白头翁皂苷PSA对SW480人结直肠癌细胞糖酵解途径关键蛋白及调节因子HIF-1α的影响

目的探讨白头翁皂苷PSA对人结直肠癌SW480细胞糖酵解的影响。方法 MTT法检测细胞存活率;分光光度试剂盒检测葡萄糖消耗及糖酵解产物;荧光定量PCR法检测己糖激酶II(HKII)、丙酮酸激酶M2(PKM2)和乳酸脱氢酶A(LDHA)以及葡萄糖转运体1(GLUT1)、单羧酸转运体4(MCT4)mRNA表达;流式细胞术检测凋亡; Western blot法检测低氧诱导因子(HIF-1α)蛋白表达。结果在无血清条件下,白头翁皂苷PSA(1～9μg/mL)能够显著抑制细胞的增殖(P0.01),降低葡萄糖的消耗、乳酸和ATP的生成(P0.05,P0.01),下调HK-II、PKM2以及GLUT1 mRNA的表达(P0.05,P0.01),诱导凋亡(P0.01),降低HIF-1α蛋白表达水平(P0.05)。结论白头翁皂苷PSA能够有效干扰SW480细胞糖酵解途径,其机制可能与抑制HIF-1α蛋白表达,下调HK-II、PKM2及GLUT1 mRNA有关。     

消癌解毒方含药血清对人结肠癌细胞增殖及糖酵解过程的影响

目的:探讨不同浓度消癌解毒方含药血清对人结肠癌细胞增殖及糖酵解过程的影响及其作用机制。方法:8只新西兰兔随机分为含药血清组(消癌解毒方40 g·kg·~(-1)d~(-1))和空白血清组(等体积生理盐水),每组兔子连续灌胃3 d,制备消癌解毒方含药血清和空白血清。5%,10%,15%消癌解毒方含药血清处理人结肠癌HT-29与HCT-116细胞后,采用噻唑蓝比色法测定其对HT-29与HCT-116细胞生长的抑制作用,乳酸试剂盒检测HT-29与HCT-116细胞的乳酸生成量,葡萄糖试剂盒检测HT-29与HCT-116细胞的葡萄糖生成量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测己糖激酶(HK2),丙酮酸脱氢酶激酶(PDK1),乳酸脱氢酶(LDHA)和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达。结果:消癌解毒方含药血清能够抑制HT-29与HCT-116细胞增殖能力,15%消癌解毒方含药血清对人结肠癌HT-29与HCT-116细胞的抑制率分别为42.7%,50.2%。Western blot结果显示,与空白组比较,消癌解毒方含药血清可降低HK2,PDK1,LDHA,HIF-1α蛋白相对表达量(P0.05),且随浓度的增加表达降低。乳酸及葡萄糖试剂盒检测结果显示,与空白组比较,消癌解毒方含药血清可降低HT-29与HCT-116细胞的乳酸及葡萄糖水平(P0.05),且随浓度的增加乳酸及葡萄糖水平降低。结论:消癌解毒方含药血清可以通过抑制人结肠癌HT-29与HCT-116细胞糖酵解的过程从而抑制肿瘤细胞的增殖,其抑制糖酵解过程的机制可能与降低HIF-1α表达,进而减少糖酵解相关酶HK2,PDK1,LDHA表达有关。     

