烟曲霉鼻变态反应性病人细胞因子活性水平观察

对８６例烟曲霉变态反应性鼻炎病人血清Ｔ细胞亚群、ＩＬ－２、ＩＬ－６和Ｂ细胞生长因子（ＢＣＧＦｓ）活性水平进行了检测，结果显示烟曲霉鼻变态反应病人血清ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＢＣＧＦｓ活性水平升高，与对照组比较差异显著；血清Ｔ细胞亚群ＣＤ４／ＣＤ８比值大大高于对照组，存在显著差异。提示：Ｔ细胞及其分泌的细胞因子和Ｂ细胞分化对ＩｇＥ的生成具有调节作用，它们可能参与了Ⅰ型变态反应病的发生     

IL-6和IL-8 mRNA在变态反应性哮喘患者BAL细胞的表达

目的：测定IL-6和IL-8 mRNA在变态反应性哮喘患者支气管肺泡灌洗（BAL）细胞中的表达。方法：采用原位杂交技术，测定变态反应性哮喘患者BAL中表达IL-6和IL-8 mRNA的阳性细胞数。结果：全部哮喘患者BAL细胞对IL-6和IL-8 mRNA探针杂交均呈阳性（阳性率分别为14/14和14/14）。变态反应性哮喘患者BAL中表达IL-6和IL-8 mRNA阳性细胞数明显多于对照（P<0.01）。结论：变态反应性哮喘患者BAL细胞中IL-6和IL-8 mRNA表达增加。     

细胞因子IL6、IL8及IL-10与变应性鼻炎的关系研究

目的探讨白细胞介素-6、8、10与变应性鼻炎（allergicrhinitis,AR）发病的相关性,为指导临床治疗提供实验依据。方法应用酶联免疫吸附测定（enzymelinkedimmu—nosorbentassay,ELISA）方法检测35例正常健康对照组以及60例变应性鼻炎患者脱敏治疗前后血清标本中IL-6、IL-8、IL-10的表达水平,并应用SPSSl3．0软件分析治疗前后各指标的表达差异,以及三者之间的相关性。结果IL-6、IL-8在AR患者血清中高表达,与健康对照组相比差异具有显著性（t=15．213,P〈0．01;t=12．231,P〈0．01）,脱敏治疗后表达均下降,治疗前后差异具有统计学意义（t=21．995,P〈0．01;t=19．766,P〈0．01）;IL-10在患者血清中表达低于对照组（t=7．446,P〈0．01）,脱敏治疗后其表达上升,与治疗前相比差异显著（t=10．228,P〈0．01）;IL-6、IL-8在AR患者中的表达呈正相关（r=0．523。P〈0．01）,而二者与IL-10的表达呈负相关（r=-0．482,P〈0．01）。结论IL-6、IL-8及IL-10与变应性鼻炎发病过程密切相关,相应的细胞因子或拮抗剂将可能成为候选的治疗药物。     

急性呼吸窘迫综合征患者血浆TNF-α、IL-6、IL-10和IL-13水平变化

目的：通过检测分析急性呼吸窘迫综合征（ARDS）和全身炎症反应综合征（SIRS）病人血浆促炎症细胞因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）和抗炎细胞因子白细胞介素10（IL-10）、白细胞介素13（IL-13）水平的变化，探讨这些细胞因子在ARDS炎症发展机制中的作用。 方法： 选择临床诊断ARDS病例22例和SIRS 8例，以及正常对照10例，收集血样品，采用酶联免疫法（ELISA）检测TNF-α、IL-6和IL-10、IL-13蛋白含量。 结果： ARDS病人血浆TNF-α、IL-6、IL-10、IL-13含量分别为(629.30±187.00)ng/L、(261.10±71.30)ng/L、(458.10±111.93)ng/L、(5.21±2.02) ng/L，SIRS病人则分别为(206.10±85.90) ng/L、(141.40±41.50)ng/L、(259.60±54.34) ng/L、(1.69±0.39) ng/L，两者血浆细胞因子水平比较有显著差异(P<0.01)；但SIRS和ARDS病人的细胞因子水平均显著高于正常对照组(P<0.01)。 结论： TNFα、IL-6是SIRS和ARDS演变中的重要促炎细胞因子，抗炎细胞因子IL-10和IL-13的过度释放在促进炎症反应失控和ARDS发展中发挥一定作用。     

