肿瘤坏死因子α诱导人肾近曲小管上皮细胞C3mRNA表达和蛋白合成及其意义

目的：研究体外培养的人肾脏近曲小管上皮细胞（PTEC）自身以及在肿瘤坏死因子α（TNF－α）诱导下补体第三部分（C3）的基因表达和蛋白合成。方法：用单纯培养或TNF－α诱导培养人肾组织的近曲小管上皮细胞,采用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）方法测定C3mRNA和酶联免疫法（ELISA）测定C3蛋白。结果：基础状态的人PTEC可表达C3mRNA和合成C3蛋白,并在TNF－α诱导后显著增高,且呈剂量和时间依赖关系。结论：人PTEC自身具有表达C3mRNA和合成C3蛋白的能力,并在TNF－α的诱导下明显上调。     

雷公藤甲素对TNF-α诱导的肾系膜细胞MCP-1和ICAM-1表达干预及其机制的研究

目的：观察雷公藤甲素对TNF-α诱导的肾系膜细胞（GMC）MCP-1,ICAM-1表达的干预并探讨其作用机制。方法：把培养的GMC按刺激及干预情况分为正常对照组、TNF-α刺激组、雷公藤甲素低（5ng/ml）,中（10ng/ml）,高浓度（15ng/ml）干预组,以及吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）干预组（阳性对照组）、PDTC与雷公藤甲素（10ng/ml）联合干预组。TNF-α刺激干预诱导24h后,分别提取细胞上清液、细胞质、细胞核等成分,采用ELISA法检测MCP-1,ICAM-1,IκB,IκBα,ELISA结合EMSA方法检测各组NF-κB p65,以RT-realtime PCR方法检测MCP-1,ICAM-1的mRNA。结果：TNF-α刺激组MCP-1、ICAM-1的mRNA及蛋白表达、NF-κB p65分子水平较对照组显著增高（P〈0.01）;各浓度雷公藤甲素或PDTC干预后上述指标显著下降（P〈0.01）,其中PDTC与雷公藤甲素联合干预组较单用PDTC干预组MCP-1、ICAM-1更低。相关分析表明NF-κB p65与MCP-1及ICAM-1的蛋白和mRNA表达水平呈正相关。GMC经TNF-α刺激后IκB有所下降,雷公藤甲素呈剂量依赖性上调κB,TNF-α刺激后磷酸化的IκBα较正常对照组显著升高（P〈0.05）,低浓度雷公藤甲素可显著下调其水平（P〈0.05）。结论：雷公藤甲素能显著抑制GMC分泌MCP-1、ICAM-1等促炎因子的mRNA及蛋白表达,其机制可能是促进IκB表达上调,并抑制IκBα磷酸化,从而阻断细胞核NF-κB p65活化所致。     

内毒素血症状态下生长激素不敏感的实验研究

目的：探讨内毒素血症状态下生长激素不敏感的发生机制。方法：采用雄性SD大鼠（n=180）,静脉分别注射内毒素（LPS）、TNF-α及IL-6,部分注射LPS大鼠同时皮下注射生长激素（GH）,不同时相处死大鼠。应用RT-PCR法测定肝组织胰岛素样生长因子I(IGF I)、生长激素受体（GHR）和细胞因子信号抑制子3（COCS-3）mRNA的表达;应用RIA测定血清GH水平;应用ELISA测定血清TNF-α和IL-6水平。结果：静脉注射LPS后各时相血清GH水平无明显变化,但肝组织IGF I和GHR mRNA的表达却明显下调,最多分别达53％和89％。正常大鼠肝组织SOCS-3mRNA微弱表达,但内毒素血症鼠其表达却明显上调,最高达7.84倍。大剂量LPS注射诱导更多GHRmRNA表达下调和SOCS-3mRNA表达上调。GH可使正常鼠肝组织IGF ImRNA的表达上调25％,但与LPS同时注射则不能阻止IGF I mRNA表达的下调。LPS刺激TNF-α和IL-6的产生,且升高的IL-6水平与SOCS-2mRNA表达上调成高度正相关。静脉注射TNF-α主要使肝组织GHRmRNA表达下调,而IL-6主要使肝组织SOCS-3mRNA表达上调。结论：静脉注射LPS可以诱导生长激素的不敏感,该不敏感可能与GHRmRNA表达下调和SOCS-3mRNA表达上调有关,TNF-α和IL-6可能从不同方面介导了LPS的部分生物效应。     