清燥救肺汤对荷Lewis小鼠肺癌细胞增殖相关糖酵解乳酸生成的影响

目的:观察清燥救肺汤对荷Lweis小鼠肺癌细胞增殖相关糖酵解乳酸生成的影响,探讨其作用机制。方法:50只雄性C57BL/6J小鼠,随机分为模型组,化疗组,清燥救肺汤高、中、低剂量组,每组10只。右腋下注射Lewis肺癌细胞建立肺癌荷瘤模型,清燥救肺汤高、中、低剂量组以11,5.5,2.75 g·kg~(-1)·d~(-1)造模前2周灌胃给药,化疗组以50 mg·kg~(-1)·(2d)~(-1)腹腔注射给药,模型组以等体积生理盐水灌胃给药,接种后继续给药2周后处死各组小鼠并取瘤称重,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测低氧诱导因子-α亚基(hypoxia inducible factor,HIF-)α),原癌基因蛋白(cancer-myc,C-myc)表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测乳酸水平以及乳酸脱氢酶-A(lactate dehydrogenase-A,LDH-A)活性。结果:与模型组比较,清燥救肺汤高、中、低剂量组及化疗组瘤质量,乳酸含量显著降低(P0.01);清燥救肺汤高、中、低剂量组及化疗组中肺癌细胞C-myc蛋白表达,LDH-A活性明显降低(P0.05,P0.01);清燥救肺汤高、中剂量组及化疗组HIF-1α蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:清燥救肺汤可通过抑制HIF-1α蛋白表达,导致C-myc蛋白表达下调,从而降低LDH-A活性,减少肺癌细胞糖酵解乳酸的生成,从而达到抑制荷Lewis小鼠肺癌细胞增殖的功效。     

解毒消癥饮调控肝癌细胞HIF-1的表达抑制肝癌血管生成的机制研究

目的:解毒消癥饮(JXY)是应用于围手术期消化道肿瘤的临床验方。前期工作表明,其可抑制肝癌血管的生成,可能与下调缺氧诱导因子-1(HIF-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达有关。但该方如何下调HIF-1及VEGF的表达进而抗肿瘤血管生成的机制尚不清楚。为探讨JXY抑制肝癌血管新生的作用机制,本文从表观遗传学角度出发,考察JXY对组蛋白乙酰基转移酶p300和CBP的表达情况,从分子水平研究该方调控VEGF表达的作用机制。方法:制备JXY乙酸乙酯提取物,体外建立常氧和乏氧条件下HepG2肝癌细胞的培养,MTT法检测不同乏氧时间下HepG2肝癌细胞的存活率,RT-PCR法检测HepG2肝癌细胞VEGF和HIF-1α mRNA水平,用以确定乏氧模型构建成功。MTT法检测不同浓度JXY对乏氧条件下HepG2肝癌细胞存活率的影响,RT-PCR法检测不同浓度JXY对乏氧条件下HepG2肝癌细胞VEGF和HIF-1α mRNA表达水平的影响,Western blot法检测不同浓度JXY对乏氧条件下HepG2肝癌细胞VEGF、HIF-1α、CBP和P300蛋白表达的影响。在体建立HepG2肝癌细胞裸小鼠皮下移植瘤动物模型,随机分为模型组和JXY组,模型组给予生理盐水,JXY组给予0.06 g/kg/d JXY。Western blot法和免疫组织化学法检测瘤体VEGF、VEGFR、HIF-1α蛋白表达的影响。结果:与常氧组比较,随着乏氧时间的延长,HepG2肝癌细胞存活率先降低后升高,在乏氧7h时达到波谷(P0.01)。此时间点HepG2肝癌细胞VEGF和HIF-1α mRNA的表达水平也明显升高。随着JXY浓度的升高,乏氧条件下HepG2肝癌细胞存活率逐渐降低,VEGF和HIF-1α mRNA和蛋白表达水平也受到抑制,呈现剂量依赖性(P0.05或P0.01)。在乏氧条件下HepG2肝癌细胞p300和CBP的蛋白表达水平明显高于常氧组,给予不同浓度JXY后, CBP、P300蛋白的表达量逐渐减弱,有剂量依赖性(P0.05或P0.01)。在体实验也观察到JXY对裸小鼠皮下移植瘤VEGF、VEGFR和HIF-1α蛋白表达水平呈现明显的抑制作用。结论:JXY可能通过抑制组蛋白乙酰基转移酶p300和CBP的表达水平,抑制其与HIF-1α结合形成HIF-1α/p300(CBP)低氧诱导复合物,进而抑制VEGF的转录,最终抑制肿瘤新生血管的生成。     