结核分枝杆菌培养滤液蛋白对变应性鼻炎患者Th1和Th2失衡的影响

目的：观察结核分枝杆菌培养滤液蛋白（Mycobacterium tuberculosis culture filtrate protein，CFP）对变应性鼻炎患者Th1和Th2失衡的影响。方法：抽取30例变应性鼻炎患者外周静脉血，分离单个核细胞（PBMCs），采用MTF法测定刺激淋巴细胞增殖最佳CFP浓度，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测CFP干预前后PBMCs培养上清液中的白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素5（IL-5）和干扰素γ（IFN-γ）水平。结果：变应性鼻炎患者组PBMCs上清液中IL-4、IL-5含量较正常对照组显著增高，而IFN-γ含量显著减少。CFP干预后变应性鼻炎患者组上清液IL-4、IL-5水平明显降低，而IFN-γ含量显著升高，差异有显著性。结论：CFP能纠正变应性鼻炎患者体内Th1和Th2细胞因子的失平衡状态，为治疗变应性鼻炎提供了理论依据。     

LPS和IL-13影响系膜细胞表达IL-12的研究

目的：探讨脂多糖（LPS）及IL-13对系膜细胞表达IL-12的影响作用。方法：用酶联免疫吸附（ELISA）法检测LPS对系膜细胞分泌IL-12的影响，实验分组：①LPS（20μg／ml）对系膜细胞刺激不同时间；②不同剂量LPS刺激系膜细胞24小时。用ELISA法和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法分别检测IL-13对系膜细胞IL-12蛋白和IL-12p40 mRNA表达的影响，分空白对照组，LPS（10μg／ml）刺激组及实验组（LPS 10μg／ml＋不同浓度的IL-13）。结果：未受LPS刺激的系膜细胞几乎不分泌IL-12，在一定的剂量范围内，LPS诱导系膜细胞显著表达IL-12，但随着LPS刺激时间及浓度的增加，IL-12的表达量反而减少。IL-13在1。100μg／ml浓度范围内呈剂量依赖性抑制LPS诱导的系膜细胞IL-12分泌及其mRNA表达（P〈0．01）。结论：LPS可诱导系膜细胞表达IL-12，但系膜细胞在表达IL-12时对LPS的长期及高浓度刺激产生耐受性。IL-13可能通过抑制LPS诱导系膜细胞分泌IL-12，作为抗炎性细胞因子在肾小球肾炎发病机制中发挥一定作用。 12；系膜细胞     

细胞因子IL6、IL8及IL-10与变应性鼻炎的关系研究

目的 探讨白细胞介素-6、8、10与变应性鼻炎( allergic rhinitis,AR)发病的相关性,为指导临床治疗提供实验依据.方法 应用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测35例正常健康对照组以及60例变应性鼻炎患者脱敏治疗前后血清标本中IL-6、IL-8、IL-10的表达水平,并应用SPSS 13.0软件分析治疗前后各指标的表达差异,以及三者之间的相关性.结果 IL-6、IL-8在AR患者血清中高表达,与健康对照组相比差异具有显著性(t=15.213,P＜0.01;t=12.231,P＜0.01),脱敏治疗后表达均下降,治疗前后差异具有统计学意义(t=21.995,P＜0.01;t =19.766,P＜0.01);IL-10在患者血清中表达低于对照组(t=7.446,P＜0.01),脱敏治疗后其表达上升,与治疗前相比差异显著(t=10.228,P＜0.01);IL-6、IL-8在AR患者中的表达呈正相关(r=0.523,P＜0.01),而二者与IL-10的表达呈负相关(r=-0.482,P＜0.01).结论 IL-6、IL-8及IL-10与变应性鼻炎发病过程密切相关,相应的细胞因子或拮抗剂将可能成为候选的治疗药物.     

