磷酸化糖原合成酶激酶-3β在大鼠移植肾早期病理改变中的作用

目的 探讨糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)在大鼠移植肾早期病理改变中的作用.方法 以F344大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,依照标准的慢性移植肾肾病(CAN)模型要求行左肾原位移植,制作CAN模型(移植组).术后7d切除受者的右肾.以切除一侧肾脏的雄性F344大鼠和Lewis 大鼠为对照(F344对照组和LEW对照组).分别于术后4、8、12、16及24周时收集24 h尿液,采集血液,测定24 h尿蛋白和血肌酐,取移植肾组织,观察组织学改变,并用免疫组化法检测肾组织中磷酸化GSK-3β表达.结果 移植组术后早期(4、8和12周)移植肾病理改变主要表现为单个核细胞浸润、血管平滑肌细胞(SMC)的移行增殖,在后期(16和24周)尿蛋白排泄率显著增高,移植肾病理改变表现为肾间质单个核细胞浸润明显增加及严重的肾间质纤维化、肾小管萎缩.移植组术后各时间点移植肾组织中磷酸化GSK-3β及其mRNA表达水平均显著低于LEW对照组和F344对照组相同时点的表达水平(P＜0.05),并随着移植时间的延长进一步降低.磷酸化GSK-3β表达水平与早期肾间质单个核细胞浸润程度、SMC移行增殖及后期肾间质纤维化、肾小管萎缩、血管硬化程度呈显著负相关.结论 磷酸化GSK-3β表达下调在大鼠移植肾早期的肾间质单个核细胞浸润、SMC移行增殖及后期的肾间质纤维化、肾小管萎缩、肾血管硬化病变的发生中均起重要作用.     

慢性排斥移植肾浸润细胞亚群及TNFα和IL-2R原位表达

目的探讨移植肾慢性排斥的细胞免疫学机制。方法对１８例肾移植术后慢性排斥病人移植肾进行活检,采用免疫组化技术检测移植肾内浸润炎性细胞亚群及ＴＮＦα和ＩＬ２Ｒ原位表达。结果慢性排斥移植肾间质中呈明显的单核细胞／巨噬细胞和淋巴细胞灶样浸润伴纤维化和小管萎缩,浸润细胞组成分别为ＣＤ＋３细胞（４６８±１９．０）％,ＣＤ＋４细胞（２４１±１７３）％,ＣＤ＋８细胞（２７３±６９）％,ＣＤ＋１４细胞（３３４±１９６）％,ＣＤ＋１９细胞仅（３２±１９）％,以Ｔ淋巴细胞和巨噬细胞为主。移植肾中ＴＮＦα和ＩＬ２Ｒ表达较正常肾脏明显增强,且主要分布于移植肾间质浸润炎性细胞。结论慢性排斥移植肾内浸润淋巴细胞和巨噬细胞处于活化状态,可能通过产生和释放各种细胞因子发挥其生物学作用,从而介导细胞免疫损伤,认为细胞免疫可能在慢性排斥发病中起作用。     

慢性排斥移植肾中细胞间粘附分子-1与HLA-DR表达的关系

目的：探讨慢性排斥移植肾中细胞间粘附分子－1（ICAM－1）和HLA－DR表达与间质淋巴细胞浸润的关系。方法：对20例慢性排斥肾移植受者进行肾活检，采用免疫组化技术（ABC法）检测移植肾内ICAM－1和HLA－DR的表达。结果：ICAM－1在慢性排斥移植肾肾小管上皮细胞和间质微小动脉内皮细胞表达增强，而HLA－DR表达则普遍上调，尤其在远曲小管。此外，在ICAM－1和HLA－DR表达增强的局部血管周围和小管间质伴有大量淋巴细胞浸润。结论：慢性排斥移植肾中ICAM－1和HLA－DR表达增强可能在排斥反应中起诱导作用，尤其是间质炎细胞的浸润及抗原递呈，同时它们又可能使表达上调的细胞成为免疫反应效应支的靶细胞，从而参与慢性排斥的细胞免疫损伤及移植肾间质损害过程。     