芹菜素对人肝癌细胞Hepg2增殖与葡萄糖摄取的影响

目的:探讨芹菜素对人肝癌Hepg2细胞增殖与葡萄糖摄取的影响。方法:以Hepg2细胞为研究对象,实验均用0.625~10μmol·L~(-1)不同浓度芹菜素作用于细胞,细胞密度以6×10~3个/m L接种于96孔培养板,5复孔/组,分别培养24,48,72 h后,MTT法检测细胞增殖抑制情况;同时,取96孔板培养24,48,72 h的细胞上清液,用葡萄糖测定试剂盒检测Hepg2细胞葡萄糖摄取情况;细胞密度以10~6个/m L接种于6孔培养板中,培养48 h后,Western blot检测葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)表达的变化。结果:与对照组比较,芹菜素各浓度组均能抑制Hepg2细胞的增殖,且抑制作用呈时间和浓度依赖性,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);芹菜素各浓度组作用后Hepg2细胞对葡萄糖的摄取明显减少(P0.05,P0.01);与对照组比较,GLUT1蛋白随着芹菜素浓度的升高表达减少(P0.05,P0.01)。结论:芹菜素具有抑制人肝癌Hepg2细胞增殖与葡萄糖摄取的作用,为肝癌的预防和治疗提供新的思路。     

川楝素调节丙酮酸激酶M2抑制乳腺癌糖酵解

目的:观察川楝素对乳腺癌糖酵解的干预及糖酵解相关酶的影响。方法:采用人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MCF-7;通过噻唑蓝(MTT)比色法考察川楝素(0,2.5,5,10,20,40,60,80μmol·L-1)对乳腺癌细胞增殖的抑制作用,检测10,20,40μmol·L-1川楝素干预后乳腺癌细胞中葡萄糖消耗,乳酸含量,评价川楝素对乳腺癌细胞糖酵解的干预作用;检测乳腺癌细胞中三磷酸腺苷(ATP)及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADH)水平,评价乳腺癌细胞能量供应水平;检测己糖激酶2及丙酮酸激酶活性,考察川楝素对糖酵解相关酶活性影响。蛋白免疫印迹法检测川楝素对乳腺癌细胞中丙酮酸激酶M2蛋白表达的调控作用。结果:川楝素对人乳腺癌MDA-MB-231,MCF-7细胞增殖具有明显抑制作用(P0.05),并呈浓度依赖性;川楝素可以明显降低不同乳腺癌细胞株中葡萄糖消耗及乳酸含量(P0.05),并降低细胞ATP含量(P0.05),升高NAD+/NADH含量(P0.05),抑制肿瘤细胞糖酵解水平。此外川楝素可抑制丙酮酸激酶活性,但对己糖激酶2活性无影响,蛋白检测结果表明,川楝素可以下调丙酮酸激酶M2蛋白表达水平(P0.05)。结论:川楝素可以明显抑制乳腺癌细胞增殖,并影响乳腺癌细胞糖酵解水平,其机制与其干预乳腺癌细胞中丙酮酸激酶M2的表达相关。     

HIF-1α基因沉默联合丹参酮ⅡA抑制低氧人肝癌HepG2细胞增殖及其机制

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因沉默联合丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)对低氧条件下人肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制。方法依据人HIF-1α基因信息筛选RNAi有效靶序列,设计慢病毒载体引物并构建质粒,包装慢病毒表达载体,转染HepG2细胞,沉默低氧条件下HepG2细胞株中HIF-1α基因表达。将细胞分为正常对照组(野生型HepG2细胞)、干扰对照组(HepG2细胞转染NC-shRNA)、干扰组(HepG2细胞转染HIF-1α-shRNA),应用化学缺氧法(150μmol/L CoCl_2)加入培养液模拟肿瘤细胞低氧微环境,采用Western Blot检测各组细胞HIF-1α蛋白表达证实基因沉默效果,采用CCK-8检测5 mg/L TanⅡA处理对低氧条件下各组细胞增殖活性的影响,采用Western Blot检测TanⅡA处理对各组细胞内p53和p21~( CIP1/WAF1)蛋白表达的影响。结果 (1)HIF-1α-shRNA慢病毒载体包装成功且转染效率高,低氧培养各组细胞24 h后,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞中HIF-1α蛋白表达明显降低(P0.01)。(2)TanⅡA能时间依赖性抑制低氧条件下各组细胞增殖,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞增殖明显活性下降(P0.01,P0.05)。(3)低氧培养各组细胞24 h,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞中p53和p21~( CIP1/WAF1)蛋白表达水平明显增高(P0.05)。结论 HIF-1α基因沉默可增强TanⅡA对低氧HepG2细胞的增殖抑制作用,其机制可能与p53和p21~( CIP1/WAF1)蛋白水平上调有关。     