尿毒清颗粒对造影剂肾病的实验研究

目的：探讨尿毒清颗粒对造影剂肾病（ CIN）的疗效及其可能的作用机制。方法：144只雄性SD大鼠随机分成3组：对照组（n＝48）、CIN组（n＝48）和尿毒清组（n＝48）。CIN组及尿毒清组均从尾静脉注射76%复方泛影葡胺注射液（10 ml/kg）建立CIN大鼠模型，对照组以生理盐水替代。尿毒清组在造模前1周给予尿毒清颗粒（2．5 g·kg^-1·d^-1）每日灌胃至处死大鼠前，CIN组用等量生理盐水替代。在造模后6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、5 d、10 d及15 d分别应用生化（血Scr、BUN）和组织学（ HE染色）指标评估肾功能及肾小管损伤的情况；免疫组化和RT-PCR检测KIM-1、NF-κB、TNF-α的蛋白及mRNA的表达情况。结果：（1）尿毒清组血Scr、BUN及肾小管间质损伤评分明显较CIN组低（P﹤0．05）；（2）造模后CIN组KIM^-1、NF-κB及TNF-α蛋白及 mRNA表达均上调，而尿毒清组KIM-1、NF-κB及TNF-α蛋白及mRNA表达水平均显著低于CIN组（P﹤0．05）。结论：（1）NF-κB、TNF-α在CIN肾组织中表达上调，CIN发生、发展过程中存在炎性反应；（2）尿毒清颗粒通过下调KIM-1、NF-κB、TNF-α在肾组织中的表达，减轻CIN的炎性反应，从而对CIN有一定的防治作用。     

格尔德霉素对肿瘤坏死因子诱导的PC-3M细胞中c-FLIP表达上调的影响

目的:探讨热休克蛋白90抑制剂格尔德霉素(Geldanamycin,GA)对TNF-α诱导的前列腺肿瘤细胞PC-3M中白介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)上调的影响及意义。方法:分别用TNF-α和GA TNF-α处理PC-3M细胞,用免疫细胞化学法测c-FLIP蛋白水平表达差异,采用RT-PCR测c-FLIP mRNA水平的表达差异。结果:使用TNF-α处理6小时后PC-3M细胞c-FLIP在蛋白及mRNA表达水平明显上调,而使用热休克蛋白90抑制剂GA预处理18小时后,能明显抑制TNF-α诱导的c-FLIP表达上调。结论:热休克蛋白90抑制剂能有效抑制TNF诱导的c-FLIP表达上调。     

Par-3蛋白在转化生长因子?茁1介导的大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的 观察转化生长因子（TGF)β1诱导的正常大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK52E）转分化（EMT）过程中细胞极性蛋白Par-3的表达及上调Par-3蛋白表达对TGF-β1诱导NRK52E细胞转分化进程的影响。 方法 应用TGF-β1 (10 μg/L)刺激NRK52E细胞，采用RT-PCR、Western印迹和免疫荧光方法分别检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Par-3 mRNA和蛋白的表达；应用Lipofectmine 2000将pKH3-HA-Par-3质粒瞬时转染NEK52E细胞，采用Western印迹观察上调表达Par-3对上述指标的影响。 结果 TGF-β1刺激后，NRK52E细胞α-SMA蛋白和mRNA水平上调，E-cadherin蛋白和mRNA的表达下调；Par-3蛋白表达呈时间依赖模式下调，72 h TGF-β1刺激组与对照组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。但Par-3 mRNA水平在各时间点差异均无统计学意义（P > 0.05）。脂质体转染外源性质粒pKH3-HA-Par-3上调表达Par-3可显著抑制TGF-β1诱导NRK52E细胞α-SMA蛋白的上调表达；逆转E-cadherin蛋白的下调表达。 结论 在TGF-β1诱导NRK52E细胞转分化进程中细胞极性Par-3蛋白表达下调，基因转染上调表达Par-3可部分减轻EMT的程度，提示Par-3蛋白在TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化和肾脏纤维化中可发挥保护性作用。     

