伐他汀对人血管内皮细胞双向调节作用的实验研究

目的 探讨洛伐他汀对人血管内皮细胞的调节作用及其浓度相关性.方法 配制含不同浓度洛伐他汀的培养基(0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L),分别于96孔板中进行人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)培养,在培养24、72、120 h后以噻唑蓝比色法(MTT)法进行细胞活性及增殖情况评估.将HUVECs接种于6孔板中,分别加入含上述不同浓度洛伐他汀的培养基,培养24 h后,消化细胞,计数,按照2×104/ml每孔接种在24孔板中,30 min后,洗掉尚未黏附的细胞,将余下的细胞每孔随机选一个视野,在200×视野中计量黏附细胞数,比较各组细胞的黏附情况. 结果培养24 h,0.01、0.1μmol/L的洛伐他汀对HUVECs存在明显的促进增殖作用;培养72 h,1μmol/L的洛伐他汀对HUVECs存在明显的促进增殖作用;培养120 h,0.001、0.01、0.1、1 μmol/L的洛伐他汀与对照组相比HUVECs增殖活性差异无统计学意义,10μmol/L的洛伐他汀表现出明显的增殖抑制作用.洛伐他汀与HUVECs作用24 h后,0.1、1μmol/L的洛伐他汀表现出明显的促进HUVECs黏附作用.结论 洛伐他汀对人血管内皮细胞存在双向调节作用,与浓度相关.体外浓度0.1、1μmol/L时可以表现出明显的促进增殖及黏附作用,浓度达10 μmol/L时则表现出抑制作用.     

Modifications induced by LDL from type 1 diabetic patients on endothelial cells obtained from human umbilical vein.

The aim of the present work was to analyze the effect of LDL obtained from type 1 diabetic patients in good metabolic control on human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) after a short incubation period to detect possible atherogenic modifications of endothelial properties. Cultured HUVECs were incubated for 3 h with culture medium alone (control HUVEC), with native LDL from 12 healthy men (control LDL), or with native LDL from 12 type 1 diabetic men (type 1 LDL) (100 pg/ml). After the incubation, the following parameters were evaluated: nitric oxide synthase (NOS) activity, cytoplasmic Ca2+ levels, Na+-K+-ATPase activity, plasma membrane fluidity determined by means of 1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene (DPH) and 1-(4-trimethylaminophenyl)-6-phenyl-1,3,5-hexatriene (TMA-DPH), and plasma membrane conjugated diene (CD) content. The same experiments were repeated after bradykinin stimulation or in the presence of the antioxidant butylated hydroxytoluene (BHT), and nitric oxide (NO) production in intact HUVECs was also evaluated. HUVECs incubated with control LDL in comparison with control HUVECs showed a decreased fluidity of the membrane surface evaluated by TMA-DPH and a higher CD content. These alterations were prevented by the presence of BHT. HUVECs incubated with type 1 LDL in comparison with both control HUVECs and cells incubated with control LDL showed 1) increased NOS and Na+-K+-ATPase activity, cytoplasmic Ca2+ levels, and CD content, and 2) decreased fluidity of the membrane surface evaluated by TMA-DPH. These modifications were blunted--but not abolished--by the presence of BHT. After bradykinin stimulation either in the absence or in the presence of BHT, both cytoplasmic Ca2+ levels and NO production were increased in control HUVECs and in HUVECs incubated with control LDL, while a reduced response was observed in HUVECs incubated with type 1 LDL. The alterations observed in the endothelial function after the cell-LDL interaction might play a central role in the atherogenic process in diabetes.     