金复康口服液联合吉非替尼对H1975肺癌裸鼠移植瘤生长及有氧糖酵解的影响北大核心CSCD

目的 观察金复康口服液联合吉非替尼对肺癌H1975细胞裸鼠移植瘤生长及有氧糖酵解的影响。方法 采用生物信息学分析HK2、PFKP、PKM2、LDHA在肺腺癌中的表达及对诊断和预后的影响;建立人肺腺癌H1975细胞荷瘤裸鼠模型后随机分为模型组、吉非替尼组(38 mg/kg)、金复康口服液组(25 g/kg生药)和联合用药组(38 mg/kg吉非替尼+25 g/kg金复康口服液生药),每组6只。每周测量移植瘤体积及裸鼠体质量2次,给药21日后取肿瘤组织称重并计算相对肿瘤增殖率及抑瘤率;采用RT-PCR、Western Blot法检测各组移植瘤组织HK2、PFKP、PKM2、LDHA的m RNA及蛋白表达;微量法检测糖酵解酶活性、ATP及乳酸含量。结果 生物信息学分析显示PFKP、PKM2和LDHA在肺腺癌中高表达,对肺腺癌的诊断和预后判断具有一定参考意义。与模型组及单药组比较,联合用药组肿瘤体积及肿瘤质量降低(P<0.01),抑瘤率提高(P<0.01)。与模型组比较,联合用药组HK2、PFKP及PKM2的m RNA及蛋白表达下调(P<0.01),LDHA蛋白表达无明显变化,移植瘤内HK、PFK活性下调,ATP和乳酸含量降低(P<0.01)。结论 复康口服液能增强耐药H1975细胞荷瘤裸鼠对吉非替尼的敏感性延缓肿瘤生长,其机制可能是通过下调HK2、PFKP和PKM2水平,减少ATP及乳酸生成,抑制有氧糖酵解实现的。     

参芪健胃颗粒调节能量代谢重编程抑制胃癌作用及机制

目的:探究参芪健胃颗粒对胃癌细胞能量代谢的影响及其可能的分子机制。方法:裸鼠皮下注射胃癌细胞MGC803制备裸鼠胃癌细胞皮下移植瘤模型,随机分为模型对照组、5-氟尿嘧啶(5-FU)50 mg/kg组、参芪健胃颗粒960 mg/kg组,各组灌胃或腹腔注射给予相应药物或生理盐水,每3 d相同时间测量肿瘤大小及裸鼠体质量,给药21 d后处理动物,剥离肿瘤并称质量;HE染色法检测参芪健胃颗粒对裸鼠胃癌细胞皮下移植瘤组织病理改变的影响;TUNEL法检测参芪健胃颗粒对裸鼠胃癌细胞皮下移植瘤组织细胞凋亡的影响;Western blot法检测参芪健胃颗粒对裸鼠胃癌细胞皮下移植瘤组织凋亡、能量代谢相关蛋白表达的影响。结果:与模型对照组相比,参芪健胃颗粒960 mg/kg组显著抑制裸鼠胃癌细胞皮下移植瘤的生长,显著改善移植瘤组织的病理,促进移植瘤组织细胞的凋亡(P<0.01),明显下调移植瘤组织糖酵解相关蛋白磷酸化丙酮酸脱氢酶α1(p-PDHA1)、丙酮酸脱氢酶激酶1(PDHK1)和乳酸脱氢酶(LDHA)的蛋白表达(P<0.05或P<0.01),显著降低移植瘤组织B细胞淋巴瘤-2(BCL...     