缺血预处理对缺血再灌注损伤大鼠肾组织TLR2表达的影响

目的观察缺血预处理对缺血／再灌注损伤大鼠肾组织Toll样受体2（TLR2）表达的影响。方法将24只雄性SD大鼠随机分为3组：假手术对照组（SHAM组）、单纯缺血再灌注组（I／R组）和缺血预处理组（IPC组）,每组8只。于术后24h留取各组大鼠血标本和肾组织。检测各组大鼠血肌酐（SCr）和尿素氮（BUN）,肾组织切片行HE染色后观察其病理学改变,酶联免疫吸附法（ELISA）检测肾组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量,实时荧光定量多聚酶链反应检测肾组织TLR2mRNA表达,Westernblot检测肾组织TLR2蛋白表达。结果与SHAM组相比,I／R组大鼠SCr和BUN升高,肾组织TNF-α含量和TLR2蛋白表达升高,差异均有统计学意义（P〈0．01）;与I／R组相比,IPC组大鼠SCr和BUN降低,肾组织TNF-α含量和TLR2蛋白表达降低,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论缺血预处理可能通过抑制大鼠。肾组织TLR2表达及其信号通路,下调TNF-α的表达,发挥其肾脏保护作用。     

系膜细胞源性肿瘤坏死因子α上调IgA肾病肾小管肝型脂肪酸结合蛋白的表达及其肾脏保护作用

目的 探讨体外近曲小管肝型脂肪酸结合蛋白（L-FABP）在IgA肾病（IgAN）中的上调机制及其对肾脏的保护作用。 方法 原代培养的小鼠系膜细胞（MC）与不同浓度的多聚IgA（AIgA）（10～250 mg/L）共孵育48 h,取上清作为AIgA-MC介质。分别应用不同浓度的AIgA、AIgA-MC介质、中和性抗肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体及重组鼠TNF-α刺激小鼠近曲小管上皮细胞系mProx和通过转染稳定表达人L-FABP （hL-FABP）基因的mProx (mProx-L)细胞。实时荧光定量PCR方法检测细胞中的hL-FABP和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的mRNA表达。Western印迹方法检测细胞中的hL-FABP蛋白和4-羟壬烯醛 （4-HNE）修饰蛋白的表达。 结果 （1）AIgA-MC介质显著上调mProx-L细胞的hL-FABP mRNA和蛋白的表达（P < 0.01）,而AIgA刺激不能上调hL-FABP的表达。（2）中和性抗TNF-α抗体（终质量浓度为1和5 mg/L）的预孵育可以显著抑制AIgA-MC介质对hL-FABP蛋白表达的上调效应（P < 0.05和P < 0.01）。（3）重组鼠TNF-α（终质量浓度为50 和250 ng/L）呈剂量依赖性显著上调hL-FABP蛋白的表达（P < 0.01）。（4）AIgA-MC介质刺激后, mProx-L细胞4-HNE修饰蛋白和MCP-1 mRNA的表达水平显著低于mProx细胞（P < 0.05和P < 0.01）。 结论 IgAN中系膜细胞源性TNF-α可以诱导肾小管L-FABP表达的上调。肾小管高表达的L-FABP抑制了氧化应激和炎性反应,发挥了肾脏保护作用。     

细胞因子及受体基因多态性与移植肾急性排斥反应的关系

目的 采用细胞因子基因芯片技术，检测肾移植受者5种细胞因子及其受体的21个等位基因位点的基因多态性，并探讨其与移植肾急性排斥反应的关系。方法 取144例肾移植受者的外周血，通过细胞中白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素10（IL-10）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和转化生长因子β1（TGF-β1）及其受体启动区21个基因多态性位点，设计寡核苷酸探针58条，进行多重聚合酶链反应（PCR）扩增、标记、杂交和结果判断。将受者分成急性排斥反应组和无排斥反应组，比较两组受者5种细胞因子及其受体的21个位点的基因型和等位基因分布情况。结 果在肾移植受者中，与移植肾急性排斥反应相关的基因型为：TNF-α（-308A／A、A／6、G／G）、IL-10（-597A／A、C／C、A／C；-824T／T、C／C、C／T；-1087A／A、A／G）、TGF-β1（＋869C／C、C／T、T／T）；与移植肾急性排斥反应相关的等位基因为：TNF-α（-308A／G）、IL-10（-597A／C;-824T／C；-1087A／G）、TGF-β1（＋869C／T）。结论 Th1类细胞因子TNF-α能够促进移植肾排斥反应的发生；Th2类细胞因子IL-10和Th3类细胞因子TGF-β1对移植肾急性排斥反应起保护作用。     