热打击对培养人脐静脉内皮细胞增殖能力的影响

目的：研究梯度热打击对体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖的影响.方法：设置培养HUVEC细胞的温度梯度（39、41、43 ℃）进行热打击1 h,相差显微镜观察细胞形态学改变,CCK-8比较细胞增殖率,流式细胞术研究细胞周期改变.结果：与正常对照组比较,1 h热打击结束时,各热打击组均出现部分细胞形态变圆,伪足变短,细胞间隙增大,以43 ℃组为明显.随热打击程度加深,未伸展细胞占培养细胞百分比增加（P〈0.05）.细胞增殖实验显示,与正常对照组比较,热打击后24 h,41 ℃和43 ℃组增殖率显著下降（P〈0.01）,48 h时仅43 ℃组增殖率显著下降（P〈0.05）,至72 h,各热打击组与正常对照组无显著差异.流式细胞术检查显示,1 h热打击结束即刻,与正常对照组比较,各热打击组细胞呈现显著的G0/G1期阻滞,以43 ℃组最显著（P〈0.05）;至48 h时各热打击组细胞周期基本恢复正常.结论：热打击对HUVEC具有细胞毒效应,可抑制HUVEC的增殖,造成细胞周期G0/G1期阻滞.     

鼠肝大部切除术后肠粘膜细胞免疫功能的变化及其与肠道细菌移位的关系

目的　探讨鼠肝大部切除术后空、回肠粘膜固有层细胞免疫功能的变化及其与肠道细菌移位的关系。方法　将 48只SD大鼠随机分为实验组和假手术组 ,每组 2 4只。实验组切除 70 %肝脏 ,假手术组除不切除肝脏外 ,其余手术步骤同实验组。分别于术后 6、12、2 4和 72h取两组大鼠 (n =6)空、回肠粘膜冰冻切片 ,而后行免疫组化染色 ,观察不同时相肠粘膜固有层CD3+ 、CD4+ 、CD8+ T淋巴细胞的数量及肝脏功能的变化。结果　实验组术后 2 4h和 72h ,其肠粘膜固有层CD3+ 、CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞的数量较假手术组明显下降 (P<0 .0 5) ,而两组大鼠术后不同时相的ALT及AST变化 ,实验组明显高于假手术组 (P<0 .0 5)。结论　鼠肝大部切除 ( 70 % )术后 2 4h ,肠粘膜固有层CD3+ 、CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞数量明显降低。这种细胞免疫功能降低所导致的肠粘膜屏障功能受损 ,可能是造成肠道细菌移位的原因之一     

Inhibition of neutrophil activation by volatile anesthetics decreases adhesion to cultured human endothelial cells.

BACKGROUND: Polymorphonuclear leukocytes (neutrophils, PMNs) have been shown to mediate vascular and tissue injury, leading to so-called systemic inflammatory response syndrome. The authors evaluated the effect of volatile anesthetics on neutrophil adhesion to human endothelial cells, focusing on whether the inhibitory effect observed is linked to an alteration in the function of endothelial cells or neutrophils. METHODS: The adhesion of human PMNs was quantified using cultured human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). The increase in the number of adhering PMNs was assessed when HUVECs (with 1 mM hydrogen peroxide), PMNs (with 10 nM N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine), or both were prestimulated. To determine the influence of volatile anesthetics on the adhesion of PMNs, the experiments were performed in the absence or presence of 0.5, 1, and 2 minimum alveolar concentration halothane, isoflurane, or sevoflurane, whereby HUVECs, PMNs, or both were pretreated with gas. RESULTS: Activation of HUVECs with hydrogen peroxide or stimulation of PMNs with N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine resulted in a 2.5-fold increase in PMN adhesion. Preincubation of PMNs, separately, with halothane, isoflurane, or sevoflurane, respectively, abolished enhanced neutrophil adhesion to hydrogen peroxide-activated HUVECs and adhesion of PMNs prestimulated with N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine to unstimulated HUVECs (maximal effect at 1 minimum alveolar concentration). No decrease in adhesion was detected when only HUVECs were pretreated with volatile anesthetics. Additional exposure of HUVECs and PMNs to volatile anesthetics had no inhibitory effect on adhesion greater than that seen when only PMNs were treated. Appropriately, the volatile anesthetics abolished the upward regulation of the adhesion molecule CD11b on PMNs (as evaluated at 1 minimum alveolar concentration each), whereas 1 minimum alveolar concentration halothane failed to affect the expression of P-selectin, an adhesion molecule on endothelial cells. CONCLUSIONS: This study indicates that halothane, isoflurane, and sevoflurane inhibit neutrophil adhesion to human endothelial cells at concentrations relevant to anesthesia in a static system. The effects appear to be mediated by inhibition of PMN activation; that is, by attenuating the upward regulation of neutrophil CD11b.     