益气养精方对人肺癌A549细胞糖酵解通路中HIF-1α和PFKFB3蛋白的调节作用

目的:研究益气养精方对人肺癌A549细胞糖酵解过程及糖酵解相关蛋白的调节作用。方法:采用不同浓度益气养精方干预A549后肺癌细胞,CCK-8法检测不同时间内的增殖抑制作用;采用乳酸试剂盒检测细胞乳酸生成量;Annexin V-PI双染法检测A549细胞的凋亡率; Western blot法检测A549细胞中糖酵解相关蛋白缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、6-磷酸果糖-2-激酶(PFKFB3)的表达。结果:益气养精方能抑制A549肺癌细胞株的增殖,高浓度的益气养精方对A549细胞具有明显的促进凋亡作用,益气养精方能降低肺癌细胞糖酵解产物即乳酸生成量,在蛋白水平对肺癌细胞糖酵解相关蛋白HIF-1α、PFKFB3的表达有下调作用。结论:益气养精方能抑制肺癌A549增殖作用,可能与抑制肺癌细胞糖酵解有关,其中抑制细胞糖酵解相关蛋白HIF-1α和PFKFB3可能是作用机制之一。     

恶性肿瘤有氧糖酵解关键酶研究进展

近年来,在世界范围内恶性肿瘤的病死率呈现出逐年升高的趋势,其早期预防、诊断和治疗显得尤其重要。因此恶性肿瘤的临床医学及基础科学研究成为热点领域。恶性肿瘤最显著的特征之一是有氧糖酵解,该酵解也称为糖酵解或Warburg效应。大量实验表明,磷酸甘油酸激酶1(PGK1)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、丙酮酸激酶M2(PKM2)均为糖酵解过程的关键酶,均受缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的调控,且都在促进肿瘤细胞糖酵解水平的过程中发挥重要作用,可能成为潜在的肿瘤诊断和治疗的标志物及靶点。因此,本文就在恶性肿瘤细胞糖酵解过程中受HIF-1α调控的关键酶(PGK1、LDHA、PKM2)的研究现状进行总结,进而深入理解其潜在的重要诊断和治疗价值。     

肾衰Ⅱ号方对慢性肾衰竭大鼠有氧糖酵解及肾间质纤维化的影响

目的观察肾衰Ⅱ号方对慢性肾衰竭大鼠有氧糖酵解及肾间质纤维化的影响,探讨其抗肾间质纤维化的作用机制。方法体内实验以5/6(A/I)手术构建慢性肾衰竭大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、中药组、西药组,进行相应干预8周后,取肾组织行PAS染色观察肾脏病理变化,Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达,免疫组化检测α-SMA、己糖激酶(HK)2蛋白定位,紫外法检测肾组织HK活性,比色法检测肾组织乳酸、丙酮酸浓度;体外实验以白细胞介素(IL)-1β刺激大鼠肾成纤维细胞NRK-49F构建NRK-49F增殖活化模型,细胞分为空白组、IL-1β组、IL-1β+肾衰Ⅱ号方低剂量组(200μg/mL)、IL-1β+肾衰Ⅱ号方高剂量组(400μg/mL)、IL-1β+2-脱氧-D-葡萄糖组(10 mmol/L),Western blot检测NRK-49F细胞α-SMA、增殖细胞核抗原(PCNA)、纤维连接蛋白(FN)、HK2蛋白表达,比色法检测细胞培养基乳酸浓度,葡萄糖氧化酶法检测细胞培养基葡萄糖浓度,免疫荧光检测HK2蛋白表达。结果体内实验:与假手术组比较,模型组PAS染色提示肾间质糖原含量增加,肾小球、肾小管形态异常;α-SMA蛋白表达明显升高(P0.01),肾组织乳酸浓度、乳酸/丙酮酸、HK活性、HK2蛋白表达均明显升高(P0.01)。与模型组比较,中药组和西药组肾组织病理变化改善,α-SMA蛋白表达、乳酸浓度、乳酸/丙酮酸、HK活性、HK2蛋白表达均明显降低(P0.05,P0.01)。体外实验:与空白组比较,IL-1β组NRK-49F细胞FN、α-SMA、PCNA、HK2蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01);细胞培养基p H值、葡萄糖浓度明显降低(P0.05),乳酸浓度明显升高(P0.01);与IL-1β组比较,各干预组NRK-49F细胞FN、α-SMA、PCNA、HK2蛋白表达明显降低(P0.05,P0.01);细胞培养基p H值、葡萄糖浓度升高(P0.05,P0.01),乳酸浓度明显降低(P0.01)。结论肾衰Ⅱ号方可通过抑制NRK-49F细胞有氧糖酵解反应,从而阻止成纤维细胞增殖活化,实现其抗肾间质纤维化的作用。     