积雪草苷通过TGF-β/Smads通路对BMSCs成骨分化的影响

目的 探讨积雪草苷对骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）成骨分化的诱导作用以及潜在机制。方法 使用6个浓度的积雪草苷（0、5、10、20、30、40 μmoL/L）作用BMSCs,利用CCK-8与检测细胞增殖率与细胞凋亡率,筛选出积雪草苷对BMSCs最大无毒浓度。将BMSCs分成3组,空白对照组、积雪草苷组与抑制组,空白对照组正常培养,积雪草苷组使用积雪草苷对BMSCs进行诱导成骨分化,抑制组在此基础上加用SB-431542（50 moL/L）处理。诱导12 d后,茜素红染色观察细胞中矿化结节的数量,RT-qPCR检测细胞中碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）和骨钙素（OCN）基因表达水平,Western blot检测细胞中转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad2、p-Smad2、Smad3和p-Smad3蛋白表达水平。结果 20 μmoL/L的积雪草苷对BMSCs无明显抑制效果。与空白对照组相比,积雪草苷促进BMSCs钙化结节形成增多,ALP、OPN和OCN基因表达水平升高,TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3蛋白表达水平升高（均P＜0.05）;积雪草苷在TGF-β/Smads通路被抑制的情况下仍然能发挥诱导BMSCs成骨分化作用。结论 积雪草苷具有诱导骨髓间充质干细胞成骨分化的潜力,可能涉及的机制为激活细胞中TGF-β/Smads通路,上调OPN、ALP与OCN基因表达量,帮助骨髓间充质干细胞完成成骨分化。     

1，25（OH）2D3对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞维生素D受体及肿瘤坏死因子α、转化生长因子β1表达的影响

目的 研究脂多糖（LPS）对大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）维生素D受体(VDR)及肿瘤坏死因子α（TNF-α）、转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响,从而为1,25（OH）2D3在腹膜透析相关腹膜炎中的应用提供理论依据。 方法 胰蛋白酶消化法原代培养腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组：(1)正常对照组;(2)脂多糖组：不同浓度的脂多糖（1、10、100 mg/L）分别作用6 h;10 mg/L脂多糖分别作用2、6、12 h;(3)1,25（OH）2D3作用组：10 mg/L脂多糖预孵育2 h后,加1,25（OH）2D3(10－8 mol/L、10－7 mol/L、10－6 mol/L)再作用6 h。RT-PCR法检测VDR mRNA的表达;Western印迹法检测VDR蛋白表达;ELISA法检测上清液TNF-α、TGF-β1的表达。 结果 与对照组相比,LPS组RPMC VDR mRNA和蛋白表达均显著下调（均P < 0.05）。与LPS组相比,1,25（OH）2D3组VDR mRNA和蛋白表达均显著上调（均P < 0.01）。LPS组上清液中TNF-α、TGF-β1浓度均显著高于对照组（均P < 0.01）;1,25（OH）2D3组上清液中TNF-α、TGF-β1浓度均显著低于LPS组（均P < 0.01）。 结论 LPS能下调RPMC VDR mRNA和蛋白的表达,上调TNF-α、TGF-β1表达。1,25（OH）2D3可逆转LPS的作用,上调RPMC VDR mRNA和蛋白的表达,并下调TNF-α、TGF-β1表达。VDR对腹膜透析相关腹膜炎具有一定的保护作用,并具有抑制腹膜纤维化的作用。     