烧伤患者血清与痂下水肿液诱导内皮细胞凋亡的实验研究

目的　探讨烧伤患者血清 (以下称烧伤血清 )、痂下水肿液诱导人脐静脉血管内皮细胞株ECV30 4凋亡的分子机制。　方法　将体外培养的ECV30 4随机分为 :A组 ,用含体积分数 30 %正常人血清的培养基培养 ;B、C组 ,分别用含烧伤血清、痂下水肿液 (体积分数同A组 )的培养基培养。 6、12、2 4、36h后采用Hochest 332 5 8荧光染色观察 3组细胞核形态学改变 ,并计算细胞凋亡百分率。培养 12h后采用半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 (caspase)检测试剂盒测定caspase 3、8、9的活化情况。培养 12、2 4h后进行琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡的特征性DNA梯状条带。　结果　A组各时相点下可见胞核呈弥散均匀荧光 ,B、C组细胞培养 2 4h后胞核呈现深染、致密的颗粒块状荧光。培养12～ 36hB、C组的凋亡百分率均高于A组 (P <0.0 1),其中 36h时B、C组的凋亡百分率分别为 (38.9± 7 3) %、(4 9.5± 6 .5 ) % ,明显高于A组 (2 .2± 0 .3) % (P <0.0 1)。B、C组培养 12h后caspase 3、8、9活性均高于A组 (P <0.0 1)。B、C组DNA琼脂糖电泳出现明显梯状条带 ,A组未见此现象。　 结论　烧伤血清、痂下水肿液通过同时激活死亡受体信号通路和线粒体信号通路导致ECV30 4细胞凋亡     

Markers of endothelial cell activation/injury: CD146 and thrombomodulin are related to adiponectin in kidney allograft recipients

BACKGROUND: Adiponectin may be used for assessing the risk of coronary artery disease (CAD) and may be related to the development of acute coronary syndrome. Decreased adiponectin has been associated with some risk factors for cardiovascular diseases such as male sex, obesity and diabetes mellitus. Adiponectin has antiatherogenic properties and attenuates endothelial inflammatory responses. CD146, a novel cell adhesion molecule, is localized at the endothelial junction. In kidney allograft recipients, endothelial dysfunction and atherosclerosis are almost universal. The aim of this cross-sectional study was to evaluate possible relations between adiponectin, CD146, and other markers of endothelial cell injury in 82 stable kidney transplant recipients (mean age 45 years, mean time after transplantation 47 months) with and without CAD. METHODS: Adiponectin and markers of endothelial injury: CD146, von Willebrand factor, thrombomodulin, ICAM, CD40L, P-selectin and other hemostatic markers were assessed using commercially available kits. RESULTS: Patients with CAD had evidence of more pronounced endothelial dysfunction, procoagulant state and lower adiponectin than patients without CAD. Adiponectin correlated significantly, in univariate analysis, with CD146 (r = 0.29, p = 0.009), thrombomodulin (r = 0.37, p = 0.001), protein Z (r = -0.25, p = 0.03), BMI (r = -0.26, p = 0.047), serum creatinine (r = 0.26, p = 0.02) and urea (r = 0.38, p = 0.001). CD146 correlated significantly with von Willebrand factor (r = 0.33, p = 0.002), thrombomodulin (r = 0.25, p = 0.025), age (r = 0.34, p = 0.001), platelets (r = -0.33, p = 0.002), serum urea (r = 0.24, p = 0.039), cholesterol (r = 0.24, p = 0.046), ICAM (r = 0.23, p = 0.036), protein C activity (r = -0.26, p = 0.019) and tended to correlate with serum creatinine and time after transplantation. In multivariate linear regression, independent predictors of adiponectin were CD146, thrombomodulin and urea, and of CD146 was mainly age of patients. CONCLUSIONS: Endothelial dysfunction and procoagulant state are more pronounced in kidney transplant recipients with CAD, particularly in those with lower GFR. In kidney transplant recipients, markers of endothelial cell injury are significantly increased relative to healthy volunteers. Elevation of adiponectin may be a defense mechanism against endothelial damage, reflected by elevated CD146 and thrombomodulin.     