白头翁皂苷干预糖酵解途径抑制SW480人结直肠癌细胞增殖作用研究

目的:观察白头翁皂苷抑制人结直肠癌细胞的增殖作用及对肿瘤细胞糖酵解途径的影响。方法:采用人结直肠癌细胞株SW480,通过噻唑蓝(MTT)比色法研究白头翁皂苷(1.25、2.5、5、10、20、40μg/mL)对SW480细胞增殖的抑制作用,检测1、3、9μg/mL白头翁皂苷干预后SW480的葡萄糖消耗、乳酸生成和三磷酸腺苷含量变化,评价白头翁皂苷对SW480细胞糖酵解的干预作用;采用RT-PCR技术检测SW480细胞酵解途径中关键蛋白GLUT1、HK2、LDHA、MCT4、MCT1、c-Myc、HIF-1a mRNA表达水平;采用Western blot检测糖酵解调节因子HIF-1a、c-Myc蛋白及乳酸外排蛋白MCT4的表达。结果:白头翁皂苷对SW480细胞的增殖具有抑制作用,作用强度呈浓度依赖性,其对SW480的IC_(50)为11.69μg/mL;9μg/mL白头翁皂苷能显著降低SW480细胞葡萄糖消耗、乳酸生成和三磷酸腺苷含量,能使糖酵解关键蛋白GLUT1、HK2、MCT4、MCT1、c-Myc、HIF-1a mRNA表达显著下调,并使调节因子c-Myc、HIF-1a蛋白和乳酸转运蛋白MCT4表达显著降低。结论:白头翁皂苷能显著抑制SW480细胞增殖,降低细胞糖酵解水平,其机制与调控c-Myc、HIF-1a而干预GLUT1、HK2、MCT4、MCT1的表达相关。白头翁皂苷可能是一种潜在的肿瘤能量代谢阻断剂。     

红花组分HSYA对人胃腺癌BGC-823移植瘤裸鼠VEGF蛋白、KDR与缺氧诱导因子表达的影响

目的:研究红花组分羟基红花黄色素A(HSYA)对人胃腺癌皮下移植瘤裸鼠血管内皮生长因子(VEGF)蛋白、含激酶插入区受体(KDR)和缺氧诱导因子(HIF-1α)mRNA与蛋白表达的影响。方法:采用BALB/C nu/nu裸小鼠接种人胃腺癌细胞株BGC-823于右前肢腋部皮下建立裸鼠人癌移植瘤模型,随机分为模型组、对照组、HSYA高、低剂量组(0.056g/L、0.028g/L),观察抑瘤作用,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测瘤组织VEGF与HIF-1α蛋白以及血清VEGF蛋白表达;蛋白印迹(Western blotting)法测定瘤组织KDR磷酸化蛋白的表达;实时荧光定量PCR(RTFQ-PCR)法检测瘤组织KDR及HIF-1αmRNA表达。结果:HSYA低剂量组抑瘤明显,该组瘤组织及血清VEGF蛋白表达降低,瘤组织KDR磷酸化蛋白表达减弱,与模型组比较差异明显(P0.05,P0.01);HIF-1α蛋白表达较模型组瘤组织明显减少(P0.01)。KDR mRNA表达与模型组相比减弱,差异有统计学意义(P0.05)。结论:一定浓度的HSYA抑制肿瘤生长的可能机制与抑制VEGF、HIF-1α蛋白的表达,减弱KDR蛋白磷酸化及其基因表达,从而抑制内皮细胞活化阻碍肿瘤血管新生以及降低肿瘤缺氧微环境对血管生成的诱导有关。     