原因不明习惯性流产患者主动免疫前后IL-4、IL-12变化的研究

目的:探讨原因不明习惯性流产（UHA）患者主动免疫治疗前后外周血IL-4和 IL-12mRNA水平的变化。方法:用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术,检测30例正常非孕妇女和30例UHA妇女的外周血单个核细胞内IL-4和IL-12mRNA表达水平的相对含量（％）。结果:①UHA组妇女外周血单个核细胞上IL-4mRNA的相对含量,明显低于正常非孕组妇女（P<0.01）。而IL-12　mRNA的相对含量明显高于正常非孕组妇女（P<0.05）。②主动免疫治疗后,UHA组妇女外周血单个核细胞上IL-4 mRNA的相对含量较治疗前明显升高（P<0.05）,而IL-12mRNA的相对含量较治疗前明显降低（P<0.01）。③主动免疫治疗后,UHA组妇女上述细胞因子mRNA的相对含量与正常非孕组妇女相比无显著差异。④主动免疫治疗后,妊娠成功者其外周血单个核细胞上IL-4　mRNA的相对含量较治疗前明显升高（P<0.05）,IL-12　mRNA的相对含量较治疗前明显降低（P<0.05）;而妊娠失效者IL-4和IL-12　mRN的相对含量与治疗前无显著差异。结论:IL-4和IL-12的表达异常与UHA的发生密切相关,主动免疫治疗可上调IL-4的表达及下调IL-12的表达,可能进一步诱导TH2分化和抑制TH1分化,从而促使TH1/TH2型细胞因子平衡向TH2为主的模式转换,并使妊娠获得成功。     

变应性鼻炎和哮喘患者血清IL-5、IL-15及IL-18的水平研究

目的探讨IL-5、IL-15和IL-18在变应性鼻炎、支气管哮喘、变应性鼻炎合并哮喘疾病中的作用。方法采用双抗体夹心ELISA测定法对33例支气管哮喘患者、35例变应性鼻炎患者、35例变应性鼻炎合并哮喘的患者及35例正常健康查体者血清中IL-5、IL-15和IL-18的水平进行检测。结果支气管哮喘、变应性鼻炎、变应性鼻炎合并哮喘的患者血清中IL-5、IL-15和IL-18水平较正常对照组升高（P〈0．01）,IL-5、IL-15,IL-18水平在变应性鼻炎合并哮喘组均高于鼻炎组与和哮喘组;鼻炎组IL-5水平高于哮喘组（P=0．003）,哮喘组IL-18水平高于鼻炎组（P=0．001）。结论IL-5、IL-15和IL-18参与了过敏性鼻炎和哮喘的发病过程;变应性鼻炎合并哮喘的炎症程度较高;哮喘和鼻炎因发病部位不同炎症反应也有不同。     

来氟米特对紫癜性肾炎患者血清IL-6、IL-8及TNF-α水平的影响

目的：探讨来氟米特对过敏性紫癜性肾炎患者血清白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素8（IL-8）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平的影响及其临床意义。方法：应用双抗体夹心ELISA法对23例过敏性紫癜性肾炎患者治疗前后血清IL-6、IL-8和TNF-α水平进行检测，23例健康成人作为正常对照组。结果：过敏性紫癜性肾炎患者血清IL-6、IL-8和TNF-α水平明显高于正常对照组，来氟米特治疗后患者IL-6、IL-8和TNF-α水平明显降低（P〈0．05）。结论：IL-6、IL-8和TNF-α参与过敏性紫癜性肾炎的发生发展，来氟米特治疗过敏性紫癜性肾炎可能与调节炎性细胞因子的产生，抑制炎症反应有关。     

Ovarian follicular concentration of IL-12, IL-15, IL-18 and p40 subunit of IL-12 and IL-23

BACKGROUND: The aim of the study was to determine the presence of interleukin (IL)-12, IL-15, IL-18 and p40 subunit of IL-12/IL-23 in follicular fluid from spontaneous cycles and the relation between the concentration of selected cytokines and IVF-embryo transfer outcome. METHODS: IVF-embryo transfer and enzyme immunoassay (EIA) (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA and MBL, Nagoya, Japan) were used. RESULTS: Follicular fluid of women included in the IVF-embryo transfer procedure contained common p40 subunit of IL-12/IL-23 (median 70.1 pg/ml), IL-15 (median 1.3 pg/ml) and IL-18 (median 38.2 pg/ml). There was a significant negative correlation between follicular fluid concentrations of IL-15 and IL-18 (R=-0.392, P=0.003). Significantly higher concentrations of common p40 subunit of IL-12/IL-23 (median 79.8 pg/ml) were found in the follicular fluid taken from follicles containing oocytes, when compared with those without an oocyte (median 44.5 pg/ml, P=0.006). Patients who achieved clinical pregnancy had significantly decreased concentration of IL-15 (median 0.8 pg/ml) compared with patients without successful IVF-embryo transfer outcome (median 1.4 pg/ml, P=0.047). CONCLUSION: Follicular fluid collected from spontaneous cycles contains detectable levels of p40 subunit of IL-12/IL-23, IL-15 and IL-18. Increased concentrations of p40 subunit of IL-12/IL-23 in follicles containing oocytes suggest an important role of this cytokine in reproduction. Possible negative value of IL-15 as a predictor of IVF-embryo transfer success remains to be determined.     