吕宏生教授治疗慢性移植肾肾病的经验

自20世纪80年代广泛开展肾移植术以来,已为众多尿毒症患者解除了痛苦,但随着肾移植逐渐成为常规手术,大量慢性移植肾失功出现,而移植半年以后,慢性移植肾肾病(CAN)逐渐成为移植肾失功的主要原因.狭义的CAN指肾移植6个月后肾小球滤过率进行性降低,无其他原因引起(如原发病、环孢素A中毒等),临床表现为高血压、蛋白尿,肾活检表现为纤维性动脉内膜增厚,间质纤维化、小管萎缩,管外毛细血管基底膜分层等相关的病理表现者.K/DOQI将原发病复发、环孢素A中毒、反流性肾病包括在内成为广义CAN.吕宏生主任医师在西医抗排异反应药物治疗的基础上结合中医理论辨证治疗之,多获良效,现介绍如下.     

慢性排斥移植肾中浸润淋巴细胞亚群初步观察

为探讨参与慢性排斥的细胞免疫学机制,本文对18例肾移植术后慢性排斥病人移植肾进行活检,采用免疫组化技术检测移植肾组织内浸润炎性细胞亚群,了解其意义。结果表明:慢性排斥移植肾间质中呈明显的单核细胞和淋巴细胞灶样浸润伴纤维化和小管萎缩,定量分析证明这些浸润细胞中其组成分别为CD_3~+细胞46.8±19％,CD_4~+细胞24.1±17.3％,CD_8~+细胞27.3±6.9％,CD_(14)~+细胞33.4±19.6％,C_(19)~+细胞仅占3.2±1.9％,提示主要是T淋巴细胞和巨噬细胞。这些资料提示慢性排斥移植肾内存在细胞免疫反应的细胞学基础,细胞免疫可能参与了慢性排斥反应的发生和发展。     

整合素连接激酶在大鼠慢性移植肾肾病中的作用与机制

目的探讨整合素连接激酶(ILK)在慢性移植肾肾病(CAN)中的作用与机制。方法实验组肾移植受者为雄性Lewis大鼠40只,供者为雄性F344大鼠40只,依照标准的慢性移植肾肾病大鼠模型要求行左肾原位移植。对照组分别为行单纯右肾切除的Lewis大鼠及F344大鼠各25只。于术后4、8、12、16及24周时分批处死大鼠,同时做肾功能与组织学检测,免疫组织化学与蛋白印迹法测定肾组织中ILK的表达,逆转录聚合酶链(RT-PCR)法检测ILK mRNA的表达,免疫组织化学方法检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达。结果CAN大鼠移植4周时肾间质可见单个核细胞浸润,12周时可见血管平滑肌细胞的移行与增殖,24周时可见轻度肾间质纤维化、血管硬化及管腔狭窄。CAN大鼠肾组织中ILK及ILK mRNA表达水平显著增高,且随着移植时间的延长有逐渐增高趋势。CAN大鼠肾移植术后8周前肾小管间质及肾小动脉MMP-9表达水平均显著高于同时段LEW对照组及F344对照组,16周后显著降低。Spearman等级相关分析结果显示:CAN大鼠肾组织中ILK表达水平与24 h尿蛋白定量、血清肌酐水平、肾间质单个核细胞浸润程度、肾小动脉平滑肌细胞数量、肾间质纤维化程度等呈显著正相关,与8周前MMP-9表达水平呈正相关,12周后无显著相关性。结论ILK在慢性移植肾肾病病理变化中发挥重要作用,移植早期肾小管间质及肾小动脉中MMP-9表达上调与ILK的作用机制有关。     

黄葵胶囊对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化中炎性因子表达的影响

目的：本文拟观察黄葵胶囊对慢性肾间质纤维化中炎性因子表达的影响。方法：以5/6肾切除方法建立肾间质纤维化模型作为研究对象,随机分为模型组、黄葵治疗组及假手术组,经治疗后检测24h尿蛋白定量、血清肌酐（Scr）;测定细胞间黏附分子1（ICAM-1）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的表达与变化情况;通过肾组织Masson染色进行病理形态学观察等。结果：经黄葵胶囊治疗后,其肾功能显著改善,肾小球硬化程度、系膜区增生程度、小管萎缩、扩张、蛋白管型形成及间质纤维化范围等均较模型组明显减轻,提示黄葵胶囊对5/6肾切除大鼠的肾脏有保护作用（P〈0.01）。结论：黄葵胶囊可能通过调节ICAM-1、MCP-1炎性因子的表达,从而延缓肾间质纤维化的进展。     