诱导立体网架上成纤维细胞表达成骨表型及其机制的研究

目的探讨诱导条件下的成纤维细胞在三维结构的聚乙醇酸（PGA）网架上表达成骨表型的可行性,以及肿瘤坏死因子α（TNF-α）对成纤维细胞骨形态发生蛋白（BMP）受体表型表达的影响。方法分离、纯化人皮肤成纤维细胞,实验用第2代细胞：（1）种植成纤维细胞于PGA网架上,进行体外旋转培养,并用含TNF-α（50U／ml）和BMP-2（0．1μg／ml）的条件培养液进行诱导。于1d,3、6周后利用倒置相差显微镜、扫描电镜、四环素荧光标记、茜素红染色方法观察细胞生长、骨样组织形成和矿化物沉积情况。上清液生化检测分析成骨性标志物分泌情况;（2）接种成纤维细胞于预置玻片或75cm。培养瓶中,用含TNF-α（50U／ml）的条件培养液进行一次性或连续性干预,采用逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学技术,于2．4、6、8d后分别检测BMPⅠ型受体（BMPR-ⅠA和BMPR-ⅠB）mRNA表达及蛋白形成状况。结果诱导3周后三维网架上的成纤维细胞表达成骨表型,分泌成骨细胞特征性标志物：骨钙素（OCN）和骨特异性碱性磷酸酶（B-AKP）;分泌大量细胞外基质形成骨样组织;平面培养发现,TNF-α（50U／ml）连续干预8d可增高BMPR-ⅠB的mRNA表达和蛋白合成。结论三维立体网架上的成纤维细胞在诱导条件下能够向成骨型细胞转化,形成骨样组织,有希望作为一种新的成骨型细胞的种子细胞源;TNF-α为BMP-2的靶向作用提供条件,TNF-α和BMP-2联合应用是调节成纤维细胞表型转化的诱导条件之一。     

复方积雪草合剂对IgA1诱导的大鼠系膜细胞增殖及IL-6与TGF-β1表达的影响

目的：探讨复方积雪草合剂对IgA1诱导的大鼠系膜细胞（MsC）的增殖及分泌白细胞介素-6（IL-6）、转化生长因子-β1（TGF-β1）的影响。方法：用体外实验的方法,将MsC经培养及传代,分成正常组、模型组,复方积雪草合剂高、中、低组,泼尼松组及代文组;经IgA1诱导后分别予以上述各药含药血清;用计数板对MsC进行计数、用RT-PCR及ELISA法分别检测IL-6 mRNA、TGF-β1 mRNA及其蛋白质的表达。结果：实验显示,复方积雪草合剂能抑制IgA1诱导的MsC增殖（与模型组比较P〈0.05）,且高、中剂量组明显优于其他治疗组;同时复方积雪草合剂能使MsC分泌IL-6 mRNA、TGF-β1 mRNA及其蛋白质下降（与模型组比较P〈0.05）,并呈一定的量效关系,尤其对IL-6的抑制作用更明显。结论：复方积雪草合剂可抑制IgA1诱导的MsC增殖,并减少IL-6 mRNA、TGF-β1 mRNA及其蛋白质的表达。     

Apocynin对缺氧复氧后肾小管上皮细胞MCP-1表达的干预作用

目的：研究缺氧复氧后肾小管上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达及Apocynin对其影响。方法：选用人肾小管上皮细胞（HK-2）建立缺氧复氧损伤模型,设正常对照组、单纯缺氧复氧组、不同浓度（0.05、0.25、0．5mmol／L）Apocynin干预组。流式细胞术检测细胞内氧化应激水平,流式细胞术检测MCP-1蛋白表达、RT-PCR法测定细胞MCP-1 mRNA表达。结果：缺氧复氧后HK-2细胞内氧化应激水平提高,细胞MCP-1蛋白和mRNA表达上调,且随缺氧时间的延长,细胞内氧化应激水平逐渐升高,MCP-1蛋白和mRNA表达逐渐增强;Apocynin呈剂量关系抑制细胞内氧化应激水平,同时呈剂量关系抑制MCP-1蛋白和mRNA表达的上调。结论：缺氧复氧诱导细胞内氧化应激的产生,诱导MCP-1表达上调;Apocynin可以通过抑制细胞内氧化应激抑制MCP-1的上调。     

氯沙坦对实验性糖尿病大鼠肾脏的炎症抑制作用

目的：观察氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏的炎症抑制作用。方法：采用链脲佐菌素（streptomtoein，STZ）65mg／kg腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。试验分正常对照组、模型组、治疗组，后一组于模型成功后1周给予氯沙坦20mg／kg灌胃，共12周。分别测定3组24h尿蛋白排泄量、血肌酐、肾重／体重、血浆C反应蛋白（CRP）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；观察肾脏病理形态学变化；应用免疫组化法检测肾组织T011样受体4（TLR4）、核因子-κB（NF-κB）的蛋白表达；RT-PCR检测肾组织TLR4的核酸表达。结果：模型组与对照组相比：模型组大鼠24h尿蛋白、血肌酐、尿素氮、肾重／体重明显升高，肾小球肥大，细胞增生，PAS阳性物质沉积增多；血CRP、TNF-α含量及肾组织TLR4、NF-κB的表达明显增加。经氯沙坦治疗后大鼠血CRP、TNF-α含量下降，肾组织TLR4、NF-κB的表达亦减弱，治疗前后比较存在差异（P〈0．05）。结论：氯沙坦对糖尿病肾病具有保护作用，其作用机制还可能是通过下调NF-κB、TLR4的表达，降低血浆CRP、TNF-α含量，抑制炎症反应而减少糖尿病肾病损伤。     