IL-12和IL-18在实验性自身免疫性神经炎中的协同作用机制

目的:研究IL-12和IL-18分别在实验性自身免疫性神经炎(EAN)中的调节机制以及IL-12与IL-18的协同作用.方法:建立P0180-199特异性T细胞系.分别用IL-12或IL-18或者IL-12和IL-18进行体外干预,将不同处理组的T细胞回输到正常的大鼠体内,建立过继免疫的EAN动物模型.应用国际分级标准和临床评分对发病鼠进行临床评定;通过免疫组化检测不同组EAN鼠坐骨神经淋巴细胞浸润;ELISA法检测相关细胞因子的变化.结果:①在IL-12和IL-18共同干预的条件下,特异性T细胞TNF-α和IFN-γ的产生均增加;②与IL-12或IL-18组相比,IL-12 IL-18组大鼠临床发病明显加重,发病时间提前;③在坐骨神经标本中,与对照组相比,IL-12 IL-18组CD4 淋巴细胞浸润数量较多,而IL-12和IL-18组CD4 淋巴细胞浸润较少.结论:经IL-12和IL-18体外干预的P0180-199特异性T淋巴细胞,通过过继免疫给正常大鼠后,诱导出严重的EAN动物模型,表现出协同增强作用.     

Treatment of old mice with IL-2 corrects dysregulated IL-2 and IL-4 production

Splenic T cells from old BALB/c mice, activated in vitro withantibody to CD3e, secrete more IL-4 but less IL-2 than splenicT cells from young mice. The age-associated increase in IL-4secretion is associated with a significantly increased concentrationof intracellular IL-4 and its mRNA, although there is no increasein the number of activated T cells with intracellular IL-4.In contrast, the age-associated decrease in IL-2 secretion isassociated with a significant decrease in the number of activatedT cells with intracellular IL-2. In vivo there is a similarage-associated change in the number of activated T cells withdetectable cytokine. The number of activated T cells with intracellularIL-4 is comparable in old and young mice, while the number ofactivated T cells with intracellular IL-2 is significantly decreasedin old compared with young mice. Of great interest is the factthat old mice continuously exposed to IL-2 In vivo followingthe transplantation of J558 cells expressing the transfectedIL-2 gene product have an increased number of splenic T cellswith intracellular IL-2 that equals the level of such cellsobserved in young mice. Most important, the effect of continuousIL-2 administration in vitro was stable as spleen cells fromold, IL-2-treated mice when stimulated in vitro with anti-CD3ehad a young-like pattern of both intracellular IL-2 and IL-4expression as well as IL-2 and IL-4 secretion following in vitroactivation. Thus, it appears that exposure of old mice to exogenousIL-2 can redress the age-associated imbalance in cytokine expressionin vivo and cytokine secretion in vitro.     

IL-4、IL-13蛋白表达及抗IL-4、IL-13人源单链抗体的筛选

目的:表达IL-4和IL-13蛋白,从人源单链抗体文库中分别筛选抗IL-4和抗IL-13单链抗体.方法:采用RT-PCR从健康志愿者外周血单核细胞(PBMC) mRNA中扩增IL-4和IL-13 cDNA;构建硫氧还蛋白融合表达载体,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化鉴定.以生物素化的IL-4和IL-13为抗原从前期构建的人源抗体文库中采用噬菌体展示技术分别筛选抗IL-4和抗IL-13人源单链抗体(scFv).结果:扩增的IL-4 cDNA大小为280 bp,表达的融合蛋白大小为27 kD左右.扩增的IL-13 cDNA大小为252 bp,表达的融合蛋白大小为25 kD左右.分别以生物素化的IL-4和IL-13蛋白为抗原,采用噬菌体展示技术对人源抗体文库进行3轮富集后,分别有大约37％的scFvs与IL-4有结合特性,有约27％的scFvs与IL-13有结合特性.筛选了4株分别与IL-4和IL-13结合能力强的单链抗体进行了Westem blot鉴定和测序.结论:成功筛选到抗IL-4和抗IL-13人源性单链抗体.     