原儿茶酸对结肠癌SW620细胞糖酵解及增殖的影响

目的研究原儿茶酸对结肠癌细胞SW620糖酵解和增殖的影响。方法细胞计数试剂盒(CCK-8)和集落形成实验检测不同浓度原儿茶酸对SW620细胞增殖的影响,试剂盒检测细胞中葡萄糖消耗和乳酸水平,Western blot检测CyclinD1和P21蛋白表达水平。RT-PCR检测lncRNAs MYOSLID)在结肠癌组织、癌旁组织以及各组SW620中的表达。转染MYOSLID小干扰RNA至SW620细胞,检测干扰MYOSLID表达对SW620细胞增殖和糖酵解的影响。结果原儿茶酸处理后SW620细胞葡糖糖消耗、乳酸产生降低,细胞增殖抑制率、p21表达升高,MYOSLID和CyclinD1表达、克隆形成数降低(P0.05),且表现出一定剂量依赖性。结肠癌组织中MYOSLID表达较癌旁组织升高(P0.05)。干扰MYOSLID表达后SW620细胞葡糖糖消耗、乳酸产生显著降低,细胞增殖抑制率、p21表达升高,MYOSLID和CyclinD1表达、克隆形成数降低(P0.05)。MYOSLID过表达可降低原儿茶酸处理对SW620增殖、糖酵解以及CyclinD1和p21表达的影响(P0.05)。结论原儿茶酸可抑制结肠癌SW620细胞的增殖和糖酵解反应,其机制与下调MYOSLID表达有关。     

蜂毒素对骨肉瘤UMR-106细胞裸鼠移植瘤血管生成的影响

目的本研究拟探讨蜂毒素抗骨肉瘤UMR-106细胞裸鼠胫骨移植瘤的作用及其对肿瘤血管生成的影响.方法建立骨肉瘤UMR-106细胞裸鼠胫骨移植瘤模型,成瘤后随机分为两组生理盐水组、蜂毒素治疗组.瘤内注射给药治疗10天,计算治疗组肿瘤的体积抑制率和重量抑制率;采用免疫组化CD105观察移植瘤的微血管密度(MVD);免疫组化和Western blot检测瘤组织VEGF、HIF-1α蛋白表达.结果蜂毒素组对骨肉瘤的重量押制率为38.92%,体积抑制率为43.04%(P＜0.05).免疫组化及Western blot检测结果显示蜂毒素组CD105蛋白标记的MVD、VEGF、HIF-lα蛋白表达水平均明显低于生理盐水组(P＜0.01).结论蜂毒素能明显抑制骨肉瘤UMR-106细胞裸鼠胫骨移植瘤的血管生成,从而抑制肿瘤生长.与蜂毒素能够下调瘤组织VEGF、HIF-1α蛋白表达有关.     

西黄丸调控HIF-1α抑制胃癌MGC-803细胞荷瘤裸鼠血管生成拟态的机制研究

目的 探讨西黄丸通过调控HIF-1α对胃癌MGC-803细胞荷瘤裸鼠血管生成拟态的影响.方法 BALB/c裸鼠荷瘤造模成功后按数字表法随机分为空白组、西黄丸组、2-甲氧基雌二醇(2-ME)组、西黄丸+2-ME结合组4组,各6只,分别予相应措施干预14 d,测量计算各组裸鼠肿瘤体积,RT-qPCR检测血管内皮钙黏附分子(VE-Cadherin)、肝配蛋白A型受体2(EphA2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、乏氧因子1α(HIF-1α)的mRNA表达,免疫组化法检测VE-Cadherin、EphA2、p-EphA2、MMP-2蛋白表达,Western-blot法检测HIF-1α蛋白表达.结果 西黄丸可以抑制胃癌细胞的增殖,降低胃癌肿瘤体积和质量(P＜0.05);减少胃癌组织血管生成拟态形成数量,降低VE-Cadherin、MMP-2的mRNA表达(P＜0.01)和蛋白表达(P＜0.05),抑制EphA2蛋白磷酸化(P＜0.05),降低乏氧关键因子HIF-1α蛋白及mRNA表达(P＜0.01).结论 西黄丸可通过调控HIF-1α抑制胃癌MGC803细胞血管生成拟态形成.     