慢性移植肾肾病肾间质非特异性细胞浸润的意义

目的 探讨不同类型慢性移植肾肾病组织非特异性细胞浸润的意义及其预后.方法 回顾性分析2007年6月至2009年6月间83例肾移植受者的资料,受者均经移植肾穿刺证实为慢性移植肾肾病(CAN).按照Banff 2009标准,病例分为3组:慢性活动性T淋巴细胞介导的排斥反应(CTMR)组、慢性活动性抗体介导的排斥反应(CAMR)组和无特异性的间质纤维化和肾小管萎缩(NOS)组.检测并分析移植肾组织中肾小管和肾间质病变程度,CD4+、CD8+、CD20+和CD3+细胞浸润以及补体C4d染色情况.随访2年,记录移植肾存活率.结果 CTMR组受者为34例(40.9％),CAMR组为12例(14.6％),NOS组为37例(44.5％).3组间质炎症浸润范围、管周毛细血管炎和管周C4d沉积的差异均有统计学意义.CTMR组肾间质CD4+和CD8+细胞数高于CAMR组和NOS组.CTMR组移植肾存活率为73.5％,NOS组为78.4％,CAMR组为41.7％；CAMR组预后最差(P＜0.05).结论 CAMR预示肾功能预后不良,CD4+和CD8+细胞浸润是CTMR较特异性的指标,可能有助于CTMR的诊断.     

抗体介导的微循环损伤是移植后远期移植肾失功的主要原因

近几年来,肾移植后移植肾的近期存活率显著提高,但是慢性移植肾失功的发生率仍然较高.造成肾移植后远期移植肾失功的原因尚不明确.目前,因血肌酐浓度缓慢升高而致失功的受者往往未行肾活组织检查(活检),而对行肾活检的受者的诊断也常被含糊地归纳为慢性排斥反应或慢性移植肾肾病.     

黄芩提取物对大鼠肾间质纤维化的作用及其抗氧化机制

目的：观察黄芩提取物对肾间质纤维化的作用及其影响肾组织过氧化损伤的作用机制。方法：雄性SD大鼠33只随机分为4组：正常组、模型组、高剂量组及低剂量组。以10mg/kg氯化汞灌胃8周制备大鼠肾纤维化模型。自造模之日起分别以20mg/kg（高剂量组）、10mg/kg（低剂量组）的黄芩提取物灌胃模型大鼠,正常组与模型对照组予以等量生理盐水,共8周。生化法测血尿素氮、血肌酐及尿蛋白浓度,以盐酸水解法测定肾组织羟脯氨酸含量,分别以HE、六铵银及Mas-son染色观察肾组织的炎症与纤维化病理。试剂盒生化法检测肾组织谷胱甘肽（glutathion,GSH）含量和过氧化物歧化酶（su-peroxide dismutase,SOD）活性。结果：模型组大鼠肾脏病理检查可见肾小管上皮细胞肿胀、脱落、坏死;部分肾小管明显萎缩、部分肾小管扩张;可见广泛胶原组织沉积和炎症细胞浸润。模型组尿蛋白浓度明显升高,模型组血尿素氮和肌酐及羟脯氨酸含量增加。低剂量组与模型组相比有一定程度的减轻,但无统计学差异;高剂量组与模型组相比肾小管病变明显减轻,炎症细胞浸润减轻,纤维化程度减轻,尿蛋白浓度及血尿素氮和肌酐明显下降,羟脯氨酸含量减少。模型组GSH含量和SOD活性明显下降,黄芩提取物高、低剂量组均可以提高肾组织GSH含量和SOD活性。结论：黄芩提取物具有抗肾间质纤维化作用,呈一定的量效关系;抗肾组织氧化损伤是黄芩提取物抗肾间质纤维化的重要作用机制。     