IL-13对成纤维细胞IL-13受体和IL-4受体表达的影响

目的研究IL-13对人肺成纤维细胞株HFL-1和人肝星状细胞株LX-2 IL-13受体和IL-4受体表达的调节作用。方法 RT-PCR法检测HFL-1细胞株和LX-2细胞株IL-13Rα1、IL-4R和IL-13Rα2 mRNA的表达;凝胶电泳定量软件Image Tool2.0对RT-PCR电泳条带进行光密度分析;ELISA法检测HFL-1细胞株和LX-2细胞株分泌可溶型IL-13Rα2以及检测细胞裂解液总IL-13Rα1、IL-4R和IL-13Rα2含量。结果 IL-13(5～100 ng/ml)对HFL-1细胞株和LX-2细胞株表达IL-13Rα1和IL-4R无影响;IL-13为5、10、20 ng/ml时能诱导HFL-1细胞株表达IL-13Rα2并呈现剂量依赖,当IL-13为50 ng/ml时,对HFL-1细胞株IL-13Rα2表达的诱导作用明显减弱,IL-13 100 ng/ml组没有检测到HFL-1细胞株IL-13Rα2的表达;LX-2细胞株IL-13Rα2表达缺失且IL-13不能诱导LX-2细胞株表达IL-13Rα2。结论 IL-13不能上调人肺成纤维细胞株HFL-1和人肝星状细胞株LX-2表达功能型受体IL-13Rα1和IL-4R,表明IL-13不能通过上调IL-13Rα1和IL-4R表达量来放大自身作用;一定浓度的IL-13能诱导人肺成纤维细胞株HFL-1表达抑制型受体IL-13Rα2,表明IL-13的自身负调控。     

IL-2、IL-4和IL-7体外诱导人外周血淋巴因子激活的杀伤细胞效应的比较

比较了淋巴因子ＩＬ－２、ＩＬ－４和ＩＬ－７在体外诱导健康人外周血淋巴因子激活的杀伤 （ＬＡＫ）细胞活性的效应。结果表明，ＩＬ－７可单独，亦可与ＩＬ－２、ＩＬ－４协同诱导ＬＡＫ细胞，而且ＩＬ－７ 诱导ＬＡＫ细胞的效应不被抗ＩＬ－２、抗ＩＬ－４所抑制。ＩＬ－７单独诱导的ＬＡＫ细胞活性高峰迟于ＩＬ－ ２或ＩＬ－４所诱导的活性高峰，且与增殖反应曲线一致。抗ＣＤ８抗体明显抑制ＩＬ－７诱导ＬＡＫ细胞 的效应，而ＩＬ－７诱导ＬＡＫ细胞的效应不能被抗ＮＫＨ－１所抑制。提示：ＩＬ－７ 激活ＬＡＫ细胞的效应 机制不依赖ＩＬ－２和ＩＬ－４，并很可能成为肿瘤过继治疗中的重要淋巴因子。     

脂多糖和金黄色葡萄球菌对IL-23、IL-12表达的调控

目的：检测脂多糖（LPS）和金黄色葡萄球菌（SAC）对人外周血单个核细胞（PBMC）IL-23和IL-12各亚基表达的调节作用并探索其作用机制。方法：用LPS和SAC直接刺激人PBMC，或用CD14抗体或p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）抑制剂Mastoparan预处理PBMC后再予LPS和SAC刺激，半定量RT-PCR方法检测IL-23p19、IL-12p35和IL-12p40亚基的基因表达变化。结果：人PBMC组成性表达p19和p35，不表达p40。LPS和SAC可上调各亚基的表达。LPS诱导的IL-23和IL-12各亚基表达均需通过CDl4；CDl4仅部分参与SAC诱导的IL-12p40和p35表达上调，而与p19上调无关。LPS和SAC诱导的IL-23和IL-12各亚基表达均需要p38MAPK通路。结论：LPS和SAC刺激下IL-23和IL-12亚基表达及信号传导通路既有相似之处又有不同点，为单独或同时调控这两种因子的表达提供线索。     

IL-10、IL-17及IL-18在肝细胞肝癌中的表达特点及其临床意义

目的 检测IL-10、IL-17及IL-18在肝细胞肝癌中的表达特点,为肝细胞肝癌的诊断与治疗提供实验依据.方法 采用RT-PCR方法检测肝癌以及癌旁组织中IL-10、IL-17及IL-18mRNA水平的表达,采用Western Blot、免疫组化方法检测肝癌以及癌旁组织中IL-10、IL-17及IL-18蛋白水平的表达;采用ELISA检测肝癌细胞株BEL-7402、HepG2中IL-10、IL-17及IL-18的释放水平.结果 IL-10、IL-17在肝癌组织及细胞株中高表达,与血清AFP检测结果呈正相关;IL-18在肝癌组织及细胞株中不表达或者少量表达,与血清AFP检测结果呈负相关.结论 IL-10、IL-17的过表达和IL-18的沉默与肝细胞肝癌的发生密切相关,IL-10、IL-17的过表达可作为肝细胞肝癌诊断的重要标志.     