肿瘤坏死因子α介导人脐动脉血管平滑肌细胞成骨样钙化

目的 观察肿瘤坏死因子α（TNF-α）对体外培养人脐动脉血管平滑肌细胞（hUASMC）骨特异性碱性磷酸酶（BAP）、骨桥蛋白（OPN）和骨形成蛋白2（BMP-2）等成骨样分化标志蛋白表达以及细胞外钙盐沉积的影响。 方法 植块贴壁法原代培养人hUASMC。予以TNF-α刺激，甲O-酚酞络合酮方法测定细胞外基质钙盐沉积；Von Kossa法观察钙化染色；实时定量PCR法测定血管平滑肌细胞BAP和OPN mRNA表达水平；免疫印迹法观察血管平滑肌细胞BAP、OPN和BMP-2蛋白表达水平。 结果 一定浓度范围内的TNF-α可促进hUASMC增殖；增加细胞外基质钙盐沉积。TNF-α 50 μg/L刺激可在第3天上调血管平滑肌细胞BAP和OPN mRNA表达水平（BAP mRNA：1.908±0.034比1.000±0.033，OPN mRNA： 3.600±0.073比1.000±0.079，均P < 0.05）。TNF-α 50 μg/L刺激可在第5天上调血管平滑肌细胞BAP、OPN和BMP-2蛋白表达水平（BAP蛋白：3.394±0.083比1.000±0.030，OPN蛋白： 1.967±0.134比1.000±0.070，BMP-2蛋白：2.745±0.289比1.000±0.208， 均P < 0.05）。 结论 一定浓度范围的TNF-α可刺激hUASMC增殖；介导细胞成骨样分化；增加细胞外基质钙盐沉积，从而参与血管钙化的发生发展。     

雷公藤内酯醇对TNF-α诱导人PTEC补体C3的影响

目的:观察雷公藤内酯醇对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导上调的人近端肾小管上皮细胞(PTEC)补体C3表达的影响.方法:首先观察PTEC在基础状态时补体C3 mRNA表达和C3蛋白合成状况, 然后采用TNF-α对PTEC进行诱导培养.在找到TNF-α发挥最佳上调补体C3表达的浓度和时间交叉点后,加入剂量递增但作用时间相同,或同一剂量但作用时间递增的雷公藤内酯醇,以及剂量递增的CsA或FK506.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测C3 mRNA,采用酶联免疫法(ELISA)检测C3蛋白;并计算50%抑制浓度(IC50)以比较雷公藤内酯醇与CsA和FK506对C3作用的强度.结果:雷公藤内酯醇以剂量依赖方式和时间依赖方式完全抑制TNF-α诱导下的PTEC C3 mRNA表达和C3蛋白合成,其IC50分别只有4.53 ng/ml和3.99 ng/ml,而CsA和FK506即使在很大剂量也只有轻微的抑制作用,CsA的IC50为2 770 ng/ml和4 898 ng/ml,FK506为1 920 ng/ml和6 000 ng/ml.结论:(1)雷公藤内酯醇能明显抑制PTEC 在TNF-α诱导下的C3 mRNA表达和C3蛋白合成,这可能是其治疗肾病的重要免疫抑制机制之一;(2)雷公藤具有明显较CsA和FK506强的抑制PTEC C3表达的作用.     