青藤碱对UUO小鼠肾组织间质纤维化与炎症因子表达的干预作用

目的：通过抗风湿药青藤碱对UUO小鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、炎症介质细胞间黏附分子（intercellular adhesion molecule1,ICAM-1）、单核细胞趋化因子（monocyte chemoattractant protein1,MCP-1）表达的影响,探讨其防治肾间质纤维化作用及其机制。方法：实验采用小鼠单侧输尿管结扎（UUO）模型,用不同剂量青藤碱进行干预,用血管紧张素受体抑制剂蒙诺作为对照。肾脏病理用HE和Masson染色;肾组织α-SMA表达采用免疫组化;ICAM-1蛋白质表达采用Western-blotting方法检测;MCP-1基因表达采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法。结果：UUO模型组小鼠肾间质纤维化程度以及肾组织α-SMA的表达较假手术组显著增高,肾小管间质中炎细胞浸润亦较假手术组显著增强;青藤碱各治疗组肾间质纤维化程度、α-SMA和ICAM-1蛋白、MCP-1基因表达均显著低于模型组;蒙诺治疗亦可显著降低肾间质纤维化程度和肾组织α-SMA的表达,但对于炎细胞浸润和炎症因子抑制作用显著较青藤碱弱。而且未见其具有抑制ICAM-1表达的作用。结论：抗风湿药青藤碱可显著抑制肾间质纤维化和肌成纤维细胞的积聚,可能与其显著抑制肾组织炎症因子的表达及炎细胞浸润有关。     

大鼠供肾转染反义ERK2基因减缓肾移植后慢性移植肾肾病的作用及机制

目的 研究腺病毒介导的反义ERK2(A-dant-ERl(2)基因转染供肾对减缓肾移植后发生慢性移植肾肾病(CAN)的作用及机制.方法 建立大鼠间肾移植模型.按供肾移植前处理方式的不同分为对照组、空载病毒组和基因转染组,每组6只.对照组供肾灌注无菌HTK液0.5 ml,空载病毒组供肾灌注含5x109>pfu LaeZ基因腺病毒(Ad-LacZ)的HTK液0.5 ml,基因转染组供肾灌注含5x 109>pfu Adanti-ERK2的HTK液0.5 ml.肾移植术后24周行移植肾的病理学观察,免疫组织化学法观察肾小管上皮细胞表面标志蛋白E-Cadherin、Vimentin、TβRⅠ的表达以及CD4+、CD8+T淋巴细胞和ED-1+细胞的浸润情况;酶联免疫法检测受者血清中转化生长因子β1>(TGF-β1>)的含量.结果 肾移植术后24周,对照组和空载病毒组移植肾呈CAN表现;肾小球硬化,肾小管萎缩明显,伴严重间质纤维化以及明显的CD4+、CD8+T淋巴细胞和ED-1+细胞浸润;病变区肾小管上皮细胞E-Cadherin表达减少,Vimentin、TβRⅠ表达显著增多.基因转染组移植肾间质内仅有少量CD4+、CD8+T淋巴细胞和ED-1+细胞浸润;肾小管上皮细胞E-Cadherin表达正常.对照组和空载病毒组血清中TGF-β1>,含量明显高于基因转染组.结论 Adanti-ERK2基因转染移植肾可减缓CAN的发生,对移植肾具有保护作用.这种保护机制可能与减少炎症细胞的浸润、下调TGF-β1>,等致纤维化因子的表达以及抑制肾小管上皮细胞向间充质细胞的转化有关.     

血清转化生长因子-β_1与肾间质损害相关研究

目的：探讨血清转化生长因子-β1（TGF-β1）与肾间质、肾小管损害间的关系。方法：对156例肾病患者行肾穿刺活检、血清TGF-β1检测,参照Katafuchi标准进行肾间质浸润、纤维化评分及肾小管萎缩评分,分析肾间质、肾小管评分与血清TGF-β1关系。结果：（1）肾间质浸润评分≥0.5组血清TGF-β1、肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）显著高于0分组,肾间质浸润评分与血清TGF-β1显著相关,相关系数0.296,P〈0.01。（2）肾间质纤维化评分≥0.5组血清TGF-β1、Scr、BUN显著高于0分组,肾间质纤维化评分与血清TGF-β1显著相关,相关系数0.248,P〈0.01。（3）经Logistic回归分析,肾间质纤维化评分是影响血清TGF-β1水平的相关因子。结论：血清TGF-β1与肾间质浸润和纤维化相关,是评估肾间质浸润和纤维化的指标。     