IL-13和IL-4在哮喘发病中的作用及相互关系

目的　探讨IL 13在哮喘发病中的作用及其与IL 4的相互关系。方法　哮喘组 2 4例 ,男 17例 ,女 7例 ;健康对照组 2 4例 ,男 12例 ,女 12例。用ELISA法检测不同时段PBMC培养上清IL 13和IL 4水平及加IL 13单克隆抗体 (McAb)和IL 4McAb干预后PBMC培养上清IL 4、IL 12、IL 13和IFN γ水平。结果　 (1)IL 13动态变化 :①对照组PBMC培养 3d、5d、7d水平均较培养 1d水平高 ,差异有显著性 ,培养 3d的水平较培养 5d、7d的高 ,差异有显著性 ;②哮喘组PBMC培养 3d、5d、7d的水平均较培养 1d的水平高 ,差异有显著性 ,培养 5d的水平均较培养 3d、7d的水平高 ,但之间差异无显著性 ;③哮喘组PBMC培养 3d、5d、7d的IL 13水平均较对照组高 ,差异有显著性。 (2 )IL 4动态变化 :①对照组和哮喘组PBMC培养 1d后 ,IL 4水平明显上升 ,第 3天仍保持较高水平 ,第 5、7天明显下降 ;②哮喘组 1d、3d、5d和 7d水平均较对照组高 ,差异有显著性。 (3)IL 4McAb干预后 ,哮喘组和正常组IL 13水平与对应小鼠IgG组相比有显著性降低 ,哮喘组IFN γ水平与对应小鼠IgG组相比有显著性增高。 (4)IL 13McAb干预后IL 12水平在哮喘组和正常组均提高 ,与对应小鼠IgG组相比差异有显著性。 (5 )IL 13McAb和IL 4McAb联合干预后哮喘组I     

Cytokine-specific ELISPOT assay single cell analysis of IL-2, IL-4 and IL-6 producing cells

In order to assess cytokine-producing cells at the single cell level, the cytokine-specific ELISPOT assay has proven to be an important and sensitive method. The purpose of this study was to adapt this method to elucidate individual cells producing murine IL-2, IL-4 or IL-6. In order to establish these cytokine-specific ELISPOT assays, IL-2-, IL-4- and IL-6-specific cDNA transfected myeloma cell lines, e.g., X63-Ag8-653 X2, X63-Ag8-653 X4 and X63-Ag8-653 X6, respectively, were used as specific cytokine-producing cells. In the IL-2 ELISPOT assay, the coating reagent, monoclonal antibody (mAb) rat IgG2a anti-mouse IL-2 (CR #40014) was used while rabbit IgG polyclonal anti-mouse IL-2 was employed for detection of IL-2 spot forming cells (SFC). The mAbs anti-mouse IL-4, BVD4-1D11 and BVD6-24G2 were selected as capture and detection antibodies for enumeration of IL-4 SFC. For the IL-6 ELISPOT assay, anti-mouse IL-6 (MP5-20F3) mAb was used for coating and MP5-32C11 mAb was used for detection of IL-6 SFC. When IL-2 producing X63-Ag8-653 X2 cells were subjected to these three different ELISPOT assays, IL-2-specific SFC were only noted with the IL-2 ELISPOT system. In the case of IL-4 SFC, only X63-Ag8-653 X4 cells formed specific spots using the tandem of BVD4-1D11 and BVD6-24G2 mAbs. IL-6-specific spots developed in MP5-20F3 mAb pre-coated wells containing X63-Ag8-653 X6 cells, when developed with mAb anti-IL-6 (MP5-32C11). Addition of cycloheximide (50 μg/ml) inhibited formation of IL-2, IL-4 and IL-6 SFC by approximately 90%. When an unrelated mAb was used as detection antibody in these three different cytokine-specific ELISPOT assays, IL-2-, IL-4-and IL-6-specific SFC were not detected. Further, when concanavalin A stimulated T cells from Peyer's patch of normal mice were subjected to the respective cytokine-specific ELISPOT assay, IL-2, IL-4 and IL-6 SFC were enumerated. These results have shown that cytokine-specific IL-2, IL-4 and IL-6 ELISPOT assays have now been established and will allow analysis of the frequency of cytokine-secreting cells at the single cell level.