蜕皮甾酮对急性肺损伤大鼠肺组织中Toll样受体4及肺表面活性蛋白A表达的影响

目的：观察蜕皮甾酮（EDS）对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）大鼠肺组织中TNF-α、肺表面活性蛋白A（SP-A）、Toll样受体4（TLR4）表达的影响,并探讨其机制.方法：将40只雄性Wistar大鼠随机分成正常对照组、LPS组、EDS低（20 mg/kg）、中（30 mg/kg）、高（40 mg/kg）剂量治疗组（n=8）.腹腔注射LPS（10 mg/kg）诱导大鼠ALI模型,3个EDS治疗组于建模1 h后予不同剂量的EDS腹腔注射,其余两组注射等体积生理盐水.24 h后,取肺组织,用光学显微镜观察各组肺组织病理学改变;用Western blot测定肺表面活性蛋白A（SP-A）、Toll样受体4（TLR4）的表达;用ELISA测定各组肺组织中TNF-α含量,RT-PCR检测TNF-α mRNA表达水平.结果：肺组织病理学观察显示：LPS组可见肺间质充血、水肿,大量炎性细胞浸润,而EDS治疗组肺损伤明显改善,效果随EDS剂量的增加而增加.与正常对照组比较,LPS组肺组织的SP-A蛋白表达明显降低（P〈0.05）,而TNF-α含量、TNF-α mRNA表达、TLR4蛋白表达明显增加 （P〈0.05）.与LPS组相比较,不同剂量EDS治疗组肺组织SP-A蛋白表达均增加（P〈0.05）,而TNF-α含量、TNF-α mRNA表达、TLR4蛋白表达明显降低（P〈0.05）,其中EDS高剂量组比中、低剂量组效果明显 （P〈0.05）.结论：蜕皮甾酮对LPS诱导大鼠急性肺损伤有保护作用,其机制可能与抑制TLR4通路来降低肺组织中TNF-α炎性因子的表达,并促进抗炎物质SP-A释放有关.     

复方桐叶烧伤油促进糖尿病足皮肤创面愈合及通过p38 MAPK信号通路调节糖尿病足大鼠皮肤组织AQP3表达

探讨复方桐叶烧伤油通过p38信号通路调节激酶（MAPK）信号通路对糖尿病足大鼠 皮肤组织水通道蛋白3表达的影响。方法 选取60只SD大鼠随机分为正常对照组（A组）、糖尿病足 溃疡组（B组）、复方桐叶烧伤油组（C组）、复方桐叶烧伤油+S B 2 0 3 5 8 0组（D组），各15只。 B组、C组、D组45只大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病后构建糖尿病足溃疡模型；比较各组研究指 标。结果 C组创面愈合率显著高于B组，D组创面愈合率显著低于C组（P ＜0.001）；B组、C组、D组 组织中TNF -α、I L - 6、CRP水平均显著高于A组，C组组织中TNF -α、I L - 6、CRP水平均显 著低于B组，D组组织中TNF-α、IL-6、CRP水平显著高于C组（P ＜0.001）；B组、D组组织中 APQ3、p38蛋白表达量均低于A组（P ＜0.001）；C组组织中APQ3表达量低于A组（P ＜0.001），而 p38蛋白表达量显著高于B组，D组APQ3、p38蛋白表达量均极显著低于C组（P ＜0.001）。结论 复方 桐叶烧伤油促进糖尿病足皮肤创面愈合，通过激活p38 MAPK信号通路磷酸化上调糖尿病足大鼠皮肤组 织中APQ3表达。     

益肾饮合雷公藤多苷对系膜增生性肾小球肾炎大鼠TNF-α和IL-6蛋白表达的影响

目的：探讨益肾饮合雷公藤多苷对大鼠系膜增生性肾小球肾炎中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）蛋白表达的影响。方法：实验大鼠随机分为空白对照组、模型组、雷公藤多苷组、益肾饮组、雷公藤多苷加益肾饮组。制备大鼠系膜增生性肾小球肾炎模型;以雷公藤多苷和益肾饮灌胃;观察各组肾脏病理变化;免疫组织化学检测各组大鼠肾脏组织中TNF-α和IL-6蛋白表达。结果：模型组大鼠肾脏系膜细胞增生明显,系膜组织中TNF-α和IL-6蛋白表达明显升高。用益肾饮和雷公藤多苷各自治疗和合用治疗大鼠系膜增生性肾小球肾炎后肾脏系膜细胞增生均减轻,系膜组织中TNF-α和IL-6的蛋白表达均下降,合用后效果更为明显。结论：益肾饮联合雷公藤多苷能有效地降低系膜组织中TNF-α和IL-6的蛋白表达,减轻系膜细胞的增生。