麻杏石甘汤通过调节肺组织糖酵解干预病毒性肺炎的实验研究

目的 探索麻杏石甘汤通过影响肺组织糖酵解而治疗病毒性肺炎的作用机制。方法 通过鼻腔接种法建立甲型H1N1流感病毒株A/PR/8/34感染小鼠模型,给药6天后,计算小鼠体质量变化、肺指数和肺指数抑制率,苏木素—伊红(hemotaxylin-eosin staining, HE)染色观察肺组织病理变化;生化检测小鼠肺组织糖酵解代谢物丙酮酸、乳酸的含量,以及糖酵解关键酶己糖激酶(hexokinase, HK)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)的活性;ELISA法检测小鼠肺组织炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha, TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin 1 Beta, IL-1β),以及抑炎因子白细胞介素-10(interleukin 10,IL-10)的变化;免疫蛋白印迹法检测肺组织中葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,GLUT1)、调控糖酵解关键因子缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1-Alpha, HIF-1α)、促炎巨噬细胞标记物...     

基于糖酵解机制的白头翁皂苷多成分协同抑制人肺癌NCI-H460细胞增殖作用研究

目的探讨白头翁皂苷中有效成分抑制人肺癌NCI-H460细胞增殖作用及其有效成分协同对肿瘤糖酵解机制的作用。方法体外培养NCI-H460细胞,以MTT法检测白头翁皂苷中白头翁皂苷A3(A3)、白头翁皂苷D(PSD)、白头翁皂苷B4(B4)、常春藤碱C(HC)、常春藤碱D(HD)、常春藤皂苷元(HY)、白头翁皂苷R13(R13)和白头翁皂苷PSA(PSA)的抗肿瘤活性;通过Calcusyn 3.0软件将筛选出的白头翁有效成分进行配伍及协同抗肿瘤作用研究;采用生物化学检测法和Elisa法检测糖酵解相关代谢产物(丙酮酸、乳酸、葡萄糖)和葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、乳酸脱氢酶(LDHA)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)和己糖激酶(HK)水平;运用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术和Westernblotting技术检测糖酵解相关41个成员基因和关键蛋白细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、Ras、GLUT1、单羧酸转运体4(MCT4)的表达。结果体外抗肿瘤结果显示,白头翁皂苷中以PSD、R13、PSA抑瘤活性最强,其对NCI-H460细胞IC50分别为5.2、4.6、7.9μg/m L;运用Calcusyn 3.0软件确定了白头翁皂苷中3个有效单体成分配伍比例及判定了配伍后具有协同抗肿瘤效应;生化和Elisa结果显示,与对照组比较,白头翁单体组及联合组的丙酮酸、乳酸、葡萄糖、HK、PKM2、LDHA含量均明显降低,且GLUT1含量明显升高(P0.05),与各单体组相比,其联合组的丙酮酸、乳酸、葡萄糖、HK、PKM2、LDHA含量均明显的降低,GLUT1含量明显升高(P0.05);q RT-PCR结果显示,单体联合组在网络图中节点最多,其作用靶点多于各个单体组;Western blotting结果显示,与对照组比较,白头翁单体联合组可显著性降低细胞ERK1/2、Ras、GLUT1、MCT4蛋白表达(P0.05)。结论白头翁皂苷有效成分联用对NCI-H460细胞具有协同抗肿瘤作用,其可能通过调节肿瘤细胞糖酵解发挥抗肿瘤作用。