降钙素基因相关肽对人脐静脉血管内皮细胞增殖和迁移的影响及机制研究

目的组织工程骨的神经化能有效促进支架材料内血管生成,修复骨缺损。研究降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖与迁移的作用,进一步揭示组织工程骨的神经化促血管生成机制。方法体外分离获取HUVECs,并通过血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)与CD31抗原鉴定,取第1代细胞用于实验。实验分为6组,分别以0(A组)、1×10—12(B组)、1×10—11(C组)、1×10—10(D组)、1×10—9(E组)、1×10—8mol/L(F组)浓度CGRP干预HUVECs。采用细胞免疫荧光观察HUVECs的CGRP1受体(CGRP1 receptor,CGRP1R)表达情况,AlarmarBlue法动态检测各组HUVECs增殖率,Transwell小室检测各组HUVECs的迁移能力,ELISA法检测HUVECs分泌VEGF的水平,Westernblot法检测其局部黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)的表达。结果分离的细胞通过形态学及vWF、CD31免疫荧光鉴定为HUVECs,并可见CGRP1R在细胞质和细胞膜表达。CGRP呈时间-浓度依赖性刺激HUVECs增殖;B～F组各时间点细胞增殖能力均高于A组(P<0.05),F组各时间点细胞增殖能力最高。B～F组迁移细胞数均显著高于A组(P<0.05),最大增幅达3倍以上。B～F组VEGF分泌量均显著高于A组(P<0.05);C、D组促进细胞分泌VEGF的能力最强。Western blot检测示,与A组相比,B～F组CGRP刺激HUVECs 3、7、10 d后,FAK表达明显增加(P<0.05)。结论 CGRP对HUVECs的增殖和迁移有直接促进作用,可能作用机制为CGRP能促进VEGF分泌和增加FAK的表达。     

高迁移率族蛋白B1对小鼠调节性T细胞与CD4+CD25-T细胞相互作用的影响

目的 观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对调节性T细胞(Treg)与CD4+CD25-T细胞相互作用的影响,并初步探讨其影响Treg抑制功能的机制.方法 免疫磁珠法分离正常BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+Treg及CD4+CD25-T细胞.采用固相包被抗CD3/可溶性抗CD28进行辅助活化,以不同时间及浓度HMGB1刺激Treg,ELISA法分析HMGB1刺激对Treg分泌IL-10的影响.将HMGB1(1000μg/L)刺激后的Treg与CD4+CD25-T细胞共培养,MTT法观察其对Treg抑制CD4+CD25-T细胞反应的作用,并分析HMGB1刺激后的Treg对CD4+CD25-T细胞IL-2生成及细胞功能极化的影响.结果 经抗CD3/CD28辅助活化的CD4+CD25+Treg在HMGB1作用下IL-2生成无显著差异(P＞0.05),但随时间延长及剂量增加,IL-10生成明显减少(P＜0.05).经HMGB1刺激的Treg对CD4+CD25-T细胞增殖的抑制反应减弱,同时诱导CD4+CD25-T细胞IL-2产生及细胞功能极化的能力均下降(P＜0.05).结论 HMGB1可通过诱导Treg抑制功能的下调,从而影响CD4+CD25-T细胞功能,进而调节炎症反应过程.