大鼠慢性同种移植肾病肾组织中Smad7的表达及意义

目的研究大鼠慢性同种移植肾病肾组织中Smad7的表达及意义。方法制作原位肾移植大鼠模型，分别于4周、8周、12周、16周及24周处死大鼠，检测24h尿蛋白定量、肾功能；移植肾组织标本切片行光镜检测；免疫组织化学与免疫印迹、逆转录-多聚酶链反应方法检测肾组织中Smad7蛋白、Smad7mRNA的表达；免疫印迹方法检测肾组织p-smad2／3蛋白的表达水平，逆转录-多聚酶链反应方法检测肾组织转化生长因子-81mRNA的表达。结果移植组大鼠尿蛋白定量、血清肌酐水平于移植后16周时显著增高，24周时更为显著。Smad7蛋白在移植组逐渐降低，24周时降至最低，为对照组的15％。Smad7mRNA在移植后4周即升高，随着移植时间逐渐延长，24周时为对照组的2．73倍（P〈0．01）；p-smad2／3在移植后随疾病进展逐渐升高，24周时达高峰。免疫组织化学结果显示Smad7主要表达在小管间质。相关分析显示，肾移植大鼠Smad7蛋白表达水平与24h尿蛋白定量、血清肌酐水平、肾间质纤维化程度呈负相关（P〈0．05，P〈O．01）。结论Smad7蛋白表达下调在慢性同种移植肾病发病机制中起重要作用。     

雌激素预防大鼠同种肾移植慢性排斥反应的实验研究

目的 探讨雌激素对移植肾慢性排斥反应的影响。方法 以Fisher大鼠作供者,雌性Lewis大鼠作受者进行同种肾移植,为排除排卵周期及相应的内源性性激素变化的影响,肾移植均在非排卵期进行,后治疗组大鼠隔日给予25μg/kg雌二醇皮下注射。移植后16周作肾功能、移植肾组织学及免疫组化检测,测定肾组织中转化生长因子及β－机动蛋白mRNA的表达。结果 与对照组比较,移植后治疗组24d尿蛋白持续保持较低的水平（P＜0.01）,血清肌酐水平降低（P＜0.01）,肌酐清除率升高（P＜0.01）,移植肾组织管内膜增厚、肾小球硬化和间质纤维化程度减轻（P均＜0.01）,淋巴细胞和单核／巨噬细胞浸润减少（P＜0.01）,细胞间粘附分子（ICAM－1）、转化生长因子（TGF－β1）的mRNA表达减少（P均＜0.01）。结论 雌激素对移植肾功能有保护作用,其机理与影响上述细胞因子在移植肾的表达有关,提示雌激素可能为一类潜在的抗慢性排斥反应药物。     

移植肾CD20~+淋巴细胞浸润的临床意义

目的:探讨CD20+细胞在移植肾排斥反应中浸润程度与移植肾预后的关系。方法:选取93例肾移植后穿刺患者,肾活检组织标本行CD20免疫组化染色。并对病理结果行半定量分析,根据CD20+细胞在肾组织内浸润程度,分为阴性组48例(N组,CD20+细胞浸润占肾小管间质面积<10%)、中度浸润组25例(M组,CD20+细胞浸润占肾小管间质面积≥10%<50%)和重度浸润组20例(H组,CD20+细胞浸润占肾小管间质面积≥50%)。分析CD20+细胞浸润的程度与移植肾预后的相关性。随访内容包括患者穿刺活检后的临床资料,随访内容包括患者的肌酐、蛋白尿变化及移植肾的生存状况等指标。结果:三组患者在年龄、性别、组织活检时间以及移植的次数均没有明显差异(P>0.05);穿刺活检后12个月的肌酐N组[(276.79±240.78)μmol/L]低于M组[(360.16±290.30)μmol/L];M组低于H组[(466.50±330.53)μmol/L],P<0.05;CD20+浸润组的患者的4年生存率明显低于阴性组(P<0.05);穿刺活检后12个月内,N组穿刺后出现蛋白尿的概率明显低于M组和H组(P<0.05)。结论:CD20+细胞在肾移植内浸润的程度与移植肾预后有明显相关性。     

活性维生素D在肾纤维化中的治疗作用及机制

正肾纤维化是大多数肾脏疾病发展到后期及终末期肾病的主要病理变化和共同通路。肾纤维化在病理上包括肾小球硬化、小管间质纤维化、炎症细胞浸润和小管萎缩、毛细血管减少和足细胞丢失等。肾纤维化机制至今未能完全阐明,涉及炎症和氧化应激反应、促/抑细胞纤维化的因子失衡和信号传导通路的建立、肾脏固有细胞及免疫细胞凋亡、上皮细胞向间充质细胞转分化(EMT)等多个环节[1]。目前肾纤维化尚无有效的治疗,因此寻找有效治疗肾纤维化的方法是当前研究的热点。     

中药对肾间质纤维化作用机制研究进展

肾间质纤维化（tubulointerstitial fibrosis,TIF）是所有慢性肾脏疾病发展到后期的病理学特征之一,它以细胞外基质（extra cellular matrix,ECM）在肾间质中过度沉积伴肾小管萎缩、小管周围毛细血管减少、荒废、肾单位进行性破坏、致肾小球滤过率持续下降为特点。     

整合素连接激酶在慢性移植肾肾病患者肾组织中的表达及意义

目的：探讨移植肾组织中整合素连接激酶（ILK）及Ⅳ型胶原的表达,及与转化生长因子-β1（TGF-β1）表达和慢性移植肾肾病（CAN）的关系。方法：用免疫组织化学技术和计算机真彩色图像分析系统半定量检测30例CAN患者移植肾组织中ILK、Ⅳ型胶原和TGF-β1的表达情况,分析三者间及与CAN病理分级之间的关系。10例正常肾组织作为对照。结果：CAN移植肾组织中ILK、Ⅳ型胶原、TGF-β1的表达比正常肾组织明显增加（P〈0.001）,并随CAN病理分级呈逐渐递增的趋势。移植肾组织中ILK的表达与TGF-β1、Ⅳ型胶原呈正相关（r分别为0.822、0.715,P〈0.001）。结论：研究结果显示ILK可能介导TGF-β1促进CAN细胞外基质（ECM）异常沉积发病机制,Ⅳ型胶原的异常沉积是CAN患者移植肾纤维化的重要表现,且ILK在CAN移植肾纤维化进程中起重要作用。     

大豆异黄酮对大鼠慢性移植肾肾病的防治作用

目的通过对肾移植大鼠的饮食营养干预，观察大豆异黄酮对慢性移植肾肾病的防治作用。方法选择近交系雄性Fisher（F344）大鼠作为供者，雄性Lewis（Lew）大鼠作为受者，采用显微外科技术制作肾移植模型。将受者随机分为三组，分别给予高异黄酮大豆蛋白饲料（HIS组）、低异黄酮大豆蛋白饲料（LIS组）或酪蛋白饲料（CAS组）。移植前和移植后第4、12和24周时检测血压，并收集受者的血和尿样，检测尿蛋白和血肌酐含量。24周时处死大鼠获取移植肾，行组织学和免疫组织化学检查。结果在移植后4周时，HIS组受者的尾动脉收缩压、24h尿蛋白含量和血肌酐浓度即低于LIS组和CAS组，但差异无统计学意义（P〉0．05）；移植后12周和24周时，HIS组的受者尾动脉收缩压、24h尿蛋白含量和血肌酐浓度均较LIS组和CAS组显著降低（P〈0．05）；移植后24周时，HIS组移植肾组织的间质纤维化和炎症、血管硬化、肾小球硬化和肾小管萎缩等慢性病变均较LIS组和CAS组为轻（P〈0．05）；HIS组移植肾组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达和分泌均较LIS组和CAS组为少（P〈0．05）。结论大豆异黄酮对移植肾功能和结构有保护作用，可作为一种防治慢性移植肾肾病的新方法。